Điều tra tỷ lệ nhiễm salmonella trên một số trại gà ở thành phố hải phòng

ề Đ án Ki nh Đề tài: ĐIỀU TRA TỶ LỆ NHIỄM SALMONELLA TRÊN MỘT SỐ TRẠI GÀ Ở THÀNH PHỐ HẢI PHÒNG Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thùy Dung Lớp : Công nghệ sinh học K14 Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Người hướng dẫn 1: TS Lưu Quỳnh Hương Người hướng dẫn 2: ThS Lưu Thúy Hòa HẢI PHỊNG -2017 tế KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP c ố qu VIỆN SINH-NÔNG tế TRƯỜNG ĐẠI HỌC HẢI PHÒNG ề Đ án Ki nh tế ố qu LỜI CẢM ƠN c Quỳnh Hương ThS.Lưu Thúy Hịa tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực thực tập tốt nghiệp Tơi xin chân thành cảm ơn quý Thầy, Cô Viện Sinh Nơng, Trường Đại Học Hải Phịng đã tạo điều kiện thuân lợi cho suốt thời gian năm học vừa qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tập thể cán bộ, môn Vệ sinh Thú y, Viện Thú y Quốc gia gia đình bạn bè đồng nghiệp động viên, cổ vũ giúp đỡ suốt trình thực hồn thành luận văn Hải Phịng, ngày 30 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Thùy Dung tế Để hồn thành khóa luận này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Lưu ề Đ án Ki nh tế ố qu DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT c tế S RV BPW DHL Tp KA DK WHO MR Cs K.đạt HT ĐBSCL KKS Salmonella Rappaports Vassiliadis Buffered Pepton Water Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose Thành phố Quận Kiến An Quận Dương Kinh World Health Organization Methyl red Cộng Không đạt Hệ thống Đồng sông Cửu Long Kháng kháng sinh ề Đ án Ki nh tế ố qu PHẦN 1.MỞ ĐẦU Hải Phòng là thành phố cảng quan trọng, trung tâm cơng nghiệp, cảng biển lớn nhất phía Bắc Việt Nam, đồng thời trung tâm kinh tế, văn hoá, y tế, giáo dục, khoa học, thương mại công nghệ của Vùng duyên hải Bắc Bộ Đây thành phố lớn thứ nước, lớn thứ miền Bắc sau Hà Nội Ngày nay, Hải Phòng trung tâm kinh tế quan trọng Việt Nam, từ năm 2005 đến đứng top tỉnh thành phố đóng góp ngân sách nhiều nước, cụ thể đứng vị trí thứ sau Thành phố Hồ Chí Minh, Hà Nội và Bà Rịa Vũng Tàu Hải Phòng thành phố sát biển Đơng, có vị trí địa lý thuận lợi, điều kiện tự nhiên phong phú, đa dạng, khí hậu ơn hịa điều kiện tốt cho phát triển kinh tế, phải kể đến ngành chăn ni gia cầm Tính đến ngày 01/10/2007 địa bàn thành phố có 472 trang trại theo tiêu chí Thơng tư liên tịch số 69/2000/TTLT -BNN -TCTK ngày 26/3/2000 Liên tịch Bộ Nông nghiệp  - Tổng cục thống kê có 183 trang trại gà Nét bật phát triển chăn nuôi trang trại tập trung năm gần số địa phương chủ động xây dựng quy hoạch sản xuất chăn nuôi theo hướng phát triển bền vững hình thành số khu chăn ni trang trại tập trung Hải Phịng có tỷ lệ hộ chăn nuôi gà với quy mô trang trại cao.Theo thống kê Tổng cục thống kê thành phố Hải Phòng số 67 /BC-CTK, ngày 22/04/2017 ước tính số lượng gia cầm có sau:Tổng đàn gia cầm 6.959,36 ngàn tăng 0,84% so với kỳ năm trước, đó: đàn gà 5.241,44 ngàn tế 1.1 Tính cấp thiết đề tài c ĐẶT VẤN ĐỀ ề Đ án Ki nh tế 79,47% tổng đàn gia cầm, tăng 0,74% so với kỳ năm trước Đối với ố qu tái đàn hết lứa Các hộ chăn nuôi nhỏ lẻ dân quy mô từ đến 40, 50 con, hộ trì sản xuất để phục vụ nhu cầu thực phẩm hàng ngày Do vậy, chăn ni gia cầm nhìn chung ổn định so kỳ có xu mở rộng quy mơ chăn ni, giá đầu mang lại hiệu cho người sản xuất giá giống có xu giảm so tháng trước Những năm gần đây, chăn nuôi gà thịt phát triển mạnh, nhiên, điều kiện nuôi gà với quy mô lớn thuận lợi cho việc phát triển bệnh vi khuẩn gây ra, vi khuẩn Salmonella hạn chế đáng kể việc phát triển mạnh giống gia cầm Hầu hết hộ chăn nuôi gà bị nhiễm Salmonella mức độ khác Salmonella thuộc họ Enterobactriceae, gây nhiều bệnh cho gà bệnh thương hàn, nhiễm trùng huyết nhiều bệnh nghiêm trọng khác Có thể nói sở chăn nuôi dù quy mô lớn hay nhỏ xuất bệnh Xuất phát từ thực tiễn nghiên cứu yêu cầu sản xuất, tiến hành nghiên cứu đề tài : “Điềù tra tỷ lệ nhiễm Salmonella số trại gà thành phố Hải Phòng” tế so kỳ, mang lại hiệu sản xuất, hộ chăn ni tiếp tục c chăn nuôi gà lông màu trang trại, gia trại, giá bán sản phẩm có thấp ề Đ án Ki nh tế ố qu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định số đặc tính sinh hóa vi khuẩn Salmonella phân lập - Định type, thử độc lực chủng Salmonella phân lập chuột nhắt trắng 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Kết nghiên cứu đề tài bổ sung thêm nguồn tư liệu cho nghiên cứu Salmonella gà nói riêng Salmonella gia cầm nói chung Việt Nam Thế giới - Kết nghiên cứu sở để xây dựng chương trình phịng bệnh tổng hợp để bước giám sát khống chế bệnh Salmonella gây gà góp phần bảo vệ sức khoẻ vật nuôi cộng đồng tế - Xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella trại gà thành phố Hải Phòng c - Nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Salmonella ề Đ án Ki nh tế ố qu 2.TỔNG QUAN TÀI LIỆU Năm 1880, Eberth lần quan sát thấy vi khuẩn Salmonella kính hiển vi Bốn năm sau (1884), Gaffky ni cấy thành cơng vi khuẩn Lồi vi khuẩn Salmonella typhi thời gian đầu gọi với tên như: Bacillus typhous, Bacterium typhi Eberthella typhi hay Eberthella typhi tiphosa, tên giống Salmonella Lignires sử dụng đặt tên cho trực khuẩn gây bệnh dịch tả “Hogcholera bacillus” vào năm 1900 (Selbizt cs, 1995) Năm 1885, tên gọi S choleraesuis lần xuất báo cáo năm phịng chăn ni cơng nghiệp Mỹ với nhìn nhận nhầm lẫn cho tác nhân gây bệnh dịch tả lợn (Barnes D.M Sorensen K.D, 1975) Thời gian này, Salmon, D.E trưởng phịng nghiên cứu, mà tên ơng lấy đặt cho vi khuẩn Song Smith, người cộng Salmon thật người phát vi khuẩn Salmonella Một vài năm sau đó, loài Salmonella khác phát lồi vi khuẩn có ý nghĩa y học ngày Năm 1891 Jensen, phân lập S dublin từ bệnh phẩm bê bị tiêu chảy Cũng vào năm đó, S.typhimurium phát vùng Greiswald Breslau Hai năm sau (1893), Breslau xảy vụ ngộ độc thịt ăn phải thịt bò ốm, kết bệnh xảy người Kaensche người tìm thấy vi khuẩn, vi khuẩn đặt tên trực khuẩn Kaensche (Selbizt cs, 1995) Tất bệnh Salmonella gây lúc đầu đặt tên chung Phó thương hàn “Para-typhus”, năm 1914, có 12 lồi vi khuẩn mơ tả xếp vào giống Salmonella tế 2.1.1 Tình hình nghiên cứu Salmonella Thế giới c 2.1 Tình hình nghiên cứu Salmonella bệnh chúng gây ề Đ án Ki nh tế Năm 1926, với cơng trình nghiên cứu White cấu trúc kháng ố qu Salmonella (Selbizt cs, 1995) Năm 1934, Kauffmann White thiết lập bảng cấu trúc kháng nguyên đặt tên bảng phân loại Kauffmann-White Từ đến nay, bảng cấu trúc kháng nguyên Salmonella ln bổ sung Năm 1993 có 2375 serovar Salmonella định danh (Selbizt cs, 1995) Năm 1997, số serovar lên đến 3000 (Plonait Birkhardt, 1997) Như vậy, giống Salmonella luôn thu hút ý nhà chuyên môn lĩnh vực vi sinh vật Trước năm 1983, tồn nhiều lồi Salmonella chấp nhận phân loại Từ kết thí nghiệm cho thấy mức tương đồng DNA cao, tất chủng Salmonella xếp thành loài S Choleraesuis (Salmonella choleraesuis) (Crosa cs, 1973; Farmer, 1995) Năm 1999, khóa phân loại học trung tâm Kiểm sốt phòng ngừa dịch bệnh (CDC: Center for Diease Control and Prevention) Hoa Kỳ, Euzéby đề nghị đặt tên typ huyết Salmonella sau: Giống Salmonella chia thành lồi, S enterica S bongori Tất type huyết gây bệnh cho người động vật thuộc S enterica Loài S enterica chia nhỏ thành lồi là: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houterae indica, tương ứng với số la mã: I, II, IIIa, IIIb, IV VI dựa tương đồng DNA phạm vi vật chủ Do lồi I có nhiều typ huyết khác nên loài phân loại đến typ huyết Để nhấn mạnh typ huyết loài riêng biệt nên tên typ huyết không viết nghiêng chữ đầu phải viết hoa Vì vậy, S choleraesuis có tên đầy đủ S enterica serotyp choleraesuis, viết tắt ngắn gọn tế Sau Kauffmann thành cơng lĩnh vực nghiên cứu vi khuẩn c nguyên Salmonella bắt đầu thời kỳ khoa học giống vi khuẩn ề Đ án Ki nh tế S choleraesuis Mặc dù hệ thống phân loại khơng cơng nhận ố qu Từ việc tìm thấy vi khuẩn Salmonella động vật ốm, sản phẩm động vật, nước dụng cụ chăn ni , tác giả có đề xuất giải pháp tổng hợp cần thiết nhằm tránh lây lan vi khuẩn hệ sinh thái môi trường để bảo vệ sức khỏe Nguồn tàng trữ Salmonella chủ yếu đường tiêu hoá người động vật mắc bệnh Một vài loài S typhi, S paratyphi A, S paratyphi B, S paratyphi C ký sinh người Những loài khác hay gặp như: S choleraesuis, S enteritidis chủ yếu ký sinh động vật có khả gây bệnh cho người Do tính chất gây bệnh vi khuẩn Salmonella khơng cho gia súc, gia cầm, động vật máu nóng, máu lạnh người nên từ lâu nhân y thú y, người ta quan tâm nghiên cứu đặc tính sinh học, yếu tố gây bệnh biện pháp phòng điều trị bệnh chúng gây Wilcock Schwartz (1992) nước Anh, năm 1972 tìm thấy vi khuẩn Salmonella có phân lợn 9,9%, năm 1973 tìm thấy vi khuẩn Salmonella hạch ruột 7,3% Tại Nhật Bản, Asai cs (2002) cho thấy tỷ lệ nhiễm Salmonella lợn sau cai sữa bị tiêu chảy 12,4%; lợn vỗ béo 17,3%; lợn theo mẹ 4,5% Tác giả cho biết S typhimurium phân lập thấy nhiều lợn sau cai sữa 72,6%; lợn gần xuất chuồng 73,8% tế tổ chức y tế giới hiệp hội vi c cách thức ủy ban quốc tế vi khuẩn học hệ thống, ề Đ án Ki nh tế Trung tâm Kiểm sốt Phịng ngừa dịch bệnh (CDC) Hoa Kỳ ước tính ố qu Ở nước khác, theo nghiên cứu Piskus et al (2008), tỉ lệ thịt gà bị nhiễm Salmonella spp 29% Lithuania, 20% Ý 11% Hà Lan Báo cáo Shoba et al., (1996) cho thấy 100% Salmonella phân lập từ trứng mang plasmid spv Gần đây, nhiều nghiên cứu tập trung vào nghiên cứu gen kháng kháng sinh DT104 vi khuẩn Salmonella Chủng đa kháng thuốc S typhimurium DT104 phát lần người mắc Salmonellosis Anh vào năm 1980 Sau quan sát thấy người vật nuôi khắp giới vào năm 90 mối quan ngại hàng đầu sức khỏe cộng đồng Gen thường xuất serotyp S typhimurium thấy serotyp khác Một tổ hợp kháng thuốc điển hình S typhimurium DT104 kháng đồng thời với loại kháng sinh, bao gồm: Ampicillin, Chloramphenicol, Streptomycin, Sulfonamide Tetracycline (ACSSuT) (Kishima cs, 2008) Tuy nhiên, khơng có chiều ngược lại, tức kết xác định lâm sàng cho thấy chủng vi khuẩn kháng với loại kháng sinh chưa đủ để kết luận chủng vi khuẩn có mang gen kháng kháng sinh DT104 (Kishima cs, 2008) Cũng theo tác giả, có 61,5% số chủng thuộc serotyp S typhimurium có mang gen DT104 Selbitz (1995) cịn cho biết: “genom” Salmonella nghiên cứu tương đối kỹ Cho đến chứng minh 750 gen, có 680 gen có đồ gen tế bệnh nhiễm trùng gây Salmonella c Salmonella gây 1.4 triệu tập nhiễm năm 1999 2003, với 7% ề Đ án Ki nh tế 1,2 0 7.14 14.29 7.14 42.86 S choleraesuis S typhimurium S enteritidis S derby S rissen S anatum 21.43 Hình 4.3 Kết định type chủng vi khuẩn Salmonella phân lập Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm 14 mẫu phân lập Salmonella, có chủng tìm thấy, có chủng phân lập thuộc Salmonella typhimurium chiếm 42,86%,3 chủng phân lập thuộc S enteritidis chiếm 21,43%, chủng phân lập thuộc S rissen chiếm 14,29% Các chủng S anatum, S derby, S choleraesuis chiếm 7,14% Kết chúng tơi có đơi chút tương đồng so với nghiên cứu Trần Đức Hạnh tỷ lệ mẫu có S typhimurium S enteritidis cao Theo Trần Đức Hạnh, kết định type 235 mẫu cho thấy có chủng : S choleraesuis tế 7.14 d c ố qu S stanley ề Đ án Ki nh tế (15,32%), S typhimurium (40,43%) , S enteritidis (22,13%), S derby (7,23%), S ố qu bò, thịt heo thịt gà ĐBSCL S typhimurium chiếm 15,8% Theo Hương et al (2006) số kiểu huyết phân lập từ thịt gà Hà Nội, S typhimurium chiếm tỷ lệ 7,75% tế Theo Vo et al (2006), số 297 kiểu huyết phân lập người,thịt c risen (5,96%), S anatum (2,28%) S Stanley ( 6,81%) ề Đ án Ki nh tế 4.4 Kết xác định tính kháng kháng sinh chủng Salmonella phân lập ố qu c tế Bảng 4.7.Khả KKS chủng Salmonella phân lập Tên KS Chủng Salmonella Số chủng kháng Tỷ lệ (%) M M M M M M M M M M 10 M 11 M 12 M 13 M 14 Ampicillin S S S S R R R S R R R R S R 57,14 Ciprofloxacin R R S R S S S S S S S S R R 35,71 Ceftazidime R S S R S R S S R S S S S R 35,71 Nitrofurantoin S S S S I S I S I I I I R R 14,29 Tetracycline R R R I R R R R S S I I R I 57,14 Gentamycin S S S S S S R S R R R S S S 28,57 Tổng hợp kết kiểm tra khả kháng kháng sinh 14 chủng Salmonella phân lập nhận thấy Salmonella mẫn cảm với loại kháng sinh kiểm tra Salmonella mẫn cảm cao với Gentamycin chiếm tỷ lệ 71,43% Sau Ceftazidime Ciprofloxacin với tỷ lệ 64,29% Tỷ lệ mẫn cảm với Ampicillin Nitrofurantoin 42,86%, kháng sinh Tetracycline có tỷ lệ mẫn cảm thấp 14,29% ề Đ án Ki nh tế Các chủng Salmonella kháng Ampicillin Tetracycline với tỷ lệ cao nhất, ố qu kháng với loại kháng sinh 60 57.14 57.14 50 40 35.71 35.71 28.57 30 20 14.29 10 Ampicillin Ciprofloxacin Ceftazidime Nitrofurantoin Tetracycline Gentamycin Hình 4.3.Tỷ lệ kháng kháng sinh số chủng Salmonella phân lập So sánh kết thu với kết số tác giả nước nghiên cứu khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella kết chúng tơi có đơi chút khác biệt Theo Nguyễn Viết Khơng (2012),vi khuẩn Salmonella có khả kháng kháng sinh thông thường với tần số khác (theo thứ tự): Streptomycin (84,44%), Tetracycline (82,22%), Ciprofloxacin (35,56%), Norfloxacin (35,56%), Ampicillin (62,22%), Nalidixic axit (62,22%), Trimethoprim (80,00%), Ceftazidime (33,33%), Gentamicin (33,33%), Nitrofurantoin (33,33%) Theo Phùng Quốc Chướng (2005) vi khuẩn Salmonella mẫn cảm với Nofloxacin Ciprofloxacin (100%), Hoàng Hoài Phương cs.(2008) với 67,5% tế Tetracycline sử dụng phổ biến trại gà nên Salmonella c 57,14%; kháng Nitrofurantoin với tỷ lệ thấp nhất, 14,29% Như vậy, Ampicillin ề Đ án Ki nh tế chủng Salmonella phân lập từ thực phẩm kháng Chloramphenicol, 65% kháng ố qu mẫn cảm cao với Nofloxacin (90%), Ofloxacin (90%) Gentamycin (90%) Theo Griggs cs (1994), khả kháng kháng sinh vi khuẩn nói chung Salmonella sp nói riêng yếu tố trì chất gây bệnh vi khuẩn Vì yếu tố kháng kháng sinh hóa dược vi khuẩn Salmonella luôn thay đổi theo thời gian, không gian khác cá thể, vậy, thời gian định, cần phải làm kháng sinh đồ để xác định xác khả kháng kháng sinh vi khuẩn Salmonella gây bệnh, ngồi mục đích lựa chọn kháng sinh mẫn cảm điều trị, để kiểm tra khả gây bệnh độc lực chủng vi khuẩn phân lập tế Cịn theo Tơ Liên Thu (2004) vi khuẩn Salmonella phân lập từ thịt lợn c Tetracycline, 37,5% kháng Ampicillin ề Đ án Ki nh tế 4.5 Kết kiểm tra độc lực vi khuẩn chuột nhắt thí nghiệm Số Số chuột chết thời điểm chuột