(Đồ án hcmute) khảo sát khả năng sống sót của saccharomyces boulardii được bao gói bằng gel alginate có bổ sung gelatin trong môi trường giả lập dạ dày và dịch ruột

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT TP.HCM KHOA CƠNG NGHỆ HĨA VÀ THỰC PHẨM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGÀNH CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA SACCHAROMYCES BOULARDII ĐƯỢC BAO GÓI BẰNG GEL ALGINATE CÓ BỔ SUNG GELATIN TRONG MÔI TRƯỜNG GIẢ LẬP DẠ DÀY VÀ DỊCH RUỘT GVHD: TS TRỊNH KHÁNH SƠN SVTH: ĐỒN THỊ BÍCH THẢO MSSV: 11116060 SKL 0 Tp Hồ Chí Minh, tháng 7/2015 an TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP MÃ SỐ: 2015-11116060 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SỐNG SÓT CỦA SACCHAROMYCES BOULARDII ĐƯỢC BAO GĨI BẰNG GEL ALGINATE CĨ BỔ SUNG GELATIN TRONG MƠI TRƯỜNG GIẢ LẬP DẠ DÀY VÀ DỊCH RUỘT GVHD: TS TRỊNH KHÁNH SƠN SVTH: ĐỒN THỊ BÍCH THẢO MSSV: 11116060 THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 07/2015 an TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM KỸ THUẬT THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA CƠNG NGHỆ HĨA HỌC VÀ THỰC PHẨM BỘ MƠN CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM NHIỆM VỤ KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Đồn Thị Bích Thảo Ngành: Cơng nghệ Thực phẩm Tên khóa luận: Khảo sát khả Saccharomyces boulardii đƣợc bao gói gel alginate có bổ sung gelatin mơi trƣờng giả lập dày dịch ruột Nhiệm vụ khóa luận: Khảo sát khả Saccharomyces boulardii đƣợc bao gói gel alginate có bổ sung gelatin môi trƣờng giả lập dày dịch ruột Ngày giao nhiệm vụ khóa luận: 15/01/2015 Ngày hồn thành khóa luận: 16/07/2015 Họ tên ngƣời hƣớng dẫn 1: TS Trịnh Khánh Sơn Phần hƣớng dẫn: toàn khóa luận Nội dung yêu cầu khóa luận tốt nghiệp đƣợc thông qua Trƣởng Bộ môn Công nghệ Thực phẩm Tp.HCM, ngày 16 tháng 07 năm 2015 Trƣởng Bộ mơn Ngƣời hƣớng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) i an LỜI CÁM ƠN Lời đầu tiên, em xin chân thành cám ơn thầy cô trƣờng Đại học Sƣ Phạm Kỹ Thuật TP.HCM đặc biệt thầy Khoa Cơng nghệ hóa học & thực phẩm truyền đạt kiến thức cho chúng em suốt năm học Đại học tạo điều kiện cho chúng em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Đặc biệt em xin bày tỏ lời biết ơn sâu sắc đến thầy TS Trịnh Khánh Sơn hƣớng dẫn em hoàn luận văn Em xin gởi lời cám ơn đến thầy, thầy quan tâm dẫn em hoàn thành luận văn, làm việc với thầy em không mở mang thêm đƣợc nhiều kiến thức mà học đƣợc nhiều thứ tinh thần trách nhiệm công việc học sống mà thầy chia sẻ với nhóm Nhờ giúp em thời gian ngắn đầy khó khăn hoàn thành luận văn thời hạn Xin gởi đến lời cảm ơn đến tập thể lớp 11116, quan tâm giúp đỡ suốt thời gian qua Và cuối xin chân thành cám ơn gia đình ln ủng hộ, động viên tơi suốt quãng thời gian qua Dù cố gắng nhƣng thời gian có hạn thiếu nhiều kinh nghiệm thực tế qúa trình thực luận văn khơng tránh khỏi sai sót, mong nhận đƣợc ý kiến đóng góp thầy để giúp cho luận văn thêm hoàn thiện ii an LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan tồn nội dung đƣợc trình bày khóa luận tốt nghiệp riêng Tôi xin cam đoan nội dung đƣợc tham khảo khóa luận tốt nghiệp đƣợc trích dẫn xác đầy đủ theo qui định Ngày 16 tháng năm 2015 Kí tên Đồn Thị Bích Thảo iii an MỤC LỤC NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP…………………………………………………………i LỜI CÁM ƠN ii LỜI CAM ĐOAN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii TÓM TẮT LUẬN VĂN ix CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .1 1.1 Hệ vi sinh vật dày – ruột ngƣời 1.2 Probiotic nấm men Saccharomyces boulardii 1.2.1 Định nghĩa Probiotic 1.2.4 Sự tồn sống sót Probiotic dày - ruột .4 1.2.5 Nấm men Saccharomyces boulardii vai trị hệ tiêu hóa 1.3 Kĩ thuật vi bao .7 1.3.1 Định nghĩa bao gói (encapsulation) 1.3.2 Cấu trúc hạt trình vi bao .7 1.3.3 Nguyên liệu để vi bao 1.3.4 Vai trò vi bao 11 1.3.5 Các phƣơng pháp vi bao 11 1.4 Các nghiên cứu nƣớc .16 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 20 2.1 Địa điểm thực đồ án .20 2.2 Vật liệu sử dụng cho nghiên cứu 20 2.2.1 Vật liệu .20 2.2.2 Chủng vi sinh vật sử dụng môi trƣờng .20 2.3 Phƣơng pháp phân tích thu nhận kết .20 2.3.1 Phân tích vi sinh .20 2.3.2 Phân tích hóa sinh .20 2.3.3 Phƣơng pháp thống kê xử lí số liệu .21 2.4.1 Quá trình chuẩn bị 21 iv an 2.4.2 Khảo sát đặc tính sinh học 22 2.4.3 Khảo sát đƣờng cong sinh trƣởng S.Boulardii 22 2.4.4 Vi bao S.Boulardii với Natri Alginate có bổ sung gelatin 22 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .25 3.1 Kiểm tra đặc tính sinh học S.boulardii 25 3.1.1 Quan sát hình thái S.boulardii 25 3.1.2 Khảo sát đƣờng cong sinh trƣởng S.boulardii 26 3.2 Vi bao S.boulardii Natri alginate có bổ sung gelatin (G) 27 3.2.1 Cấu trúc hạt vi bao 27 3.2.2 Mật độ tinh thể hạt bao gói 29 3.3 Đánh giá khả tồn S boulardii môi trƣờng giả lập dịch dày môi trƣờng giả lập dịch ruột 31 3.3.1 Đánh giá khả tồn S boulardii môi trƣờng giả lập dịch dày 31 3.3.2 Đáng giá khả tồn S boulardii môi trƣờng dịch ruột 34 3.4 Khảo sát mật độ tế bào theo thời gian lƣu trữ hạt bao gói 36 3.5 Khảo sát khả sống sót S boularddi mơi trƣờng giả lập dày dịch ruột sau 12 ngày lƣu trữ hạt bao gói 40 3.5.1 Khảo sát khả sống sót S boularddi mơi trƣờng giả lập dày sau 12 ngày lƣu trữ hạt bao gói 40 3.5.2 Khảo sát khả sống sót S boularddi mơi trƣờng giả lập dịch ruột sau 12 ngày lƣu trữ hạt bao gói .42 CHƢƠNG KẾT LUẬN .44 TÀI LIỆU THAM KHẢO .45 PHỤ LỤC 50 v an DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 sơ đồ tóm tắt thay đổi thành phần hệ vi sinh vật đƣờng ruột qua giai đoạn khác Hình 1.2 Hệ vi sinh vật đƣờng ruột Hình 1.4 Cấu trúc alginate trình hình thành gel có mặt ion Ca2+ Hình 1.5 Quá trình vi bao phƣơng pháp sấy phun 13 Hình 1.6 Sơ đồ trình vi bao kỹ thuật nhũ tƣơng 14 Hình 1.7 Quá trình tạo hạt vi bao kỹ thuật ép đùn dùng kim tiêm 15 Hình 1.8 Bề mặt vi bao mẫu khô (A) hạt vi bao khơ nghiền (B)…………… … 18 Hình 3.1: A-Tế bào S.boulardii, B-Khuẩn lạc S.boulardii 25 Hình 3.2 Hình dạng hạt bao gói trƣớc sấy (A) sấy khơ (B) 28 Hình 3.3 Cấu trúc tinh thể mẫu bao gói alginate (A), mẫu bao gói alginate có gelatin (B) mẫu bao gói alginate có bổ sung vi sinh vật geletine (C) 29 vi an DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1: Một số đặc điểm khác biệt vi khuẩn nấm men ứng dụng probiotic…………………………………………………………………………………… Bảng 1.2 Tóm tắt phƣơng pháp bao gói………………………………………………16 Biểu đồ 3.1 đƣờng cong sinh trƣởng S.Bouladii môi trƣờng Hasnsen………… 30 Biểu đồ 3.2 Mật độ tế bào S boulardii sau thử dịch giả lập dày theo thời gian 0, 30, 60, 90 120 phút ……….……………………………………………………………33 Biểu đồ 3.3 Mật độ tế bào S boulardii sau thử dịch giả lập dày theo thời gian 0, 30, 60, 90 120 phút ………………………………………………………………… 35 Biểu đồ 3.4: Mật độ tế bào S boulardii theo thời gian lƣu trữ (0, 3, 6, 12 ngày) 50C (A) 300C (B) mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao sấy hạt vi bao sấy nghiền…… ……………………………………………………………………38 Biểu đồ 3.5: mật độ tế bào S boulardii thử giả lập dày 120 phút sau 12 ngày lƣu trữ mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao khô hạt vi bao sấy nghiền… …41 Biểu đồ 3.6: mật độ tế bào S boulardii thử giả lập dịch ruột 120 phút sau 12 ngày lƣu trữ mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao sấy hạt vi bao sấy nghiền….43 vii an DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Giải thích nghĩa STT Từ viết tắt B C CFU Colony form unit – đơn vị hình thành khuẩn lạc ĐC Mẫu đối chứng T Mẫu hạt tƣơi bổ sung 0.75%w/v S Mẫu hạt sấy khô SN Mẫu hạt sấy khô nghiền E Escherichia 10 FAO Bifidobacteria Candida Food and Argiculture Organization – Tổ chức Nông Lƣơng Liên Hiệp Quốc 11 G Gelatin 12 L Lactobacillus 13 S Saccharomyces 14 V Vibrio 15 %w/v Weight/Volume – Khối lƣợng/Thể tích 16 WHO World Health Organization – Tổ chức Y tế giới viii an 3.5.2 Khảo sát khả sống sót S boularddi môi trƣờng giả lập dịch ruột sau 12 ngày lƣu trữ hạt bao gói Tƣơng tự, chúng tơi tiến hành khả sát khả sống sót S.boularddi sau 12 môi trƣờng giả lập dịch ruột 120 phút Chúng nhận thấy tất mẫu lƣu trữ giảm mạnh so với mẫu ngày, giảm nhiều so với thử môi trƣờng giả lập dịch dày Kết khảo sát cho thấy nhiệt độ lƣu trữ giúp lƣu trữ mẫu ĐC, T, S, SN tốt Cụ thể mật độ tế bào sau 120 phút thử môi trƣờng dịch ruột mẫu ĐC lƣu trữ 1.75(log cfu/g hạt), mẫu ĐC 30 giảm 1.68 (log cfu/g hạt) Đối với mẫu lƣu trữ tủ lạnh mật độ tế bào mẫu T, S, SN 5.98, 5.7, 2.48 (log cfu/g hạt) Còn mẫu lƣu trữ nhiệt độ phòng, mật độ tế bào mẫu T, S, SN 5.8, 5.57 2.39 (log cfu/g hạt) Trong mẫu S mẫu giảm mật độ Chúng tơi cho nhận thấy sau khoảng thời gian lƣu trữ tác động nhiệt độ, ánh sáng, hoạt độ nƣớc ảnh hƣởng đến cấu trúc màng bao làm cho kết cấu gel alginate gelatin trở nên yếu, lƣợng nƣớc thoát nhiều (mẫu T), điều dẫn đến việc làm giảm khả bao bọc bảo vệ tế bào bên 42 an b b c c Log CFU/g hat d d a a 5do C/12ngay 30do c/12 dieu kien luu tru khong vi bao hat tuoi hat say hat say nghien Biểu đồ 3.6: Mật độ tế bào S boulardii thử giả lập dịch ruột 120 phút sau 12 ngày lƣu trữ mẫu không vi bao, hạt tƣơi, hạt sấy hạt sấy nghiền Kết đƣợc tính dựa giá trị trung bình (n=3) ± độ lệch chuẩn Thanh sai số thể giá trị độ lệch chuẩn Các chữ khác biệt có nghĩa mặt thống kê (p < 0.05) 43 an CHƢƠNG KẾT LUẬN Kết nghiên cứu cho thấy việc bổ sung gelatin vi bao S boulardii gel alginate làm tăng khả sống sót tế bào điều kiện thử môi trƣờng giả lập dày dịch ruột mà cịn góp phần tăng khả sống sót chúng q trình bảo quản 12 ngày Cụ thể mẫu đƣợc lƣu trữ cho khả sống sót cao so với lƣu trữ 30 Bên cạnh đó, việc bổ sung S boulardii vào vi bao alginate có bổ sung gelatin không làm thay đổi mật độ tinh thể hạt bao sau sấy, mà tế bào đƣợc bảo vệ tốt làm tăng khả chống chịu S boulardii môi trƣờng giả lập dày dịch ruột Chúng tơi nhận thấy nên có nhiều nghiên cứu để khảo sát mật độ tế bào hạt vi bao để xem xét có ảnh hƣởng đến cấu trúc tinh thể khả chịu đựng axit dày, muối mật hay không? Đồng thời nghiên cứu thêm vi bao Saccharomyces boulardii sử dụng vật liệu vi bao khác (whey protein, sữa bột gầy, chitosan…) khảo sát đƣợc thực vi bao S bouladrii kỹ thuật vi bao khác nhƣ kỹ thuật sấy phun, sấy phun chân khơng để so sánh khả sống sót S boulardii sử dụng phƣơng pháp với phƣơng pháp sấy đối lƣu thực nhằm tạo dòng sản phẩm S boulardii với số lƣợng, hoạt tính probiotic đáp ứng yêu cầu mặt y học điều trị bệnh liên quan đến hệ tiêu hóa 44 an TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Amin T, Monika T, Jain SC 2013 Microencapsulation - the future of probiotic cultures Journal of Microbiology, Biotechnology and Food Sciences 3:35-43 [2] Anal, A.K.; Singh, H Recent advances in microencapsulation of probiotics for industrial applications and targeted delivery Trends Food Sci Technol 2007, 18, 240–251 [3] Barc MC, Charrin-Sarnel C, Rochet V, Bourlioux F, Sandré C, Boureau H, Doré J, Collignon A 2008 Molecular analysis of the digestive microbiota in a gnotobiotic mouse model during antibiotic treatment: Influence of Saccharomyces boulardii Journal of Anaerobe 14: 229-233 [4] Burgain C, Gaiani C, Linder M, Scher J 2011 Encapsulation of probiotic living cells: From laboratory scale to industrial applications Journal of Food Engineering 104:467-483 [5] Caroline L Hyndman, Anne F Groboillot, Denis Poncelet, Claude P Champagne: & Ronald J Neufeldg Microencapsulation of Lactococcus Lactis within Cross-Linked Gelatin Membranes 1992 J Chem Tech Biotechnol pp.1-5 [6] Catalina Valenzuela ⇑, José Miguel Aguilera 2015 Effects of maltodextrin on hygroscopicityand crispness of apple leathers Journal of Food Engineering 144: 1–9 [7] Chandramouli V, Kailasapathy K, Peiris P, Jones M 2004 An improved method of microencapsulation and its evaluation to protect Lactobacillus spp in simulated gastric conditions Journal of Microbiological Methods 56:27-35 [8] Czerucka D, Piche T Rampal P 2007 Review article: yeast as probiotics – Saccharomyces boulardii Alimentary Pharmacology and Therapeutics 26:767-778 [9] Đào Thị Minh Châu, “Khảo sát ảnh hưởng phương pháp vi gói Natri alginate lên số lượng hoạt tính Probiotic Lactobacillus casei q trình tạo bột sữa chua”, Đại học Khoa học Tự nhiên, pp.19-26 [10] Đào Thị Minh Châu, Nguyễn Thúy Hƣơng 2012 Khảo sát ảnh hưởng phương pháp vi gói natri-alginate lên số lượng hoạt tính probiotic Lactobacillus casei 45 an trình tạo bột sữa chua Bộ môn Công nghệ Sinh Học, trƣờng Đại học Bách khoa TP HCM [11] Doleyres, Y.; Fliss, I.; Lacroix, C Continuous production of mixed lactic starters containing probiotics using immobilized cell technology Biotechnol Prog 2004, 20, 145–150 [12] Doleyres, Y.; Fliss, I.; Lacroix, C Quantitative determination of the spatial distribution of pure and mixed-strain immobilized cells in gels beads by immunofluorescence Appl Microbiol Biotechnol 2002, 59, 297–302 [13] Fang Z and Bhandari B 2012 Spray drying, freeze drying and related processes for food ingredient and nutraceutical encapsulation Encapsulation Technologies and Delivery Systems for Food Ingredients and Nutraceuticals 73– 109 [14] FAO WHO (2001), Health and Nutrient Properties of Probiotics in food including Powder Milk with Live lactic Acid Bacteria, Report of a joint FAO/WHO expert consultation on evaluation of health and nutrient properties of probiotics including Powder Milk with Live lactic Acid Bacteria, Cordoba, Argentina [15] Gareau MG, Sherman PM, Walker WA Probiotics and the gut microbiota in intestinal health and disease Nature Reviews in Gastroenterological Hepatology 2010;7:503–14 [16] Jans D 2005 “Probiotics in Animal Nutrition” 20 pp 4-18 [5] [17] Jyothi SS, Seethadevi A, Prabha KS, Muthuprasanna P And Pavitra P 2012 Microencapsulation: A Review International Journal of Pharma and Bio Sciences 3(1):509-531[17] [18].Kailasapathy K 2002 Microencapsulation of probiotic bacteria: technology and potential applications Current Issues in Intestinal Microbiology 3(2):39-48 [19] Kailasapathy K Microencapsulation of probiotic bacteria: Technology and potential applications Curr Issues Intestinal Microbiol 2002;3:39–48 [20] King AH, Risch SJ and Reineccius GA 1995 Encapsulation of Food Ingredients: A review of available technology, focussing on hydrocolloids, “In: Encapsulation and 46 an Controlled Release of Food Ingredients, ACS Symposium Series 590 Journal of American Chemical Society pp: 26-39 [21] Krasaekoopt, W , Bhandari, B , Deeth, H 2004 The influence of coating materials on some properties of alginate beads and survivability of microencapsulated probioticbacteria International Dairy Journal 14 pp.737-743 [22] Liliana Serna-Cock and Vladimir Vallejo-Castillo 2013 Review: ProbioticEncapsulation African Journal of Microbiology Research 11 pp.2-3 [23] Liliana Serna-Cock* and Vladimir Vallejo-Castillo 2013 Probiotic encapsulation - Review African Journal of Microbiology Research 7, pp 4743 – 4753 [24] Lucie Beaulieu, Laurent Savoie, Paul Paquin and Muriel Subirade 2001 Elaboration and Characterization of whey protein beads by an Emulsification/cold gelation process: Application for the protection of retinol 10 pp.1-4 [25] Madigan, M.T., Martinko, J.M., Parker (2000) Brock Biology of Microorganism Prentice – Hall Inc, New jersey, USA, 9th ed [26] Marco, M.L, Pavan, S., and Kleerebezen 2006 Towards understanding molecular modes of probioticaction Curent Opinion in Biotechnology 17 pp.204-210 [27] McFarland LV 2010 Systematic review and meta-analysis of Saccharomyces boulardii in adult patients World Journal Gastrointestinal 16:2202-2222 [28] Nguyễn Đức Lƣợng, Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết (2006), Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2: Thí nghiệm vi sinh vật học, NXB Đại Học Quốc gia TP.HCM [29] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty 2010 Vi sinh vật học NXB Giáo dục Việt Nam [30] Nguyến Thị Tuyết (khóa luận tốt nghiệp, 20014) Khảo sát ảnh hƣởng gelatin lòng trắng trứng đến khả sống sót Saccharomyces boulardii đƣợc vi bao alginate, trƣờng Đại Học Sƣ Phạm Kĩ thuật TP.HCM [31] Oelschlaeger TA 2010 Mechanisms of probiotic action – A review, International Journal of Medical Microbiology 300:57-62 [32] Parthiban Muthukumarasamy, Paula Allan – Wojtas and Richard A Holley 2006 Stability of Lactobacillus reuteri in different Types of Microcapsules Food Microbiology and Safety 20 pp.20-22 47 an [33] R Berni Cannani, S.Cucchiara, R.Cuomo, F.Pace, F.Papale 2011 Saccharosemyces boulardii: a summary of the evidence for gastroenterology clinical practice in adults and children University of Naples “Federico II” [34] R.R Mokarram *, S.A Mortazavi, M.B Habibi Najafi, F Shahidi, 2009 The influence of multi stage alginate coating on survivability of potential probiotic bacteria in simulated gastric and intestinal juice, pp.2-6 [35] Rama Dubey, Shami TC and Bhasker Rao KU 2009 Microencapsulation Technology and Applications Defence Science Journal 59: 82-95 [36] Rees DA, Welsh EJ Secondary and tertiary structure of polysaccharides in solution and gels Angew Chem Int Ed Engl (1977) 16 pp.214-224 [37] Rees DA, Welsh EJ Secondary and tertiary structure of polysaccharides in solution and gels Angew Chem Int Ed Engl (1977) 16 pp.214-224 [38] Rokka, S.; Rantamaki, P Protecting probiotic bacteria by microencapsulation: Challenges for industrial applications Eur Food Res Technol 2010, 231, 1–12 [39] S.B Doherty, V.L Geea, R.P Ross, C Stantona, G.F Fitzgeraldb, A Brodkorba 2011 Development and characterisation of whey protein micro-beads as potential matrices for probioticprotection Food Hydrocolloids 14 pp.1604 [40] Serna-Cock L and Vallejo-Castillo V 2013 Probiotic encapsulation African Journal of Microbiology Research 7(40):4743-4753 [41] Tawheed Amin*, Monika Thakur, S C Jain 2013 Microencapsulation the future of probiotic cultures Journal of Microbiology, Biotechnology and Food Sciences (1): 35 – 43 [42] Trần Bích Lam, Tơn Nữ Minh Nguyệt, Đinh Trần Nhật Thu 2009 Thí nghiệm Hóa sinh Thực phẩm Nhà xuất Đại học Quốc gia TP.HCM 83.pp.57-59 [43] Trần Huỳnh Nhƣ (khóa luận tốt nghiệp, 2014) Ảnh hƣởng tinh bột maltodextrin lên khả sống sót Saccharomyces boulardii đƣợc vi bao gel alginate, trƣờng Đại Học Sƣ Phạm Kĩ thuật TP.HCM [44] Trần Linh Thƣớc (2012), Phƣơng pháp phân tích vi sinh vật nƣớc, thực phẩm mĩ phẩm Nhà xuất giáo dục Việt Nam, 232, pp.65-66 [45] Vidhyalakshmi R, Bhakyaraj Rand Subhasree RS 2009 Encapsulation “The Future of Probiotics”-A Review Advances in Biological Research 3: 96 – 103 48 an [46] Xiao Yan Li, Xi Guang Chen, Dong Su Cha, Hyun Jin Park Cheng Sheng Liu (2009), Microencapsulation of a probioticbacteria with alginate-gelatin and its properties Journal of Microencapsulation 10 pp.2-3 [47] Xiao Yan Li1, Xi Guang Chen1, Dong Su Cha2, Hyun Jin Park2 and Cheng Sheng Liu1 2009.Microencapsulation of a probiotic bacteria with alginate–gelatin and its properties Journal of Microencapsulation 26(4): 315–324 [48] Yoav Bashan, Juan-Pablo Hemandez, Luis A.Leyva, Macario Bacilio 2002 Alginate microbeads as inoculant carriers for plant growth-promoting bacteria Biology and Fertility of Soils 10 pp1-2 [49] Yoav Bashan, Juan-Pablo Hemandez, Luis A.Leyva, Macario Bacilio 2002 Alginate microbeads as inoculant carriers for plant growth-promoting bacteria Biology and Fertility of Soils 10 pp1-2 49 an PHỤ LỤC Một số bảng số liệu Bảng Mật độ tế bào S boulardii sau thử dịch giả lập dày theo thời gian 0, 30, 60, 90 120 phút Mẫu Thời gian (phút) Không vi 8.33 0.01a 30 60 90 120 7.64± 0.02b 6.53 0.02c 7.39 0.04d 4.43 0.02e bao Hạt tƣơi 8.3 0.01a 8.17 0.02b 7.72 0.01c 8.04 0.01d 7.8 0.02e Hạt sấy 6.53 0.01a 7.27 0.01b 7.28 0.01b 7.23 0.01c 7.02 0.03d sấy 4.45 0.02a 4.25 0.01b 4.17 0.01c 3.95 0.01d 3.44 0.02e Hạt nghiền Bảng Mật độ tế bào S boulardii sau thử dịch giả lập dịch ruột theo thời gian 0, 30, 60, 90 120 phút Mẫu Thời gian (phút) Không vi 8.33 0.01a 30 60 90 120 6.5± 0.02b 5.8 0.03c 5.01 0.01d 4.32 0.01e 0.01b 7.93 0.01c 7.88 0.02d 7.71 0.01e 7.21 0.03b 7.15 0.01c 7.04 0.01d 6.94 0.01e 3.93 0.02b 3.7 0.03c 3.53 0.02d 3.28 0.03e bao Hạt tƣơi 8.3 0.01a Hạt vi bao 6.53 0.01a sấy Hạt sấy 4.45 0.02a nghiền 50 an Bảng Mật độ tế bào S boulardii theo thời gian lƣu trữ (0, 3, 6, 12 ngày) nhiệt độ phịng (50C) mẫu khơng vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao khô hạt vi bao sấy khô nghiền Mẫu Thời gian (ngày) 12 8.33 0.01a 7.84 0.02b 7.28 0.02c 6.7 0.01d 6.23 0.02e Hạt tƣơi 8.3 0.01a 7.8 0.02b 7.57 0.03c 7.4 0.01d 7.1 0.02e Hạt sấy 6.53 0.01a 6.82 0.01b 6.55 0.01c 6.38 0.01d 6.12 0.02e Hạt sấy 4.45 0.02a 4.23 0.01b 0.02c 3.78 0.02d 3.58 0.02e Không vi bao nghiền Bảng Mật độ tế bào S boulardii theo thời gian lƣu trữ (0, 3, 6, 12 ngày) nhiệt độ phòng (300C) mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao khô hạt vi bao sấy khô nghiền Mẫu Thời gian (ngày) 12 8.33 0.01a 7.78 0.01b 7.26 0.01c 6.68 0.01d 6.13 0.01e Hạt tƣơi 8.3 0.01a 7.95 0.02b 7.68 0.01c 7.35 0.01d 6.96.1 0.01e Hạt sấy 6.53 0.01a 6.92 0.01b 6.64 0.01c 6.32 0.01d 6.04 0.01e Hạt sấy 4.45 0.02a 4.16 0.01b 3.85 0.01c 3.56 0.02d 3.26 0.01e Không vi bao nghiền Bảng Tỷ lệ thay đổi mật độ tế bào S boulardii thử giả lập dày 120 phút sau 12 ngày lƣu trữ mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao khô hạt vi bao sấy nghiền Không vi bao Hạt tƣơi Hạt khô Hạt sấy nghiền 1.85 0.02a 6.03 0.04b 5.8 0.04c 2.53 0.03d 30 1.72 0.03a 5.95 0.01b 5.68 0.04c 2.42 0.03d 51 an Bảng Tỷ lệ thay đổi mật độ tế bào S boulardii thử giả lập dịch ruột 120 phút sau 12 ngày lƣu trữ mẫu không vi bao, hạt vi bao tƣơi, hạt vi bao khô hạt vi bao sấy nghiền Không vi bao Hạt tƣơi Hạt khô Hạt sấy nghiền 1.75 0.01a 5.98 0.04b 5.7 0.03c 2.48 0.01d 30 1.68 0.02a 5.8 0.03b 5.57 0.02c 2.39 0.02d Một số thiết bị sử dụng thí nghiệm Hình 1: tủ sấy đối lƣu 52 an Hình 2: máy khuấy từ Hình 3: máy đếm khuẩn lạc 53 an Hình 4: cân điện tử số (trái), cân điện tử số (phải) Hình 5: máy li tâm 54 an Hình 6: Máy đo pH Mettler Toledo, Trung Quốc Hình 7: Tủ cấy vi sinh Telstart, Tây Ban Nha Hình 8: Nồi hấp tiệt trùng ALP, Nhật 55 an S an K L 0