Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật dung hợp tế bào trần để chọn tạo giống khoai tây kháng virus pvy ở việt nam

BỘ GIÁO DỰC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Đinh Thị Thu Lê NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DUNG HỌP TÉ BÀO TRẦN ĐÉ CHỌN TẠO GIÓNG KHOAI TÂY KHÁNG VIRUS PVY Ỏ VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN Sĩ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội-2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRUỒNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI Đinh Thị Thu Lê NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DUNG HỌP TÉ BÀO TRẦN ĐÉ CHỌN TẠO GIÓNG KHOAI TÂY KHÁNG VIRUS PVY Ở VIỆT NAM Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 9420201 LUẬN ÁN TIẾN Sĩ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẢN KHOA HỌC: GS TS HỒNG ĐÌNH HỊA GS TS NGUYÊN QUANG THẠCH Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trinh nghiên cứu cùa riêng hướng dần khoa học GS.TS Hồng Đình Hịa GS.TS Nguyễn Quang Thạch Các số liệu, kết quà nêu luận án trung thực, chưa tác giả công bố công trinh khác Hà Nội, ngày ỉ tháng năm 2021 Giáo viên hướng dần GS.TS Hoàng Đình Hịa GS.TS Nguyễn Quang Thạch Tác giả luận án Đinh Thị Thu Lê LỜI CẢM ƠN Đế hoàn thành luận án tiến sĩ, em nhận giúp đỡ động viên cúa thày, cô tập Lời đau tiên, cho phép em bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sac tới GS TS Hồng Đình Hịa - Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội, GS TS Nguyễn Quang Thạch - Học viện Nông nghiệp Việt Nam, người thày trực tiếp hường dẫn, định hướng tận tình giúp đờ em suốt trinh thực luận án Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thày, cô môn Công nghệ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội dạy dồ, động viên giúp đỡ cm nhiều thời gian nghiên cứu sinh môn Em xin gửi lời cảm ơn đen thày, cô, anh chị bạn Đỗ Thị Thu Hà, Vũ Thị Hằng - Phịng Cơng nghệ phân tư & Cơng nghệ Vi sinh, Viện Sinh học Nông nghiệp, Học viện Nông nghiệp Việt Nam ln nhiệt tình giúp đỡ sát cánh bên em trình thực luận án đơn vị Tôi xin gửi lời câm ơn đến quan chủ quản - Trường Đại học Mờ Hà Nội, khoa Cơng nghệ Sinh học bố trí thời gian, tạo điều kiện thuận lợi đế tơi hồn thành luận án Cuối cùng, tơi xin cảm ơn chân thành tới gia đình bạn bè ln động viên tinh than, khích lệ lúc khó khăn đế tơi vượt qua hồn thành luận án Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2021 Đinh Thị Thu Lê iỉ MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CHỦ’ VIÉT TẤT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, ĐỊ THỊ ix MỞ ĐÀU Chương TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung khoai tây 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Tình hình sán xuất khoai tây giới Việt Nam 1.2 Giới thiệu khoai tây chế biến chip 1.3 Tim hiếu ve virus hại khoai tây 10 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.4 Giới thiệu chung 10 Giới thiệu PVY 12 Tác hại PVY đến sàn xuất khoai tây 14 Các hướng nghiên cứu khắc phục bệnh virus hại khoai tây 15 1.4.1 Xây dựng hệ thống sán xuất giống khoai tây bệnh 15 1.4.2 Thanh lọc vệ sinh đồng ruộng, nhổ bõ nhiễm virus 19 1.4.3 1.5 Chọn tạo giống kháng bệnh virus 20 Phương pháp chọn tạo giống khoai tây kháng virus 20 1.5.1 Phương pháp chọn tạo giống truyền thống 21 1.5.2 Phương pháp công nghệ sinh học 22 Chương VẶT LIỆU, NÔI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 44 2.1 Vật liệu nghiên cứu 44 2.1.1 Các dòng khoai tây nghiên cứu 44 2.1.2 Hóa chất 46 2.1.3 2.2 2.2.1 Thiết bị 46 Nội dung nghiên cứu 47 Nội dung 1: Xác định thông số tối ưu cho quy trinh dung hợp khoai tây từ nguyên liệu nhị bội (2n = 2x), tứ bội (2n = 4x) khoai tây dại (pnt2G, trn3G, blb2G) 47 2.2.2 Nội dung 2: Xác định đánh giá lai soma tố hợp dung hợp khoai tây nhị bội (2n = 2x) 49 iii Nội dung 3: Xác định thể lai soma cùa tố hợp dung hợp khoai tây dại 2.2.3 (2n = 2x) khoai tây trồng (2n = 4x) Đánh giá kháng PVY cùa chúng 49 Nội dung 4: Đánh giá lai backcross (BCi) lai soma (khoai tây dại 2.2.4 khoai tây trồng) với khoai tây trồng 49 2.3 Phưomg pháp nghiên cứu 51 2.3.1 Tách tế bào trần 51 2.3.2 Dung hợp tế bào trần 52 2.3.3 Xác định lai đếm độ bội flow cytometry 53 2.3.4 Chiết tách DNA tổng số 53 2.3.5 Xác định lai bàng sinh học phântứ 54 2.3.6 Lây nhiễm nhàn tạo PVY 55 2.3.7 Kiếm tra gen kháng PVY lai soma thị phân từ 55 2.3.8 Đánh giá đặc tính nơng sinh học 56 2.3.9 Phân tích chi tiêu hóa sinh 56 2.3.10 Lai lại (backcross) số tố hợp khoai tây có triển vọng với khoai tây trồng 58 2.3.11 2.3.12 Các chi tiêu theo dõi 58 Xử lý số liệu 60 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 61 3.1 Xác định thông số tách, dung hợp, tái sinh tế bào trần dòng khoai tây nhị bội, khoai tây dại khoai tây trồng 61 3.1.1 Nghiên cứu thơng số tách tế bào trần dịng khoai tây nhị bội, khoai tây dại, khoai tây trồng phục vụ cho dung hợp tế bào trần 61 3.1.2 3.1.3 Xác định thông so dung hợp tế bào trần 66 Nuôi cấy tái sinh tô hợp lai sau dung họp 72 3.2 Xác định đánh giá thể lai soma cùa tồ hợp dung hợp khoai tây nhị bội (2n = 2x) .75 3.2.1 Tạo lai 75 3.2.2 Xác định độ bội thê tái sinh 76 3.2.3 Xác định lai soma đo chi thị phán từ 78 3.2.4 Đánh giá phâm chất cù lai soma điểu kiện chậu vại 81 3.2.5 Kiêm tra có mặt gen kháng lai soma từ vật liệu nhị bội 83 3.3 Xác định lai soma tố hợp dung hợp khoai tây dại (2n=2x) khoai tây trồng (2n = 4x) Đánh giá khả kháng virus PVY cùa chúng 85 3.3.1 Xác định lai soma khoai tây dại khoai tây trồng đo độ bội thể86 3.3.2 Xác định lai soma khoai tây dại khoai tây trồng chì thị phân tử.87 iv 3.3.3 Kiểm tra có mặt gen kháng PVY lai soma khoai tây dại khoai tây trồng 88 3.ỉ Đánh giá khả kháng PVY lai soma khoai táy dại khoai tây trồng lảy nhiễm nhân tạo 90 3.3.5 Đánh giá lai soma khoai tây dại khoai tây trơng ve tính trạng nơng sinh học phâm chat củ 91 3.4 Đánh giá lai backcross (BCi) the lai soma (khoai tây dại khoai tây trồng) với khoai tây trồng 96 3.4.1 Lai hữu tinh lai soma (cùa khoai tây dại khoai tây trồng) với giong khoai táy trồng chọn lọc lai có đặc tinh mong muốn 96 3.4.2 Đánh giá kháng PVY lai BC1 triển vọng đóng ruộng kiêm gia có mặt gen kháng PVY thị phán từ 105 3.4.3 Khâo sát diện hẹp dòng lai BC/ triển vọng đồng ruộng 106 Chuông KÉT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ 117 4.1 Kết luận 117 4.2 Đề nghị 117 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BĨ 119 CỦA LUẬN ÁN 119 TÀI LIỆU THAM KHẢO 120 PHỤ LỤC 131 DANH MỤC CHỮ’VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BA - benzyl amino purine BC| Backcross CNSH Công nghệ sinh học CT Công thức DAS-ELISA Double Antibody Sandwich Enzyme linked imunosorbent assay DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme - linked imunosorbent assay FAO Food and Agriculture Organization GAí Gibberellic Acid IAA Indole-3-acetic acid KLCTB Khối lượng củ trung bình LSD Least significant difference MS Murashige and Skoog NAA Naphthaleneacetic acid NSLT Năng suất lý thuyết NSTT Năng suất thực thu NST Nhiễm sắc OD Optical density PCR Polymerase chain reaction PEG Polyethylene glycol PVY Potato virus Y SSR Simple sequence repeat TB Te bào vi DANH MỤC CÁC BẢNG Báng 1.1 Mười lăm quốc gia sàn xuất khoai tây nhiều the giới năm 2019 Bảng 1.2 Diện tích, suất sản lượng khoai tây Việt Nam Băng 1.3 Hệ thống sàn xuất cấp giống khoai tây đồng ruộng Canada 16 Báng 1.4 Tiêu chuẩn ruộng giống khoai tây Việt Nam .18 Bảng 1.5 Thời gian chọn tạo giống khoai tây theo phương pháp truyền thồng 22 Bàng 1.6 Tóm tắt kết q q trình chọn tạo giống khoai tây thông qua dung hợp te bào trần loài Solanum (1985 - 2016) 31 Bàng 2.1 Các vật liệu thu thập, nguồn gốc, độ bội tính trạng mong muốn phục vụ cho lai soma 44 Bàng 2.2 Trinh tự nhiệt độ gắn mồi sử dụng phân tích PCR chọn lọc lai soma khoai tây dại khoai tây trồng 54 Bảng 3.1 Ánh hường nồng độ macerozyme cellulase dung dịch enzyme đến mật độ tế bào trần dòng khoai tây nhị bội (Te bào trần /ml môi trường) 61 Bâng 3.2 Ánh hường cùa thời gian ủ mẫu dung dịch enzyme đến mật độ tế bào trần thu 64 Bảng 3.3 Ánh hưởng cùa tuổi in vitro đen mật độ te bào trần thu từ mẫu 65 Bảng 3.4 Ánh hưởng tần số dung hợp số lần tạo xung điện đến khả tạo callus cúa tố hợp B186 (+) B208 tổ hợp trnĩG (+) Delikat 66 Bảng 3.5 Ánh hường nồng độ ion Ca2+ đến khả kết dính thành hàng tế bào trình dung hợp khà tế bào phân chia sau dung hợp 68 Bâng 3.6 Ảnh hướng cùa mật độ tế bào trần đến kết dung hợp xung điện cũa tố hợp nhị bội BI86 (+) B208 70 Báng 3.7 Ảnh hưởng cùa mật độ tế bào trần đến kết dung hợp xung điện tố hợp khoai tây dại khoai tây trồng trnĩG (+) Delikat 71 Báng 3.8 Sự phân chia tổ hợp lai nhị bội tồ hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng môi trường nuôi cấy khác 72 Bâng 3.9 Ảnh hướng môi trường tái sinh khác đến khả tạo chồi tố hợp lai 74 Bàng 3.10 Ket quà dung hợp, nuôi cấy tái sinh tổ hợp lai nhị bội sau dung hợp 76 Báng 3.11 Kết xác định độ bội lai sau dung hợp 76 vii Bàng 3.12 Kết quà xác định lai soma tố hợp dung hợp 78 Bảng 3.13 Một số chi tiêu hóa sinh dịng lai soma khoai tây dòng nguyên liệu 82 Bàng 3.14 Kết nuôi cấy tái sinh chồi tố hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng sau dung hợp 86 Bảng 3.15 Kết tái sinh phân tích độ bội thể cũa tổ hợp lai khoai tây dại khoai tây trồng sau dung hợp 86 Bảng 3.16 Kết sừ dụng marker phân tử xác định lai soma 88 Bàng 3.17: Ket mức độ kháng bệnh cùa lai soma 6x sau lây nhiễm nhân tạo 90 Bảng 3.18 Đánh giá đặc tính nơng sinh học lai soma điều kiện chậu vại 94 Bảng 3.19 Ket quà lai hữu tính lai soma khoai tây trồng tứ bội 96 Bảng 3.20 Khả mầm hạt lai BCi 97 Báng 3.21 Đánh giá khả nàng kháng bệnh virus lai BC1 giai đoạn con.98 Bảng 3.22 Bảng đánh giá hình thái kiểu sinh trưởng lai BCi 99 Bảng 3.23 Bảng đánh giá suất hình thái củ lai BCi 100 Bảng 3.24 Tinh hình sinh trường, phát triển vật liệu khảo sát sau 60 ngày trồng 102 Bàng 3.25 Các yếu tố cấu thành suất dòng/giống khoai tây kháo sát 103 Băng 3.26 Đặc tính nơng sinh học dòng/giống khoai tây khảo sát điều kiện đồng ruộng 107 Báng 3.27 Thời gian sinh trướng qua giai đoạn dòng/giống khoai tây 109 Báng 3.28 Ket quà đánh giá tình hình sinh trường, phát triển lai BC1 giống khoai tày trồng vụ đông xuân 2017-2018 110 Bàng 3.29 Các yếu tố cấu thành suất cùa dòng/giống khoai tây khào sát 111 Báng 3.30 Đặc điềm hình thái củ khoai tây dịng/giống khảo sát 112 Bâng 3.31 Đánh giá căm quan chất lượng cù qua ăn nếm cúa dòng/giống khoai tây 113 Báng 3.32 Đánh giá hàm lượng chất khơ dịng/ giống khoai tây .114 viii MEANS FOR EFFECT NL NOS NL LA 10 5.20000 10 6.05000 10 6.30000 SE (N= 10) 0.180278 5% LSD 18DF 0.535631 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 5/ 6/18 12:28 :PAGE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V 1GS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL SS RESID SS LA 30 5.8500 1.2536 I % I I I I I I 9.7 0.0000 0.0011 0.57009 BALANCED ANOVA FOR VARIATE |NL I I LA FILE SOLA 5/ 6/18 12:20 - :PAGE VARIATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES I G$ 42.3000 4.70000 9.20 0.000 2NL 15.8000 7.90000 15.46 0.000 * RESIDUAL 18 9.20000 * TOTAL (CORRECTED) 511111 29 67.3000 2.32069 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA -iPAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS 1305.6 LA 9.50000 Rasant 9.50000 Delikat 8.00000 1303.4 9.00000 1303.22 1301.5 1300.3 solara atlantic 3 SE(N= 3) 5%LSD I8DF 8.50000 8.50000 10.0000 9.50000 12.0000 0.412760 1.22637 MEANS FOR EFFECT NL F RATIO PROB ER LN 5/6/18 12:20 NOS NL LA 8.20000 10 9.90000 10 9.50000 SE(N= 10) 0.226078 5% LSD 18DF 0.671710 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 5/ 6/18 12:20 - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |GS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID SS LA 30 9.2000 1.5234 I % I I I I I 7.8 0.0000 0.0001 0.71492 LA FILE SOLA BALANCED ANOVA FOR VARIATE |NL I I 3/6/18 21:56 - :PAGE VARIATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES G$ 50.5333 5.61481 3.38 0.013 2NL 7.46667 3.73333 2.25 0.133 * RESIDUAL 18 29.8667 * TOTAL (CORRECTED) 1.65926 29 87.8667 3.02989 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS LA 1305.6 15.0000 Rasant 14.6667 Delikat 15.6667 1303.4 15.0000 1303.22 1301.5 1300.3 14.0000 15.6667 15.3333 solara 17.0000 atlantic 16.3333 SE (N= 3) 0.743698 5% LSD 18DF 2.20964 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 10 LA 14.4000 F RATIO PROB ER LN 3/ 6/18 21:56 10 15.6000 10 15.2000 SE(N= 10) 0.407340 5%LSD I8DF 1.21027 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 3/ 6/18 21:56 -iPAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - I GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |G$ VARIATE (N= 30) SD/MEAN I NO BASEDON BASEDON % OBS TOTAL ss RESID ss I LA 30 15.067 1.7407 I I I |NL I I I I I 8.5 0.0134 0.1326 1.2881 LA FILE SOLA BALANCED ANOVA FOR VARIATE :PAGE 3/ 6/18 22: I VARATE V003 LA LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES I G$ 42.5333 4.72593 2.20 0.074 2NL 26.6667 13.3333 6.21 0.009 18 38.6667 • RESIDUAL • TOTAL(CORRECTED) 2.14815 29 107.867 3.71954 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS LA 20.0000 1305.6 Rasant 20.3333 Dclikat 22.3333 1303.4 21.3333 1303.22 1301.5 3 1300.3 19.6667 20.0000 20.6667 solara 22.6667 atlantic 21.6667 SE(N= 3) 0.846197 5%LSD 18DF 2.51418 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS LA 10 19.4000 10 21.4000 F RATIO PROB ER LN 3/ 6/18 22: 21.4000 10 SE(N= 10) 0.463481 5%LSD 18DF 1.37707 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 3/ 6/18 22: - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V JGS VARIATE NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID ss 30 20.733 LA 1.9286 I I I I I I 7.10.0737 0.0089 1.4657 BALANCED ANOVA FOR VARIATE I % |NL I I (N= 30) SD/MEANI CCT FILE TTB1 - :PAGE 6/ 6/18 17:27 VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES 1G$ 12.7083 1.41204 6.84 0.000 2NL 6.95000 3.47500 16.83 0.000 •RESIDUAL 18 3.71667 • TOTAL (CORRECTED) 206482 29 23.3750 806034 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTBl - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ NOS GS 1305.6 CCT 4.00000 rasant 6.00000 delikat 4.66667 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 solara 4.50000 5.00000 4.83333 5.66667 4.83333 atlantic SE(N= 4.00000 0.262349 3) 5%LSD 18DF 0.779478 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT I 10 4.10000 10 4.90000 10 5.25000 SE(N= 10) 0.143695 F RATIO PROB ER LN 6/ 6/18 17:27 5% LSD 18DF 0.426938 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 1TB1 6/ 6/18 17:27 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V JGS VARIATE (N= 30) NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID SS CCT 30 4.7500 0.89779 I % I I I |NL I I I SD/MEANỊ I I 9.6 0.0003 0.0001 0.45440 :PAGE I VARIATE V003 CCT SOURCE OF VARIATION LN SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 2NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 18 249.467 • TOTAL(CORRECTED) F RATIO PROB ER LN 13.8593 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/6/1817:53 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS 1305.6 CCT 32.7500 rasant 37.8333 dclikat 34.1333 1303.4 33.1667 1303.22 34.5833 1301.5 35.5833 1300.3 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5% LSD 18DF 6.38607 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 5%LSD 18DF 1.17725 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V ỊGS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID ss CCT 30 35.045 4.4265 I % I I I I I |NL I I I 10.6 0.0900 0.1405 3.7228 I :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 2NL 60.3915 30.1958 2.18 0.140 18 249.467 • RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) F RATIO PROB ER LN 13.8593 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS F1LETTB1 17:53 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS CCT NOS 1305.6 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 1303.22 1301.5 1300.3 33.1667 34.5833 35.5833 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 5%LSD I8DF 6.38607 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 5%LSD 18DF 1.17725 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V |GS (N= 30) SD/MEAN I NO BASEDON BASEDON % I I I I I |NL 6/6/18 TOTAL ss RESID ss OBS CCT 30 35.045 4.4265 I I I 10.6 0.0900 0.1405 3.7228 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES I G$ 258.368 28.7076 2.07 0.090 2NL 260.3915 30.1958 2.180.140 •RESIDUAL 18 249.467 13.8593 29 568.227 * TOTAL (CORRECTED) F RATIO PROB ER LN 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/6/18 17:53 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS CCT NOS 1305.6 32.7500 rasant 37.8333 delikat 34.1333 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 33.1667 34.5833 35.5833 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 2.14936 SE(N= 3) 6.38607 5%LSD I8DF MEANS FOR EFFECT NL NOS NL CCT 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SE(N= 10) 1.17725 5%LSD 18DF 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILETTB1 6/6/18 17:53 - :PAGE F-PROBABLI1TY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - I GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V ỊGS VARIATE (N= 30) - — SD/MEAN1 CCT NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL ss RESID ss 30 35.045 4.4265 3.7228 % 1 1 10.6 0.0900 0.1405 - :PAGE VARIATE V003 CCT 1 1 |NL I SOURCE OF VARIATION LN 2NL MEAN DF SUMS OF SQUARES 258.368 28.7076 2.07 0.090 60.3915 30.1958 2.18 0.140 * RESIDUAL 13.8593 18 249.467 • TOTAL (CORRECTED) F RATIO PROB ER SQUARES 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTBI 6/ 6/18 17:53 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS CCT NOS 1305.6 32.7500 rasant 37.8333 delikal 34.1333 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 33.1667 34.5833 35.5833 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 SE(N= 3) 2.14936 6.38607 5%LSD 18DF MEANS FOR EFFECT NL NOS NL CCT 33.0750 I 10 10 36.3600 10 35.7000 1.17725 SE(N- 10) 5%LSD I8DF 3.49779 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILETTB1 6/6/18 17:53 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V IGS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON % OBS TOTAL ss RESID ss I 30 35.045 4.4265 3.7228 I I I |NL I I I I I 10.6 0.0900 0.1405 :PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN F RATIO PROB ER I G$ 258.368 2NL 60.3915 •RESIDUAL 2.07 0.090 28.7076 2.18 0.140 30.1958 13.8593 18249.467 • TOTAL (CORRECTED) 29 568.227 19.5940 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/ 6/18 17:53 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS CCT NOS 1305.6 32.7500 rasant 37.8333 delikai 34.1333 1303.4 3 1303.22 1301.5 3 1300.3 33.1667 34.5833 35.5833 38.0000 solara 39.0667 atlantic 36.6667 2.14936 SE(N= 3) 6.38607 5%LSD 18DF MEANS FOR EFFECT NL NOS NL CCT I 10 33.0750 10 36.3600 10 35.7000 SB(N= 10) 1.17725 5% LSD 18DF 3.49779 616/18 17:53 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTBI - page F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - I GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V |GS VARIATE (N= 30) SD/MEANỊ CCT NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID ss 30 35.045 4.4265 I I I I I I 10.60.0900 0.1405 3.7228 BALANCED ANOVA FOR VARIATE % |NL I I CCTFILETTBI - PAGE 6/6/18 18:4 I VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN G$ 83.1274 9.23638 2.86 0.028 NL 70.0685 35.0342 10.85 0.001 • RESIDUAL 18 58.0998 3.22777 F RATIO PROB ER ♦ TOTAL (CORRECTED) 7.28606 29 211.296 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/6/18 18: - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ CCT NOS GS 1305.6 28.0000 rasant 28.0000 delikat 28.0000 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 27.6667 28.2333 29.0833 30.3333 solara 32.3333 atlantic 30.0000 SE(N= 3) 1.03727 3.08187 5%LSD I8DF MEANS FOR EFFECT NL NL NOS CCT 10 26.7000 10 29.2450 10 30.3500 SE (N= 10) 0.568135 1.68801 5% LSD 18DF ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILETTB1 6/6/18 18:4 - :PAGE F-PROBABLI1TY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V ỊGS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL SS RESID ss 30 28.765 2.6993 |NL I I % I I I I I I 6.2 0.0276 0.0009 1.7966 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCT FILE TTBI 6/ 6/18 18:52 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCT FILE TTBI 6/ 6'18 19:11 - :PAGE I VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES 2NL DF SUMS OF MEAN SQUARES 350.253 38.9170 2.87 0.027 453.021 226.511 16.69 0.000 • RESIDUAL * TOTAL (CORRECTED) 18 244.337 13.5743 29 1047.61 36.1245 F RATIO PROB ER TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 6/6/18 19:11 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ CCT NOS GS 1305.6 46.4167 rasant 56.0833 delikal 52.7833 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 47.5000 47.3333 51.7500 54.3500 solara 54.8333 atlantic 55.5000 2.12715 SE(N= 3) 5%LSD 18DF 6.32007 MEANS FOR EFFECT NL NOS NL CCT 46.4500 10 10 53.1650 10 55.6500 SE(N= 10) 1.16509 5%LSD 18DF 3.46164 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILETTB1 6/6/18 19:11 - :PAGE F-PROBABLI1TY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V |GS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON % OBS TOTAL ss RESID ss I 30 51.755 6.0104 3.6843 I |NL I I I I I I I 7.1 0.0274 0.0001 - :PAGE I VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES 2NL DF SUMS OF MEAN 548.604 60.9560 4.18 0.005 379.129 189.565 12.98 0.000 * RESIDUAL * TOTAL(CORRECTED) 18 262.782 14.5990 29 1190.52 41.0523 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 -iPAGE MEANS FOR EFFECT G$ F RATIO PROB ER SQUARES 6/ 6/18 20:13 GS CCT NOS 1305.6 63.0833 rasant 67.0000 dclikat 60.8500 1303.4 3 1303.22 1301.5 I3OO.3 54.3333 56.4167 61.5167 59.0833 solara 63.1167 atlantic 65.7500 SE(N= 3) 2.20598 5%LSD 18DF 6.55429 MEANS FOR EFFECT NL NOS NL CCT 10 57.3000 10 62.6500 10 65.9250 SE(N= 10) 1.20826 5%LSD 18DF 3.58993 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE F1LETTB1 6/6/18 20:13 - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V |GS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL SS RESID SS 30 61.958 6.4072 I % I I I I |NL I I I 6.2 0.0049 0.0004 3.8209 - - PAGE VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES I G$ 484.443 53.8270 2.24 0.069 2NL 387.127 193.563 8.06 0.003 18 432.404 * RESIDUAL • TOTAL (CORRECFED) 24.0225 29 1303.97 44.9646 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS CCT 76.0833 1305.6 rasant 79.9167 dclikat 77.1000 F RATIO PROB ER LN 6/ 6/18 20:34 1303.4 1303.22 1301.5 1300.3 66.6667 68.4333 73.2333 69.5000 solara 75.7500 atlantic 73.8167 SE(N= 3) 2.82975 5%LSD I8DF 8.40760 MEANS FOR EFFECT NL CCT NOS NL I 10 69.8850 10 71.3150 10 78.1190 SE(N= 10) 1.54992 5%LSD 18DF 4.60503 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILETTB1 6/6/1820:34 - :PAGE F-PROBABL11TY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION c OF V |GS VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL SS RESID ss 30 73.106 6.7056 I % I I I |NL I I I I I 6.7 0.0693 0.0032 4.9013 VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES G$ 233.680 25.9645 0.59 0.786 2NL 387.698 193.849 4.43 0.027 18 787.006 • RESIDUAL ♦ TOTAL (CORRECTED) 43.7226 29 1408.38 48.5650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS CCT 82.0000 1305.6 rasanl delikat 84.9333 88.9333 80.1167 1303.4 1303.22 83.5667 1301.5 81.5000 1300.3 solara 3 82.0667 82.4667 F RATIO PROB ER LN 6/6/18 20:46 atlantic 84.1867 3.81762 SE(N= 3) 5% LSD 18DF NL 11.3427 CCT NOS I 10 79.1000 10 87.6560 10 81.5750 SE(N= 10) 2.09099 5% LSD 18DF 6.21265 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V ịGS VARIATE (N= 30) SD.'MEAN I NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL SS RESID SS CCT 30 82.777 6.9689 I % I I I |NL I I I I I 8.0 0.7864 0.0268 6.6123 VARIATE V003 CCT LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF MEAN SQUARES GS 233.680 25.9645 0.59 0.786 2NL 387.698 193.849 4.43 0.027 •RESIDUAL 18 787.006 * TOTAL (CORRECTED) 43.7226 29 1408.38 48.5650 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TTB1 - :PAGE MEANS FOR EFFECT G$ GS NOS 1305.6 CCT 82.0000 rasant 84.9333 delikat 88.9333 1303.4 3 1303.22 1301.5 1300.3 80.1167 83.5667 81.5000 82.0667 solara 82.4667 atlantic 84.1867 SE (N= 3) 3.81762 5% LSD 18DF 11.3427 MEANS FOR EFFECT NL NL NOS 10 CCT 79.1000 F RATIO PROB ER LN 6/ 6/18 20:46 10 87.6560 10 81.5750 SE(N= 10) 2.09099 5%LSD I8DF 6.21265 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TTB1 6/ 6/18 20:46 - :PAGE F-PROBABL1ITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - I GRAND MEAN STANDARD DEVIATION COFV|G$ VARIATE (N= 30) SD/MEAN I CCT NO BASEDON BASEDON OBS TOTAL ss RESID ss 30 82.777 6.9689 6.6123 % I I I I I I I I 8.0 0.7864 0.0268 |NL