Nghiên cứu tác động dược lý hướng bảo vệ gan, thận của bí kỳ nam ( hydnophytum formicarum jack , rubiaceae )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack., Rubiaceae) LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH, Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH MAI NGUYỄN NGỌC TRÁC NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG DƯỢC LÝ HƯỚNG BẢO VỆ GAN, THẬN CỦA BÍ KỲ NAM (Hydnophytum formicarum Jack., Rubiaceae) NGÀNH: DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 62720405 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS ĐỖ THỊ HỒNG TƯƠI PGS TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG TP HỒ CHÍ MINH, Năm 2020 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ v MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN .1 1.1 BÍ KỲ NAM 1.2 STRESS OXY HÓA 10 1.3 GAN VÀ TRESS OXY HÓA .20 1.4 THẬN VÀ STRESS OXY HÓA 23 1.5 CÁC MÔ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG BẢO VỆ GAN 26 1.6 CÁC MƠ HÌNH NGHIÊN CỨU TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN 35 1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ 41 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .45 2.1 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 45 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 46 2.3 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 46 2.4 DUNG MƠI , HĨA CHẤT VÀ TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ .47 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .50 2.6 PHÂN TÍCH KẾT QUẢ VÀ XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ .68 CHƯƠNG KẾT QUẢ 69 3.1 ĐỊNH DANH LỒI BÍ KỲ NAM 69 3.2 CHIẾT XUẤT VÀ SÀNG LỌC CÁC CAO TỒN PHẦN BÍ KỲ NAM 75 3.3 CHIẾT XUẤT VÀ KHẢO SÁT CHẤT LƯỢNG CAO CỒN 50% 79 3.4 CÁC CAO PHÂN ĐOẠN VÀ HOẠT TÍNH CAO PHÂN ĐOẠN 81 3.5 ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% 86 3.6 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ GAN CỦA BÍ KỲ NAM 86 3.7 TÁC ĐỘNG BẢO VỆ THẬN CỦA BÍ KỲ NAM 99 3.8 ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN ĐƯỜNG UỐNG CỦA CAO CỒN 50% BÍ KỲ NAM 113 CHƯƠNG BÀN LUẬN 119 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .148 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố nơi Tác giả luận án Mai Nguyễn Ngọc Trác ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ ANH – VIỆT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ADH Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase rượu AND Deoxyribonucleic acid Acid deoxyribonucleic AIN Acute intersititial nephritis Viêm ống thận mô kẽ cấp AKI Acute kidney injury Tổn thương thận cấp ALD Alcoholic liver disease Bệnh gan rượu ALDH Aldehyde dehydrogenase Aldehyd dehydrogenase ALT Alanine aminotransferase Alanin aminotransferase AO Acridine orange Acridin cam ARE Antioxidant response element Yếu tố đáp ứng chống oxy hóa ARF Acute renal failure Suy thận cấp ARN Ribonucleic acid Acid ribonucleic AST Aspartate aminotransferase Aspartat aminotransferase ATN Acute tubular necrosis Hoại tử ống thận cấp BSA Bovine Serum Abumin Albumin huyết bò CAT Catalase Catalase CCl4 Carbon tetrachloride Cacbon tetraclorua CKD Chronic kidney disease Bệnh thận mãn CYP Cytochrome Cytochrom DAMPS Damage-associated molecular patterns Thành phần phân tử kèm tổn thương DCM Dichloromethane Dichloromethan DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxit DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl DTNB 5,5’-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid) Acid 5,5’-dithio-bis-(2nitrobenzoic) EDTA Ethylene Diamine Tetracetic Acid Acid Ethylen Diamin Tetracetic ii EGCG Epigallocatechin gallate Epigallocatechin gallat EMEM Eagle's Minimum Essential Medium Môi trường thiết yếu tối thiểu Eagle EPO Erythropoietin Erythropoietin ERA-EDTA European Renal Association - Tổ chức cấy ghép, lọc thận – Hiệp European Dialysis and Transplant hội thận Châu Âu Association ERK Extracellular signal-regulated kinase Kinase điều hòa tín hiệu ngoại bào EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat GPx Glutathione peroxidase Glutathion peroxidase GSH Glutathione Glutathion GGT Gamma-glutamyl transpeptidase Gamma-glutamyl transpeptidase Hb Hemoglobin Hemoglobin HCC Hepatocellular carcinoma Ung thư biểu mô tế bào gan HE Hematoxylin Eosin Hematoxylin Eosin HO-1 Heme oxygenase-1 Heme oxygenase-1 HSOS Hepatic sinusoidal obstruction Hội chứng tắc nghẽn xoang gan syndrome HTCO Hoạt tính chống oxy hóa IL Interleukin Interleukin iNOS Inducible nitric oxide synthase Cảm ứng tổng hợp nitric oxid I.P Intraperitoneal injection Tiêm phúc mô ISN International Society of Nephrology Hiệp hội thận quốc tế Keap1 Kelch-like ECH-associated protein Protein liên kết với ECH giống Kelch LDH Lactate dehydrogenase Lactat dehydrogenase MAPK Mitogen-activated protein kinase Protein kinase hoạt hóa phân bào MDA Malondialdehyde Malondialdehyd ii MTT 3-(4,5-Dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- 3-(4,5-Dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5- Diphenyltetrazolium bromide Diphenyltetrazolium bromid) NAC N-acetyl cysteine N-acetyl cystein NAFLD Non-alcoholic fatty liver disease Bệnh gan nhiễm mỡ không rượu NADH Nicotinamide adenine dinucleotide Nicotinamid adenin dinucleotid NALFD Nonalcoholic fatty liver disease Bệnh gan nhiễm mỡ không rượu NAPQ1 N-acetyl-p-benzoquinone imine N-acetyl-p-benzoquinon imin NF-κB Nuclear Factor-kappa B Yếu tố nhân kappa B NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOQ1 NAD(P)H-quinone oxidoreductase NAD(P)H-quinon oxidoreductase Nrf2 Nuclear erythroid 2-related factor Yếu tố liên quan nhân erythroid NSAID Non-steroidal anti-inflammatory drug Thuốc kháng viêm không steroid OD Optical Density Mật độ quang P.O Per os Đường uống PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp PEG Polyethylene glycol Polyethylen glycol PVDF Polyvinylidene difluoride Polyvinyliden difluorid rbcL Ribulose-1,5-biphosphate carboxylate Gen ribulose-1,5- biphosphat carboxylat RNS Reactive nitrogen species Các gốc chứa ni tơ hoạt động ROS Reactive oxygen species Các gốc chứa oxy hoạt động S.C Subcutaneous Dưới da SOD Superoxide Superoxid TAA Thioacetamide Thioacetamid TGF Transforming growth factor Yếu tố tăng trưởng TNB 5'- Thio - 2-nitrobenzoic acid Acid 5'- Thio - 2-nitrobenzoic TNF-α Tumor necrosis factor Yếu tố hoại tử khối u WHO World Health Organisation Tổ chức Y tế Thế giới iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các nguyên tố vơ có Bí kỳ nam Bảng 1.2 Hoạt tính kháng khuẩn Bí kỳ nam Bảng 1.3 Một số mơ hình in vitro gây tổn thương gan CCl4 tế bào HepG2 .28 Bảng 1.4 So sánh mơ hình đánh giá tác động bảo vệ gan 29 Bảng 1.5 Một số mơ hình in vivo gây tổn thương gan CCl4 .32 Bảng 1.6 Một số nghiên cứu mơ hình in vitro gây độc tế bào thận 36 Bảng 1.7 Một số nghiên cứu mơ hình in vivo gây độc thận 40 Bảng 2.1 Danh mục dung môi, hóa chất sử dụng nghiên cứu 47 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng nghiên cứu 49 Bảng 3.1 Trình tự cặp mồi rbcL sử dụng phản ứng PCR 72 Bảng 3.2 Kết phân tích sơ thành phần hóa học dược liệu Bí kỳ nam 73 Bảng 3.3 Độ ẩm độ tro dược liệu Bí kỳ nam 74 Bảng 3.4 Hàm lượng polyphenol toàn phần dược liệu Bí kỳ nam .75 Bảng 3.5 Phương trình tuyến tính, IC50 cao Bí kỳ nam (DPPH) 76 Bảng 3.6 Phương trình tuyến tính, IC50 cao Bí kỳ nam (MDA) 76 Bảng 3.7 Hoạt tính cao Bí kỳ nam tăng trưởng dòng tế bào .77 Bảng 3.8 Giá trị hồi quy đa thức IC50 cao toàn phần Bí kỳ nam 79 Bảng 3.9 Độ ẩm độ tro cao cồn 50% từ thân củ Bí kỳ nam 80 Bảng 3.10 Giá trị IC50 cao phân đoạn Bí kỳ nam (DPPH) 82 Bảng 3.11 Giá trị IC50 cao phân đoạn Bí kỳ nam (MDA) 82 Bảng 3.12 Tác động Bí kỳ nam lên tăng trưởng tế bào gan HepG2 .87 Bảng 3.13 Tác động Bí kỳ nam phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào gan HepG2 CCl4 gây .87 Bảng 3.14 Tác động Bí kỳ nam phịng ngừa tình trạng hoại tử tế bào gan HepG2 CCl4 gây .91 Bảng 3.15 Trọng lượng chuột khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam 92 Bảng 3.16 Hoạt tính TNF-α khảo sát tác động bảo vệ gan Bí kỳ nam .95 Bảng 3.17 Kết vi thể gan chuột thử nghiệm bảo vệ gan Bí kỳ nam 98 iii Bảng 3.18 Tác động cisplatin nồng độ thời gian xử lý khác lên tế bào HEK 293 nuôi cấy mật độ khác .100 Bảng 3.19 Tác động cisplatin 25 µM sau 24 xử lý lên tế bào HEK 293 102 Bảng 3.20 Tác động Bí kỳ nam lên tăng trưởng tế bào HEK 293 103 Bảng 3.21 Tác động phòng ngừa ức chế tăng trưởng tế bào thận HEK 293 cisplatin gây 104 Bảng 3.22 Tác động Bí kỳ nam phòng ngừa hoại tử tế bào thận HEK 293 cisplatin gây 106 Bảng 3.23 Trọng lượng thể chuột tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 108 Bảng 3.24 Nồng độ ure creatinin máu khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 109 Bảng 3.25 Hàm lượng GSH thận khảo sát tác động bảo vệ thận in vivo 112 Bảng 3.26 Vi thể thận chuột khảo sát tác động bảo vệ thận Bí kỳ nam 113 Bảng 3.27 Trọng lượng chuột thử nghiệm độc tính bán trường diễn 114 Bảng 3.28 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số hồng cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 115 Bảng 3.29 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số bạch cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 116 Bảng 3.30 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số tiểu cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn 116 Bảng 3.31 Tác động cao cồn 50% Bí kỳ nam lên số chức gan thận thử nghiệm độc tính bán trường diễn 117 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL67 Sau 60 ngày Sinh lý Lô EAHF 100 mg/kg TB SEM EAHF 200 mg/kg TB SEM TB SEM Số lượng bạch cầu Tỷ lệ % bạch cầu trung tính Tỷ lệ % bạch cầu Lympho Tỷ lệ % bạch cầu Mono 10,3 9,8 10,8 14,1 9,5 10,8 10,88 0,68 11,3 7,7 14,6 7,8 9,9 8,5 10,4 9,3 9,94 0,80 17,0 6,7 8,6 9,3 17,3 8,1 13,5 9,7 11,28 1,46 7,6 34,2 12,0 8,4 9,6 12,0 13,97 4,11 32,7 5,4 35,3 8,6 36,3 16,9 5,0 9,5 18,71 4,88 6,8 17,9 5,8 1,9 23,2 14,0 19,9 15,0 13,06 2,65 67,3 62,2 82,3 70,5 85,4 82,3 75,00 3,91 54,0 78,9 61,0 73,3 60,9 52,9 70,4 68,7 65,01 3,29 90,6 68,7 76,6 87,2 73,4 80,3 77,0 78,7 79,06 2,50 25,1 3,6 5,6 21,1 5,1 5,6 11,02 3,87 13,3 15,7 3,8 18,1 2,5 30,2 24,6 21,8 16,25 3,41 2,6 13,4 17,6 10,9 3,4 5,7 3,1 6,3 7,88 1,95 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Sớ lượng Sớ lượng Sớ lượng bạch cầu bạch cầu bạch cầu trung tính Lympho Mono 0,80 3,35 1,30 1,20 0,91 1,30 1,48 0,38 3,70 0,40 2,15 0,70 2,53 1,40 0,50 0,90 1,54 0,41 0,95 1,20 0,50 0,20 4,02 1,13 2,69 1,46 1,52 0,44 6,9 6,1 8,9 9,9 8,1 8,9 8,13 0,58 6,1 6,1 8,9 5,7 9,2 9,5 7,3 6,4 7,40 0,55 15,4 4,6 6,6 8,1 12,7 6,5 10,4 7,6 8,99 1,27 2,60 0,35 0,61 3,00 0,48 0,61 1,28 0,49 1,50 1,20 0,55 1,40 1,17 2,06 2,16 2,00 1,51 0,19 0,44 0,90 1,50 1,00 0,58 0,46 0,42 0,61 0,74 0,13 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL68 PHỤ LỤC 61 Các số tiểu cầu thử nghiệm độc tính bán trường diễn sau 30 ngày Lô Sinh lý Trung bình SEM EAHF 100 mg/kg Trung bình SEM EAHF 200 mg/kg Trung bình SEM Sớ lượng tiểu cầu (PLT) 987,0 437,0 772,0 1107,0 1147,0 1004,0 1199,0 1073,0 965,75 88,41 932,0 752,0 745,0 1256,0 898,0 1012,0 912,0 908,0 926,88 56,80 1115,0 1148,0 634,0 615,0 833,0 1088,0 731,0 940,0 888,00 76,60 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Thể tích trung bình TC (MPV) 2,6 5,0 2,3 2,7 2,9 2,9 3,0 1,8 2,90 0,33 2,3 2,4 3,2 2,8 2,8 2,1 2,0 3,4 2,63 0,18 1,7 2,2 1,8 5,0 2,2 2,0 1,9 2,4 2,40 0,38 Khối tiểu cầu (PCT) Độ phân bố TC (PDW) 0,25 0,21 0,17 0,29 0,33 0,29 0,35 0,19 0,26 0,02 0,21 0,18 0,23 0,35 0,25 0,21 0,18 0,30 0,24 0,02 0,18 0,25 0,11 0,30 0,18 0,21 0,13 0,22 0,20 0,02 18,1 17,7 17,1 17,5 17,5 17,5 15,9 17,7 17,38 0,23 17,1 16,5 16,9 17,4 16,5 17,1 17,1 16,9 16,94 0,11 16,6 15,5 17,7 18,5 17,2 17,1 17,8 16,5 17,11 0,33 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL69 Sau 60 ngày Lơ Sinh lý Trung bình SEM EAHF 100 mg/kg Trung bình SEM EAHF 200 mg/kg Trung bình SEM Sớ lượng tiểu cầu (PLT) 734,0 646,0 554,0 577,0 564,0 554,0 604,83 29,43 645,0 781,0 625,0 673,0 664,0 456,0 425,0 624,0 611,63 41,34 599,0 589,0 573,0 701,0 708,0 599,0 735,0 781,0 660,63 28,13 Thể tích trung bình Khới tiểu cầu TC (MPV) (PCT) 2,2 0,16 2,4 0,15 2,8 0,15 1,8 0,10 2,0 0,11 2,8 0,15 2,33 0,14 0,17 0,01 1,8 0,11 2,3 0,17 1,8 0,11 2,3 0,15 3,0 0,17 1,9 0,08 2,0 0,08 2,0 0,12 2,14 0,12 0,14 0,01 2,4 0,14 2,3 0,13 3,3 0,18 2,3 0,22 3,0 0,21 2,1 0,12 2,4 0,17 2,2 0,17 2,50 0,17 0,15 0,01 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Độ phân bố TC (PDW) 17,1 16,5 17,6 17,8 17,8 17,6 17,40 0,21 17,8 17,1 16,1 17,1 17,5 17,8 17,2 17,8 17,30 0,20 18,0 17,1 18,5 17,1 17,5 18,7 18,2 17,1 17,78 0,23 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL70 PHỤ LỤC 62 Nồng độ AST ALT thử nghiệm độc tính bán trường diễn Lơ Sinh lý Trung bình SEM EAHF 100 mg/kg Trung bình SEM EAHF 200 mg/kg Trung bình SEM Sau 30 ngày AST ALT 84,2 31,6 77,6 34,0 87,6 43,5 75,0 31,8 92,5 53,0 155,3 95,2 112,4 38,7 152,4 42,4 104,63 46,28 11,47 7,43 79,3 42,1 69,5 40,1 86,3 63,0 106,2 63,5 101,2 49,1 89,8 29,5 81,0 49,9 77,0 31,5 86,29 46,09 4,38 4,54 74,9 40,3 94,5 36,1 88,4 37,5 151,2 44,1 90,5 47,8 90,2 35,6 150,9 99,3 133,6 55,9 109,28 49,58 10,88 7,51 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Sau 60 ngày AST ALT 44,1 35,8 55,3 49,6 96,7 78,4 53,6 46,5 73,2 65,7 96,7 78,4 69,93 9,29 44,7 81,0 66,3 53,1 76,5 73,7 66,1 61,8 65,40 4,29 393,6 121,7 479,2 94,8 129,0 177,9 61,1 356,0 226,66 56,08 59,07 7,26 39,8 56,1 54,7 42,7 63,0 63,9 51,3 58,5 53,75 3,11 367,3 364,3 476,1 35,2 44,8 60,1 31,1 468,6 230,94 72,59 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL71 PHỤ LỤC 63 Nồng độ urê creatinin thử nghiệm độc tính bán trường diễn Sau 30 ngày Lô Sinh lý Trung bình SEM EAHF 100 mg/kg Trung bình SEM EAHF 200 mg/kg Trung bình SEM Sau 60 ngày Urée Créatinine Urée Créatinine 4,5 6,6 6,3 5,2 4,5 3,1 5,3 3,2 4,84 0,45 4,1 6,5 6,0 5,0 6,2 3,8 4,0 3,9 4,94 0,40 4,9 6,2 3,7 5,2 4,0 3,5 4,9 5,2 4,70 0,32 33,8 32,5 35,9 34,9 31,5 34,0 41,1 36,6 35,04 1,05 36,0 42,8 42,1 36,6 41,6 32,9 35,1 30,0 37,14 1,64 36,0 39,9 33,0 33,8 37,2 38,3 35,0 38,0 36,40 0,84 7,0 4,7 6,8 4,9 4,4 6,8 41,2 44,8 42,8 38,4 41,2 42,8 5,77 0,50 4,3 6,7 6,1 6,3 3,7 5,8 4,0 4,1 5,13 0,43 6,5 5,4 3,7 5,6 8,2 7,3 9,5 3,4 6,20 0,75 41,87 0,88 43,9 40,3 43,6 46,7 42,4 45,2 47,2 38,3 43,45 1,08 44,8 42,4 38,2 38,4 37,2 36,5 42,1 39,6 39,90 1,03 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL72 PHỤ LỤC 64 Hình ảnh vi thể tế bào gan chuột lô sinh lý thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: mơ gan bình thường Chuột 2: mơ gan bình thường Chuột 3: mơ gan bình thường Chuột 4: mơ gan bình thường Chuột 5: mơ gan bình thường Chuột 6: mơ gan bình thường Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL73 PHỤ LỤC 65 Hình ảnh vi thể tế bào gan chuột lô EAHF 100 mg/kg thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: mô gan bình thường Chuột 2: mơ gan bình thường Chuột 3: mơ gan bình thường Chuột 4: mơ gan bình thường Chuột 5: mơ gan bình thường Chuột 6: hoại tử quanh khoảng cửa, hoại tử quanh tĩnh mạch trung tâm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL74 PHỤ LỤC 66 Hình ảnh vi thể tế bào gan chuột lô EAHF 200 mg/kg thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: mô gan bình thường Chuột 2: mơ gan bình thường Chuột 3: mơ gan bình thường Chuột 4: mơ gan bình thường Chuột 5: mơ gan bình thường Chuột 6: mơ gan bình thường Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL75 PHỤ LỤC 67 Hình ảnh vi thể tế bào thận chuột lô sinh lý thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: bình thường Chuột 2: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 3: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 4: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 5: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 6: viêm thận, bể thận mạn tính Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL76 PHỤ LỤC 68 Hình ảnh vi thể tế bào thận chuột lô EAHF 100 mg/kg thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 2: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 3: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 4: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 5: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 6: viêm thận, bể thận mạn tính Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL77 PHỤ LỤC 69 Hình ảnh vi thể tế bào thận chuột lô EAHF 200 mg/kg thử nghiệm độc tính bán trường diễn Chuột 1: bình thường Chuột 2: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 3: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 4: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 5: viêm thận, bể thận mạn tính Chuột 6: viêm thận, bể thận mạn tính Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL78 PHỤ LỤC 70 Phiếu kết định danh dược liệu Bí kỳ nam PHIẾU KẾT QUẢ ĐỊNH DANH DƯỢC LIỆU THÂN CỦ BÍ KỲ NAM Thông tin chung thử nghiệm: Mẫu thử nghiệm: Dược liệu Bí kỳ nam Tình trạng mẫu: Dược liệu Bí kỳ nam tươi đầy đủ thân, rễ, lá, thân củ Người giao mẫu: ThS Mai Nguyễn Ngọc Trác - Trưởng khoa Dược, Bệnh viện Bình An Địa chỉ: 80 - 82 Nguyễn Trung Trực, TP Rạch Gía, Tỉnh Kiên Giang (Điện thoại: 0909110682) Người thử mẫu: PGS.TS Trương Thị Đẹp Nội dung: Vật liệu nghiên cứu mẫu tươi có đầy đủ phận (thân, rễ, lá, thân củ) Bí kỳ nam thu hái rừng Phú Quốc, tỉnh Kiên Giang Khảo sát đặc điểm hình thái: Các đặc điểm hình thái quan sát mắt thường, kính lúp, kính soi hay kính hiển vi quang học; mô tả chụp ảnh đặc điểm khảo sát Tên khoa học loài xác định dựa vào đặc điểm hình thái phân tích so với tài liệu tác giả Võ Văn Chi (1991), Huxley (1978) Khảo sát đặc điểm giải phẫu: Cắt ngang thân, rễ (đường kính – mm), thành lát mỏng dao lam Thân cắt phần lóng, phiến cắt 1/3 phía phiến Nhuộm vi phẫu son phèn lục iod Quan sát vi phẫu nước kính hiển vi quang học (Olympus, model QH20) Chụp ảnh mô tả cấu trúc Kết quả: Đặc điểm hình thái Thân phình to thành củ Mặt thân củ có từ hai đến bốn thân dài khoảng 60 cm, màu nâu (Hình 1a) Mặt ngồi củ sần sùi, màu nâu xám, khơng có gai Mặt thân củ có nhiều rễ nhỏ, bám nhiều đất, bề mặt có nhiều lỗ để kiến chui vào làm tổ (Hình 1b) Thân củ Bí kỳ nam có kích thước 15 - 20 cm, bổ dọc có nhiều lỗ hổng chằng chịt mang đầy kiến, thịt nạc màu trắng, chứa nhiều nước (Hình 1c) Trên thân có mọc đối phiến dày, hình bầu dục, dài - 15 cm rộng - cm, gốc thuôn, đầu tù, hai mặt có màu lục nhạt, mặt nhẵn bóng (Hình 1d,đ) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL79 a d Đặc điểm giải phẫu b c đ Đặc điểm vi phẫu rễ: Bên vi phẫu rễ lớp bần gồm nhiều lớp tế bào xuyên tâm nhuộm màu xanh (Hình 2a), tiếp đến lớp mơ mềm vỏ xen lẫn nhiều tế bào mô cứng có khuyết lớn (Hình 2b), libe libe bị ép dẹp, lớp gỗ chiếm tâm (Hình 2c) Đặc điểm vi phẫu thân: Bên vi phẫu thân lớp bần gồm tế bào vách dày xếp thành lớp, nhuộm màu xanh (Hình 3a), mô mềm vỏ xen lẫn tế bào mơ cứng (Hình 3b) Bên có vịng tế bào mơ cứng gồm - lớp tế bào, tiếp đến libe gồm lớp tế bào màu hồng bị ép dẹp, libe libe gồm tế bào màu hồng xếp xuyên tâm (Hình 3c), bên gỗ tận bó gỗ xếp hướng tâm (Hình 3d) Đặc điểm vi phẫu lá: Mặt vi phẫu lớp biểu bì có cutin lồi, phía có hàng tế bào hạ bì có kích thước to (Hình 4a) Dưới hạ bì có lớp tế bào mơ giậu chứa diệp lục tố Gân có vịng libe - gỗ với tế bào mơ cứng bao quanh (Hình 4b) Lớp biểu bì có cutin lồi, tế bào mô cứng tập trung phần mơ mềm mặt (Hình 4c) Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL80 Hình Vi phẫu rễ Bí kỳ nam Hình Vi phẫu thân Bí kỳ nam Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL81 Hình Vi phẫu Bí kỳ nam Kết luận: Các đặc điểm hình thái, cấu tạo giải phẫu thân, rễ, lá, thân củ Bí kỳ nam thu hái Phú Quốc, Kiên Giang mô tả cách chi tiết Dựa vào đặc điểm hình thái cấu tạo giải phẫu phân tích cây, so với tài liệu tác giả Võ Văn Chi (1991) [1], Huxley (1978) [2], xác định dược liệu thu hái rừng Phú Quốc, tỉnh Kiên Giang loài Bí kỳ nam (Hydnophytum formicarum Jack.) Tài liệu tham khảo: Võ Văn Chi V.V (1991), Cây thuốc An Giang, Ủy ban khoa học - Kỹ thuật An Giang, p.49-50 Huxley C.R (1978), The ant‐plants Myrmecodia and Hydnophytum (Rubiaceae), and the relationships between their morphology, ant occupants, physiology and ecology New Phytologist, 80(1): p 231-268 Tp HCM, ngày 14 tháng 12 năm 2014 Người thực PGS TS Trương Thị Đẹp Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn