hddddddddddddddgssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssgssssssssssssssssssssssssssssssssssssgggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggg
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC BÁO CÁO THÍ NGHIỆM VI SINH VẬT Giảng viên hướng dẫn: Nguyễn Minh Thiện Lớp: L02 Sinh viên thực HỌ VÀ TÊN MSSV Nguyễn Hiếu Vinh 2115298 Hồ Thái Anh Thi 2114854 Bùi Bảo Trung 2115105 Mai Nguyễn Lập Thành 2114779 Nguyễn Thị Quỳnh Giang 2113257 TP Hồ Chí Minh, tháng 12 năm 2023 MỤC LỤC BÀI 1: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐẠI CƯƠNG: THỰC HÀNH: KẾT QUẢ BÀI CẤY ĐẠI CƯƠNG: THỰC HÀNH: KẾT QUẢ: 11 BÀi CÁC PHƯƠNG PHÁP NHUỘM MÀU VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT 12 ĐẠI CƯƠNG 12 THỰC HÀNH 13 KẾT QUẢ: 17 BÀI ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT TRỰC TIẾP 19 ĐẠI CƯƠNG 19 THỰC HÀNH 20 KẾT QUẢ 21 BÀI 5: ĐỊNH LƯỢNG GIÁN TIẾP 24 ĐẠI CƯƠNG 24 THỰC HÀNH: 24 KẾT QUẢ: 26 BÀI 1: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐẠI CƯƠNG: 1.1 Khái niệm Môi trường nuôi cấy nguyên liệu chứa chất dinh dưỡng cần thiết cho vi khuẩn phát triển phịng thí nghiệm 1.2 Phân loại − Phân loại theo trạng thái lý hóa: + Mơi trường lỏng: thường dùng để nhân giống, nghiên cứu số đặc tính, tổng hợp vi sinh vật; môi trường không chứa agar hay gelatin… + Môi trường rắn (môi trường đặc): cho lượng agar (1.5 – 2%) hay gelatin (10 – 20%) vào môi trường lỏng để làm đặc môi trường, thường dùng để phân lập, nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý vi sinh vật… + Mơi trường bán rắn: hàm lượng chất tạo độ đặc môi trường rắn (0.3 – 0.7% agar), thường dùng cho việc xác định khả chuyển động vi sinh vật… − Phân loại theo thành phần: + Môi trường xác định: chứa chất hóa học mà thành phần xác định định lượng cách cụ thể xác + Mơi trường bán tổng hợp: chứa chiết xuất nấm men, thịt hay thực vật, peptone, vitamin yếu tố sinh trưởng… + Môi trường có sẵn: mơi trường pha sẵn dạng bột, cần hòa tan với hàm lượng nước định sử dụng − Phân loại theo mục đích: + Mơi trường chọn lọc: hạn chế phát triển vi khuẩn không mong muốn làm tăng phát triển vi khuẩn mong muốn + Môi trường chuyên biệt: giúp phân biệt khuẩn lạc vi khuẩn mong muốn + Môi trường tăng sinh: tăng nồng độ vi khuẩn mong muốn 1.3 Nguyên tắc tạo môi trường dinh dưỡng − Dựa sở nhu cầu chất dinh dưỡng khả đồng hóa chất dinh dưỡng loại vi sinh vật − Đảm bảo cân áp suất thẩm thấu môi trường tế bào vi sinh vật nên cần điều chỉnh tỷ lệ nồng độ chất thành phần môi trường − Đảm bảo điều kiện hóa lý cần thiết cho hoạt động trao đổi chất vi sinh vật 1.4 Các tiêu môi trường nuôi cấy − Đủ chất dinh dưỡng cần thiết cho loài vi khuẩn cần nuôi − Đủ độ ẩm cần thiết − Khoảng pH thích hợp − Mức độ oxy cần thiết − Tiệt trùng − Ủ nhiệt độ thích hợp mà thành phần dinh dưỡng không bị ảnh hưởng THỰC HÀNH: 2.1 Chuẩn bị dụng cụ − Ống nghiệm − Đĩa petri − Đèn cồn − Ống đong − Chai đựng hóa chất 2.2 Chuẩn bị hóa chất − Mơi trường nuôi cấy NB (Nutrient Broth) − Bột thạch Agar 2.3 Tiến hành thí nghiệm Bước 1: Cân, đong thành phần môi trường + Đối với môi trường lỏng: H2O g/l NB + Đối với môi trường rắn: H2O, g/l NB 1.5% agar Bước 2: Hịa tan thành phần mơi trường lượng nước nhỏ, sau trộn lẫn tất thành phần dinh dưỡng với thêm nước cho đủ thể tích Khi pha mơi trường cần phải khuấy cho agar tan hoàn toàn để tránh việc môi trường không đông đặc lại Bước 3: Cho mơi trường hịa tan vào chai đựng hóa chất để tiến hành hấp tiệt trùng Bước 4: Hấp tiệt trùng nồi hấp nhiệt độ 121oC 20 phút Bước 5: Để nguội Sau dùng ống nghiệm để chuẩn bị môi trường thạch đứng, thạch nghiêng đĩa petri để chuẩn bị môi trường thạch đĩa + Đối với môi trường thạch đứng: cho khoảng 1/2 ống nghiệm để thẳng đứng giá đựng ống nghiệm Sau dùng nút bơng bịt chặt vừa phải dùng giấy bọc phần miệng ống với nút lại + Đối với môi trường thạch nghiêng: để ống nghiệm nằm nghiêng