Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao methanol m1 cuả cây cơm cháy sambucus javanica

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Lê Thành Đạt NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC PHÂN ĐOẠN CAO METHANOL M1 CỦA CÂY CƠM CHÁY (Sambucus javanica) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP SƯ PHẠM HỐ HỌC Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Lê Thành Đạt NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC PHÂN ĐOẠN CAO METHANOL M1 CỦA CÂY CƠM CHÁY (Sambucus javanica) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP SƯ PHẠM HỐ HỌC Chun ngành: Hố học hữu GV hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học phân đoạn cao methanol M1 Cơm cháy (Sambucus javanica)” cơng trình nghiên cứu tiến hành công khai, minh bạch Đây công trình riêng tơi tiến hành hướng dẫn TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết Các kết nghiên cứu trung thực khơng có chép từ cơng trình nghiên cứu khác Nếu phát có chép khác tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2022 Lê Thành Đạt LỜI CẢM ƠN Quá trình học tập rèn luyện trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh giúp em tích luỹ hành trang quý báu đường phát triển nghiệp Em xin gửi đến thầy cô giảng viên trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh, đặc biệt thầy giảng viên khoa Hố học lời cảm ơn sâu sắc tạo điều kiện cho chúng em học tập nghiên cứu suốt bốn năm đào tạo trường Bằng tất tình cảm chân thành, em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt đến: ❖ TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết tận tình hướng dẫn kiến thức chun mơn, động viên, hỗ trợ điều kiện thuận lợi để em hồn thành khố luận tốt nghiệp ❖ Bạn Nguyễn Ngọc Dũng – sinh viên thực khố luận tốt nghiệp phịng hợp chất thiên nhiên đồng hành, giúp đỡ lẫn để trình thực khoá luận tốt nghiệp thuận lợi ❖ Các anh chị em học viên, nghiên cứu sinh bạn sinh viên khố khích lệ, hỗ trợ em q trình thực khố luận tốt nghiệp ❖ Gia đình người thân ln chỗ dựa tinh thần vững cho em suốt thời gian học tập thực khoá luận tốt nghiệp Lời cuối em xin chúc quý thầy cô, bạn sinh viên dồi sức khỏe đạt nhiều thành công sống Em xin chân thành cảm ơn! DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Cụm từ đầy đủ Tiếng Anh Tiếng Việt d Chemical shift Độ dịch chuyển hố học µM Micromolar 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (13) Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1) brd Broad doublet Mũi đôi rộng d Doublet Mũi đôi dd Doublet of doublet Mũi đôi – đôi HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Phổ tương quan dị hạch qua nhiều liên kết HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence Phổ tương quan dị hạch qua liên kết Hz Hertz IC50 The half maximal inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối đa nửa J Coupling constant Hằng số ghép spin MHz Megahertz NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân ppm Part per million Một phần triệu s Singlet Mũi đơn t Triplet Mũi ba TLC Thin Layer Chromatography Sắc kí lớp mỏng UV Ultra Violet Bức xạ tử ngoại H-NMR DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây cơm cháy (Sambucus javanica) Hình 3.1 Cấu trúc hố học hợp chất 15 Hình 3.2 Cấu trúc hố học số tương quan HMBC hợp chất 18 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các phân đoạn sắc kí cột silica gel từ phân đoạn M1.3 13 Bảng 2.2 Các phân đoạn sắc kí cột silica gel từ phân đoạn M1.4 13 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất với 3b-O-acetylursolic acid [17] 15 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất với 3b,13b-dihydroxyurs-11-en-28-oic acid [18] 18 DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Quy trình điều chế phân đoạn cao methanol từ Cơm cháy 11 Sơ đồ 2.2: Quy trình phân lập số hợp chất từ phân đoạn cao M1 12 MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật 1.2 Các nghiên cứu dược tính .2 1.3 Các nghiên cứu thành phần hoá học .3 Chương THỰC NGHIỆM 2.1 Hoá chất, thiết bị, phương pháp 2.1.1 Hoá chất .9 2.1.2 Thiết bị 2.1.3 Phương pháp tiến hành 2.2 Nguyên liệu 10 2.2.1 Thu hái xử lí mẫu 10 2.2.2 Điều chế loại cao 10 2.3 Phân lập số hợp chất hữu từ phân đoạn cao M1 11 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 14 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất 14 3.2 Khảo sát hợp chất 16 Chương KẾT LUẬN – KIẾN NGHỊ 20 4.1 Kết luận 20 4.2 Kiến nghị 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO 22 LỜI MỞ ĐẦU Việt Nam có khí hậu thiên nhiên ưu đãi, thuận lợi cho phát triển nhiều loài nhiệt đới Từ lâu, y học cổ truyền Việt Nam phát triển nhờ việc sử dụng số thành phần cỏ nước để làm thuốc chữa bệnh Do đó, nghiên cứu thành phần hố học loài thực vật Việt Nam chủ đề nghiên cứu hấp dẫn, đóng vai trị quan trọng việc tìm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học để phục vụ nhu cầu chữa bệnh người Hiện nay, nhiều người hay sử dụng thuốc dân gian từ loại thảo dược mà chưa nắm rõ thành phần hoá học chúng Cây Cơm cháy (Sambucus javanica) thường dùng thuốc chữa thông tiểu, nhuận tràng, lị thấp khớp Dù thuốc sử dụng phổ biến, giới nước, nghiên cứu thành phần hoá học cịn Do đó, tơi tiến hành nghiên cứu thành phần hoá học phân đoạn cao methanol M1 Cơm cháy (Sambucus javanica) nhằm làm sáng tỏ thành phần hố học cây, tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học cao để góp phần làm phong phú thêm dược tính lồi 2.2 Nguyên liệu 2.2.1 Thu hái xử lí mẫu Cây Cơm cháy thu hái vào tháng năm 2020 huyện Nơng Cống, tỉnh Thanh Hố, Việt Nam Mẫu nhận danh tiến sĩ Đặng Văn Sơn, Viện Sinh học nhiệt đới, thành phố Hồ Chí Minh Mẫu thu hái cành cây, phơi khơ tự nhiên, sau xay nhuyễn thành dạng bột khô (15 kg) 2.2.2 Điều chế loại cao Bột khô phần mặt đất (15 kg) ngâm dầm methanol Sau tiến hành lọc lấy dịch chiết, quay loại dung môi áp suất thấp, thu cao methanol thô Chiết lỏng-lỏng cao methanol thô với n-hexane, ethyl acetate thu cao n-hexane, cao ethyl acetate tương ứng cao methanol cịn lại Q trình điều chế loại cao tóm tắt theo sơ đồ 2.1 10 Toàn phần mặt đất Cơm cháy Phơi khô, xay nhuyễn Bột lá, cành khô (15 kg) Ngâm dầm với methanol Lọc, thu hồi dung môi Cao methanol thô (450 g) Chiết lỏng-lỏng với dung môi n-hexane Lọc, thu hồi dung môi Cao n-hexane (10 g) Dịch chiết cịn lại Chiết lỏng-lỏng với dung mơi ethyl acetate Lọc, thu hồi dung môi Cao ethyl acetate (280 g) Cao methanol lại (160 g) Các kĩ thuật sắc kí cột, sắc kí lớp mỏng Các hợp chất lập Sơ đồ 2.1: Quy trình điều chế phân đoạn cao methanol từ Cơm cháy 2.3 Phân lập số hợp chất hữu từ phân đoạn cao M1 Thực sắc kí cột silica gel cao methanol lại (160 g) với hệ dung môi giải li n-hexane – ethyl acetate (10-100% ethyl acetate), ethyl acetate – methanol (10-100% methanol) thu phân đoạn (kí hiệu M1 đến M8) Phân đoạn M1 (25.4 g) tiến hành sắc kí cột silica gel, giải li với hệ dung môi n-hexane – ethyl acetate (10-100% ethyl acetate) thu phân đoạn (kí hiệu M1.1 đến M1.6) 11 Phân đoạn M1.3 (6.33 g) sắc kí cột silica gel với hệ dung mơi n-hexane – ethyl acetate (4:1) thu phân đoạn trình bày bảng 2.1 Phân đoạn M1.3.4 tiếp tục sắc kí cột silica gel nhiều lần với hệ dung môi n-hexane – chloroform (4:1) thu hợp chất (4.4 mg) Phân đoạn M1.4 (5.08 g) sắc kí cột silica gel nhiều lần với hệ dung môi n-hexane – ethyl acetate (4:1) thu phân đoạn trình bày bảng 2.2 Phân đoạn M1.4.2 tiếp tục sắc kí cột silica gel nhiều lần với hệ dung môi nhexane – chloroform – acetone (18:30:2) thu hợp chất (6.2 mg) Quá trình phân lập hợp chất từ phân đoạn cao M1 tóm tắt theo sơ đồ 2.2 Cao methanol (160 g) Sắc kí cột silica gel với hệ dung mơi n-hexane – ethyl acetate (10 – 100% ethyl acetate) ethyl acetate – methanol (10 – 100% methanol) M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 25.4 g 28.4 g 24.6 g 14.2 g 20.3 g 16.7 g 10.0 g 12.9 g Sắc kí cột silica gel với hệ dung mơi n-hexane – ethyl acetate (10 – 100% ethyl acetate) M1.1 M1.2 M1.3 M1.4 M1.5 M1.6 3.62 g 4.14 g 6.33 g 5.08 g 3.51 g 2.23 g Sắc kí cột silica gel nhiều lần với hệ dung môi n-hexane – ethyl acetate 4:1 n-hexane – chloroform 4:1 Sắc kí cột silica gel nhiều lần với hệ dung môi n-hexane – ethyl acetate 4:1 n-hexane – chloroform – acetone 18:30:2 Hợp chất Hợp chất 4.4 mg 6.2 mg Sơ đồ 2.2: Quy trình phân lập số hợp chất từ phân đoạn cao M1 12 Bảng 2.1 Các phân đoạn sắc kí cột silica gel từ phân đoạn M1.3 STT Phân đoạn Khối lượng M1.3.1 1.34 g M1.3.2 1.02 g M1.3.3 1.29 g M1.3.4 0.55 g M1.3.5 0.63 g Ghi Tinh chế hợp chất Bảng 2.2 Các phân đoạn sắc kí cột silica gel từ phân đoạn M1.4 STT Phân đoạn Khối lượng M1.4.1 0.44 g M1.4.2 0.82 g M1.4.3 1.16 g M1.4.4 0.95 g 13 Ghi Tinh chế hợp chất Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất Hợp chất dược phân lập từ phân đoạn M1.3 với số tính chất sau: - Là chất rắn có dạng bột trắng, tan tốt dung mơi chloroform - Vết hợp chất TLC không hấp thụ UV - Sắc kí lớp mỏng hợp chất giải li với hệ dung môi n-hexane – ethyl acetate 8:2, cho vết hình dung dịch sulfuric acid 20%, sấy nóng xuất vết màu hồng tươi - Phổ 1H-NMR (chloroform-d, 600 MHz) (Phụ lục 1, Bảng 3.1) - Phổ 13C-NMR (chloroform-d, 150 MHz) (Phụ lục 2, Bảng 3.1) Biện luận cấu trúc Trên phổ 1H-NMR xuất tín hiệu proton olefin dH 5.24 (1H, t, J = 1.2 Hz, H-12), tín hiệu proton methine gắn carbon mang oxygen (–O-CH