Nghiên cứu tạo dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ streptomyces có hoạt tính kháng vi khuẩn erwinia carotovora và nấm pythiaceae gây bệnh thối nhũn và thối rễ trên rau ăn lá họ thập tự

SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU TẠO DỊCH CHIẾT HOẠT CHẤT THỨ CẤP TỪ Streptomyces CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG VI KHUẨN Erwinia carotovora VÀ NẤM Pythiaceae GÂY BỆNH THỐI NHŨN VÀ THỐI RỄ TRÊN RAU ĂN LÁ HỌ THẬP TỰ MÃ SỐ: VS01/19-20 Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Cơng nghệ Sinh học Chủ nhiệm nhiệm vụ: ThS Nguyễn Thị Ánh Nguyệt Thành phố Hồ Chí Minh - năm 2021 SỞ NƠNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN TRUNG TÂM CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU TẠO DỊCH CHIẾT HOẠT CHẤT THỨ CẤP TỪ Streptomyces CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG VI KHUẨN Erwinia carotovora VÀ NẤM Pythiaceae GÂY BỆNH THỐI NHŨN VÀ THỐI RỄ TRÊN RAU ĂN LÁ HỌ THẬP TỰ MÃ SỐ: VS01/19-20 (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 23/06/2021) Chủ nhiệm nhiệm vụ: Nguyễn Thị Ánh Nguyệt Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Thành phố Hồ Chí Minh - năm 2021 SỞ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN TRUNG TÂM CƠNG NGHỆ SINH HỌC CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Thành phố Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2021 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu tạo dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ Streptomyces có hoạt tính kháng vi khuẩn Erwinia carotovora nấm Pythiaceae gây bệnh thối nhũn thối rễ rau ăn họ thập tự (Mã số: VS01/19-20) Thuộc: Chương trình mục tiêu, phát triển Rau an toàn địa bàn TP HCM Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Nguyễn Thị Ánh Nguyệt Học hàm, học vị: Thạc sĩ Vi sinh Vật học Chức danh khoa học:…………………………………………………………… Chức vụ: Nhân viên P CNVS Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: .Mobile: 0383 203 381 Fax: E-mail: anhnguyet07s2@gmail.com Tên tổ chức công tác: Trung tâm Công nghệ Sinh học TP HCM Địa tổ chức: 2374 quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, Quận 12, TP HCM Địa nhà riêng: Chung cư Thới An, Lê Thị Riêng, quận 12, TP HCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Cơng nghệ Sinh học TP.HCM Điện thoại: (84-28) 37 153 792 Fax: (84-28) 38 91 69 97 E-mail: ttcnsh.snn@tphcm.gov.vn Website: https://www.hcmbiotech.com.vn Địa chỉ: 2374 quốc lộ 1, khu phố 2, phường Trung Mỹ Tây, Quận 12, TP HCM Họ tên thủ trưởng tổ chức: TS Nguyễn Đăng Quân Số tài khoản: 3713.0.1007645 Kho bạc: Tại kho bạc Nhà nước TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Sở Nông nghiệp Phát triển nơng thơn II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ 04/2019 đến 12/2020 - Thực tế thực hiện: từ 04/2019 đến 06/2021 Được gia hạn: tháng Lần từ tháng 01 năm 2021 đến tháng 06 năm 2021 Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 600 tr.đ, đó: - Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 600 tr.đ - Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, (VNĐ) năm) 12/2019 300.000.000 6/2021 300.000.000 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, (VNĐ) năm) 6/2020 293.417.500 6/2021 291.254.280 Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: VNĐ Số TT Nội Theo kế hoạch dung Nguồn khoản Tổng NSKH khác chi Trả công 184.947.840 184.947.840 lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, 232.001.160 232.001.160 vật liệu, Thực tế đạt Tổng NSKH 184.947.840 184.947.840 223.702.140 223.702.140 Nguồn khác lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác 183.051.000 183.051.000 Tổng 600.000.000 600.000.000 cộng 176.021.800 176.021.800 584.671.780 584.671.780 Các văn hành q trình thực nhiệm vụ: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT Số, thời gian ban hành văn Số 352/QĐ-SNN ngày 29 tháng 10 năm 2019 Số 07/2019/HĐSNN ngày 31 tháng 10 năm 2019 Số 39/HĐGVCNSH ngày 15 tháng năm 2019 Số 72/QĐ-SNN ngày 26 tháng năm 2019 Số 278/QĐ-SNN ngày 22 tháng năm 2020 Số 245/QĐ-SNN ngày 16 tháng năm 2020 Số 383/QĐ-SNN ngày 12 tháng 10 năm 2020 Số 193/QĐ-SNN ngày 21 tháng năm 2021 Tên văn Quyết định việc phê duyệt danh mục giao thực nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở năm 2019 Hợp đồng thực thực nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở Hợp đồng giao việc thực nhiệm vụ KH-CN cấp sở Quyết định việc thành lập Hội đồng Tư vấn khoa học công nghệ năm 2019 Quyết định việc thay đổi chủ nhiệm nhiệm vụ khoa học công nghệ Quyết định việc thành lập Hội đồng Tư vấn giám định nhiệm vụ khoa học công nghệ Quyết định việc gia hạn thời gian thực nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở Quyết định việc thành lập Hội đồng Tư vấn nghiệm thu nhiệm vụ khoa học công nghệ cấp sở Ghi Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Số TT Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Số TT Tên cá nhân tham gia thực Nội dung tham gia Nội dung 1: Thu thập mẫu, phân lập nấm vi khuẩn gây bệnh thối rễ thối nhũn rau họ thập tự 1 Nguyễn Nguyễn Thị Ánh Thị Ánh Nguyệt Nguyệt Nội dung 2: Thu thập mẫu phân lập Streptomyces spp Nội dung 3: Sàng lọc định danh chủng Streptomyces Sản phẩm chủ yếu đạt - Thu 32 mẫu rau có triệu chứng bệnh thối rễ, thối nhũn - Phân lập chủng nấm Pythiaceae chủng vi khuẩn nghi ngờ thuộc chi Erwinia - Đã định danh chủng vi khuẩn Erwinia carotovora chủng nấm Pythium vexans Thu thập 81 mấu đất phân lập 112 chủng Streptomyces spp Chọn chủng LD26 LD41 có dịch ni cấy loại bỏ tế bào đối kháng tốt với tác nhân gây bệnh Ghi sp có khả đối kháng mạnh với vi khuẩn nấm gây bệnh thối nhũn, thối rễ rau họ thập tự phân lập Nội dung 4: Chọn lọc môi trường, thời gian pH môi trường để thu dịch chiết có hoạt tính kháng bệnh từ q trình ni cấy Streptomyces sp Nội dung 5: Chiết xuất dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ q trình ni cấy Streptomyces sp Nội dung 6: Kiểm tra hiệu lực dịch chiết phịng thí nghiệm Nội dung 1: Thu thập mẫu, Lê Thị phân lập nấm Lê Thị Mai Mai vi khuẩn gây Châm Châm bệnh thối rễ thối nhũn rau họ thập tự định danh đến loài chủng - Chọn điều kiện nuôi cấy phù hợp cho chủng Streptomyces filamentosus LD26: môi trường MT1, pH7, sau ngày - Chọn điều kiện nuôi cấy phù hợp cho chủng Streptomyces nashvillensis LD41: môi trường Gause I, pH7, sau ngày - Chọn ethyl acetate dung môi chiết phù hợp - Xây dựng quy trình tạo dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ q trình ni cấy Streptomyces sp Kết thử nghiệm cho thấy dịch nuôi cấy loại bỏ tế bào dịch chiết thô từ hai chủng LD41 LD26 có vai trị tăng tỷ lệ nảy mầm hạt nhiễm bệnh vi khuẩn nấm khảo sát - Thu 32 mẫu rau có triệu chứng bệnh thối rễ, thối nhũn - Phân lập chủng nấm Pythiaceae chủng vi khuẩn nghi ngờ thuộc chi Erwinia Nội dung 2: Thu thập mẫu Phân lập 40 chủng phân lập Streptomyces spp Streptomyces spp - Thu 32 mẫu rau có triệu chứng bệnh thối rễ, Nội dung 1: thối nhũn Thu thập mẫu, - Phân lập chủng phân lập nấm nấm Pythiaceae và vi khuẩn gây chủng vi khuẩn nghi ngờ bệnh thối rễ thuộc chi Erwinia thối nhũn - Đã định danh rau họ thập tự chủng vi khuẩn Erwinia carotovora chủng nấm Pythium vexans Nội dung 2: Thu thập mẫu Thu 81 mẫu đất và phân lập phân lập 112 chủng Streptomyces Streptomyces spp spp Nội dung 3: Sàng lọc định danh Đinh Đinh Anh chủng Anh Hòa Hòa Chọn chủng LD26 Streptomyces LD41 có dịch ni cấy sp có khả loại bỏ tế bào đối kháng đối kháng tốt với tác nhân gây bệnh mạnh với nấm định danh đến loài vi khuẩn gây chủng bệnh thối nhũn, thối rễ rau họ thập tự phân lập Nội dung 4: - Chọn điều kiện Chọn lọc môi nuôi cấy phù hợp cho trường, thời chủng Streptomyces gian pH môi filamentosus LD26: môi trường để thu trường MT1, pH7, sau dịch chiết ngày có hoạt tính - Chọn điều kiện kháng bệnh từ nuôi cấy phù hợp cho q trình ni chủng Streptomyces cấy nashvillensis LD41: mơi Streptomyces sp Nội dung 5: Chiết xuất dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ q trình ni cấy Streptomyces sp Nội dung 6: Kiểm tra hiệu lực dịch chiết phịng thí nghiệm Trần Thùy Trang Nội dung 3: Sàng lọc định danh chủng Streptomyces sp có khả đối kháng mạnh với vi khuẩn nấm gây bệnh thối nhũn, thối rễ rau họ thập tự Trần Thùy phân lập Trang Nội dung 4: Chọn lọc môi trường, thời gian pH mơi trường để thu dịch chiết có hoạt tính kháng bệnh từ q trình ni cấy Streptomyces sp trường Gause I, pH7, sau ngày - Chọn ethyl acetate dung môi chiết phù hợp - Xây dựng quy trình tạo dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ q trình ni cấy Streptomyces sp Kết thử nghiệm cho thấy dịch nuôi cấy loại bỏ tế bào dịch chiết thô từ hai chủng LD41 LD26 có vai trị tăng tỷ lệ nảy mầm hạt nhiễm bệnh vi khuẩn nấm khảo sát Chọn chủng LD26 LD41 có dịch nuôi cấy loại bỏ tế bào đối kháng tốt với tác nhân gây bệnh định danh đến loài chủng - Chọn điều kiện nuôi cấy phù hợp cho chủng Streptomyces filamentosus LD26: môi trường MT1, pH7, sau ngày - Chọn điều kiện nuôi cấy phù hợp cho chủng Streptomyces nashvillensis LD41: môi trường Gause I, pH7, sau ngày Nguyễn Thị Thùy Dương Nội dung 5: Chiết xuất dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ q trình ni cấy Streptomyces sp - Chọn ethyl acetate dung môi chiết phù hợp - Xây dựng quy trình tạo dịch chiết hoạt chất thứ cấp từ trình ni cấy Streptomyces sp Nội dung 6: Kiểm tra hiệu lực dịch chiết phịng thí nghiệm Kết thử nghiệm cho thấy dịch nuôi cấy loại bỏ tế bào dịch chiết thô từ hai chủng LD41 LD26 có vai trị tăng tỷ lệ nảy mầm hạt nhiễm bệnh vi khuẩn nấm khảo sát Nội dung 1: Thu thập mẫu, phân lập nấm vi khuẩn gây bệnh thối rễ thối nhũn rau họ thập tự Nội dung 2: Thu thập mẫu phân lập Streptomyces spp Nội dung 3: Nguyễn Sàng lọc Thị Thùy định danh Dương chủng Streptomyces sp có khả đối kháng mạnh với nấm vi khuẩn gây bệnh thối nhũn, thối rễ rau họ thập tự phân lập Nội dung 4: Chọn lọc môi trường, thời gian pH mơi - Thu 22 mẫu rau có triệu chứng bệnh thối rễ, thối nhũn Phân lập 45 chủng Streptomyces spp Chọn chủng LD26 có dịch ni cấy loại bỏ tế bào đối kháng tốt với tác nhân gây bệnh - Chọn thời gian nuôi cấy phù hợp cho chủng Streptomyces filamentosus LD26 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201 202 203 204