Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật dung hợp tế bào trần để chọn tạo giống khoai tây kháng virus pvy ở việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Đinh Thị Thu Lê NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN ĐỂ CHỌN TẠO GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG VIRUS PVY Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội – 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Đinh Thị Thu Lê NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN ĐỂ CHỌN TẠO GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG VIRUS PVY Ở VIỆT NAM Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS TS HỒNG ĐÌNH HỊA GS TS NGUYỄN QUANG THẠCH Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn khoa học GS.TS Hồng Đình Hịa GS.TS Nguyễn Quang Thạch Các số liệu, kết nêu luận án trung thực, chưa tác giả công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2021 Giáo viên hướng dẫn GS.TS Hồng Đình Hịa Tác giả luận án GS.TS Nguyễn Quang Thạch i Đinh Thị Thu Lê LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận án tiến sĩ, em nhận giúp đỡ động viên thày, cô tập thể Lời đầu tiên, cho phép em bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Hồng Đình Hịa – Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, GS.TS Nguyễn Quang Thạch – Học viện Nông nghiệp Việt Nam, người thày trực tiếp hưỡng dẫn, định hướng tận tình giúp đỡ em suốt trình thực luận án Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thày, cô môn Công nghệ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội dạy dỗ, động viên giúp đỡ em nhiều thời gian nghiên cứu sinh môn Em xin gửi lời cảm ơn đến thày, cô, anh chị bạn Đỗ Thị Thu Hà, Vũ Thị Hằng – Phịng Cơng nghệ phân tử & Cơng nghệ Vi sinh, Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam ln nhiệt tình giúp đỡ sát cánh bên em trình thực luận án đơn vị Tôi xin gửi lời cảm ơn đến quan chủ quản – Trường Đại học Mở Hà Nội, khoa Cơng nghệ Sinh học bố trí thời gian, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án Cuối cùng, tơi xin cảm ơn chân thành tới gia đình bạn bè ln động viên tinh thần, khích lệ lúc khó khăn để tơi vượt qua hồn thành luận án Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2021 Đinh Thị Thu Lê ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung khoai tây 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Tình hình sản xuất khoai tây giới Việt Nam 1.2 Giới thiệu khoai tây chế biến chip 1.3 Tìm hiểu virus hại khoai tây 10 1.3.1 Giới thiệu chung 10 1.3.2 Giới thiệu PVY 12 1.3.3 Tác hại PVY đến sản xuất khoai tây 14 1.4 Các hướng nghiên cứu khắc phục bệnh virus hại khoai tây 15 1.4.1 Xây dựng hệ thống sản xuất giống khoai tây bệnh 15 1.4.2 Thanh lọc vệ sinh đồng ruộng, nhổ bỏ nhiễm virus 19 1.4.3 Chọn tạo giống kháng bệnh virus 20 1.5 Phương pháp chọn tạo giống khoai tây kháng virus 20 1.5.1 Phương pháp chọn tạo giống truyền thống 21 1.5.2 Phương pháp công nghệ sinh học 22 Chương VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 Vật liệu nghiên cứu 44 2.1.1 Các dòng khoai tây nghiên cứu 44 2.1.2 Hóa chất 46 2.1.3 Thiết bị 46 2.2 Nội dung nghiên cứu 47 2.2.1 Nội dung 1: Xác định thơng số tối ưu cho quy trình dung hợp khoai tây từ nguyên liệu nhị bội (2n = 2x), tứ bội (2n = 4x) khoai tây dại (pnt2G, trn3G, blb2G) 47 2.2.2 Nội dung 2: Xác định đánh giá thể lai soma tổ hợp dung hợp khoai tây nhị bội (2n = 2x) 49 iii 2.2.3 Nội dung 3: Xác định thể lai soma tổ hợp dung hợp khoai tây dại (2n = 2x) khoai tây trồng (2n = 4x) Đánh giá khả kháng PVY chúng 49 2.2.4 Nội dung 4: Đánh giá lai backcross (BC1) thể lai soma (khoai tây dại khoai tây trồng) với khoai tây trồng 49 2.3 Phương pháp nghiên cứu 51 2.3.1 Tách tế bào trần 51 2.3.2 Dung hợp tế bào trần 52 2.3.3 Xác định lai đếm độ bội flow cytometry 53 2.3.4 Chiết tách DNA tổng số 53 2.3.5 Xác định lai sinh học phân tử 54 2.3.6 Lây nhiễm nhân tạo PVY 55 2.3.7 Kiểm tra gen kháng PVY lai soma thị phân tử 55 2.3.8 Đánh giá đặc tính nơng sinh học 56 2.3.9 Phân tích tiêu hóa sinh 56 2.3.10 Lai lại (backcross) số tổ hợp khoai tây có triển vọng với khoai tây trồng 58 2.3.11 Các tiêu theo dõi 58 2.3.12 Xử lý số liệu 60 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 61 3.1 Xác định thông số tách, dung hợp, tái sinh tế bào trần dòng khoai tây nhị bội, khoai tây dại khoai tây trồng 61 3.1.1 Nghiên cứu thông số tách tế bào trần dòng khoai tây nhị bội, khoai tây dại, khoai tây trồng phục vụ cho dung hợp tế bào trần 61 3.1.2 Xác định thông số dung hợp tế bào trần 66 3.1.3 Nuôi cấy tái sinh tổ hợp lai sau dung hợp 72 3.2 Xác định đánh giá thể lai soma tổ hợp dung hợp khoai tây nhị bội (2n = 2x) 75 3.2.1 Tạo lai 75 3.2.2 Xác định độ bội thể tái sinh 76 3.2.3 Xác định lai soma đo thị phân tử 78 3.2.4 Đánh giá phẩm chất củ lai soma điều kiện chậu vại 81 3.2.5 Kiểm tra có mặt gen kháng lai soma từ vật liệu nhị bội 83 3.3 Xác định thể lai soma tổ hợp dung hợp khoai tây dại (2n=2x) khoai tây trồng (2n = 4x) Đánh giá khả kháng virus PVY chúng 85 3.3.1 Xác định lai soma khoai tây dại khoai tây trồng đo độ bội thể86 3.3.2 Xác định lai soma khoai tây dại khoai tây trồng thị phân tử 87 iv 3.3.3 Kiểm tra có mặt gen kháng PVY lai soma khoai tây dại khoai tây trồng 88 3.3.4 Đánh giá khả kháng PVY lai soma khoai tây dại khoai tây trồng lây nhiễm nhân tạo 90 3.3.5 Đánh giá lai soma khoai tây dại khoai tây trồng tính trạng nông sinh học phẩm chất củ 91 3.4 Đánh giá lai backcross (BC1) thể lai soma (khoai tây dại khoai tây trồng) với khoai tây trồng 96 3.4.1 Lai hữu tính lai soma (của khoai tây dại khoai tây trồng) với giống khoai tây trồng chọn lọc lai có đặc tính mong muốn 96 3.4.2 Đánh giá khả kháng PVY lai BC1 triển vọng đồng ruộng kiểm gia có mặt gen kháng PVY thị phân tử 105 3.4.3 Khảo sát diện hẹp dòng lai BC1 triển vọng đồng ruộng 106 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 117 4.1 Kết luận 117 4.2 Đề nghị 117 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 119 CỦA LUẬN ÁN 119 TÀI LIỆU THAM KHẢO 120 PHỤ LỤC 131 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BA - benzyl amino purine BC1 Backcross CNSH Công nghệ sinh học CT Công thức DAS – ELISA Double Antibody Sandwich – Enzyme linked imunosorbent assay DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme – linked imunosorbent assay FAO Food and Agriculture Organization GA3 Gibberellic Acid IAA Indole-3-acetic acid KLCTB Khối lượng củ trung bình LSD Least significant difference MS Murashige and Skoog NAA Naphthaleneacetic acid NSLT Năng suất lý thuyết NSTT Năng suất thực thu NST Nhiễm sắc thể OD Optical density PCR Polymerase chain reaction PEG Polyethylene glycol PVY Potato virus Y SSR Simple sequence repeat TB Tế bào vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Mười lăm quốc gia sản xuất khoai tây nhiều giới năm 2019 Bảng 1.2 Diện tích, suất sản lượng khoai tây Việt Nam Bảng 1.3 Hệ thống sản xuất cấp giống khoai tây đồng ruộng Canada 16 Bảng 1.4 Tiêu chuẩn ruộng giống khoai tây Việt Nam 18 Bảng 1.5 Thời gian chọn tạo giống khoai tây theo phương pháp truyền thồng 22 Bảng 1.6 Tóm tắt kết q trình chọn tạo giống khoai tây thơng qua dung hợp tế bào trần loài Solanum (1985 - 2016) 31 Bảng 2.1 Các vật liệu thu thập, nguồn gốc, độ bội tính trạng mong muốn phục vụ cho lai soma 44 Bảng 2.2 Trình tự nhiệt độ gắn mồi sử dụng phân tích PCR chọn lọc lai soma khoai tây dại khoai tây trồng 54 Bảng 3.1 Ảnh hưởng nồng độ macerozyme cellulase dung dịch enzyme đến mật độ tế bào trần dòng khoai tây nhị bội (Tế bào trần /ml môi trường) 61 Bảng 3.2 Ảnh hưởng thời gian ủ mẫu dung dịch enzyme đến mật độ tế bào trần thu 64 Bảng 3.3 Ảnh hưởng tuổi in vitro đến mật độ tế bào trần thu từ mẫu 65 Bảng 3.4 Ảnh hưởng tần số dung hợp số lần tạo xung điện đến khả tạo callus tổ hợp B186 (+) B208 tổ hợp trn3G (+) Delikat 66 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ ion Ca2+ đến khả kết dính thành hàng tế bào trình dung hợp khả tế bào phân chia sau dung hợp 68 Bảng 3.6 Ảnh hưởng mật độ tế bào trần đến kết dung hợp xung điện tổ hợp nhị bội B186 (+) B208 70 Bảng 3.7 Ảnh hưởng mật độ tế bào trần đến kết dung hợp xung điện tổ hợp khoai tây dại khoai tây trồng trn3G (+) Delikat 71 Bảng 3.8 Sự phân chia tổ hợp lai nhị bội tổ hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng môi trường nuôi cấy khác 72 Bảng 3.9 Ảnh hưởng môi trường tái sinh khác đến khả tạo chồi tổ hợp lai 74 Bảng 3.10 Kết dung hợp, nuôi cấy tái sinh tổ hợp lai nhị bội sau dung hợp 76 Bảng 3.11 Kết xác định độ bội lai sau dung hợp 76 vii Bảng 3.12 Kết xác định lai soma tổ hợp dung hợp 78 Bảng 3.13 Một số tiêu hóa sinh dòng lai soma khoai tây dòng nguyên liệu 82 Bảng 3.14 Kết nuôi cấy tái sinh chồi tổ hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng sau dung hợp 86 Bảng 3.15 Kết tái sinh phân tích độ bội thể tổ hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng sau dung hợp 86 Bảng 3.16 Kết sử dụng marker phân tử xác định lai soma 88 Bảng 3.17: Kết mức độ kháng bệnh lai soma 6x sau lây nhiễm nhân tạo 90 Bảng 3.18 Đánh giá đặc tính nơng sinh học lai soma điều kiện chậu vại 94 Bảng 3.19 Kết lai hữu tính lai soma khoai tây trồng tứ bội 96 Bảng 3.20 Khả nảy mầm hạt lai BC1 97 Bảng 3.21 Đánh giá khả kháng bệnh virus lai BC1 giai đoạn con.98 Bảng 3.22 Bảng đánh giá hình thái kiểu sinh trưởng lai BC1 99 Bảng 3.23 Bảng đánh giá suất hình thái củ lai BC1 100 Bảng 3.24 Tình hình sinh trưởng, phát triển vật liệu khảo sát sau 60 ngày trồng 102 Bảng 3.25 Các yếu tố cấu thành suất dòng/giống khoai tây khảo sát 103 Bảng 3.26 Đặc tính nơng sinh học dịng/giống khoai tây khảo sát điều kiện đồng ruộng 107 Bảng 3.27 Thời gian sinh trưởng qua giai đoạn dòng/giống khoai tây 109 Bảng 3.28 Kết đánh giá tình hình sinh trưởng, phát triển lai BC1 giống khoai tây trồng vụ đông xuân 2017-2018 110 Bảng 3.29 Các yếu tố cấu thành suất dòng/giống khoai tây khảo sát 111 Bảng 3.30 Đặc điểm hình thái củ khoai tây dòng/giống khảo sát 112 Bảng 3.31 Đánh giá cảm quan chất lượng củ qua ăn nếm dòng/giống khoai tây 113 Bảng 3.32 Đánh giá hàm lượng chất khơ dịng/ giống khoai tây 114 viii MEANS FOR EFFECT NL NL NOS LA 10 5.20000 10 6.05000 10 6.30000 SE (N= 10) 0.180278 5% LSD 18DF 0.535631 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 5/ 6/18 12:28 :PAGE VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS LA 30 5.8500 1.2536 0.57009 BALANCED ANOVA FOR VARIATE | | |NL | | | | | | 9.7 0.0000 0.0011 LA FILE SOLA 5/ 6/18 12:20 :PAGE VARIATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 42.3000 4.70000 9.20 0.000 NL 15.8000 7.90000 15.46 0.000 * RESIDUAL 18 9.20000 511111 * TOTAL (CORRECTED) 29 67.3000 2.32069 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA 5/ 6/18 12:20 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS LA 9.50000 1305.6 Rasant 9.50000 Delikat 8.00000 1303.4 9.00000 1303.22 8.50000 1301.5 8.50000 1300.3 10.0000 solara atlantic 3 SE(N= 3) 5%LSD 18DF 9.50000 12.0000 0.412760 1.22637 MEANS FOR EFFECT NL - NL NOS LA 10 8.20000 10 9.90000 10 9.50000 SE (N= 10) 0.226078 5% LSD 18DF 0.671710 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 5/ 6/18 12:20 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | LA | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 9.2000 1.5234 0.71492 BALANCED ANOVA FOR VARIATE | | |NL | | | | | | 7.8 0.0000 0.0001 LA FILE SOLA 3/ 6/18 21:56 :PAGE VARIATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 50.5333 5.61481 3.38 0.013 NL 7.46667 3.73333 2.25 0.133 * RESIDUAL 18 29.8667 1.65926 * TOTAL (CORRECTED) 29 87.8667 3.02989 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA 3/ 6/18 21:56 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS LA 1305.6 15.0000 Rasant 14.6667 Delikat 15.6667 1303.4 15.0000 1303.22 14.0000 1301.5 15.6667 1300.3 15.3333 solara 17.0000 atlantic 16.3333 SE (N= 3) 0.743698 5% LSD 18DF 2.20964 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 10 LA 14.4000 10 15.6000 10 15.2000 SE (N= 10) 0.407340 5%LSD 18DF 1.21027 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 3/ 6/18 21:56 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS LA 30 15.067 1.7407 1.2881 BALANCED ANOVA FOR VARIATE | | | | |NL | | | | 8.5 0.0134 0.1326 LA FILE SOLA 3/ 6/18 22: :PAGE VARATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 42.5333 4.72593 2.20 0.074 NL 26.6667 13.3333 6.21 0.009 * RESIDUAL 18 38.6667 2.14815 * TOTAL (CORRECTED) 29 107.867 3.71954 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA 3/ 6/18 22: :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS LA 20.0000 1305.6 Rasant 20.3333 Delikat 22.3333 1303.4 21.3333 1303.22 19.6667 1301.5 20.0000 1300.3 20.6667 solara 22.6667 atlantic 21.6667 SE(N= 3) 0.846197 5%LSD 18DF 2.51418 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS LA 10 19.4000 10 21.4000 10 21.4000 SE(N= 10) 0.463481 5%LSD 18DF 1.37707 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 3/ 6/18 22: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS LA 30 20.733 1.9286 1.4657 BALANCED ANOVA FOR VARIATE | | | | |NL | | | | 7.1 0.0737 0.0089 CCT FILE TTB1 6/ 6/18 17:27 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 12.7083 1.41204 6.84 0.000 NL 6.95000 3.47500 16.83 0.000 * RESIDUAL 18 3.71667 206482 * TOTAL (CORRECTED) 29 23.3750 806034 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:27 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 4.00000 rasant 6.00000 delikat 4.66667 1303.4 4.00000 1303.22 4.50000 1301.5 5.00000 1300.3 4.83333 solara 5.66667 atlantic 4.83333 SE(N= 3) 0.262349 5%LSD 18DF 0.779478 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 4.10000 10 4.90000 10 5.25000 SE (N= 10) 0.143695 5% LSD 18DF 0.426938 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:27 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS CCT 30 4.7500 0.89779 0.45440 | | | | |NL | | | | 9.6 0.0003 0.0001 - :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 13.8593 * TOTAL (CORRECTED) 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE (N= 3) 2.14936 5% LSD 18DF 6.38607 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 5%LSD 18DF 1.17725 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS CCT 30 35.045 4.4265 3.7228 | | | | | |NL | | | 10.6 0.0900 0.1405 - :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 13.8593 * TOTAL (CORRECTED) 17:53 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5%LSD 18DF 6.38607 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 5%LSD 18DF 1.17725 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | | | | | |NL | 6/ 6/18 OBS CCT TOTAL SS RESID SS 30 35.045 4.4265 | 3.7228 | | 10.6 0.0900 0.1405 - :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 13.8593 * TOTAL (CORRECTED) 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5%LSD 18DF 6.38607 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 1.17725 5%LSD 18DF 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 35.045 4.4265 3.7228 | | | | | | | 10.6 0.0900 0.1405 - :PAGE VARIATE V003 CCT |NL | LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 13.8593 * TOTAL (CORRECTED) 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5%LSD 18DF 6.38607 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 1.17725 5%LSD 18DF 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 35.045 4.4265 3.7228 | |NL | | | | | | | 10.6 0.0900 0.1405 - :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 13.8593 * TOTAL (CORRECTED) 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5%LSD 18DF 6.38607 -MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE (N= 10) 1.17725 5% LSD 18DF 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 35.045 4.4265 3.7228 BALANCED ANOVA FOR VARIATE | |NL | | | | | | | 10.6 0.0900 0.1405 CCT FILE TTB1 6/ 6/18 18: :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 83.1274 9.23638 2.86 0.028 NL 70.0685 35.0342 10.85 0.001 * RESIDUAL 18 58.0998 3.22777 * TOTAL (CORRECTED) 29 211.296 7.28606 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 18: :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 28.0000 rasant 28.0000 delikat 28.0000 1303.4 27.6667 1303.22 28.2333 1301.5 29.0833 1300.3 30.3333 solara 32.3333 atlantic 30.0000 SE(N= 3) 1.03727 5%LSD 18DF 3.08187 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 26.7000 10 29.2450 10 30.3500 SE (N= 10) 0.568135 5% LSD 18DF 1.68801 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 18: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 28.765 2.6993 1.7966 | | | | |NL | | | | 6.2 0.0276 0.0009 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCT FILE TTB1 6/ 6/18 18:52 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCT FILE TTB1 6/ 6/18 19:11 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 350.253 38.9170 2.87 0.027 NL 453.021 226.511 16.69 0.000 * RESIDUAL 18 244.337 13.5743 * TOTAL (CORRECTED) 29 1047.61 36.1245 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 19:11 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 46.4167 rasant 56.0833 delikat 52.7833 1303.4 47.5000 1303.22 47.3333 1301.5 51.7500 1300.3 54.3500 solara 54.8333 atlantic 55.5000 SE(N= 3) 2.12715 5%LSD 18DF 6.32007 -MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 46.4500 10 53.1650 10 55.6500 SE(N= 10) 1.16509 5%LSD 18DF 3.46164 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 19:11 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 51.755 6.0104 3.6843 | | |NL | | | | | | 7.1 0.0274 0.0001 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 548.604 60.9560 4.18 0.005 NL 379.129 189.565 12.98 0.000 * RESIDUAL 18 262.782 14.5990 * TOTAL (CORRECTED) 29 1190.52 41.0523 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 20:13 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 63.0833 rasant 67.0000 delikat 60.8500 1303.4 54.3333 1303.22 56.4167 1301.5 61.5167 1300.3 59.0833 solara 63.1167 atlantic 65.7500 SE (N= 3) 2.20598 5%LSD 18DF 6.55429 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 57.3000 10 62.6500 10 65.9250 SE(N= 10) 1.20826 5%LSD 18DF 3.58993 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:13 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 61.958 6.4072 3.8209 | | | | |NL | | | | 6.2 0.0049 0.0004 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 484.443 53.8270 2.24 0.069 NL 387.127 193.563 8.06 0.003 * RESIDUAL 18 432.404 24.0225 * TOTAL (CORRECTED) 29 1303.97 44.9646 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 20:34 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ 1305.6 NOS CCT 76.0833 rasant 79.9167 delikat 77.1000 1303.4 66.6667 1303.22 68.4333 1301.5 73.2333 1300.3 69.5000 solara 75.7500 atlantic 73.8167 SE(N= 3) 2.82975 5%LSD 18DF 8.40760 -MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 69.8850 10 71.3150 10 78.1190 SE(N= 10) 1.54992 5%LSD 18DF 4.60503 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:34 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 73.106 6.7056 4.9013 | | |NL | | | | | | 6.7 0.0693 0.0032 VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 233.680 25.9645 0.59 0.786 NL 387.698 193.849 4.43 0.027 * RESIDUAL 18 787.006 * TOTAL (CORRECTED) 43.7226 29 1408.38 48.5650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ 1305.6 NOS CCT 82.0000 rasant 84.9333 delikat 88.9333 1303.4 80.1167 1303.22 83.5667 1301.5 81.5000 1300.3 solara 3 82.0667 82.4667 atlantic 84.1867 SE (N= 3) 3.81762 5% LSD 18DF NL 11.3427 NOS CCT 10 79.1000 10 87.6560 10 81.5750 SE (N= 10) 2.09099 5% LSD 18DF 6.21265 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS CCT 30 82.777 6.9689 6.6123 | | |NL | | | | | | 8.0 0.7864 0.0268 VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= G$ 233.680 25.9645 0.59 0.786 NL 387.698 193.849 4.43 0.027 * RESIDUAL 18 787.006 43.7226 * TOTAL (CORRECTED) 29 1408.38 48.5650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ G$ NOS 1305.6 CCT 82.0000 rasant 84.9333 delikat 88.9333 1303.4 80.1167 1303.22 83.5667 1301.5 81.5000 1300.3 82.0667 solara 82.4667 atlantic 84.1867 SE (N= 3) 3.81762 5% LSD 18DF 11.3427 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 10 CCT 79.1000 10 87.6560 10 81.5750 SE(N= 10) 2.09099 5%LSD 18DF 6.21265 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ (N= 30) SD/MEAN | CCT | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 30 82.777 6.9689 6.6123 | | | | | | | 8.0 0.7864 0.0268 |NL |