Khóa luận tốt nghiệp đại học nghiên cứu ảnh hưởng của chất hữu cơ đến khả năng sinh trưởng và tích lũy sinh khối in vitro lan thạch hộc tía (dendrobium officinale kimura et migo)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ THỊ NGỌC Th Tên đề tài: N gu NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT HỮU CƠ ĐẾN KHẢ NĂNG SINH ye TRƯỞNG VÀ TÍCH LŨY SINH KHỐI IN VITRO LAN THẠCH HỘC TÍA n (Dendrobium officinale Kimura et Migo) ve ni U ity rs KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Lớp: K48 - CNSH Khoa: CNSH - CNTP Khóa học: 2016 - 2020 – Hệ đào tạo: U TN Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Xuân Vũ TS Nguyễn Văn Hồng Thái Nguyên – năm 2020 i LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực tập hồn thành luận văn, em nhận giúp đỡ nhiều mặt cấp lãnh đạo, tập thể cá nhân Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm thầy cô khoa giúp đỡ, tạo điều kiện chia sẻ kinh nghiệm để giúp đỡ em trình thực tập tốt nghiệp Th Đặc biệt em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy TS Nguyễn Xuân Vũ thầy TS Nguyễn Văn Hồng tận tình giúp đỡ em suốt trình thực tập N tốt nghiệp mình gu Cuối em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình ln tạo điều ye kiện tốt vật chất lẫn tinh thần để em hồn thành tập mình, n cảm ơn bạn bè bên cạnh cho lời khuyên động viên chân thành ve Em xin chân thành cảm ơn ni U ity rs Thái Nguyên, ngày tháng năm 2020 Sinh viên thực tập – U TN Đỗ Thị Ngọc ii DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT 6-Benzylaminopurine CS: Cộng CT: CT VC: Coefficient of Variation (Hệ số biến động) ĐC: ĐC HSNC: Hệ số nhân chồi KC: Knudson C Hợp chất hữa N HCHC: Hệ số nhân HSN: Th BAP: Least Singnificant Difference Test (Sai số trung bình nhỏ có ý nghĩa) MS: Murashige and Skoog’s NAA: Naphlene axetic acid ND: Nước dừa SD: Sắn dây THT: Than hoạt tính TB: Trung bình TQ: trùng quế VW: Vacin & Went n ye gu LSD: ity rs ve ni U – U TN iii DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1: Ảnh hưởng nước dừa đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 24 Bảng 4.2: Ảnh hưởng dịch nghiền chuối đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía .26 Bảng 4.3: Ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía .27 Th Bảng 4.4: Ảnh hưởng casein đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 30 N gu Bảng 4.5: Ảnh hưởng Myo-inositol đến khả sinh trưởng tích lũy sinh n ye khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 32 Bảng 4.6: Ảnh hưởng cao nấm men đến khả sinh trưởng tích lũy sinh U ve ni khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 33 Bảng 4.7: Ảnh hưởng tảo spirulina đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối rs in vitro lan Thạch Hộc Tía 35 ity – U TN iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC BẢNG iii MỤC LỤC iv Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Th 1.2 Mục tiêu đề tài .3 1.2.1 Mục tiêu tổng quát N 1.2.2 Mục tiêu cụ thể gu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn ye 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài n 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài .3 U ni Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU ve 2.1 Tổng quan lan Thạch Hộc Tía rs 2.1.1 Tên khoa học .4 ity 2.1.2 Đặc điểm hình thái phân bố – 2.1.3 Giá trị dược liệu lan Thạch Hộc Tía U TN 2.1.4 Giá trị kinh tế 2.2 Ảnh hưởng chất hữu q trình ni cấy sinh khối lan Thạch Hộc Tía 2.5 Tình hình nghiên cứu ni cấy mơ lan Thạch Hộc Tía .13 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 18 3.2 Địa điểm thời gian thực nghiên cứu 18 3.3 Điều kiện nuôi cấy .18 3.4 Thiết bị, dụng cụ hóa chất .18 3.5 Nội dung nghiên cứu 19 3.6 Phương pháp nghiên cứu 20 v 3.6.1 Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 20 3.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu tự nhiên đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 21 3.7 Chỉ tiêu đánh giá 23 3.8 Phương pháp xử lí số liệu 23 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nước dừa đến khả sinh trưởng Th tích lũy in vitro sinh khối lan Thạch Hộc Tía 24 4.2 Kết ảnh hưởng dịch nghiền chuối đến khả sinh trưởng tích lũy N sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 26 gu 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả sinh trưởng ye tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 27 n 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng casein đến khả sinh trưởng tích lũy U ni sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 30 ve 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng Myo-inositol đến khả sinh trưởng rs tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 31 ity 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng cao nấm men đến khả sinh trưởng – tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 33 U TN 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng tảo spirulina đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía .35 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 39 PHẦN PHỤ LỤC 43 Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong hàng thập kỉ qua người hướng tới việc sử dụng thực vật để cung cấp hợp chất thiên nhiên như: polysacarit, carbohydrate, protein, chất béo…để sản xuất thuốc, thực phẩm chức mỹ phẩm Theo WHO có tới 80% dân số có xu hướng sử dụng thực vật chứa dược chất để làm thuốc chăm sóc cho sức Th khỏe Do nhu cầu sử dụng người ngày tăng nên q trình khai thác thương mại hóa vô sôi Tuy nhiên vấn đề đặt việc khai thác N trình thương mại hóa khơng có kế hoạch dẫn đến lồi chứa dược chất bị gu giảm nhanh chóng số lượng tự nhiên Thêm vào việc biến đổi khí hậu tác ye động mạnh mẽ đến mơi trường sống tự nhiên chúng khiến số lượng n chúng giảm mạnh tự nhiên Điều buộc nhà khoa học phải tính đến việc U ni nghiên cứu tạo môi trường nhân tạo điều kiện thuận lợi để ni cấy chúng ve phịng thí nghiệm đáp ứng nhu cầu sử dụng ngày tăng người rs Nuôi cấy mô tế bào thực vật quan tâm nghiên cứu từ năm 1950 ity Việc nuôi cấy mô tế bào thực vật mang lại nhiều ưu điểm vượt trội so với canh tác – tự nhiên như: thời gian nuôi cấy ngắn hơn, hạn chế tác động môi U TN trường tự nhiên, tránh ảnh hưởng biến đổi khí hậu, tránh việc nhiễm hóa chất động hại thuốc trừ sâu, thuốc bảo vệ thực vật… Bên cạnh nhiều nghiên cứu cho hàm lượng chất có hoạt tính sinh học tích lũy bên tế bào thực vật nuôi cấy in vitro tương đương cao nhiều so với quan tích lũy chúng bên tự nhiên Lan Thạch Hộc (Dendrobium officinale Kimura et Migo) thuộc chi Thạch Hộc, họ Lan (Orchidaceae), phân bố tự nhiên chủ yếu vùng rừng có độ cao 1.000 3.400m so với mặt biển Thạch Hộc Tía loại dược liệu tốt quý có tác dụng chống ung thư, chống lão hóa, tăng sức đề kháng thể, làm dãn mạch máu kháng đông máu Trong Thạch Hộc Tía có khoảng 190 hợp chất, đặc biệt có nhóm polysaccharides, Alkaloids nhóm hoạt tính chống oxi hóa có hiệu cao phịng điều trị bệnh đường huyết, tim mạch ung thư Thạch Hộc chế biến thành phong đấu giá xuất vào năm 80 kỷ trước đạt mức 3.000 USD/kg Một Thạch Hộc tươi tuổi có giá 25.000 VNĐ – 35.000 VNĐ Nhu cầu Trung Quốc nước giới Thạch Hộc lớn với giá cao, đem lại lợi nhuận cho người trồng chế biến Thạch Hộc Dự báo 10 năm tới thị trường nội địa cần tới 15.000 tấn/năm tương đương hàng chục tỉ USD Tuy nhiên việc sản xuất loại dược liệu từ trước tới chưa quan tâm Th đầu tư thích đáng khiến Thạch Hộc Tía có nguy bị tuyệt chủng đưa vào danh mục đỏ “Sách đỏ Việt Nam” N Với giá trị to lớn Thạch Hộc Tía, nghiên cứu bảo tồn, khai thác gu phát triển loài lan thực mạnh mẽ Trong việc ứng dụng ye cơng nghệ ni cấy mô tế bào nhân giống sản xuất sinh khối, hợp chất tự n nhiên từ lan Thạch Hộc Tía có thành cơng định Nhiều nhà nghiên cứu U ni công bố thành công việc sử dụng chất điều tiết sinh trưởng nhằm nâng ve cao hệ số nhân giống lan Thạch Hộc Tía [31], [ 24] Bên cạnh có nhiều kết rs nghiên cứu khác việc sử dụng chất hữu (nước dừa, khoai tây, ity carot,…) với mục đích nhân giống lan Thạch Hộc Tía – Ngồi cơng trình nghiên cứu nhân giống lan Thạch Hộc Tía, nghiên U TN cứu nhân sinh khối đối tượng hạn chế Đặc biệt, chưa có nghiên cứu cơng bố ảnh hưởng chất hữu đến sinh trưởng tích lũy sinh khối lan Thạch Hộc Tía in vitro Xuất phát từ thực tế trên, việc thực “Nghiên cứu ảnh hưởng chất hữu đến sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thach Hộc Tía (Dendrobium officinale Kimura et Migo)” cần thiết có tính khả thi cao Thành cơng đề tài khơng tăng cường khả sinh trưởng tích lũy sinh khối lan Thạch Hộc Tía in vitro mà cịn giảm thiểu tác hại có việc sản xuất sinh khối an tồn Thạch Hộc Tía in vitro xuất phát từ việc sử dụng chất điều tiết sinh trưởng tổng hợp, cung cấp nguồn sinh khối lan Thạch Hộc Tía sử dụng với mục đích chăm sóc sức khỏe làm đẹp cho người 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Xác định ảnh hưởng chất hữu đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối lan Thạch Hộc Tía mơi trường in vitro 1.2.2 Mục tiêu cụ thể Xác định nồng độ số chất hữu tự nhiên đến sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía Xác định nồng độ tối ưu số chất hữu tổng hợp đến sinh trưởng Th tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn N 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài gu Đề tài xác định nồng độ ảnh hưởng loại chất hữu đến sinh ye trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía, bổ sung sở khoa học cho n việc sử dụng hợp chất hữu nuôi mơ lan Thạch Hộc Tía nói riêng U ni ni cấy mơ thực vật nói chung Đồng thời kết đề tài nguồn tài liệu khoa rs 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài ve học có giá trị tham khảo cho nghiên cứu đối tượng tương lai ity Thực đề tài nghiên cứu giúp cho sinh viên có hội củng cố lại kiến thức – cũ , học hỏi kiến thức mới, tích lũy kinh nghiệm cho thân loài thực vật chứa dược chất quy mô lớn U TN Kết đề tài dùng làm sở khoa học cho q trình nhân sinh khối Góp phần bảo tồn nguồn gene, thúc đẩy phát triển nuôi cấy dược liệu phương pháp nuôi cấy mô tế bào, đồng thời tạo nguồn vật liệu cho nghiên cứu khoa học Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lan Thạch Hộc Tía Theo từ điển Bách khoa dược học Việt Nam (1999) ghi “Thạch Hộc” (Dendrobium nobile Lindt) có tên khác Kim Thạch Hộc [28] Thạch Hộc sống phụ sinh thân gỗ vách đá vùng rừng có độ ẩm cao Hiện khắp giới có khoảng 1.400 lồi Lan, Trung Quốc có khoảng 81 lồi Trong chi Thạch Hộc có nhiều loài dùng để chữa bệnh Th Tại Trung Quốc, chi Thạch Hộc có khoảng 12 lồi phụ 14 lồi chính, có tới 11 loài xem dược liệu quý Đặc biệt, Thạch Hộc Tía lồi đánh giá N cao có giá trị kinh tế lớn gu Tại Việt Nam có nhiều lồi Lan Chúng phân bố rộng rãi, trải dài từ ye Bắc vào Nam Có nhiều loại bị tuyệt chủng, số khác n liệt vào sách đỏ cần phải bảo tồn Trong số loài này, cần kể đến U ni loài lan Thạch Hộc Dendrobium nobile Lindl Nó phân bố chủ yếu vùng trung du rs 2.1.1 Tên khoa học ve miền núi phía Bắc, nghiên cứu nhân giống nhằm mục đích làm thuốc ity Thạch Hộc Tía (Dendrobium officinale Kimura et Migo) loài thuộc chi Đặc điểm hình thái U TN 2.1.2 Đặc điểm hình thái phân bố – Dendrobium, họ lan (Orchidaceae) Là phụ sinh thân gỗ hay vách đá, cao 30-50 cm, thường mọc thành bụi Thân dẹt, có rãnh dọc, phía dày hơn, có đốt dài 2,5-3 cm Lá hình thn dài, phía cuống tù, gần khơng cuống, đầu cuộn hình nón, dài 12cm, rộng 2-3cm có gân dọc Lá mọc so le thành dãy hai bên thân Hoa to màu hồng, mọc thành chùm cuống dài, họng hoa có điểm màu tím Hoa đẹp, to, màu hồng hay điểm hồng Cánh mơi hình bầu dục nhọn, dài 4-5cm, rộng 3cm cuộn thành hình phễu hoa, nơi họng hoa điểm màu tía [5], [13] 36 Sau 40 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung tảo spirulina với dải nồng độ từ đến 0.09g/l thu kết bảng 4.7 Kết cho thấy CT môi trường bổ sung tảo spirulina có sai khác so với CT đối chứng Hệ số nhân có biến động CT thí nghiệm có sai khác mức độ tin cậy 99%, giá trị biến động từ 1.44 lần đến 4.89 lần Môi trường bổ sung 0.05g/l tảo cho hệ số chồi cao đạt 4.89 lần Nếu tiếp tục tăng nồng độ tảo 0.05g/l hệ số nhân giảm dần Cụ thể nồng độ 0.07g/l hệ số nhân chồi giảm từ 4.89 xuống 3.00 lần, CT bổ sung 0.09g/l giảm xuống 1.94 lần Th Đối với biến động số CT có sai khác với CT đối chứng Số sau 40 ngày nuôi cấy biến động từ 3.67 đến 7.78 lá/chồi Biến động số CT đối chứng thấp 3.67 lá/chồi, CT 3.89 lá/chồi, CT 5.33 lá/chồi, CT N gu 5.44 lá/chồi CT có biến động số cao 7.78 lá/chồi ye Ở tiêu biến động chiều cao CT có sai khác với CT đối chứng mức n tin cậy 99%, biến động từ 0.40 cm/chồi đến 1.21cm/chồi Trong CT bổ sung giá trị biến động 0.73 cm/chồi ve ni U 0.05g/l (CT 3) cho biến động chiều cao lớn (0.90 cm/chồi), CT có chung Biến động khối lượng CT thí nghiệm có sai khác so với CT đối chứng rs ity mức độ tin cậy 99% Khối lượng biến động từ 0.21 g/chồi (CT đối chứng) đến 0.87g/chồi Trong biếng động khối lượng đạt cao CT (0.87 g/chồi),CT – U TN 4(0.60 g/chồi), CT 5(0.47 g/chồi), CT 2(0.40 g/chồi) Đã có nghiên cứu bổ sung tảo spirulina vào môi trường nhân chồi đối tượng lan hài hồng Nguyễn Thị Cúc (2014) [2] xác định môi trường bổ sung 50mg/l tảo spirulina cho số chồi đạt cao 4,0 lần cấy Kết phù hợp với kết tác giả Từ kết thí nghiệm kết luận mơi trường MS bổ sung 50mg/l tảo spirulina thích hợp cho q trình sinh trưởng tích lũy sinh khối lan Thạch Hộc Tía 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Kết nghiên cứu đề tài khẳng định chất hữu có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía Cụ thể sau: Bổ sung nước dừa làm tăng khả sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía Trong nồng độ nghiên cứu (từ 0-200 ml/l), bổ sung 100ml/l nước dừa cho hệ số nhân, số lá, chiều cao khối lượng tươi cao Th 4,56 lần, 7.56 lá/chồi, 1,64 cm, 0,89g Bổ sung 100g/l chuối hệ nhân chồi thí nghiệm đạt 3.55 lần, tiêu N khác biến động chiều cao, số lá, khối lượng tươi chồi đạt giá trị cao gu 1.34cm, 7.22 lá/chồi, 1.03 g cho chất lượng chồi mập, xanh đậm ye Bổ sung khoai tây mơi trường thích hợp cho q trình sinh trưởng tích lũy n sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía Trong nồng độ nghiên cứu (từ 0- 105ml/l), U ni bổ sung 75g/l khoai tây cho hệ số nhân chồi 3.72 lần chiều cao, số lá, khối lượng tươi ve chồi thu đạt giá trị cao 1.30 cm, 7.22 lá/chồi, 1.10 g rs Chiều cao, số lá, hệ số nhân khối lượng đạt 1.37cm, 7.11 lá/chồi, 1.23 lần, ity 3.67g bổ sung 0,1g/l chất lượng chồi sau 40 ngày ni cấy có hình thái – xanh thẫm mập bổ sung 0.1g/l casein U TN Khi bổ sung 0.1g/l myo-inositol có ảnh hưởng tích cực đến sinh trưởng tích lũy sinh khối in vitro lan Thạch Hộc Tía Trong nồng độ nghiên cứu (từ 0- 0.2g/l) nồng độ 0.1g/l cho hệ số nhân chồi, số lá, khối lượng chiều cao đạt giá trị cao thí nghiện 3.67 chồi/mẫu, 6.89 lá/chồi, 1.03g 1.37cm Cao nấm bổ sung nồng độ 3g/l cho hệ số nhân chồi 4,56 lần, khối lượng đạt 0.89, số đạt 2.11 lá/chồi, chiều cao chồi đạt 1.64 cm Tảo spirulina có ảnh hưởng đến q trình sinh trưởng tích lũy sinh khối chồi lan Thạch Hộc Tía Mơi trường cho hệ số nhân chồi cao đạt 4.89 lần, chiều cao đạt 1.21cm, số 2.11 lá/chồi, trọng lượng 0.87g bổ sung 50mg/l, cho chất lượng chồi tốt thí nghiệm 38 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu môi trường nuôi cấy loại bỏ hoàn toàn chất điều tiết sinh trưởng Nghiên cứu kết hợp hợp chất hữu đến sinh trưởng tích lũy sinh khối lan Thạch Hộc Tía Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống lan Thạch Hộc Tía từ hạt Tách chiết hợp chất lan Thạch Hộc bổ sung vào thực phẩm chức năng: Cao Thạch Hộc, đồ uống, nước giải khát, Th n ye gu N ity rs ve ni U – U TN 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng việt Ngơ Xn Bình, Võ Hà Giang(2010), “Nghiên cứu kĩ thuật nhân giống phong lan Đuôi Chồn Rhynchostylis retusa [L.] blume phương pháp nuôi cấy mô tế bào”, Tạp chí nơng nghiệm & phát triển nơng thơn, (146), trang 25-30 Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Văn Kết, Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Thị Kim Lý(2014) “Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu liên quan đến trình sinh trưởng phát triển lan hài hồng (Paphiopedilum delenatii) in Th vitro”., Tạp chí sinh học, 36, 251-254 Nguyễn Kim Dung, Nguyễn Văn Việt, Bùi Văn Thắng(2016) “Nhân giống lan gu N hoàng thảo ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f) kỹ thuật ni cấy in vitro”, Tạp chí khoa học công nghệ lân nghiệm, 16, 157-158 Xã Hội, Hà Nội n ye Đặng Văn Đông(2004), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao, Nxb Lao Động U ni Lê Trần Đức(2008), Cây thuốc Việt Nam, NXB Nông nghiệm, trang 962 – 965 ve Đỗ Đăng Giáp, Phạm Ngọc Vinh, Trần Trọng Tuấn, Nguyễn Thị Huyền Trang, Phạm rs Ngô Ánh Thư, Thái Xuân Du(2012) “Tăng hệ số nhanh nhanh chồi chuối Laba ity (Musa SP.) nuôi cấy in vitro sử dụng ánh sáng, myo-inositol adenin – sulphate”, Tạp chí sinh học, 34, 183-184 U TN Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắm, Đỗ Thị Thu Hà(2010), “Nghiên cứu nhân giống in vitro nuôi trồng lan hài quý P hangianum perner Gurss (Hài hằng) thu thập Việt Nam”, Tạp chí khoa học phát triển, 8, 195-198 Mai Thị Phương Hoa, Đỗ Tiến Vinh(2018).” Nuôi cấy protocorm lan Thạch Hộc thiết bì (Dendrobium officinale Kimura et Migo) in vitro”, Tạp chí khoa học cơng nghệ, 3, 52-57 Đỗ Thị Hào(2015), Nghiên cứu nhân giống lan Thạch Hộc Tía (Dendrobium nobile Lindl) từ hạt phương pháp nuôi cấy mô Trường đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, Trường đại Học Nông Lâm Thái nguyên 40 10 Nguyễn Thị Diệu Hoa(2017), “ Nghiên cứu ảnh hưởng số chất điều tiết sinh trưởng đến khả nhân nhanh biện phát ký thuật đến sinh trưởng giống lan Thạch Hộc Tía (Dendrobium officinale Kimura et Migo) Thái Nguyên”, Luận văn Thạc sỹ trồng, Trường Đai học Nơng Lâm Thái Ngun 11 Hồng Thị Hằng, Nguyễn Huỳnh Trâm Anh(2017),Xây dựng quy trình ni cấy in vitro lan Thạch Hộc Tía(Dendrobium officinale Kimura et Migo) môi trường hữu chứa phân trùn quế( Perionyx Excavatus )kết hợp với bột sắn dây Th (Pueraria Thomsoni) Hội nghị khoa học toàn quốc 2017 Sinh lý thực vật ứng dụng công nghệ cao, Trường Đại học Lạc Hồng tháng 12 năm 2017 N 12 Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), “Nhân giống in vitro loài lan địa ye 925 gu Dendrobium nobile Lindl”, Tạp chí Khoa học Phát triển, tập 11, số 7, 917- n 13 Đỗ Tất Lợi(2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, trang 628 ni U – 642 ve 14 Phí Thị Cẩm Miêu(2012), “ Nghiên cứu nhân nhanh in vitro loài lan kim tuyến ity Khoa Học Tự Nhiên rs (Anoectochilus Setaceus Blume)”, Luận văn thạc sĩ khoa học, Trường Đại học – 15 Hoàng Thị Nga, Nguyễn Quang Thạch, Đỗ Đức Thịnh(2008), “Xây dựng quy U TN trình nhân nhanh giống địa lan Hồng hoàng (Cymbidium iridioides) kĩ thuật ni cấy mơ”, Tạp chí Khoa học kĩ thuật Nơng Nghiệm, 4: 387-394 16 Nguyễn Văn Song (2011), “Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dedrobium chysotoxum)- loài lan có nguy tuyệt chủng”, Tạp chí Khoa học Đại học Huế, 64: 127-136 17 Nguyễn Thị Sơn, Trần Thế Mai, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), “Nghiên cứu ứng dụng hệ thống bioreator plantima nhân giống loài lan Hoàng thảo Thạch Hộc (Dendrobium nobile Lindl)”, Tạp chí Nơng nghiệm Phát triển nơng thơn, 2: 28-34 41 18 Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh (2014), “Nhân dịng vơ tính lan hồ điệp Phalaenopsis sogo yukidian” Tạp trí khoa học phát triển, 12, 1289-1291 19 Nguyễn Thị Sơn, Từ Bích Thủy, Đặng Thị Nhàn cs (2014), “Nhân giống in vitro lan Dendrobium Officinale Kimura Et Migo (Thạch Hộc Thiết Bì)” Tạp chí khoa học phát triển, 12, 1277 20 Nguyễn Quỳnh Trang, Vũ Thị Huệ, Khuất Thị Hải Ninh cs (2013), “Nhân giống in vitro lan phi điệp tím (Dendrobium anosmum)” Tạp trí khoa học Th công nghệ lâm nghiệm, 3, 17 21 Nguyễn Thị Huyền Trang, Đặng Thị Kim Thúy, Đỗ Đức Thăng cs (2019) gu N “Ứng dụng hợp chất hữu thay nguồn Nitrate vô môi trường ni cấy sinh khối thử hoạt tính sinh học Lan kin tuyến ye (Anoectochilus formosanus HAYATA) in vitro” Tạp chí khoa học Trường n Đại học Cần Thơ, 55 136-139 U ni 22 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Trường Sơn, Đỗ Năng Vịnh ve (2003), “Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống nuôi trồnphong lan ity 2003, trang 850-85 rs Phalaenopsis (lan Hồ Điệp)”, Báo cáo khoa học, hội nghị CNSH toàn quốc – 23 Đỗ Đức Thăng, Lê Đức Tuấn, Bùi Minh Trí, cs, 2017 Ảnh hưởng dịch roxburghii) in vitro U TN chiết nấm men peptone lên sinh trưởng cua lan gấm (Anoectochilus (http://www.tapchikhoahocnongnghiep.vn/uploads/news/2017_12/15.pd) 24 Mai Thị Tâm, Vũ Thị Thu Hiền, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Trường Sơn (1999), “Nghiên cứu nhân nhanh giống lan Dendrobium E.R ”, Kết nghiên cứu khoa học nữ cán giảng dạy Đại học Nông Nghiệm I 25 Nguyễn Thị Tâm, Vũ Thị Lan, Nguyễn Thành Luân (2007), “Ảnh hưởng số yếu tố môi trường giá thể đến sinh trưởng lan Dendrrobium hybrid in vitro” Tạp chí khoa học cơng nghệ, 3, 105-108 42 26 Huỳnh Văn Thới (2005), Cẩm nang nuôi trồng kinh doanh phong lan, Nxb Trẻ 27 Nguyễn Thanh Tùng Trương Thị Bích Phượng (2009), “ Nhân nhanh invitro Mỹ Dung Dạ Lan vanda denisoniana benson ”, Hội nghị CNSH toàn quốc năm 2009, 452-454 28 Từ điển Bách khoa dược học Việt Nam, (1999), Nxb Y học II Tiếng Anh 29 Parisa Shekarriz, Mohsen Kafi, Shirin Dianati Deilamy, Masoud Mirmasoumi Th (2014) III Trang web n ye gu N http://www.tapchikhoahocnongnghiep.vn/uploads/news/2017_12/15.pd ity rs ve ni U – U TN PHẦN PHỤ LỤC Phụ lục 1: số hình ảnh thí nghiệm Th n ye gu N CT1 CT2 CT4 ve ni U CT3 333 33# 33# Hình 1: Kết ảnh hưởng nồng độ nước dừa ity rs CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar – U TN CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 50ml/l nước dừa CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 100ml/l nước dừa CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 150ml/l nước dừa CT5: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 200ml/l nước dừa CT5 Th ye gu N CT4 CT3 n CT5 CT2 ni U ity CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar rs ve Hình 2: chồi lan Thạch Hộc Tía mơi trường chuối – CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 100g/l chuối CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 150g/l chuối CT5: MS + 30g/l Sucroza + 5g/l agar + 200g/l chuối U TN CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 100g/l chuối CT1 Th n ye gu N CT1 CT2 CT3 CT4 ni U CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar ity rs ve Hình 3: Chồi lan Thạch Hộc Tía môi trường khoai tây – CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 45g/l chuối CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 75g/l chuối CT5: MS + 30g/l Sucroza + 5g/l agar + 90g/l chuối U TN CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 60g/l chuối CT5 Th ye gu N CT1 CT2 CT3 CT4 n U ity CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar rs ve ni Hình 4: Chồi lan Thạch Hộc Tía mơi trường casein CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.05g/l casein – CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.15g/l casein CT5: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.2g/l casein U TN CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.1g/l casein CT5 CT1 CT2 CT3 CT4 Th n ye gu N CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar rs ve ni U Hình 5: chồi lan Thạch Hộc Tía mơi trường myo-inosytol CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.05g/l myo-inosytol ity CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.1g/l myo-inosytol – CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.15g/l myo-inosytol U TN CT5: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.2g/l myo-inosytol CT5 Th gu N CT2 CT3 CT4 CT5 n ye CT1 CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar rs ve ni U Hình 6: Chồi lan Thạch Hộc Tía mơi trường cao nấm men ity CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 1.5g/l cao nấm men – CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 3g/l cao nấm men U TN CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 4.5 g/l cao nấm men CT5: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + g/l cao nấm men Th gu N CT2 CT3 CT4 n ye CT1 CT5 CT1: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar rs ve ni U Hình 7: Chồi lan Thạch Hộc Tía mơi trường tảo spirulin CT2: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.03g/l tảo spirulin ity CT3: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.05g/l tảo spirulin – CT4: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.07 g/l tảo spirulin U TN CT5: MS+30g/l Sucroza + 5g/l agar + 0.09 g/l tảo spirulin Th n ye gu N ity rs ve ni U – U TN