Nghiên cứu Resveratrol về cấu trúc hóa học, tác dụng dược lý, cấu tạo, tính chất lý hóa… và phương pháp chiết xuất Resveratrol từ một dược liệu được trồng ở Việt Nam đó là Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum). Tìm hiểu chung về Cốt khí củ: đặc điểm của cốt khí củ, bộ phận dùng, công dụng của Cốt khí củ, các thành phần hóa học của cốt khí củ...
TIỂU LUẬN KỸ THUẬT CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU Đề tài: CHIẾT XUẤT RESVERATROL \ MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương I: Sơ lược dược liệu Cốt khí củ: I Dược liệu Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum): Bộ phận dùng: Thành phần hóa học: Tác dụng dược lý: .8 Tác dụng theo Y học cổ truyền: Chương II Resveratrol 10 I Cấu trúc hóa học: 11 II Thuộc nhóm chất nào? .12 Tìm hiểu Polyphenol: 12 Tìm hiểu Stilbene: 13 III Tác dụng dược lý: 14 Tác dụng chống ung thư: 13 Tác dụng kháng virus: 14 Tác dụng kháng nấm: .14 Tác dụng khám viêm: .14 Các tác dụng khác: 15 IV Cấu tạo: 15 V Tính chất chung: 16 Tính chất lý học: .16 Tính chất hóa học: 16 VI Phương pháp chiết xuất đề xuất: .17 VII Các nghiên cứu tối ưu hóa chiết xuất chất đó: 19 Phân lập resveratrol emodin từ cốt khí củ (Polygonum cuspidatum) trồng Việt Nam .19 A simple method for the isolation and purification of resveratrol from Polygonum cuspidatum 19 Thành phần hóa học rễ cốt khí củ Việt Nam…………… 20 Ứng dụng LC-MS định lượng resveratrol Cốt khí củ…….20 Nghiên cứu công nghệ chiết tách resveratrol từ nguồn thực vật Việt Nam………………………………………………………… 20 Optimized ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds from Polygonum cuspidatum …………………………………21 Nghiên cứu chiết tách tinh chế resveratrol từ Polygonum cuspidatum công nghệ hỗn hợp nhựa hấp phụ lỗ lớn (MAR) …………………………………………………………21 A novel enzyme-assisted ultrasonic approach for highly efficient extraction of resveratrol from Polygonum cuspidatum ………22 VIII Một số thực phẩm chức lưu hành thị trường có chứa Resveratrol .22 Tài liệu tham khảo 24 LỜI MỞ ĐẦU Xã hội ngày phát triển nhu cầu bảo vệ nâng cao sức khoẻ ngày người trọng quan tâm Các gia đình tìm hiểu nhiều chế độ ăn dinh dưỡng, khoa học Trong nhiều gia đình tìm hiểu sử dụng thêm sản phẩm thực phẩm chức để bổ sung thêm chất cần thiết cho thể Đặc biệt có nhiều người quan tâm đến sản phẩm sử dụng nguồn nguyên liệu tự nhiên Từ nhu cầu thị trường theo xu hướng sử dụng nguồn nguyên liệu tự nhiên, hợp chất có hoạt tính sinh học cao lycopen, resveratrol, pycnogenol, nhà khoa học giới quan tâm nghiên cứu, chiết tách ứng dụng cách rộng rãi Một sản phẩm thực phẩm chức lưu hành thị trường có nguồn gốc từ nguồn nguyên liệu tự nhiên - Resveratrol Resveratrol stilbenoid kháng độc tố tự nhiên, có nhiều cốt khí củ, nho, việt quất, đậu phộng dâu tằm Resveratrol nhận ý đáng kể lợi ích sức khỏe đa dạng bao gồm chống oxy hóa, kháng virút, chống viêm, chống oxy hóa, chống ung thư, chữa lành viết thương bảo vệ thần kinh… Bài tiểu luận chúng em nghiên cứu Resveratrol cấu trúc hóa học, tác dụng dược lý, cấu tạo, tính chất lý hóa… phương pháp chiết xuất Resveratrol từ dược liệu trồng Việt Nam Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum) CHƯƠNG I: SƠ LƯỢC VỀ DƯỢC LIỆU CỐT KHÍ CỦ: I Dược liệu Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum): - Cốt khí củ (Polygonum cuspidatum) thuộc họ Rau răm (Polygonaceae) loại mọc hoang trồng phổ biến nhiều nơi khắp nước ta nhiều nước giới - Cốt khí củ loại nhỏ, sống lâu năm Rễ phình thành củ cứng, mọc bị nghiêng đất, vỏ ngồi màu nâu đen, ruột màu vàng Thân hình trụ, nhẵn, mọc thẳng đứng, cao 0,5-1m, thường có đốm màu tím hồng Lá mọc so le, cuống ngắn, hình trứng, đầu tù, nhọn, mép nghiêng, dài 512cm, rộng 3,5-8cm, mặt màu lục sẫm , có nâu đen , bẹ chìa ngắn Cụm hoa ngắn lá, mọc thành chùm kẽ lá, hoa nhỏ màu trắng, hoa đực hoa riêng; bao hoa có phiến; hoa đực có nhị; hoa có bầu góc Quả cạnh màu nâu đỏ, mùa hoa vào tháng 10-11 - Phần mặt đất dược liệu Cốt khí củ: - Thân rễ dược liệu Cốt khí củ tươi: - Thân rễ dược liệu Cốt khí củ sau phơi hay sấy khơ: - Cốt khí củ có nguồn gốc vùng Đơng Á, sau lan xuống khắp vùng cận nhiệt đới nhiệt đới, bao gồm Trung Quốc, Triều Tiên, Nhật Bản, Việt Nam, Lào vài nơi khác Ở Việt Nam, mọc hoang dại vùng núi cao, từ 1000-1600m trồng rải rác nhân dân vùng trung du đồng Bắc Bộ - Cốt khí củ ưa sáng, ưa ẩm, nước (úng ngập dễ làm thối củ) thường mọc thành khóm thung lũng, nơi gần nguồn nước Cây rụng vào mùa đông, hoa nhiều hàng năm, có khả mọc chồi từ thân rễ Cây sinh trưởng mạnh từ mùa xuân đến mùa thu, bắt đầu cho thu hoạch củ từ tháng trở đi, nên thu hoạch vào ngày nắng mùa đông, phần thân bắt đầu héo thu hoạch vào đầu mùa xuân, trước tái sinh - Củ cốt khí vị thuốc kinh nghiệm dân gian Việt Nam có tác dụng chữa phong thấp tê bại, đau nhức gân xương, chấn thương, ngã sưng đau ứ huyết, lợi tiểu, tiêu đờm, giảm đau, giảm độc, thông kinh, dùng cho người bị kinh nguyệt bế tắc Củ cốt khí cịn sử dụng để điều trị tổn thương viêm, viêm gan, khối u, hạ sốt tiêu chảy Do đó, vị thuốc từ củ cốt khí quan tâm nghiên cứu tiêu chuẩn hoá sử dụng, tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu từ củ cốt khí có dược điển quốc gia Bộ phận dùng: - Rễ (Rhizoma Renoutriae japanicae, gọi tên Hồ Trượng radix Polygonum cuspidatum) phơi hay sấy khơ cốt khí củ, rễ cốt khí củ thu hái quanh năm, tốt vào thu đông, rửa đất cát, cắt bỏ rễ con, thái thành miếng nhỏ dày chừng 1-2cm, phơi sấy khô Dược liệu có mặt ngồi nâu xám, sần sùi, nhăn nheo theo chiều dọc, có mấu đốt gióng, mặt cắt ngang màu vàng bẩn, lõi gần rỗng, phần khơng rỗng có màu nâu sẫm Chất nhẹ, cứng, mùi không rõ, vị đắng Thành phần hóa học: - Từ đầu năm 1950, có nhiều hợp chất hóa học phân lập từ lồi Cốt khí củ Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc nhiều nước khác giới Hầu hết nghiên cứu tập trung xác định thành phần hóa học từ rễ Cốt khí củ, phận sử dụng thuốc y học cổ truyền - Trong thành phần hóa học bật rễ Cốt khí củ, hai nhóm chất chiếm hàm lượng lớn quinon (chủ yếu anthraquinon) stilbene Đây thành phần hóa học định cho nhiều hoạt tính Cốt khí củ kháng khuẩn, kháng ung thư, chống oxy hóa, phịng ngừa bệnh tim mạch… Ngồi cịn có nhiều nhóm hợp chất khác flavonoid, coumarin, phenol, acid amin… với nhiều tác dụng sinh học đáng ý, bổ trợ với hai nhóm hợp chất làm cho Cốt khí củ có hoạt tính sinh dược học cao - Trong hai nhóm hợp chất stilbene nhóm chất quan tâm nghiên cứu nhiều có chứa hàm lượng resveratrol cao Resveratrol hợp chất tự nhiên q có hoạt tính sinh học cao, khả ứng dụng thực tiễn lớn Tác dụng dược lý: - Sự phong phú thành phần hoá học nhóm chất có hoạt tính sinh học cao làm cho cốt khí củ có nhiều tác dụng sinh học quý giá Trên giới có nhiều nghiên cứu tác dụng sinh học cốt khí củ với định hướng sinh học khác như: tác dụng kháng khuẩn, tác dụng chống viêm, tác dụng chống oxi hoá, tác dụng hạ lipid, tác dụng kháng u, chống ung thư tiềm điều trị đái tháo đường Tác dụng theo Y học cổ truyền: - Theo y học cổ truyền, rễ cốt khí củ có vị đắng, tính ấm Quy kinh can, tâm bào với công hoạt huyết thông kinh, thống, trừ phong thấp, thấp nhiệt, tiêu viêm, sát khuẩn Ở Việt Nam rễ cốt khí củ thường dùng để chữa tê thấp, tổn thương đau đớn bị ngã, bị thương, vị thuốc thu liễm cầm máu - Củ cốt khí vị thuốc kinh nghiệm dân gian Việt Nam có tác dụng chữa phong thấp tê bại, đau nhức gân xương, chấn thương, ngã sưng đau ứ huyết, lợi tiểu, tiêu đờm, giảm đau, giảm độc, thông kinh, dùng cho người bị kinh nguyệt bế tắc Củ cốt khí cịn sử dụng để điều trị tổn thương viêm, viêm gan, khối u, hạ sốt tiêu chảy Do đó, vị thuốc từ củ cốt khí quan tâm nghiên cứu tiêu chuẩn hoá sử dụng, tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu từ củ cốt khí có dược điển quốc gia - Trong Bản thảo cương mục Lý Thời Trân ( Trung Quốc- kỷ 16), vị thuốc có tác dụng lợi tiểu, thông kinh, giảm đau, giảm độc, dùng cho người bị kinh nguyệt bế tắc, kinh nguyệt khó khăn đau đớn, đẻ xong huyết ứ, bụng trướng, tiểu tiện khó khăn CHƯƠNG II RESVERATROL: - Resveratrol lần phát rễ Veratrum grandiflorum nhà khoa học Nhật Bản, sau được phân lập từ rễ Polygonum cuspidatum (Cốt khí củ) - Resveratrol loại phenol tự nhiên, loại phytoalexin tạo số loài thực vật để phản ứng với tổn thương bị mầm bệnh, chẳng hạn vi khuẩn nấm cơng Nó đóng vai trò quan trọng việc bảo vệ thực vật chống lại điều kiện gây căng thẳng Trong căng thẳng, thường kích hoạt sinh tổng hợp resveratrol, làm tăng hàm lượng - Cho đến nay, resveratrol tìm thấy nhiều loại tìm thấy với số lượng đáng kể thực phẩm dinh dưỡng nho, đậu phộng, việt quất, việt quất đen, nam việt quất, nho tím nước trái Resveratrol chủ yếu đến từ 34 họ bao gồm 100 lồi Nó thường chiết xuất từ rễ, thân, lá, hoa, hạt - Vỏ trái nho có chứa hàm lượng Resveratrol cao khí hậu Việt Nam không lý tưởng để trồng nho sản xuất resveratrol Pháp nước đưa quy trình sản xuất resveratrol từ nho, giá thành nước rẻ mà bảo đảm chất lượng - Tác dụng resveratrol sức khỏe: Resveratrol có nhiều tác dụng tích cực sức khỏe người Tác dụng mạnh resveratrol khả chống viêm tăng cường hệ miễn dịch Đối với tác dụng chống oxy hóa: Resveratrol ức chế q trình peroxide hóa, làm giảm q trình oxy hóa xúc tác đồng cách tạo phức chelat với đồng, khả chống gốc tự resveratrol mạnh vitamin E C Tác dụng chống ung thư: Resveratrol có tác dụng nhiều loại ung thư người ung thư da, ung thư vú, ung thư dày ruột kế, ung thư tuyến tiền liệt, ung thư gan, ung thư tuyến tụy, Resveratrol có tác dụng hỗ trợ điều trị bệnh tiểu đường, tim mạch (chống kết tập tiểu cầu, tác dụng giãn mạch ức chế oxy hóa peroxide)… 10 - Các nghiên cứu gần resveratrol lên thành phần chức hứa hẹn sản phẩm dược phẩm thực phẩm chức - Hàm lượng resveratrol cao tìm thấy cốt khí củ, vỏ nho đỏ, đậu phộng, dứa, dâu tằm Ở Việt Nam, việc chiết tách resveratrol chủ yếu từ rễ cốt khí củ - Các nghiên cứu trước cho thấy hàm lượng resveratrol rễ khô Polygonum cuspidatum (Cốt khí củ) cao nhiều so với nguồn thực vật khác - Cốt khí củ có hàm lượng resveratrol cao, trồng miền Bắc cao nguyên Việt Nam, khai thác resveratrol I Cấu trúc hóa học: - Resveratrol hợp chất thuộc nhóm stilbene, có chung cấu trúc mạch cacbon C6-C2-C6 - Resveratrol tồn dạng hai đồng phân cấu trúc trans-resveratrol cis-resveratrol Chúng có tác dụng sinh học dược lý khác - Trans-resveratrol: 11 - Cis-resveratrol: - trans-Resveratrol dạng đồng phân thường sử dụng so với đồng phân cis, có hoạt tính sinh học mạnh Tuy nhiên, dạng đồng phân trans chuyển thành dạng cis tiếp xúc với tia UV, nhiệt độ Theo Trela Waterhouse, phơi nhiễm vòng 120 phút với tia UV bước sóng 366 nm; 90,6 % trans-res bị chuyển hóa thành dạng cis - Danh pháp IUPAC: 5-[(E)-2-(4-hydroxyphenyl)ethenyl] benzene-1,3-diol Ngồi ra, resveratrol cịn có số tên gọi khác như: trans-3,5, 4′Trihydroxystilbene; 3,4′,5-Stilbenetriol; trans-Resveratrol; (E)-5-(pHydroxystyryl) resorcinol - Công thức phân tử Resveratrol C14H12O3 khối lượng phân tử 228 II Thuộc nhóm chất nào?: - Resveratrol thuộc nhóm lớn polyphenol chất chống oxy hóa khơng thuộc nhóm flavonoid Nhóm nhỏ Resveratrol thuộc nhóm stilbene Tìm hiểu Polyphenol: - Polyphenol nhóm hợp chất tự nhiên tìm thấy nhiều từ loại thực vật tự nhiên, có đặc tính chống oxy hóa - Các chất chống oxy hóa có tác dụng bảo vệ tế bào khỏi tổn thương gốc tự Khơng có dưỡng chất này, tế bào thể bị tổn thương thối hóa mơ - Các polyphenol chia thành loại dựa số vòng phenol mà chúng chứa - Thực tế, có đến 500 polyphenol khác Các hợp chất gọi chung thành phần hóa thực vật (phytochemicals) 12 - Hàm lượng polyphenol tìm thấy lớp ngồi thực vật cao so với lớp bên - Polyphenol phân loại thành nhóm nhỏ sau: + Flavonoid + Axit phenolic + Stilbene + Lignan - Nhóm polyphenol biết đến nhiều flavonoid - Thực phẩm có nguồn gốc từ thực vật rau củ, trái thường có chứa nhiều polyphenol Ví dụ như: Trái (Cam, táo, nho, đào, nước ép bưởi chùm, cherry, việt quất, nước ép lựu, mâm xôi, nam việt quất…), Rau, củ (rau chân vịt, hành tây, hành củ (hành tím), khoai tây, oliu xanh đen, atiso, cải xanh, măng tây, cà rốt) - Hàm lượng polyphenol thực phẩm thay đổi tùy thuộc vào nơi trồng, cách thức ni trồng vận chuyển, độ chín cách chế biến - Các tác dụng polyphenol sức khỏe liên quan đến tính chất chống oxy hóa chúng Các chất chống oxy hóa xem có khả ngăn chặn tổn thương xảy tế bào - Ngoài polyphenol cịn có tác dụng chống lại gốc tự do, bảo vệ tim mạch, ổn định huyết áp, cải thiện tiêu hóa, chống viêm, tăng cường sức đề kháng cho thể… Tìm hiểu Stilbene: - Stilben hợp chất tự nhiên tìm thấy số loại thực vật Chúng thuộc nhóm nhỏ Polyphenol - Stilben nhóm chất có chung cấu trúc mạch carbon C6-C2-C6 - Hợp chất nhóm Stilbene biết đến hoạt tính sinh học tính kháng viêm, chống oxy hóa, ngăn ngừa bệnh tim mạch… - Stilbenes không phổ biến Polyphenol khác Và có hai Stilben ý Resveratrol Pterostilbene III Tác dụng dược lý: Tác dụng chống ung thư: 13 - Resveratrol (liều 2,5 10 mg/kg, tiêm màng bụng chuột ngày) làm giảm đáng kể thể tích (42%) khối lượng (44%), ngăn cản phát triển di khối u ức chế tổng hợp DNA tế bào khối u, ngăn cản hình thành vi mạch khối u gây chuột có tế bào u phổi Lewis có nguy di cao Trong thí nghiệm khác chuột có u thần kinh đệm não, Resveratrol (liều 40mg/kg/ngày, tiêm màng bụng khoảng 150 ngày) làm giảm phát triển tế bào khối u, tăng thời gian tỷ lệ sống sót chuột thử nghiệm Cơ chế có liên quan đến tác dụng gây độc tế bào, tăng chết rụng ức chế hình thành mạch máu tế bào khối u Resveratrol có tác dụng gây độc tế bào tế bào MCF-7 tế bào MCF-7 kháng adriamycin với giá trị IC50 58,4 56,7 μg/ml Resveratrol có tác dụng chống ung thư buồng trứng (Guo cộng sự, 2010), ung thư bạch huyết, khối u khơng điển hình/ rhabdoid khơng điển hình, ung thư gan, khối u ác tính mắt khối u thần kinh người Tác dụng kháng virus: - Trong thí nghiệm ni cấy tế bào, Resveratrol ngăn chặn trình tái tạo virus cúm, đạt hiệu lớn sau phơi nhiễm cúm Resveratrol đạt hiệu nhỏ đáng kể điều trị tiến hành bắt đầu sau nhiễm, nhiên thời điểm sau bị nhiễm, Resveratrol khơng có tác dụng Tác dụng kháng nấm: - Resveratrol có tác dụng kháng nấm mạnh, chống lại loại nấm gây bệnh người khoảng nồng độ 10-20 μg/ml Sự tiêu diệt tế bào nấm C.albicans Resveratrol xác định phương pháp quét kính hiển vi điện tử Các kết đưa giả thuyết Resveratrol sử dụng chất điều trị nấm người Tác dụng kháng viêm: - Nghiên cứu Resveratrol quercetin ức chế trình chép phụ thuộc NF- kappa B-, AP-1- CREB đến mức lớn glucocorticosteroid, dexamathasone - Abeer H Harb cộng thử nghiệm hiệu chống viêm Resveratrol chuột nhận thấy: trình giảm viêm phụ thuộc liều; ức chế có ý nghĩa thống kê sau 3h 1h với liều 13,40 mg/kg tương ứng Hiệu chống viêm Resveratrol tìm thấy cách độc lập tuyến thượng thận liên quan tới việc ức chế nhân tố gây viêm gốc tự Một vài ý kiến cho hiệu chống viêm RES ức chế hoạt tính cyclooygenase, làm giảm tạo 14 prostagladin E2(PGE2); đồng thời ức chế đường phát sinh NO, làm giảm trình tổng hợp NO đại thực bào tế bào ni cấy hoạt tính Các tác dụng khác: - Resveratrol chứng minh có tác dụng giảm oxy hoá tăng trưởng tế bào biểu mô sắc tố võng mạc người, chống lại rối loạn tim mạch oxy hoá IV Cấu tạo: - Công thức phân tử: C14H12O3 - Resveratrol gồm vòng phenol nối với cầu nối styrene để tạo 3,4’,5-trihydroxystilbene Mặc dù diện nối đơi dẫn đến hình thành đồng phân cis- trans- resveratrol đồng phân translà dạng bền (Dạng cis- nhạy cảm với ánh sáng) - Resveratrol dạng trans có hoạt tính sinh học mạnh Trans-resveratrol ổn định nhiệt độ phòng nhiệt độ thể điều kiện acid V Tính chất chung: Tính chất lý học: 15 - Ở điều kiện nhiệt độ phịng Resveratrol có dạng tinh thể hình kim màu trắng Nhiệt độ nóng chảy 253-255*C Thăng hoa 261*C Resveratrol tan methanol, ethanol, chloroform, acetone, DMSO (Dimethyl sulfoxide) dung môi hữu khác - Hợp chất tan nước (0,03 mg/ml) - Phân tích quang phổ ethanol, trans-resveratrol hấp thụ cực đại bước sóng 308nm cis-resveratrol bước sóng 288nm - Trans-resveratrol chuyển hóa thành dạng cis- tiếp xúc với tia UV Tính chất hóa học: Tính chất nhóm –OH phenol: - Tạo glycoside với đường dẫn xuất đường - Tạo muối: phản ứng với kiềm loãng tạo muối phenolat bền tạo sulfat – glycoside - Tạo phức với kim loại (Al3+, Fe3+, Mg2+, Pb2+, Zn2+, Zr2+) - Phản ứng tạo hydrocacbon thơm đa vòng tác dụng UV chất oxi hóa VI Phương pháp chiết xuất đề xuất: 16 Phương pháp sử dụng quy trình chiết xuất tinh chế Resveratrol từ Cốt khí củ là: Ngâm chiết siêu âm dung dịch cồn Phương pháp ngâm (Phương pháp chiết xuất gián đoạn): - Phương pháp ngâm phương pháp đơn giản có từ thời cổ xưa - Tiến hành: Sau chuẩn bị dược liệu, người ta đổ dung mơi cho ngập dược liệu bình chiết xuất, sau thời gian ngâm định (quy định riêng cho loại dược liệu), rút lấy dịch chiết (lọc gạn) rửa dược liệu lượng dung mơi thích hợp Để tăng cường hiệu chiết xuất, tiến hành khuấy trộn cánh khuấy rút dịch chiết lại đổ lên (tuần hồn cưỡng dung mơi) - Có nhiều cách ngâm: Có thể ngâm tĩnh ngâm động, ngâm nóng ngâm lạnh, ngâm lần nhiều lần (còn gọi ngâm phân đoạn hay ngâm nhiều mẻ) - Ưu điểm: + Đây phương pháp đơn giản nhất, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, rẻ tiền - Nhược điểm: + Nhược điểm chung phương pháp chiết gián đoạn: suất thấp, thao tác thủ công (giai đoạn tháo bã nạp liệu) + Nếu chiết lần khơng chiết kiệt hoạt chất dược liệu + Nếu chiết nhiều lần dịch chiết lỗng, tốn dung mơi, tốn thời gian chiết Siêu âm: - Nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho trình chiết - Năng lượng siêu âm có tác dụng làm tăng mạnh tính thẩm thấu khuếch tán nhờ tác dụng siêu âm sau: + Làm tăng diện tích tiếp xúc hai pha cách phân tán chúng thành hạt nhỏ + Phá vỡ phần màng tế bào + Tăng cường xáo trộn hỗn hợp + Có tác dụng làm nóng chỗ - Phương pháp siêu âm có nhiều ưu điểm làm tăng cường q trình chiết xuất Tuy nhiên, phương pháp nghiên cứu phịng thí nghiệm mà chưa áp dụng sản xuất - Ngoài yếu tố kể trên, nhiều yếu tố khác gây ảnh hưởng đến q trình chiết xuất Ví dụ: áp suất, pH mơi trường, chấn động học, dịng điện cao áp… Quy trình chiết xuất tinh chế Resveratrol từ 17 Polygonum cuspidatum (Cốt khí củ) Mơ tả quy trình: - kg rễ cốt khí củ tươi cắt lát sau cho vào hệ thống máy sấy Quá trình sấy kết thúc độ ẩm mẫu cốt khí củ khơng đổi, thay đổi chậm - Tiếp tục nghiền thô miếng rễ cốt khí thu 300g bột nguyên liệu 300g mẫu ngâm chiết lít hỗn hợp dung mơi ethanol nước cất (tỷ lệ thể tích ethanol/nước cất 8/2) - Hỗn hợp chiết siêu âm Quá trình chiết tiến hành lặp lại lần, để thu dịch chiết tổng - Dịch chiết sau cất quay chân khơng, thu hồi cồn, cịn lại 1/3 thể tích - Hỗn hợp dịch tổng lên men chủng penicillium - Sau chiết n-hexane để loại bỏ tạp chất phân cực 18 - Pha n-hexane sau loại bỏ, cịn pha nước có chứa resveratrol tiếp tục chiết dung môi ethyl acetate để thu dịch chiết ethyl acetate, loại bỏ pha nước - Dịch EtOAc có chứa resveratrol tạp chất cất quay chân khơng để thu cặn rắn - Hịa tan cặn thu cồn 98o sau tinh chế cột Sephadex để thu resveratrol tinh khiết VII Các nghiên cứu tối ưu hóa chiết xuất Resveratrol: Phân lập resveratrol emodin từ cốt khí củ (Polygonum cuspidatum) trồng Việt Nam: - Tác giả: Nguyễn Hải Nam Lã Hải Chung - Tạp chí: Dược học - Năm 2007, Nguyễn Hải Nam cộng tiến hành phân lập resveratrol từ cốt khí củ trồng Việt Nam Nghiên cứu sử dụng phương pháp ngâm chiết ethanol 96% Sau dịch chiết loại bỏ dung môi cất quay chân không tiếp tục chiết ethyl acetate Tiến hành tinh hợp chất sắc ký cột silicagel với hệ dung môi dichloromethane/ethyl acetate (9/1=>7/1) Kết phân lập định lượng resveratrol cốt khí củ nhằm mục đích sử dụng nguồn dược liệu để bào chế chế phẩm phòng bệnh tim mạch ung thư A simple method for the isolation and purification of resveratrol from Polygonum cuspidatum: (Một phương pháp đơn giản để tách tinh chế resveratrol từ Polygonum cuspidatum) Tác giả: Dong-Geng Wang , Wen-Ying Liu , Guang-Tong Chen Medical School, Nan Tong University, Nan Tong 226001, China - Dong - GengWang cộng năm 2012 chiết xuất phân lập resveratrol từ rễ cốt khí củ Polygonum cuspidatum Nghiên cứu sử dụng phương pháp chiết hồi lưu với dung mơi ethanol 95% Dịch chiết thu từ q trình chiết hồi lưu đưa vào hệ cất quay chân khơng nhằm loại bỏ dung mơi Sau đó, cặn chiết thủy phân để chuyển polydatin thành resveratrol Tiến hành chiết phân đoạn hệ dung môi hữu (ethyl acetate: petroleum ether (1:1)) loại bỏ tạp chất dung dịch kiềm thích hợp Hàm lượng resveratrol thu đạt 73,8% 19 Thành phần hóa học rễ cốt khí củ Việt Nam: - Tác giả: Nguyễn Thị Hà, Trần Thanh Hà, Nguyễn Văn Đậu, Nguyễn Minh Khởi - Năm 2013 Nguyễn Thị Hà cộng tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học rễ cốt khí củ Việt nam Nhóm nghiên cứu sử dụng phương pháp ngâm kiệt với cồn 90% sau chiết phân đoạn dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexane, ethyl acetate, nbutanol Sự phân tách thành phần thực sắc ký cột với chất hấp phụ silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải khác Kết phân lập xác định 11 hợp chất có resveratrol Ứng dụng LC-MS định lượng resveratrol Cốt khí củ: - Tác giả: Nguyễn Đình Tuấn, Nguyễn Hải Nam, Nguyễn Tiến Vững - Tạp chí Dược học 11/2007 (Số 379) - Năm 2007, nhóm nghiên cứu Nguyễn Đình Tuấn cộng tiến hành định lượng resveratrol cốt khí củ LC-MS Nhóm tác giả sử dụng phương pháp chiết phân đoạn để chiết tách resveratrol Dược liệu cốt khí củ sau cắt nhỏ (100 g) cho vào bình cầu dung tích 500 ml Thêm 150 ml methanol 95% đun hồi lưu h Gạn dịch chiết methanol lặp lại trình chiết lần Các dịch chiết gộp lại loại bỏ dung môi áp suất giảm nhiệt độ nhỏ 40 oC Cặn thu (9,5 g) hịa vào nước cất nóng (70 ml) tạo thành hỗn dịch, sau chuyển sang phễu chiết thể tích 250 ml, thêm 79 ml ether dầu hỏa lắc kỹ 15 phút sau để lắng cho phân lớp Lớp ether dầu hỏa phía tách riêng Lặp lại thí nghiệm lần Sau dịch chiết ether dầu hỏa gộp lại cất quay loại bỏ dung môi khô kiệt thu dịch chiết chứa resveratrol Nghiên cứu công nghệ chiết tách resveratrol từ nguồn thực vật Việt Nam: - “Nghiên cứu công nghệ chiết tách resveratrol từ nguồn thực vật Việt Nam” PGS.TS Vũ Đình Hồng làm chủ nhiệm (2010-2011) phân lập resveratrol, piceid số thành phần hóa học khác cốt khí củ emodin, emodin-8-O-β-D-glucopyranoside physcion-8-O-βDglucopyranoside Cấu trúc hóa học hợp chất xác định 20 phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân Nhiệm vụ xây dựng phương pháp phân tích định lượng resveratrol sắc ký lỏng hiệu cao Nghiên cứu quy trình thủy phân piceid cao chiết tổng cốt khí củ nhằm nâng cao hàm lượng resveratrol cao Xây dựng quy trình cơng nghệ chiết tách bột resveratrol 20% từ cốt khí củ Xây dựng quy trình tinh chế bột resveratrol 90% theo hai giai đoạn Xây dựng tiêu chuẩn sở cho sản phẩm bột resveratrol 20% 90% - Sản xuất thử nghiệm 3000 g bột resveratrol 20% 300g bột resveratrol 90% đạt tiêu chuẩn sở Đã thử độc tính cấp độc tính bán trường diễn sản phẩm bột Kết cho thấy sản phẩm không gây độc động vật thử nghiệm Đã thử ổn định sản phẩm bột phương pháp lão hóa cấp tốc Có thể xem xét khả ứng dụng làm thực phẩm chức phát triển từ sản phẩm bột resveratrol 20% Optimized ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds from Polygonum cuspidatum (Chiết xuất tối ưu hóa với hỗ trợ siêu âm hợp chất phenolic từ Polygonum cuspidatum): - Tác giả: Chia-Hung Kuo, Bao-Yuan Chen,… - Năm 2013, nghiên cứu Chia-Hung Kuo cộng sự, hợp chất phenolic piceid, resveratrol emodin nghiên cứu chiết tách từ rễ Polygonum Cuspidatum Nhóm tác giả khảo sát điều kiện thích hợp để chiết xuất hợp chất phenolic như: nhiệt độ chiết (30-70°C), nồng độ ethanol (40% -80%) công suất siêu âm (90 -150 W) Cuối cùng, hiệu suất chiết tách piceid, resveratrol emodin thu tương ứng 10,77 mg/g, 3,82 mg/g 11,72 mg/g Nghiên cứu chiết tách tinh chế resveratrol từ Polygonum cuspidatum công nghệ hỗn hợp nhựa hấp phụ lỗ lớn (MAR): - Năm 2019, Jia cộng nghiên cứu chiết tách tinh chế resveratrol từ Polygonum cuspidatum công nghệ hỗn hợp nhựa hấp phụ lỗ lớn (MAR) Thứ nhất, lớp hỗn hợp MAR tối ưu thu dựa hiệu suất hấp thụ giải hấp 32 loại MAR Sau đó, điều kiện hoạt động trình hấp thụ giải hấp nghiên cứu tối ưu hóa Trong điều kiện tối ưu, khả hấp phụ tỷ lệ hấp phụ tương ứng 23,89 mg/ g 98,53%, tỷ lệ giải hấp độ tinh khiết 82,05% 19,32% 21