Trang 1 Copyright @ School of Medicine and Pharmacy, VNU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC ĐẶNG THỊ QUỲNH PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI an d Ph arm ac y, VN U KHOA Y DƯỢC ed ici ne ĐẶNG THỊ QUỲNH t@ Sc ho ol of M PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN Co p yri gh KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội - 2019 KHOA Y DƯỢC Ph ĐẶNG THỊ QUỲNH arm ac y, VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI M ed ici ne an d PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT LANOSTAN TRITERPEN TỪ PHÂN ĐOẠN DICLOROMETHAN CỦA NẤM CỔ CÒ - GANODERMA FLEXIPES PAT., HỌ GANODERMATACEAE THU HÁI TẠI TÂY NGUYÊN Sc ho ol of KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC TS Nguyễn Hữu Tùng Co p yri gh t@ Khóa : QH.2014.Y Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Duyên Hà Nội - 2019 Co p yri gh t@ Sc ho ol of M ed ici ne an d Ph arm ac y, VN U LỜI CẢM ƠN Đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn diclomethan Nấm cổ cò - Ganoderma flexipes Pat., họ Ganodermataceae thu hái Tây Nguyên” kết cho qúa trình học tập, rèn luyện em Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội trình nghiên cứu, thực tập Khoa Hóa Thực vật, Viện Dược liệu Trong thời gian thực khóa luận tốt nghiệp này, em nhận giúp đỡ tận tình quý thầy cơ, gia đình bạn bè Qua em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: TS Nguyễn Thị Duyên - Khoa Hóa Thực Vật - Viện Dược liệu, TS Nguyễn Hữu Tùng - Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, trực tiếp bảo, hướng dẫn em hồn thành đề tài khóa luận Lãnh đạo, thầy cô công tác Khoa Y - Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện để em học tập, nghiên cứu Khoa suốt năm học qua Em xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện Dược liệu, đặc biệt cán bộ, nhân viên khoa Hóa Thực vật giúp đỡ em trình thực đề tài Gia đình, bạn bè, người quan tâm, giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập, nghiên cứu vừa qua Dù nhận hướng dẫn giúp đỡ từ nhiều nguồn kiến thức thời gian hạn chế nên báo cáo khơng thể tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thông cảm ý kiến đóng góp q thầy cơ, bạn bè để khóa luận em hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Đặng Thị Quỳnh arm ac y, VN U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Các phương pháp sắc ký Column Chromatography High Performance Liquid Chromatography TLC Thin Layer Chromatography Các phương pháp phổ Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscop Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Electron Spray Ionization Mass Spectrometry H-NMR 13 C-NMR Sắc ký mỏng Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 Phổ DEPT an d Sắc ký cột thường Sắc ký lỏng hiệu cao Ph CC HPLC DEPT ed ici ne ESI-MS HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Heteronuclear Single Quantum Coherence Mass Spectroscopy Ultra Violet - Visible M HSQC of MS UV-Vis Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Phổ khối Phổ tử ngoại yri gh Diclomethan Dược liệu/Dung môi Phân đoạn diclomethan nấm Cổ cò Phân đoạn etyl acetat nấm Cổ cò Etyl acetat Methanol Phân đoạn nước nấm Cổ cò Sc ho t@ DCM DL/DM DNCC ENCC EtOAc MeOH WNCC ol Các loại dung môi, phân đoạn dịch chiết Các ký hiệu sinh học Co p AChE AD AIDS Acetylcholinesterase Alzheimer Acquired Immuno Deficiency Syndrom Hội chứng trí nhớ Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải Enzyme Catalase Deoxyribonucleic acid Effective dose 50% m/z Mp STT TLTK v/v VKH&CNVN Khối lượng/điện tích Melting Point Điểm nóng chảy Số thứ tự Tài liệu tham khảo Thể tích/ Thể tích Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam arm ac y, VN U CAT DNA ED50 Co p yri gh t@ Sc ho ol of M ed ici ne an d Ph Liều có hiệu 50% động vật thí nghiệm ERK Extracellular signal - regulated Kinase điều hịa tín hiệu kinases ngoại bào FGFR Fibroblast growth factor Yếu tố tăng trưởng nguyên receptor bào sợi GPx Enzyme Glutathione Peroxidase HBV Hepatitis B virus HIV Human immunodeficiency virus HSV Virus herpes simplex IC50 Half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% concentration NPC Neural progenitor cell Tế bào tiền thân thần kinh Nrf2 Nuclear factor (erythroidYếu tố hạt nhân có nguồn gốc từ erythroid derived 2)-like RNA Ribonucleic acid ROS Reactive oxygen species Gốc tự oxy hóa SOD Superoxide dismutase Enzyme xúc tác q trình phân hủy superoxide Các ký hiệu viết tắt khác DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Bảng 1.1 Một số triterpen nhóm I phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.2 Một số triterpen nhóm II phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.3 Một số triterpen nhóm III phân lập từ chi Ganoderma Bảng 1.4 Một số sterol phân lập từ chi Ganoderma arm ac y, VN U an d Dữ liệu phổ hợp chất NCC03 NCC06 Co p yri gh t@ Sc ho ol of M ed ici ne Bảng Kết tra cứu tài liệu tham khảo tính đến tháng 7/2018 Ph Bảng 1.5 Trang 17 31 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang arm ac y, VN U Hình Hình 1.1 Cấu trúc Triterpen nhóm I Hình 1.2 Cấu trúc Triterpen nhóm II Hình 1.3 Cấu trúc Triterpen nhóm III Hình 1.4 Nấm cổ cò – Ganoderma flexipes Pat., thu Tây Nguyên Nguyên liệu nấm Cổ cò - Ganoderma flexipes Pat Ph Hình 19 24 Hình 3.2 Sắc ký đồ TLC cao tổng cao phân đoạn nấm Cổ cị 25 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cao nấm Cổ cò phân đoạn DCM 27 Hình 3.4 Kết chạy HPLC kiểm tra độ tinh khiết hợp chất NCC03 NCC06 28 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC03 30 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học hợp chất NCC06 31 t@ Sc ho ol of M ed ici ne an d Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn nấm Cổ cò yri gh Co p 16 arm ac y, VN U MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN Tổng quan chi Ganoderma Ph 1.1 1.1.1 Vài nét thực vật chi Ganoderma an d 1.1.2 Thành phần hóa học ed ici ne 1.1.2.1.Triterpen/ Triterpenoid 1.1.2.2.Sterol 1.1.2.3.Polysaccharit 1.1.3 Tác dụng sinh học 10 M 1.1.3.1.Tác dụng gây độc tế bào chống ung thư 10 of 1.1.3.2.Tác dụng chống oxi hóa, bảo vệ gan 12 ol 1.1.3.3.Tác dụng kháng virut 13 Sc ho 1.1.3.4.Tác dụng kháng vi khuẩn, kháng nấm 13 1.1.3.5.Tác dụng hệ thần kinh 14 1.2 t@ 1.1.3.6.Tác dụng khác 15 Tổng quan đối tượng nghiên cứu - Nấm Cổ cò 15 yri gh CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Hóa chất, thiết bị 19 Co p 2.1 2.2.1 Hóa chất, dung mơi 19 2.2.2 Thiết bị 19 arm ac y, VN U 2.3 Phương pháp chiết xuất phân lập xác định cấu trúc hợp chất tinh khiết 20 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập 20 2.3.2 Phương pháp xác định nhận dạng cấu trúc 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 Chiết phân đoạn nấm Cổ cò phân lập hợp chất từ cao phân đoạn diclomethan 24 3.1.1 Kết chiết phân đoạn nấm Cổ cò 24 an d Ph 3.1.2 Kết phân lập hợp chất tinh khiết từ cao phân đoạn diclomethan nấm Cổ cò 26 3.1.3 Kết kiểm tra độ tinh khiết 27 Biện luận cấu trúc hợp chất NCC03 NCC06 28 ed ici ne 3.2 3.2.1 Hợp chất NCC03 28 3.2.2 Hợp chất NCC06 30 Bàn luận 32 M 3.3 3.3.1 Về chiết xuất 32 of 3.3.2 Về phân lập, tinh chế nhận dạng cấu trúc hợp chất 33 ol KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 Kết luận 35 Kiến nghị 35 Sc ho t@ TÀI LIỆU THAM KHẢO Co p yri gh PHỤ LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ arm ac y, VN U Cùng với tiến khoa học – kỹ thuật, xu hướng quay với thiên nhiên, tìm phương thuốc truyền thống dân gian ngày quan tâm, phát triển Dược thảo thiên nhiên ngày đóng vai trò quan trọng phòng, chữa bệnh nâng cao sức khoẻ Trong đó, việc tìm loại dược liệu có nguồn gốc thiên nhiên để chữa bệnh hiểm nghèo sở khoa học có ý nghĩa vô to lớn [10] ed ici ne an d Ph Nấm Linh chi loại dược liệu quý y học cổ truyền Với thành phần hóa học có chứa polysaccharit (giàu β-glucan), triterpenoid, steroid, saponin…, nấm Linh chi ghi nhận có tác dụng phịng chống ung thư, tăng cường hệ miễn dịch, giải độc gan, hỗ trợ điều trị tiểu đường, giảm cholesterol máu… Chính thế, nhu cầu sử dụng nấm Linh chi phịng ngừa điều trị bệnh lớn, khơng Việt Nam, mà nhiều nơi giới Nhật Bản, Trung Quốc, Hàn Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan,…[9] yri gh t@ Sc ho ol of M Theo Nấm linh chi - Tài nguyên dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, nước ta có khoảng 80 loài nấm Linh chi, chiếm khoảng 1/3 số loài giới với khơng lồi mới, đặc hữu [7] Riêng Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh thuộc khu vực Tây Ngun, chi Ganoderma có 25 lồi, 10 lồi có tác dụng dược liệu Ganoderma tornatum, Ganoderma amboinense, Ganoderma gibbosum, Ganoderma capense, Ganoderma lobatum, Ganoderma applanatum, Ganoderma lucidum, Ganoderma flexipes, Ganoderma tropicum, Ganoderma cochlear, lồi cịn lại chưa biết rõ ý nghĩa [6] Do đó, nghiên cứu tài nguyên nấm Linh chi Việt Nam cơng trình có ý nghĩa mang lại hiệu to lớn cho người trồng nấm Tuy nhiên, hầu hết nghiên cứu (cả nước) chi Ganoderma dừng lại đối tượng Ganoderma lucidum Trong cơng bố số 10 lồi có tác dụng dược liệu Vườn Quốc gia Kon Ka Kinh, nấm Cổ cò - Ganoderma flexipes lại chưa nghiên cứu thành phần hóa học giá trị sử dụng Co p Vì vậy, để góp phần làm sáng tỏ thành phần hóa học Ganoderma flexipes, em thực đề tài “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất lanostan triterpen từ phân đoạn dicloromethan nấm Cổ cò yri gh Co p t@ ol Sc ho of ed ici ne M an d arm ac y, VN U Ph PHỤ LỤC BỘ PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC03 h P d V , y c a m r a n a e n i c i ed Cấu trúc hóa học hợp chất NCC03 M f o (3β-Acetoxyl- lanosta-7,9(11),24-triene-26-ol) l o o @ t h p o C g i r y h c S U N U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC03 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ 1H-NMR hợp chất NCC03 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ 13C-NMR hợp chất NCC03 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ DEPT hợp chất NCC03 yri gh Co p Phổ HMBC hợp chất NCC03 t@ ol Sc ho of ed ici ne M an d arm ac y, VN U Ph yri gh Co p Phổ HSQC hợp chất NCC03 t@ ol Sc ho of ed ici ne M an d arm ac y, VN U Ph yri gh Co p t@ ol Sc ho of ed ici ne M an d arm ac y, VN U Ph PHỤ LỤC BỘ DỮ LIỆU KHỐI PHỔ CỦA HỢP CHẤT NCC06 V , y c a m r a U N h P d n a e n i c i ed Cấu trúc hóa học hợp chất NCC06 M f o (lanostan-7,9(11),24-triene-3β,26-diol, ganodermadiol) l o o @ t h p o C g i r y h c S U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y h c S M f o Phổ khối ESI-MS hợp chất NCC06 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ 1H-NMR hợp chất NCC06 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ 13C-NMR hợp chất NCC06 U N V , y c a m r a h P d n a e n i c i ed l o o @ t h p o C g i r y M f o h c S Phổ DEPT hợp chất NCC06 yri gh Co p t@ ol Sc ho of ed ici ne M an d arm ac y, VN U Ph