Tóm tắt: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang)

Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây Giáo cổ lam quả dẹt (Gynostemma compressum X. X. Chen D. R. Liang).

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ VIỆN DƯỢC LIỆU Đinh Thị Thanh Thuỷ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY GIẢO CỔ LAM QUẢ DẸT (Gynostemma compressum X.X Chen & D.R Liang) Chuyên ngành: Dược liệu - Dược học cổ truyền Mã số: 9720206 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC Hà Nội, năm 2023 A GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Cơng trình hồn thành tại: Viện Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội, Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội Người hướng dẫn khoa học HD1: GS.TS Phạm Thanh Kỳ HD2: PGS.TS Phạm Thanh Huyền Phản biện 1: GS TS Nguyễn Mạnh Cường Phản biện 2: PGS TS Nguyễn Thái An Phản biện 3: PGS TS Bùi Thanh Tùng Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp tại: vào hồi ngày 10 tháng 11 năm 2023 Có thể tìm hiểu luận án thư viện; - Thư viện Quốc Gia Hà Nội - Thư viện Viện Dược liệu 1 Tính cấp thiết luận án Giảo cổ lam tên gọi chung cho loài thuộc chi Gynostemma Blume, sử dụng từ lâu giới Hiện nay, giới chi Gynostemma Blume có khoảng 17 lồi, phân bố vùng nhiệt đới châu Á tới Đơng Á Thành phần Giảo cổ lam saponin dammaran (gọi gypenosid) có nhiều tác dụng đáng ý hạ lipid, hạ glucose huyết, điều hòa chức miễn dịch, chống oxy hoá, gây độc tế bào Tại Việt Nam cơng bố lồi Giảo cổ lam, lồi nghiên cứu thành phần hố học tác dụng sinh học bao gồm: G pentaphyllum (Thunb.) Makino, G longipes C.V.Wu, G burmanicum King ex Chakravi, G laxum (Wall.) Cogn G guangxiense X.X Chen & D.H Qin Tuy nhiên, loài G compressum X.X Chen & D.R liang (Giảo cổ lam dẹt) Việt Nam chưa có cơng bố thành phần hố học tác dụng sinh học Luận án: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học số tác dụng sinh học Giảo cổ lam dẹt (Gynostemma compressum X.X Chen & D.R Liang) thực nhằm tạo sở khoa học cho việc khai thác, khẳng định giá trị sử dụng hiệu loài Giảo cổ lam dẹt Việt Nam Mục tiêu luận án - Mô tả đặc điểm thực vật xác định đặc điểm vi học lồi Giảo cổ lam dẹt - Định tính nhóm chất hữu cơ; chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hóa học số hợp chất phân lập từ phần mặt đất loài Giảo cổ lam dẹt - Đánh giá độc tính cấp số tác dụng sinh học cao chiết số hợp chất phân lập từ phần mặt đất loài Giảo cổ lam dẹt Những đóng góp luận án 3.1 Về thực vật Đã mô tả chi tiết đặc điểm hình thái, đối chiếu với khố phân loại Trung Quốc tài liệu chuyên khảo, so sánh với mẫu lưu Phịng Tiêu bản, Bộ mơn Dược liệu, Trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ chuyên môn cán Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP), Viện Dược liệu, giám định tên khoa học mẫu Giảo cổ lam nghiên cứu G compressum X.X.Chen & D.R.Liang (GCL dẹt) Đã xác định đặc điểm vi phẫu thân, đặc điểm bột dược liệu GCL dẹt 3.2 Về thành phần hoá học Từ phần mặt đất GCL dẹt, phương pháp định tính xác định có nhóm chất gồm: saponin, flavonoid, caroten, sterol, đường khử, acid amin polysaccharid Từ phần mặt đất GCL dẹt, phân lập xác định cấu trúc 17 hợp chất, đó: - hợp chất biết corchoinol C, hydroxymethylfurfural gycomosid II (là saponin) - 14 hợp chất mới, lần xác định cấu trúc phân lập từ lồi GCL dẹt, có hợp chất triterpenoid (được gọi tên Gycomol VN14) 10 saponin (được gọi tên Gycomosid VN1-10) 3.3 Về tác dụng sinh học * Về độc tính cấp Lần công bố LD50 cao chiết nước 20,4 g cao/kg LD50 cao chiết cồn EtOH 80% 23,78 g cao/kg tương đương 102 g dược liệu 90,23g dược liệu/kg ttc * Tác dụng ức chế tích tụ lipid tế bào gan HepG2 cao chiết phân đoạn n-hexan n-butanol in vitro công bố lần đầu * Đã xác định tác dụng hoạt hoá p-AMPK, p-ACC, ức chế FAS SREBP1c tế bào mô mỡ 3T3-L1 in vitro cao chiết tổng (GCT), cao chiết phân đoạn (n-hexan (GCH), ethyl acetat (GCE), n-butanol (GCB) cắn nước (GCW)) 14 hợp chất phân lập Ngoài tác dụng theo nồng độ thời gian hợp chất GC13 tế bào 3T3-L1 báo cáo * Tác dụng hạ glucose máu mơ hình đái tháo đường type thực nghiệm in vivo cao chiết EtOH 80% Sau tuần đánh giá tác dụng chuột nhắt gây mơ hình đái tháo đường typ thể tác dụng: giảm nồng độ glucose máu so với lơ mơ hình; giảm số MDA tụy chuột so với lô mô hình, cải thiện cấu trúc vi thể gan, tụy so với lơ mơ hình Cao EtOH 80% GCL dẹt liều 0,96 g/kg/ngày thể tác dụng tương đương so với liều 2,88 g/kg/ngày Ý nghĩa luận án Đây lần loài GCL dẹt nghiên cứu đầy đủ thực vật, thành phần hoá học tác dụng sinh học Tên khoa học mẫu nghiên cứu xác định kết nghiên cứu hoá học tác dụng sinh học có nguồn gốc dược liệu rõ ràng Mơ tả chi tiết đặc điểm hình thái thực vật cơng bố đặc điểm vi phẫu góp phần nhận biết tiêu chuẩn hoá dược liệu Đã phân lập 17 hợp chất, có 14 hợp chất tự nhiên Kết nghiên cứu hoá học giúp bổ sung tư liệu cho ngành hoá học hợp chất thiên nhiên nói chung chi Gynostemma Blume nói riêng Đã xác định độc tính cấp cao chiết nước cao chiết cồn; liều độc lớn nhiều so với liều dự kiến sử dụng, chứng tỏ dược liệu sử dụng có độ an toàn cao Kết nghiên cứu tác dụng sinh học in vitro tác dụng hoạt hoá AMPK, ACC tác dụng ức chế FAS, SREBP-1c cao chiết phân đoạn 14 hợp chất phân lập được: Bước đầu đánh giá tác dụng cao chiết hợp chất phân lập đến chuyển hố acid béo glucose thơng qua đường AMPK tế bào mô mỡ 3T3-L1 Kết nghiên cứu tác dụng cao chiết tế bào gan HepG2 chứng minh cao chiết phân đoạn n-hexan n-butanol (100mcg/ml) có tác dụng ức chế tích tụ lipid tế bào HepG2 Trên in vivo, kết nghiên cứu cho thấy GCL dẹt với mức liều có tác dụng: giảm nồng độ glucose máu tương đương với gliclazid 80mg/kg/ngày, giảm số MDA tuỵ chuột so với lơ mơ hình với p < 0,01, cải thiện cấu trúc vi thể gan, tuỵ chuột nhắt trắng mơ hình gây đái tháo đường type streptozocin Đây sở khoa học cho thấy tiềm sử dụng GCL dẹt việc phát triển chế phẩm ngăn ngừa bệnh liên quan đến chế độ ăn uống thông qua giảm glucose máu kích hoạt AMPK Bố cục luận án Luận án có 149 trang, gồm chương, 36 bảng, 59 hình, 163 tài liệu tham khảo phụ lục (97 trang) Bố cục gồm: Đặt vấn đề (1 trang); Tổng quan (32 trang); Đối tượng phương pháp nghiên cứu (15 trang); Kết nghiên cứu (82 trang); Bàn luận (17 trang), Kết luận kiến nghị (2 trang); Danh mục cơng trình cơng bố (1 trang) B NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương TỔNG QUAN Tổng hợp trình bày cách hệ thống kết nghiên cứu tới thực vật, thành phần hố học, tác dụng sinh học cơng dụng số loài chi Gynostemma Blume loài G compressum giới Việt Nam Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu - Phần mặt đất GCL dẹt (được thu hái Lạng Sơn tháng 3,4 năm 2018 tháng 9, 10 năm 2019), cao chiết hợp chất phân lập từ dược liệu - Các hoá chất, thuốc thử đạt tiêu chuẩn phân tích theo quy định Dược điển Việt Nam Các dòng tế bào, thuốc thử sinh học chuột thí nghiệm đạt tiêu chuẩn nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Giám định tên khoa học lồi nghiên cứu sở phân tích đặc điểm hình thái thực vật, so sánh với tài liệu cơng bố lồi khố phân loại thực vật - Xác định đặc điểm vi phẫu lá, thân đặc điểm bột dược liệu phương pháp hiển vi - Định tính nhóm chất hữu phản ứng đặc hiệu - Chiết xuất phương pháp ngâm chiết với EtOH 80%, chiết phân đoạn với dung mơi có độ phân cực tăng dần - Phân lập hợp chất phương pháp sắc ký cột nhiều lần - Xác định cấu trúc hợp chất phân lập dựa thông số vật lý phương pháp phổ khối (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HR-EI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều (1D-NMR) chiều (2D-NMR), kết hợp đối chiếu với tài liệu công bố - Đánh giá độc tính cấp cao chiết nước cao chiết cồn theo phương pháp xác định độc tính thuốc LD50 tính theo phương pháp BehrensKarber - Đánh giá tác dụng ức chế tích tụ lipid gây acid oleic tế bào gan HepG2 phương pháp nhuộm SRB thử nghiệm Oil Red O - Đánh giá tác dụng hoạt hoá AMPK, ACC, ức chế FAS SREBP-1c tế bào mô mỡ 3T3-L1 phương pháp MTT phương pháp Western Blot - Đánh giá tác dụng hạ glucose máu mơ hình gây đái tháo đường type thực nghiệm theo phương pháp Fabiola Srinivasan đánh giá tác dụng thuốc chứng thuốc thử mô hình ĐTĐ type thực nghiệm thơng qua xác định glucose lipid máu thời điểm đồng thời lấy gan tuỵ chuột để quan sát, đánh giá đại thể vi thể 30% số chuột nghiên cứu CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Về thực vật 3.1.1 Mơ tả đặc điểm hình thái - Dây leo Tua mọc nách lá, hình mảnh, dài - cm, thường chia nhánh đầu, nhánh dài - mm, có trường hợp không chia chia ba nhánh Thân nhẵn, trừ có lơng thưa đốt, mảnh, có rãnh, cạnh, mọc bò lan mặt đất, rễ thường mọc từ đốt Lá mọc so le, mỏng, thường (đơi có 5) chét; cuống dài khoảng cm, nhẵn, có rãnh mặt trên; phiến chét hình thoi trứng ngược, mép khía tai bèo, đỉnh có mũi nhọn ngắn, mặt có lông gân, mặt lông rải rác phiến lá; gân bên - đôi, rõ mặt dưới, lõm mặt trên; chét kích thước - 4,7 cm x 1,3 - 2,2 cm, gốc nhọn, chét bên nhỏ chét giữa, gốc lệch; cuống chét dài khoảng mm Cây đơn tính Hoa đực mọc thành chùm kép nách lá; trục cụm hoa nhẵn, có sọc, dài khoảng - cm, chia - nhánh; hoa màu trắng xanh, mẫu 5, mẫu 6, có đường kính 4,5 - mm; bắc hình dải, dài khoảng 1,5 mm; cuống hoa dạng sợi, dài khoảng mm; đài thuôn, đỉnh nhọn, khoảng 0,6 x 0,5 mm; tràng hình tam giác hẹp, có mũi nhọn dài, khoảng x 0,8 mm, mép xẻ cưa nhỏ; nhị ngắn, hàn liền, cao khoảng 0,3 mm; bao phấn 5, hình trứng Hoa mọc thành cụm từ - hoa nách lá, thường mẫu 5, mẫu 6; trục cụm hoa nhẵn, từ ngắn đến 2,5 cm; bắc hình dải, dài 1,2 – 1,5 mm; đài hình thn, đỉnh nhọn, khoảng 0,7 x 0,6 mm; tràng hình tam giác hẹp, có mũi nhọn dài, khoảng x 0,6 – 0,7 mm, mép xẻ cưa nhỏ; bầu thường ơ, ơ, đường kính 1,2 – 1,4 mm, chứa nỗn; số vịi nhụy số (thường 2, 3), có rãnh mặt trong, dài khoảng 0,6 mm; núm nhụy xẻ đỉnh, dài khoảng 0,4 mm Quả màu xanh, dẹt, hình tam giác ngược, kích thước khoảng x mm, vỏ mỏng, dày 0,25 – 0,35 mm, chín tự vỡ để giải phóng hạt ngồi; đỉnh mang bao hoa núm nhụy tồn tại; cuống dạng sợi, dài 0,8 – 1,8 cm Hạt 2, hình tam giác ngược, kích thước khoảng x mm, dày khoảng mm, bề mặt có nốt sần Hoa tháng 3-4, tháng 4-5 Có gặp đến tháng 9-10 3.1.2 Giám định tên khoa học Đã giám định tên khoa học mẫu Giảo cổ lam nghiên cứu thu hái huyện Bắc Sơn, tỉnh Lạng Sơn Gynostemma compressum X X Chen & D R Liang, họ Bí (Cucurbitaceae) Tên thường gọi Giảo cổ lam dẹt Tiêu thực vật mẫu khô GCL dẹt lưu Phòng Tiêu - Viện Dược liệu với mã số tiêu NIMM0019225 Phòng Tiêu thuốc – Trường ĐH Dược Hà Nội với mã số tiêu HNIP/18590/19 HNIP/18591/19 3.1.2 Đặc điểm vi học * Đặc điểm bột dược liệu: Bột thân GCL dẹt có màu xanh thẫm (bột lá), ngả sang vàng nâu (bột thân), mùi thơm đặc trưng, vị Soi kính hiển vi quan sát thấy đặc điểm: tế bào cứng riêng lẻ tập trung thành mảng, kích thước khoảng 20 x 30 µm; lơng che chở đa bào ; hạt tinh bột kích thước hình trịn hình trứng, đường kính khoảng 15 - 25 µm, chứa tế bào mô mềm đứng riêng lẻ, mảnh mang màu, mảnh mạch xoắn, mạch điểm quan sát thấy sợi rải rác tiêu bột dược liệu Có thể (hiếm) quan sát mảnh biểu bì mang lỗ khí kiểu hỗn bào * Đặc điểm vi phẫu cuống lá: Cuống có thiết diện hình cạnh, đối xứng hai bên, lõm mặt trên, từ lên gồm phần sau: biểu bì hàng tế bào hình chữ nhật, phía ngồi phủ cutin màu xanh; mơ dày gồm hàng tế bào hình trứng, kích thước khơng nhau, thành dày lên góc, bắt màu đỏ; mơ mềm gồm tế bào hình đa giác, thành mỏng, kích thước khơng nhau, bắt màu đỏ; rải rác lớp mô mềm bó libe – gỗ kích thước khơng xếp thành vịng cung; phần libe tạo thành vịng khơng liên tục bao quanh gỗ (tập trung phía đầu gỗ); phần gỗ gồm mạch gỗ tròn nối tiếp thành dãy, dãy cách – hàng tế bào mô mềm gỗ; mô dày gồm 7-8 hàng tế bào giống mô dày dưới; biểu bì giống biểu bì * Đặc điểm vi phẫu lá: Phần gân lá: tiết diện bất đối xứng, phần gân nhú cao, nhọn, bề ngang khoảng 1/4 bề ngang gân Cấu tạo vi phẫu gân từ lên gồm phần sau: biểu bì gồm hàng tế bào xếp sít nhau, bên ngồi phủ lớp cutin mỏng, quan sát lơng che chở đa bào (rất ít, thường quan sát rải rác bột lá) lỗ khí; mô dày gồm – hàng tế bào hình trứng, kích thước khơng nhau, thành dày lên góc, bắt màu đỏ; mơ mềm tế bào hình trịn đa giác, thành mỏng, kích thước khơng nhau, bắt màu đỏ; mơ mềm, bó (hoặc bó) libe – gỗ tập trung gân; phần libe gồm nhiều tế bảo nhỏ, bắt màu đỏ đậm, tạo thành vịng khơng liên tục bao quanh gỗ; phần gỗ gồm mạch gỗ tròn nối tiếp thành dãy, dãy cách – hàng tế bào mô mềm gỗ; mô dày gồm – hàng tế bào giống mô dày dưới; biểu bì hàng tế bào tương tự biểu bì khơng mang lỗ khí Phần phiến lá: phiến nằm ngang, hướng lên trên, bề dày phiến khoảng 1/3 bề dày gân Cấu tạo phiến từ lên gồm phần sau: biểu bì gồm hàng tế bào xếp sít nhau, phía ngồi phủ cutin tương tự gân lá, mang lỗ khí; mơ mềm (hay mơ khuyết) tế bào hình trịn đa giác, thành mỏng, kích thước khơng nhau, bắt màu đỏ; mơ giậu gồm hàng tế bào hình chữ nhật (hoặc vng), xếp sít vng góc với bề mặt lá, bắt màu đỏ; biểu bì giống biểu bì tương tự gân * Đặc điểm vi phẫu thân: Mặt cắt ngang thân có cạnh, lồi lên góc, cạnh (trên cùng) lõm Từ vào gồm phần sau: hàng tế bào biểu bì, phía ngồi phủ cutin; sát lớp biểu bì góc thân lớp mô dày gồm – hàng tế bào hình trứng, kích thước khơng nhau, thành dày lên góc, bắt màu đỏ; bên lớp mô mềm vỏ gồm – hàng tế bào (nằm sát biểu bì) – hàng tế bào (nằm mơ dày), hình đa giác, thành mỏng, xếp lộn xộn, bắt màu đỏ; cung mô cứng gồm – hàng tế bào, hình đa giác, kích thước khơng nhau, thành dày hóa gỗ, bao quanh bó libe-gỗ bên trong; cung mơ cứng có đám mơ mềm gồm – hàng tế bào, thành mỏng, bắt màu đỏ; bó libe – gỗ kích thước khơng nhau, gồm: libe cấp bên ngồi bị ép dẹp thành dải mỏng, bắt màu đỏ đậm (khơng rõ hình dạng tế bào); libe cấp tế bào thành mỏng, kích thước nhỏ, hình đa giác, xếp thành hàng từ 6-10 tế bào hàng, bắt màu đỏ; gỗ cấp bắt màu xanh, có sợi tế bào màu xanh bao quanh, có mơ mềm gỗ màu hồng bên Xen kẽ bó libe – gỗ đoạn tia ruột Trong tế bào mô mềm ruột thành mỏng, hình đa giác, bắt màu đỏ, kích thước lớn so với mô mềm vỏ đám mô mềm cung mơ cứng 3.2 Về thành phần hố học 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu Kết định tính phản ứng hóa học cho thấy, mẫu GCL dẹt có chứa nhóm chất flavonoid, saponin, caroten, sterol, đường khử, acid amin polysaccharid 3.2.2 Chiết xuất dược liệu Sơ đồ chiết xuất cao tổng cao phân đoạn: Từ 1,9 kg dược liệu GCL dẹt thu 350g cao tổng, 52g cao n-hexan, 34,4 g cao EtOAc, 163g cao BuOH 100g cao nước (được tóm tắt hình 3.8) Hình 3.8: Tóm tắt sơ đồ chiết cao tổng cao phân đoạn GCL dẹt 3.2.3 Phân lập hợp chất - Phân tách 160,0g BuOH sắc ký cột silica gel với hệ dung môi rửa giải gradient DCM-MeOH thu 10 phân đoạn B1 - B10 - Sơ đồ phân tách phân đoạn B1 tóm tắt hình 3.9 - Sơ đồ phân tách phân đoạn B2 tóm tắt hình 3.10 Hình 3.9: Tóm tắt sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn B1 Hình 3.10: Tóm tắt sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn B2 2''''); 78,5 (C-3''''); 71,6 (C-34'''); 78,0 (C-5''''); 6,8 (C-6'''') HR-ESI-MS: m/z 1151,5878 [M+HCOO]– - Hợp chất GC7 (GCL-13B1, chất mới): gycomosid VN10, CTPT: C35H58O9, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,36 (1H, m, H-1); 2,08 (1H, m, H-2a); 1,78 (1H, m, H-2b); 3,20 (1H, m, H-3); 0,72 (1H, dd, 10,0; 3,5, H-5); 1,70 (2H, m, H-6); 1,55 (1H, m, H-7a); 1,41 (1H, m, H-7b); 1,90 (1H, dd, 14,0, 4,5, H-9); 3,10 (1H, dd, 14,0; 4,5, H-11a); 2,43 (1H, t, 14,0, H-11b); 3,03 (1H, d, 10,0, H-13); 1,78 (1H, m, H-15a); 1,20 (1H, m, H-15b); 1,78 (1H, m, H-16a); 1,70 (1H, m, H-16b); 2,38 (1H, m, H-17); 1,26 (3H, s, H18); 1,02 (3H, s H-19); 1,03 (3H, s, H-21); 1,47 (2H, m, H-22); 2,13 (1H, m, H23a); 2,06 (1H, m, H-23b); 5,41 (1H, td, 7,5; 1,0, H-24), 3,93 (2H, s, H-26); 1,68 (3H, s, H-27); 1,05 (3H, s, H-28); 0,87 (3H, s, H-29); 0,79 (3H, s, H-30); 4,29 (1H, d, 7,5, H-1'); 3,20 (1H, m, H-2'); 3,30 (1H, t, 9,0, H-3'), 3,48 (1H, ddd, 10,0; 8,5, H-4'); 3,84 (1H, dd, 11,5; 5,0, H-5'a); 3,20 (1H, m, H-5'b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,0 (C-1); 37,5 (C-2); 87,1 (C-3); 40,3 (C-4); 54,8 (C5); 18,9 (C-6); 35,1 (C-7); 42,3 (C-8); 56,2 (C-9); 45,0 (C-10); 43,8 (C-11); 216,6 (C-12); 57,1 (C-13); 56,3 (C-14); 32,7 (C-15); 24,8 (C-16); 44,7 (C-17); 16,5 (C18); 12,7 (C-19); 74,9 (C-20); 25,7 (C-21); 41,4(C-22); 23,5 (C-23); 127,1 (C24); 135,8 (C-25); 69,0 (C-26); 13,7 (C-27); 28,2 (C-28); 16,3 (C-29); 17,4 (C30); 107,4 (C-1'); 75,4 (C-2'); 78,0 (C-3'); 71,2 (C-4'); 66,8 (C-5') HR-ESI-MS: m/z 623,4154 [M+H]+ - Hợp chất GC8 (GCL-11A1, chất mới): gycomol VN4, CTPT: C30H52O4, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,40 (1H, dd, 10,5; 5,5, H-1); 1,77 (2H, m, H-2); 3,20 (1H, dd, 11,5; 5,5, H-3); 0,64 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,55 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,65 (1H, m, H-9); 2,86 (1H, m, H-11a); 1,38 (1H, m, H-11b); 3,60 (1H, td, 11,5; 5,5, H-12); 1,74 (1H, m, H-13); 1,56 (1H, m, H-15a); 1,08 (1H, m, H-15b); 1,87 (1H, m, H-16a); 1,30 (1H, m, H-16b); 2,03 (1H, m, H-17); 1,04 (3H, s, H-18); 0,98 (3H, s, H-19); 1,16 (3H, s, H-21); 1,75 (1H, m, H-22a); 1,09 (1H, m, H-22b); 2,15 (1H, m, H23a), 2,01 (1H, m, H-23b); 5,16 (1H, m, H-24); 1,70 (3H, s, H-26); 1,64 (3H, s, H-27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,94 (3H, s, H-30) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,3 (C5); 19,0 (C-6); 35,9 (C-7); 41,6 (C-8); 52,2 (C-9); 44,6 (C-10); 34,6 (C-11); 72,4 (C-12); 49,0 (C-13); 52,2 (C-14); 32,2 (C-15); 27,2 (C-16); 55,8 (C-17); 16,5 (C18); 12,8 (C-19); 74,4 (C-20); 26,5 (C-21); 36,4 (C-22); 23,3 (C-23); 126,2 (C- 13 24); 131,9 (C-25); 25,9 (C-26); 17,7 (C-27); 28,5 (C-28); 15,7 (C-29); 17,1 (C30) HR-ESI-MS: m/z 521,3849 [M+HCOO]– - Hợp chất GC9 (GCL-10E1, chất mới): gycomosid VN1, CTPT: C36H62O9, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,40 (1H, dd, 10,5; 6,5, H-1); 1,78 (2H, m, H-2); 3,20 (1H, m, H-3); 0,66 (1H, m, H-5); 1,62 (2H, m, H-6); 1,57 (1H, m, H-7a); 1,32 (1H, m, H-7b); 1,67 (1H, m, H-9); 2,89 (1H, m, H-11a); 1,34 (1H, m, H-11b); 3,71 (1H, td, 10,5; 5,5, H-12); 1,78 (1H, m, H-13); 1,60 (1H, m, H-15a); 1,09 (1H, m, H-15b); 1,93 (1H, m, H-16a); 1,40 (1H, m, H-16b); 2,29 (1H, td, 11,0; 8,0, H-17); 1,07 (3H, s, H-18); 0,98 (3H, s, H-19); 1,36 (3H, s, H-21); 1,84 (1H, m, H-22a); 1,69 (1H, m, H-22b); 2,09 (2H, m, H-23), 5,13 (1H, td, 6,5; 1,5, H-24); 1,71 (3H, s, H-26); 1,65 (3H, s, H27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,79 (3H, s, H-29); 0,95 (3H, s, H-30); 4,62 (1H, d, 8,0, H-1'); 3,11 (1H, dd, 9,0; 8,0, H-2'); 3,37 (1H, t, 9,0; H-3'); 3,33 (1H, m, H-4'); 3,23 (1H, m, H-5'); 3,79 (1H, dd, 12,5; 2,5; H-6'a); 3,65 (1H, dd, 12,5; 5,0; H6'b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,1 (C-5); 19,0 (C-6); 35,8 (C-7); 41,6 (C-8); 51,9 (C-9); 44,6 (C-10); 33,6 (C-11); 72,2 (C-12); 49,3 (C-13); 52,2 (C-14); 31,9 (C-15); 27,0 (C-16); 53,4 (C-17); 16,6 (C-18); 12,8 (C-19); 84,9 (C-20); 23,0 (C-21); 36,6 (C-22); 24,3 (C-23); 125,9 (C-24); 132,3 (C-25); 25,9 (C-26); 18,0 (C-27); 28,5 (C-28); 15,8 (C-29); 17,2 (C-30); 98,3 (C-1'); 75,4 (C-2'); 78,2 (C-3'); 71,1 (C-4'); 77,9 (C-5'); 62,5 (C-6') HR-ESI-MS: m/z 683,4381 [M+HCOO]– - Hợp chất GC10 (GCL-10G1, chất mới): gycomosid VN4, CTPT: C38H64O10, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,38 (1H, m, H-1); 1,75 (2H, m, H-2); 3,19 (1H, m, H-3); 0,64 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,56 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,64 (1H, m, H-9); 2,83 (1H, m, H-11a); 1,34 (1H, m, H-11b); 3,76 (1H, m, H-12); 1,75 (1H, m, H-13); 1,57 (1H, m, H-15a); 1,06 (1H, m, H-15b); 1,90 (1H, m, H-16a); 1,35 (1H, m, H-16b); 2,29 (1H, td, 10,5; 8,0, H-17); 1,04 (3H, s, H-18); 0,97 (3H, s, H-19); 1,37 (3H, s, H21); 1,79 (1H, m, H-22a); 1,57 (1H, m, H-22b); 2,15 (1H, m, H-23a); 2,05 (1H, m, H-23b), 5,14 (1H, t, 7,0, H-24); 1,69 (3H, s, H-26); 1,64 (3H, s, H-27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,94 (3H, s, H-30); 4,60 (1H, d, 7,5, H-1'); 3,15 (1H, m, H-2'); 3,38 (1H, m; H-3'); 3,26 (1H, m, H-4'); 3,45 (1H, m, H-5'); 4,40 (1H, dd, 12,0; 2,5; H-6'a); 4,13 (1H, dd, 12,0; 7,0; H-6'b); 2,05 (3H, s, COCH3) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 80,0 (C-1); 38,5 (C-2); 76,7 (C-3); 40,1 (C-4); 55,1 (C-5); 19,0 (C-6); 35,8 (C-7); 41,6 (C-8); 51,9 (C-9); 44,6 (C10); 33,4 (C-11); 72,0 (C-12); 49,3 (C-13); 52,2 (C-14); 31,7 (C-15); 27,1 (C- 14 16); 53,2 (C-17); 16,6 (C-18); 12,7 (C-19); 5,0 (C-20); 22,2 (C-21); 36,8 (C-22); 23,8 (C-23); 126,1 (C-24); 132,1 (C-25); 25,9 (C-26); 17,9 (C-27); 28,5 (C-28); 15,8 (C-29); 17,3 (C-30); 98,0 (C-1'); 75,3 (C-2'); 78,5 (C-3'); 71,8 (C-4'); 75,0 (C-5'); 65,2 (C-6'); 172,7 (CO); 20,8 (CH3) HR-ESI-MS: m/z 683,4381 [M+HCOO]– - Hợp chất GC11 (GCL-24C, chất mới): gycomosid VN2, CTPT: C48H82O19, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,41 (1H, dd, 11,0; 6,5, H-1); 1,78 (2H, m, H-2); 3,19 (1H, dd, 11,5; 5,0, H-3); 0,65 (1H, m, H-5); 1,62 (1H, m, H-6a); 1,58 (1H, m, H-6b); 1,56 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,65 (1H, m, H-9); 2,85 (1H, m, H-11a); 1,36 (1H, m, H-11b); 3,72 (1H, dd, 10,5; 6,5, H-12); 1,76 (1H, m, H-13); 1,58 (1H, m, H-15a); 1,07 (1H, m, H-15b); 1,91 (1H, m, H-16a); 1,37 (1H, m, H-16b); 2,23 (1H, td, 10,5; 7,5, H-17); 1,04 (3H, s, H-18); 0,98 (3H, s, H-19); 1,40 (3H, s, H-21); 1,87 (1H, m, H-22a); 1,59 (1H, m, H-22b); 2,10 (2H, m, H-23); 5,15 (1H, td, 6,5; 1,5, H-24); 1,72 (3H, s, H-26); 1,65 (3H, s, H-27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,95 (3H, s, H-30); 4,73 (1H, d, 8,0, H-1'); 3,48 (1H, dd, 9,0; 8,0, H-2'); 3,61 (1H, m; H-3'); 3,42 (1H, m, H-4'); 3,25 (1H, m, H-5'); 3,87 (1H, m; H-6'a); 3,74 (1H, dd, 12,0; 5,0; H-6'b); 4,75 (1H, d, 8,0, H-1''); 3,25 (1H, m, H-2''); 3,29 (1H, m, H-3''); 3,34 (1H, m, H-4''); 3,43 (1H, m, H-5''); 4,03 (1H, dd, 11,5; 1,5, H6''a); 3,82 (1H, dd, 11,5; 5,0, H-6''b); 4,34 (1H, d, 8,0; H-1'''); 3,22 (1H, m, H2'''); 3,38 (1H, m, H-3'''); 3,28 (1H, m, H-4'''); 3,28 (1H, m, H-5'''); 3,89 (1H, m, H-6'''a); 3,67 (1H, m, H-6'''b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,1 (C-5); 19,0 (C-6); 35,8 (C-7); 41,6 (C-8); 51,9 (C-9); 44,6 (C-10); 33,5 (C-11); 72,2 (C-12); 49,1 (C-13); 52,3 (C-14); 31,9 (C15); 27,3 (C-16); 53,7 (C-17); 16,6 (C-18); 12,7 (C-19); 85,3 (C-20); 22,6 (C21); 36,8 (C-22); 24,3 (C-23); 126,2 (C-24); 132,1 (C-25); 26,0 (C-26); 18,1 (C27); 28,6 (C-28); 15,8 (C-29); 17,6 (C-30); 97,0 (C-1'); 81,5 (C-2'); 78,4 (C-3'); 71,5 (C-4'); 77,9 (C-5'); 62,9 (C-6'); 104,9 (C-1''); 76,4 (C-2''); 78,1 (C-3''); 71,7 (C-4''); 76,6 (C-5''); 70,3 (C-6''); 105,1 (C-1'''); 75,1 (C-2'''); 77,9 (C-3'''); 71,7 (C-4'''); 77,9 (C-5'''); 62,9 (C-6''') HR-ESI-MS: m/z 963,5559 [M+H]+ - Hợp chất GC12 (GCL-21K1): gycomosid II, CTPT: C48H82O19, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,38 (1H, m, H-1); 2,15 (1H, m, H-2a); 2,80 (1H, m, H-2b); 3,22 (1H, m, H-3); 0,67 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,56 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,62 (1H, m, H-9); 2,83 (1H, m, H-11a); 1,36 (1H, m, H-11b); 3,76 (1H, m, H-12); 1,73 (1H, m, H-13); 1,58 (1H, m, H-15a); 1,07 (1H, m, H-15b); 1,90 (1H, m, H-16a); 1,34 (1H, m, 15 H-16b); 2,30 (1H, m, H-17); 1,03 (3H, s, H-18); 0,98 (3H, s, H-19); 1,38 (3H, s, H-21); 1,80 (1H, m, H-22a); 1,57 (1H, m, H-22b); 2,16 (1H, m, H-23a); 2,07 (1H, m, H-23b); 5,16 (1H, t, 7,0, H-24); 1,71 (3H, s, H-26); 1,65 (3H, s, H-27); 1,04 (3H, s, H-28); 0,85 (3H, s, H-29); 0,94 (3H, s, H-30); 4,60 (1H, d, 8,0, H1'); 3,15 (1H, m, H-2'); 3,35 (1H, m; H-3'); 3,36 (1H, m, H-4'); 3,45 (1H, m, H5'); 4,08 (1H, dd, 12,0; 2,0; H-6'a); 3,81 (1H, dd, 12,0; 5,5; H-6'b); 4,37 (1H, d, 8,0, H-1''); 3,22 (1H, m, H-2''); 3,36 (1H, m, H-3''); 3,29 (1H, m, H-4''); 3,36 (1H, m, H-5''); 3,88 (1H, m, H-6''a); 3,68 (1H, m, H-6''b); 4,34 (1H, d, 8,0; H-1'''); 3,20 (1H, m, H-2'''); 3,37 (1H, m, H-3'''); 3,32 (1H, m, H-4'''); 3,29 (1H, m, H5'''); 3,88 (1H, m, H-6'''a); 3,68 (1H, m, H-6'''b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 80,0 (C-1); 37,6 (C-2); 87,4 (C-3); 40,3 (C-4); 55,1 (C-5); 18,1 (C-6); 35,8 (C-7); 41,6 (C-8); 51,9 (C-9); 44,4 (C-10); 33,4 (C-11); 72,0 (C-12); 49,3 (C13); 52,1 (C-14); 31,7 (C-15); 27,1 (C-16); 53,1 (C-17); 16,6 (C-18); 12,7 (C19); 84,9 (C-20); 22,5 (C-21); 36,8 (C-22); 23,9 (C-23); 126,1 (C-24); 132,2 (C25); 25,9 (C-26); 18,0 (C-27); 28,3 (C-28); 16,4 (C-29); 17,3 (C-30); 98,1 (C1'); 75,3 (C-2'); 78,2 (C-3'); 71,5 (C-4'); 76,7 (C-5'); 70,3 (C-6'); 105,5 (C-1''); 75,1 (C-2''); 77,9 (C-3''); 71,7 (C-4''); 77,9 (C-5''); 62,9 (C-6''); 106,6 (C-1'''); 75,6 (C-2'''); 78,5 (C-3'''); 71,7 (C-4'''); 77,9 (C-5'''); 62,9 (C-6''') HR-ESI-MS: m/z 961,5 [M-H]– - Hợp chất GC13 (GCL-21G1, chất mới): gycomosid VN-3, CTPT: C54H92O24, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,42 (1H, m, H-1); 2,15 (1H, m, H-2a); 1,80 (1H, m, H-2b); 3,22 (1H, m, H-3); 0,67 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,56 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,65 (1H, m, H-9); 2,85 (1H, m, H-11a); 1,34 (1H, m, H-11b); 3,73 (1H, m, H-12); 1,76 (1H, m, H-13); 1,58 (1H, m, H-15a); 1,08 (1H, m, H-15b); 1,90 (1H, m, H-16a); 1,37 (1H, m, H-16b); 2,23 (1H, m, H-17); 1,04 (3H, s, H-18); 0.98 (3H, s, H-19); 1,40 (3H, s, H-21); 1,88 (1H, m, H-22a); 1,58 (1H, m, H-22b); 2,10 (2H, m, H23); 5,15 (1H, t, 7,0, H-24); 1,72 (3H, s, H-26); 1,65 (3H, s, H-27); 1,04 (3H, s, H-28); 0,86 (3H, s, H-29); 0,95 (3H, s, H-30); 4,73 (1H, d, 8,0, H-1'); 3,48 (1H, m, H-2'); 3,61 (1H, t, 8,5; H-3'); 3,42 (1H, m, H-4'); 3,28 (1H, m, H-5'); 3,88 (1H, m; H-6'a); 3,75 (1H, dd, 12,0; 5,5; H-6'b); 4,75 (1H, d, 8,0, H-1''); 3,25 (1H, m, H-2''); 3,38 (1H, m, H-3''); 3,42 (1H, m, H-4''); 3,44 (1H, m, H-5''); 4,06 (1H, dd, 12,0; 2,0, H-6''a); 3,82 (1H, dd, 12,0; 5,0, H-6''b); 4,34 (1H, d, 7,5; H-1'''); 3,23 (1H, m, H-2'''); 3,38 (1H, m, H-3'''); 3,30 (1H, m, H-4'''); 3,28 (1H, m, H5'''); 3,88 (1H, m, H-6'''a); 3,67 (1H, m, H-6'''b); 4,34 (1H, d, 7,5, H-1''''); 3,20 (1H, m, H-2''''); 3,37 (1H, m, H-3''''); 3,32 (1H, m, H-4''''); 3,29 (1H, m, H-5''''); 16 3,88 (1H, m, H-6''''); 3,68 (1H, m, H-6'''') 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 37,7 (C-2); 87,4 (C-3); 40,4 (C-4); 55,1 (C-5); 18,8 (C-6); 35,8 (C-7); 41,6 (C-8); 51,9 (C-9); 44,3 (C-10); 33,4 (C-11); 72,2 (C-12); 49,3 (C-13); 52,3 (C14); 31,9 (C-15); 27,3 (C-16); 53,7 (C-17); 16,6 (C-18); 12,7 (C-19); 85,4 (C20); 22,6 (C-21); 36,9 (C-22); 24,3 (C-23); 126,2 (C-24); 132,2 (C-25); 25,9 (C26); 18,1 (C-27); 28,3 (C-28); 16,4 (C-29); 17,6 (C-30); 97,0 (C-1'); 81,5 (C-2'); 78,5 (C-3'); 71,6 (C-4'); 77,9 (C-5'); 62,9 (C-6'); 104,9 (C-1''); 76,4 (C-2''); 78,1 (C-3''); 71,6 (C-4''); 76,6 (C-5''); 70,3 (C-6''); 105,1 (C-1'''); 75,1 (C-2'''); 77,8 (C3'''); 71,6 (C-4'''); 77,9 (C-5'''); 62,9 (C-6'''); 106,7 (C-1''''); 75,6 (C-2''''); 78,2 (C3''''); 71,6 (C-4''''); 77,9 (C-5''''); 62,9 (C-6'''') HR-ESI-MS: m/z 1169,5986 [M+HCOO]– - Hợp chất GC14 (GCL-15I1, chất mới): gycomol VN1, CTPT: C30H52O5, dạng chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,40 (1H, dd, 10,5; 5,5, H-1); 1,77 (2H, m, H-2); 3,20 (1H, dd, 11,5; 5,5, H-3); 0,65 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,55 (1H, m, H-7a); 1,30 (1H, m, H-7b); 1,65 (1H, m, H-9); 2,86 (1H, m, H-11a); 1,38 (1H, m, H-11b); 3,60 (1H, td, 10,5; 5,0, H-12); 1,74 (1H, m, H-13); 1,57 (1H, m, H-15a); 1,10 (1H, m, H-15b); 1,88 (1H, m, H-16a); 1,31 (1H, m, H-16b); 2,04 (1H, m, H-17); 1,03 (3H, s, H-18); 0,97 (3H, s, H-19); 1,18 (3H, s, H-21); 1,60 (1H, m, H-22a); 1,47 (1H, m, H-22b); 2,25 (1H, m, H23a); 2,08 (1H, m, H-23b); 5,46 (1H, td, 7,0; 1,0, H-24); 3,94 (2H, s, H-26); 1,69 (3H, s, H-27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,94 (3H, s, H-30) 13CNMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,1 (C-5); 19,0 (C-6); 35,9 (C-7); 41,6 (C-8); 52,2 (C-9); 44,6 (C-10); 34,7 (C-11); 72,4 (C-12); 48,5 (C-13); 52,3 (C-14); 32,2 (C-15); 27,2 (C-16); 55,3 (C-17); 16,5 (C-18); 12,8 (C-19); 74,3 (C-20); 26,5 (C-21); 36,0 (C-22); 22,9 (C-23); 127,5 (C-24); 135,7 (C-25); 69,0 (C-26); 13,7 (C-27); 28,5 (C-28); 15,7 (C-29); 17,1 (C-30) HR-ESI-MS: m/z 537,3800 [M+HCOO]– - Hợp chất GC15 (GCL-12A, chất mới): gycomol VN2, CTPT: C30H50O4, dạng bột vơ định hình màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,38 (1H, dd, 10,5; 5,5, H-1); 1,78 (2H, m, H-2); 3,10 (1H, dd, 11,0; 5,0, H-3); 0,64 (1H, m, H-5); 1,61 (2H, m, H-6); 1,55 (1H, m, H-7a); 1,31 (1H, m, H-7b); 1,64 (1H, m, H-9); 2,80 (1H, m, H-11a); 1,31 (1H, m, H-11b); 3,69 (1H, td, 10,5; 5,5, H12); 1,80 (1H, m, H-13); 1,68 (1H, m, H-15a); 1,12 (1H, m, H-15b); 1,85 (1H, m, H-16a); 1,42 (1H, m, H-16b); 2,62 (1H, m, H-17); 1,08 (3H, s, H-18); 0,97 (3H, s, H-19); 1,67 (3H, s, H-21); 5,21 (1H, td, 7,0; 1,0, H-22); 2,77 (2H, m, H23); 5,38 (1H, td, 7,5; 1,5, H-24); 3,92 (2H, s, H-26); 1,64 (3H, s, H-27); 0,96 17 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,93 (3H, s, H-30) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,9 (C-1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,1 (C-5); 19,1 (C6); 36,0 (C-7); 41,9 (C-8); 52,7 (C-9); 44,8 (C-10); 35,1 (C-11); 74,4 (C-12); 51,1 (C-13); 51,7 (C-14); 32,6 (C-15); 29,2 (C-16); 51,5 (C-17); 16,5 (C-18); 12,9 (C-19); 141,1 (C-20); 13,1 (C-21); 123,7 (C-22); 27,5 (C-23); 125,4 (C-24); 135,8 (C-25); 68,9 (C-26); 13,7 (C-27); 28,5 (C-28); 15,7 (C-29); 17,1 (C-30) HR-ESI-MS: m/z 519,3694 [M+COOH]– - Hợp chất GC16 (GCL-14G1, chất mới): gycomosid VN6, CTPT: C36H60O8, chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,39 (1H, m, H1); 2,15 (1H, m, H-2a); 1,80 (1H, q, 12,0, H-2b); 3,22 (1H, m, H-3); 0,68 (1H, m, H-5); 1,60 (2H, m, H-6); 1,55 (1H, m, H-7a); 1,32 (1H, m, H-7b); 1,64 (1H, m, H-9); 2,79 (1H, m, H-11a); 1,34 (1H, m, H-11b); 3,63 (1H, m, H-12); 1,85 (1H, t, 11,0, H-13); 1,68 (1H, m, H-15a); 1,42 (1H, m, H-15b); 2,01 (1H, m, H16a); 1,43 (1H, m, H-16b); 2,59 (1H, td, 11,0; 6,0, H-17); 1,08 (3H, s, H-18); 0,98 (3H, s, H-19); 4,90 (1H, s, H-21a); 4,71 (1H, s, H-21b); 2,14 (1H, m, H22a); 2,07 (1H, m, H-22b); 2,22 (2H, m, H-23a); 2,15 (1H, m, H-23b); 5,19 (1H, td, 6,5; 1,0, H-24); 1,70 (3H, s, H-26); 1,64 (3H, s, H-27); 1,04 (3H, s, H-28); 0,86 (3H, s, H-29); 0,94 (3H, s, H-30); 4.34 (1H, d, 8,0, H-1'); 3,20 (1H, t, 8,0, H-2'); 3,34 (1H, m, H-3'); 3,32 (1H, m, H-4'); 3,30 (1H, m, H-5'); 3,88 (1H, m, H-6'a); 3,67 (1H, dd, 13,0; 5,0, H-6'b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,8 (C-1); 37,6 (C-2); 87,3 (C-3); 40,4 (C-4); 55,2 (C-5); 18,8 (C-6); 36,0 (C-7); 41,8 (C-8); 52,7 (C-9); 44,5 (C-10); 35,4 (C-11); 74,3 (C-12); 52,6 (C-13); 52,0 (C14); 33,5 (C-15); 31,3 (C-16); 48,8 (C-17); 16,4 (C-18); 12,9 (C-19); 156,3 (C20); 108,5 (C-21); 34,9 (C-22); 27,8 (C-23); 125,8 (C-24); 132,2 (C-25); 25,9 (C-26); 17,8 (C-27); 28,3 (C-28); 16,3 (C-29); 17,1 (C-30); 106,4 (C-1'); 75,6 (C-2'); 78,2 (C-3'); 71,7 (C-4'); 77,8 (C-5'); 62,9 (C-6') HR-ESI-MS: m/z 665,4276 [M+HCOO]- - Hợp chất GC17 (GCL-18D1, chất mới): gycomosid VN5, CTPT: C36H60O9, chất rắn màu trắng 1H-NMR (500MHz, CD3OD): δH 3,40 (1H, dd, 10,5; 5,5, H-1); 1,78 (2H, m, H2); 3,20 (1H, dd, 11,0; 5,0, H-3); 0,66 (1H, dd, 10,0; 3,5, H-5); 1,62 (2H, m, H-6); 1,54 (1H, m, H-7a); 1,33 (1H, m, H-7b); 1,71 (1H, m, H-9); 2,82 (1H, dt, 13,0; 4,0, H-11a); 1,30 (1H, m, H-11b); 3,51 (1H, dt, 11,0; 5,0, H-12); 1,44 (1H, t, 11,0, H-13); 1,51 (1H, m, H-15a); 1,10 (1H, m, H15b); 1,95 (1H, m, H-16a); 1,82 (1H, m, H-16b); 2,78 (1H, td, 11,0; 6,0, H-17); 1,02 (3H, s, H-18); 0,96 (3H, s, H-19); 1,27 (3H, s, H-21); 2,29 (1H, d, 15,5, H22a); 1,90 (1H, m, H-22b); 4,47 (1H, d, 7,5, H-23); 5,14 (1H, dt, 8,0; 1,5, H-24); 18 1,71 (3H, s, H-26); 1,72 (3H, s, H-27); 0,96 (3H, s, H-28); 0,78 (3H, s, H-29); 0,99 (3H, s, H-30); 4,46 (1H, d, 7,5, H-1'); 3,12 (1H, t, 8,0, H-2'); 3,32 (1H, t, 8,5, H-3'); 3,30 (1H, m, H-4'); 3,25 (1H, m, H-5'); 3,82 (1H, dd, 11,5; 2,5, H-6'a); 3,65 (1H, dd, 11,5; 5,5; 5,0, H-6'b) 13C-NMR (125MHz, CD3OD): δC 79,8 (C1); 38,5 (C-2); 76,6 (C-3); 40,1 (C-4); 55,2 (C-5); 19,1 (C-6); 36,0 (C-7); 41,4 (C-8); 52,5 (C-9); 44,8 (C-10); 31,1 (C-11); 81,6 (C-12); 50,1 (C-13); 51,9 (C14); 33,4 (C-15); 25,5 (C-16); 47,9 (C-17); 16,2 (C-18); 12,9 (C-19); 83,3 (C20); 24,5 (C-21); 51,9 (C-22); 73,3 (C-23); 128,4 (C-24); 134,2 (C-25); 25,8 (C26); 18,9 (C-27); 28,5 (C-28); 15,7 (C-29); 17,0 (C-30); 99,2 (C-1'); 75,2 (C-2'); 78,4 (C-3'); 71,8 (C-4'); 77,7 (C-5'); 62,9 (C-6') HR-ESI-MS: m/z 665,4276 [M+HCOO]- * Cấu trúc 17 hợp chất phân lập được: Hợp chất R1 R2 R3 R4 Gycomol VN3 (GC3) H =O H H Gycomosid VN7 (GC4) H =O Glc H Gycomosid VN8 (GC5) Glc =O H H Gycomosid VN9 (GC6) Glc =O Glc(1→6)-[Rham(1→2)]Glc H Gycomosid VN10 (GC7) Xyl =O H OH Gycomol VN4 (GC8) H OH H H Gycomosid VN1 (GC9) H OH Glc H Gycomosid VN4 (GC10) H OH Glc-6ʹ-Ac H Gycomosid VN2 (GC11) H OH Glc(1→6)Glc(1→2)Glc H Gycomosid II (GC12) Glc OH Glc(1→6)Glc H 19 Gycomosid VN3 (GC13) Glc OH Glc(1→6)Glc(1→2)Glc H Gycomol VN1 (GC14) H OH H OH Hình 4.1 Cấu trúc hợp chất phân lập từ GCL dẹt 3.3 Kết nghiên cứu độc tính cấp số tác dụng sinh học 3.3.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp * Độc tính cấp cao chiết nước LD0 cao chiết nước Giảo cổ lam dẹt 13,0 g/kg, liều LD100 29,0 g/kg Tính tốn LD50 = 20,4 g cao/kg, tương đương 102 g dược liệu khô/kg * Độc tính cấp cao chiết cồn LD0 cao EtOH 80% từ Giảo cổ lam dẹt (GCT1) 13,6 g/kg, liều LD100 39,06 g/kg Tính tốn LD50 = 23,78 g cao/kg, tương đương 90,23 g dược liệu khô/kg 3.3.2 Kết nghiên cứu số tác dụng sinh học GCL dẹt * Đánh giá tác dụng ức chế tích tụ lipid gây acid oleic cao chiết tế bào HepG2 cao chiết tổng (GCT), cao chiết phân đoạn n-hexan (GCH), cao chiết phân đoạn ethylacetat (GCE), phân đoạn butanol (GCB), phân đoạn nước (GCW) - Từ kết đánh giá ảnh hưởng mẫu thử lên khả sống sót tế bào HepG2, nghiên cứu sử dụng mẫu nghiên cứu nồng độ 50 µg/ml 100 µg/ml - Tất mẫu cao chiết phân đoạn nồng độ 50 µg/ml khơng có tác dụng ức chế tích tụ lipid tế bào HepG2, riêng cao GCH GCB nồng độ 100 µg/ml có tác dụng ức chế tích tụ lipid tế bào HepG2 với tỷ lệ ức chế đạt 13,97 ± 2,15% 19,73 ± 3,71% so với đối chứng không ủ với mẫu nghiên cứu Sự khác biệt đạt ý nghĩa thống kê với giá trị p < 0,05% so với mẫu chứng không ủ mẫu cao chiết * Đánh giá tác dụng hoạt hoá AMPK, ACC, FAS SREBP-1c tế bào mô mỡ 3T3-L1 cao chiết phân đoạn: Tất cao chiết nồng độ thử nghiệm 20 μg/ml làm tăng hoạt hóa p-ACC p-AMPK mức độ khác so với giếng chứng (chỉ bổ sung dung môi dùng để pha mẫu thử) Tuy nhiên, cao GCB (20 μg/ml) tăng biểu p-ACC p-AMPK mạnh so với mẫu thử khác mạnh so với chứng dương AICAR (2 mM) biểu p-AMPK yếu biểu p-ACC Mức độ tác dụng hoạt hóa p-AMPK cao chiết xếp theo thứ tự sau GCB > GCH > GCT > GCW > 20 GCE hoạt hóa p-ACC sau: GCB ~ GCT > GCW > GCE > GCH Cao chiết GCB tiếp tục đánh giá mức độ ảnh hưởng FAS SREBP-1c * Đánh giá tác dụng ức chế FAS SREBP-1c GCB tế bào mô mỡ 3T3-L1: cao chiết GCB (20 μg/ml) thể khả ức chế mạnh biểu gen FAS SREBP-1c điều kiện nồng độ glucose cao 30 mM * Đánh giá tác dụng hoạt hoá AMPK, ACC 14 hợp chất phân lập tế bào mô mỡ 3T3-L1: Ở mức liều thử nghiệm 10 μM, trừ hợp chất GC11 GC14, hợp chất lại làm tăng biểu p-AMPK p-ACC mức độ khác (Hình 3.35A-C) Đối với thử nghiệm mức độ biểu pAMPK, hợp chất GC3, GC5, GC6, GC8 GC13 thể tác dụng mạnh gần tương đương với đối chứng dương AICAR nồng độ thử nghiệm mM Trong đó, hợp chất GC13 thể tác dụng mạnh nhiều so với GC15 nồng độ thử nghiệm Kết tương tự thử nghiệm mức độ biểu pACC Tuy nhiên thử nghiệm này, hợp chất GC15 thể tác dụng mạnh GC13 Như vậy, số 14 hợp chất sàng lọc, có hợp chất (GC3, GC5, GC6, GC8 GC13) nồng độ 10 μM thể tác dụng mạnh p-AMPK p-ACC Một số hợp chất này, GC13 lựa chọn để nghiên cứu tiếp tác dụng phụ thuộc thời gian nồng độ * Đánh giá tác dụng hoạt hoá AMPK, ACC ức chế FAS, SREBP-1c theo nồng độ thời gian GC13 tế bào mô mỡ 3T3-L1: Hợp chất GC13 thể khả ức chế mạnh biểu gen FAS SREBP-1c phụ thuộc theo nồng độ điều kiện nồng độ glucose cao 30 mM Tuy nhiên, tác dụng phụ thuộc thời gian GC13 (10 μM) thể thời điểm 12 - 24 h FAS - 24 h SREBP-1c * Tác dụng hạ glucose máu mẫu thử mơ hình đái tháo đường type thực nghiệm - GCT1 liều 0,96 g/kg/ngày liều 2,88 g/kg/ngày có tác dụng làm giảm rõ rệt nồng độ glucose máu so với lơ mơ hình (lô 2) thời điểm sau tuần sau tuần uống thuốc liên tục, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Tác dụng tương đương với gliclazid 80 mg/kg/ngày - GCT1 liều 0,96 g/kg/ngày liều 2,88 g/kg/ngày uống tuần liên tục có xu hướng làm giảm số cholesterol toàn phần, HDL-C LDL-C máu chuột 21 - Trọng lượng gan tương đối (tính theo % cân nặng) lô chứng sinh học, lô mô hình, lơ uống gliclazid, lơ uống GCT1 liều khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Trọng lượng tụy tương đối (tính theo % cân nặng) lô chứng sinh học, lơ mơ hình, lơ uống gliclazid, lơ uống GCT1 liều khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Hàm lượng MDA tụy lô uống gliclazid 80 mg/kg/ngày GCT1 liều giảm rõ rệt so với lơ mơ hình - Đánh giá kết đại thể gan, vi thể gan; đại thể tuỵ, vi thể tuỵ: Kết giải phẫu bệnh gan tuỵ chuột sau tuần uống thuốc: Ở lô uống gliclazid GCL dẹt, cấu trúc gan cải thiện tình trạng nhiễm mỡ so với lơ mơ hình, khoảng cửa tĩnh mạch trung tâm có tế bào viêm, số lượng tế bào gan nhiễm mỡ giảm rõ; cấu trúc tuỵ tổn thương nhẹ so với lơ mơ hình, tế bào tuỵ thối hố mức độ nhẹ, số tiểu đảo tuỵ tăng kích thước, số lượng đảo tuỷ tăng nhẹ Chương BÀN LUẬN Đã trình bày số ý kiến giá trị khoa học ý nghĩa thực tiễn kết nghiên cứu luận án KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ A KẾT LUẬN Về thực vật Đã mơ tả chi tiết đặc điểm hình thái thực vật thẩm định tên khoa học mẫu nghiên cứu Gynostemma compressum X X Chen & D R Liang (GCL dẹt) Đã xác định đặc điểm vi phẫu thân, đặc điểm bột dược liệu GCL dẹt Về thành phần hóa học - Đã định tính cho thấy có mặt nhóm chất flavonoid, saponin, caroten, sterol, đường khử, acid amin polysaccharid phần mặt đất GCL dẹt - Đã phân lập 17 hợp chất từ phần mặt đất G compressum X X Chen & D R Liang, có 03 chất biết (corchoionol C, hydroxymethylfurfural gycomosid II) 14 hợp chất đề nghị gọi tên là: Gycomol VN1 - VN4 gycomosid VN1 - VN10 Về độc tính cấp 22 - Đã xác định LD50 cao đặc nước Giảo cổ lam dẹt 20,4 g cao/kg, tương ứng với 102 g dược liệu khô/kg ttc - Đã xác định LD50 cao EtOH 80% chiết từ Giảo cổ lam dẹt 23,78 g cao/kg tương ứng với 90,23 g dược liệu khô/ kg ttc Về tác dụng sinh học - Trên thí nghiệm in vitro chứng minh: * Về ức chế tích tụ lipid tế bào HepG2 Cao chiết phân đoạn n-hexan (GCH) phân đoạn n-butanol (GCB) 100 µg/ml có tác dụng ức chế tích tụ lipid tế bào HepG2 với tỷ lệ đạt 13,97 ± 2,15% 19,73% ± 3,71% so với đối chứng không ủ với mẫu nghiên cứu * Về hoạt hoá p-AMPK, p-ACC, ức chế FAS SREBP-1c tế bào mô mỡ 3T3-L1 + Tất cao chiết: Cao chiết tổng (GCT) cao chiết phân đoạn nhexan (GCH), ethyl acetat (GCE), n-butanol (GCB) cắn nước (GCW) nồng độ 20 μg/mL làm tăng hoạt hoá p-AMPK p-ACC mức độ khác + Mức độ hoạt hoá p-AMPK cao chiết phân đoạn (20 μg/mL) xếp theo thứ tự: GCB > GCH > GCT > GCW > GCE + Mức độ hoạt hoá p-ACC cao chiết phân đoạn (20 μg/mL) xếp theo thứ tự: GCB ~ GCT > GCW > GCE > GCH + Phân đoạn cao n-butanol (20 µg/mL) hoạt hố mạnh p-AMPK pACC, đặc biệt p-AMPK có tác dụng mạnh chứng dương AICAR (2 µM) + Cao chiết phân đoạn n-butanol nồng độ 20 µg/mL ức chế mạnh biểu gen FAS SREBP-1c điều kiện nồng độ glucose cao 30 mM + Với 14 chất thử nghiệm nồng độ 10 µM có hợp chất: Gycomol VN3 (GC3), gycomol VN4 (GC8), gycomosid VN8 (GC5), gycomosid VN9 (GC6) gycomosid VN3 (GC13) thể tác dụng hoạt hoá p-AMPK p-ACC, có chất gần tương đương với chứng dương AICAR mM Riêng hợp chất gycomosid VN3 (GC13) chứng minh có tác dụng làm tăng biểu p-AMPK, p-ACC ức chế FAS, SREBP-1c phụ thuộc nồng độ thời gian - Trên thí nghiệm in vivo, đánh giá tác dụng hạ glucose máu mơ hình ĐTĐ type thực nghiệm Cao chiết EtOH 80% với liều 0,96 g/kg/ngày 2,88 g/kg/ngày có tác dụng: 23 + Giảm nồng độ glucose máu tương đương với gliclazid 80mg/kg/ngày + Giảm số MDA tuỵ chuột so với lơ mơ hình với p < 0,01 + Cải thiện cấu trúc vi thể gan, tuỵ chuột nhắt trắng mơ hình gây đái tháo đường type streptozotocin + Cao EtOH 80% Giảo cổ lam dẹt liều 0,96 g/kg/ngày thể tác dụng tương đương so với liều 2,88 g/kg/ngày KIẾN NGHỊ Tiếp tục phân lập hợp chất từ cao chiết lại (n-hexan, ethyl acetat nước) để bổ sung làm phong phú liệu hóa học loài Giảo cổ lam dẹt Đánh giá độc tính bán trường diễn nghiên cứu tạo chế phẩm theo hướng giảm béo hạ glucose máu 24 DANH MỤC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Tạp chí quốc tế Dinh Thi Thanh Thuy, Nguyen Thi Thu, Ngo Huy Trung, Tran Thi Hien, Pham Thanh Huyen, Pham Thanh Ky, Do Thi Ha (2021), "Dammarane-type triterpenoids from Gynostemma compressum X X Chen & D R Liang (Cucurbitaceae) and their AMPK activation effect in 3T3-L1 cells", Phytochemistry, 200, pp 113218 Tạp chí nước Dinh Thi Thanh Thuy, Nguyen Thi Thu, Ngo Huy Trung, Tran Thi Hien, Le Ba Vinh, Pham Thanh Huyen, Pham Ha Thanh Tung, Pham Thanh Ky, Do Thi Ha (2022), "A new compound, 1β,3β,12β,20(S)tetrahydroxydammar-24-ene, isolated from Gynostemma compressum and its AMPK and ACC Activation in 3T3-L1 adipocytes", Journal of Medicinal Materials, 26(1+2), pp 34-39 Đinh Thị Thanh Thủy, Nghiêm Đức Trọng, Phạm Thanh Huyền, Phạm Thanh Kỳ (2021), "Nghiên cứu đặc điểm thực vật vi học Giảo cổ lam dẹt (Gynostemma compressum X X Chen & D R Liang), họ Bí (Cucurbitaceae)", Tạp chí Y Dược học, 17(3), tr 72-77 Đinh Thị Thanh Thuỷ, Phạm Thị Vân Anh, Phạm Thanh Huyền, Phạm Thanh Kỳ (2022)"Tác dụng hạ glucose máu Giảo cổ lam dẹt chuột nhắt đái tháo đường type 2", Tạp chí Nghiên cứu Y học Trường Đại học Y Hà Nội, tr