Nghiên cứu tác dụng cải thiện hành vi của bình vôi núi cao ( stephania brachyandra) trên mô hình ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THU THẢO NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN HÀNH VI CỦA BÌNH VƠI NÚI CAO (Stephania brachyandra) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM ĐỘT BIẾN GEN RUGOSE BỆNH TỰ KỶ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI - - NGUYỄN THU THẢO Mã sinh viên : 1601725 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN HÀNH VI CỦA BÌNH VƠI NÚI CAO (Stephania brachyandra) TRÊN MƠ HÌNH RUỒI GIẤM ĐỘT BIẾN GEN RUGOSE BỆNH TỰ KỶ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng Nơi thực hiện: Bộ môn Dƣợc học cổ truyền Viện Dƣợc liệu HÀ NỘI – 2021 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, trưởng khoa Dược lý - Sinh hóa, Viện Dược liệu Cơ người trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt, bảo tận tình cho em từ ngày đến hoàn thiện đề tài Sự định hướng tâm huyết cô động lực lớn lao để em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn cô! Tiếp đến, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Hà Vân Oanh, môn Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội Cô cho em hội nghiên cứu khoa học môi trường chuyên nghiệp, giúp đỡ, quan tâm sát cho em lời khuyên quý báu q trình thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn cô! Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến anh Trần Nguyên Hồng, anh Nguyễn Văn Hiệp anh chị khoa Dược lý – Sinh hóa, Viện Dược Liệu giúp đỡ, hướng dẫn kỹ thuật tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian em tham gia nghiên cứu thực nghiệm khoa Cuối cùng, em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè bên cạnh động viên, chỗ dựa vững em gặp khó khăn học tập sống Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, khóa luận cịn nhiều điều thiếu sót Em mong nhận góp ý thầy cơ, bạn bè để khóa luận hồn thiện Hà Nội, ngày 06 tháng 06 năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thu Thảo MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan tự kỷ 1.1.1 Định nghĩa sơ lược lịch sử nghiên cứu tự kỷ 1.1.2 Dịch tễ 1.1.3 Phân loại tự kỷ 1.1.4 Nguyên nhân yếu tố nguy 1.1.5 Biểu lâm sàng chẩn đoán 1.1.6 Điều trị 1.1.7 Một số mơ hình nghiên cứu rối loạn phổ tự kỷ 10 1.1.8 Mơ hình nghiên cứu rối loạn phổ tự kỷ ruồi giấm đột biến gen rugose 11 1.2 Tổng quan dược liệu Bình vơi núi cao 13 1.2.1 Tên gọi, vị trí phân loại 13 1.2.2 Đặc điểm thực vật phân bố 13 1.2.3 Thành phần hóa học 14 1.2.4 Giá trị sử dụng 15 1.2.5 Công dụng 15 1.2.6 Tác dụng dược lý hướng thần kinh 15 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 17 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Chủng ruồi giấm phục vụ nghiên cứu 17 2.1.3 Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Quy trình chuẩn bị ruồi giấm phục vụ nghiên cứu 19 2.2.2 Thiết kế nghiên cứu 20 2.2.3 Phân tích kết 26 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 Kết đánh giá tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 27 3.2 Kết đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 29 3.3 Kết đánh giá tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose 31 3.3.1 Kết đánh giá khả khả di chuyển (bò) ấu trùng ruồi giấm (crawling assay) 31 3.3.2 Kết đánh giá nhịp sinh học ruồi giấm (activity assay) 33 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 36 4.1 Về mơ hình nghiên cứu 36 4.1.1.Về việc lựa chọn mơ hình ruồi giấm mang bệnh tự kỷ 36 4.1.2 Về việc lựa chọn dược liệu nghiên cứu 37 4.1.3 Về lựa chọn mức liều nghiên cứu 38 4.2 Về kết nghiên cứu 38 4.2.1 Đánh giá tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 38 4.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ 39 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 4.2.3 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Viết tắt Viết đầy đủ theo Tiếng Anh Viết đầy đủ theo Tiếng Việt ABA Applied Behavior Analysis Phân tích hành vi ứng dụng ASD Autism Spectrum Disorder Hội chứng rối loạn phổ tự kỷ BVNC CBT CDC DSM-5 Bình vơi núi cao Cognitive behavioral therapy Liệu pháp hành vi nhận thức Centers for Disease Control and Trung tâm kiểm sốt phịng Prevention ngừa dịch bệnh Diagnostic and Statistical Sổ tay Chẩn đoán Thống kê Manual of Mental Disorders, Rối loạn Tâm thần, phiên Fifth Edition thứ Hoạt chất L- L-THP L-tetrahydropalmatin NBEA Neurobeachin Gen Neurobeachin NMJ Neuromuscular junction Ngã ba thần kinh 10 PRT Pivotal Response Training Đào tạo phản hồi then chốt 11 TT tetrahydropalmatin Thể trọng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Kết định lƣợng L-THP [7] 15 Bảng Hóa chất sử dụng nghiên cứu 18 Bảng 2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 18 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số hình ảnh BVNC (Stephania brachyandra Diels) 13 Hình Thiết kế thí nghiệm đánh giá tương tác cộng đồng ruồi giấm [62] .21 Hình 2 Thiết kế thí nghiệm đánh giá khả nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm [30] .23 Hình Thiết kế thí nghiệm đánh giá khả bị ấu trùng ruồi giấm 25 Hình Hệ thống quan sát DAM2 Drosophila Activity Monitor 26 Hình Thử nghiệm hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm trưởng thành 28 Hình Kết đánh giá số học tập (LI) 30 Hình 3 Hình ảnh đường ấu trùng ruồi giấm bậc ba sau phân tích qua phần mềm Image-J 32 Hình Kết phân tích tốc độ di chuyển ấu trùng ruồi giấm bậc ba .32 Hình Kết xác định nhịp sinh học ruồi giấm Trục hoành biểu thị mốc thời gian ngày Trục tung biểu thị số lần vận động ruồi 34 Hình Kết phân tích tổng số lần vận động thời gian ngày 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn phổ tự kỷ (Autism spectrum disorder- ASD) bệnh lý thần kinh phức tạp, giả thuyết yếu tố di truyền phơi nhiễm với hóa chất Những rối loạn hành vi thường phát triển năm đầu đời, bao gồm khiếm khuyết tương tác xã hội, phát triển ngôn ngữ kỹ giao tiếp kết hợp với hành vi cứng nhắc, lặp lặp lại [72] Gần đây, thay đổi nhận thức tiêu chuẩn chẩn đoán kết hợp yếu tố sinh học môi trường, tỉ lệ tự kỷ có có xu hướng gia tăng với tốc độ đáng báo động không Việt Nam mà cịn tồn giới [4], [18], [42] Hiện nay, có hai hướng điều trị phổ biến cho người mắc ASD can thiệp hành vi điều trị thuốc Các biện pháp can thiệp hành vi tỏ có hiệu quả, song, địi hỏi thời gian, chi phí điều trị nỗ lực lớn từ người bệnh Cho đến nay, nhà khoa học chưa tìm thuốc đặc trị, có hai thuốc FDA cấp phép nhằm giảm triệu chứng trẻ tự kỷ[28] Trong đó, ảnh hưởng ASD lên người bệnh kéo dài từ lúc nhỏ đến suốt đời, làm giảm chất lượng sống người bệnh, tạo gánh nặng tâm lý, tài cho gia đình xã hội Chính vậy, việc nghiên cứu thuốc mới, có thuốc từ dược liệu, vấn đề thiết thực cần quan tâm Chi Stephania Lour chi lớn thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae) Các loài chi biết đến rộng rãi hiệu tác dụng thần kinh tâm thần Hoạt chất điển hình L-tetrahydropalmatin (rotundin) dùng làm thuốc an thần, gây ngủ, giảm đau, điều trị số trường hợp rối loạn tâm thần chức năng, căng thẳng thần kinh, ngủ dai dẳng nguyên nhân tâm thần [12] Trong đó, Bình vơi núi cao (Stephania brachyandra Diels) đánh giá lồi có hoạt chất với hàm lượng cao đáng kể so với lồi bình vơi khác có Việt Nam [31],[5], [7] Mặc dù có nhiều tiềm năng, song số lượng nghiên cứu tác dụng dược lý Bình vơi núi cao nói chung lĩnh vực dược lý thần kinh tâm thần nói riêng cịn hạn chế Hơn nữa, việc nghiên cứu thuốc từ dược liệu nhằm hỗ trợ điều trị tự kỷ hướng mẻ Việt Nam Vì lý đó, chúng tơi thực đề tài ―Nghiên cứu tác dụng cải thiện hành vi Bình vơi núi cao (Stephania brachyandra) mơ hình ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ‖ với mục tiêu cụ thể sau đây: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Về mơ hình nghiên cứu 4.1.1.Về việc lựa chọn mơ hình ruồi giấm mang bệnh tự kỷ Ruồi giấm có tên khoa học Drosophila melanogaster, sử dụng lĩnh vực di truyền học với lịch sử nghiên cứu 100 năm Ngày nay, ruồi giấm xem mơ hình tảng tốt cho nghiên cứu mặt di truyền sinh học tình trạng bệnh lý [14] nhiều ưu điểm nghiên cứu Về mặt đạo đức nghiên cứu, sử dụng ruồi giấm làm động vật nghiên cứu gặp phải vấn đề liên quan tới đạo đức nghiên cứu y sinh học tiến hành thử nghiệm động vật bậc cao chuột, chó, thỏ, hay động vật có vú khỉ Về mặt sinh lý, ruồi giấm sinh vật hiểu rõ trình sinh sản, chu trình phát triển từ phôi đến ấu trùng, đến ruồi trưởng thành Ruồi giấm nhỏ có cấu trúc thể hồn chỉnh, tìm hiểu rõ giải phẫu quan thể Đó lợi để thiết kế thí nghiệm giai đoạn phận khác Về mặt di truyền, ruồi giấm có cặp NST, việc thao tác, phân tích, sàng lọc di truyền dễ dàng thực Hệ gen lập đồ chi tiết cho phép so sánh, tra cứu chức tương đồng với người Đây mơ hình thuận lợi lý tưởng để nghiên cứu bệnh liên quan đến yếu tố di truyền Về mặt kinh tế, thứ nhất, ruồi giấm sinh vật kích thước nhỏ bé nên khơng địi hỏi diện tích mơi trường sống lớn hay lượng thức ăn nhiều Thứ hai, ruồi giấm đẻ hàng trăm trứng suốt đời nó, phơi tạo thành vịng 24 sau trứng thụ tinh khoảng 10 ngày để phát triển thành ruồi trưởng thành Điều cho phép tạo quần thể ruồi giấm lớn liên tục phục vụ nghiên cứu, tiết kiệm thời gian, chi phí cơng sức chăm sóc, ni dưỡng Về ứng dụng ruồi giấm lĩnh vực thần kinh di truyền học, ruồi giấm có cấu trúc não phân hóa cao với thùy khoảng 100.000 tế bào thần kinh Ruồi giấm có dây thần kinh phân đoạn giống cột sống động vật có vú [14] Với cấu trúc hệ thần kinh hoàn thiện chức tương đồng người, ruồi giấm 36 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an sử dụng làm mơ hình để nghiên cứu bệnh lý thần kinh vận động [38] Các nhà khoa học nước sử dụng ruồi giấm làm động vật nghiên cứu số bệnh lý thần kinh như: parkinson, alzheimer, huntington, tự kỷ, hội chứng xơ cứng teo bên, [14], [21], [62] Dựa ưu điểm thuận tiện quan sát, định lượng, định lựa chọn mơ hình ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ để nghiên cứu tác dụng cải thiện hành vi thần kinh BVNC bệnh tự kỷ Mặc dù có nhiều ưu điểm, song mơ hình ruồi giấm nhược điểm tồn giải phẫu não quan khác với người Cùng với đó, ruồi thiếu khả nhận thức sâu sắc so với người phương pháp đo lường xu hướng hành vi chưa toàn diện Do vậy, tác dụng thuốc phản ánh ruồi khác biệt đáng kể so với nghiên cứu người Nhìn chung, Drosophila melanogaster sinh vật mơ hình phù hợp nhiều lý chúng có nhược điểm định Mơ hình ruồi giấm có vai trị sàng lọc nhanh chóng mẫu có tiềm điều trị hỗ trợ điều trị cho hội chứng rối loạn phổ tự kỷ Xa nghiên cứu ảnh hưởng mẫu tới thay đổi di truyền, đích cụ thể đường tín hiệu liên quan 4.1.2 Về việc lựa chọn dược liệu nghiên cứu Bình vơi núi cao có tên khoa học đầy đủ Stephania brachyandra Diels, thuộc chi Stephania Lour Nhiều hoạt chất chiết từ loài chi Stephania Lour nghiên cứu cho thấy hiệu tác dụng thần kinh như Ltetrahydropalmatin, (-) – stepholidin hay palmatin Một nhóm tác giả nước phân lập hoạt chất củ loài BVNC thu hái Sa Pa (Lào Cai) BVNC đánh giá có nguồn gen tương đối với Việt Nam Rễ củ (củ) có hoạt chất dùng làm thuốc an thần, giảm đau Nhiều nghiên cứu BVNC lồi có hoạt chất với hàm lượng rotundin cao so với lồi bình vơi khác có Việt Nam Rotundin hoạt chất có hiệu tốt, thương mại hóa, dùng nhiều làm thuốc an thần, gây ngủ, giảm đau, điều trị số trường hợp rối loạn tâm thần chức năng, trạng thái căng thẳng thần kinh, ngủ dai dẳng nguyên nhân tâm thần 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nhận thấy tiềm này, lựa chọn Stephania brachyandra Diels để đánh giá tác dụng cải thiện hành vi thần kinh mơ hình ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ 4.1.3 Về lựa chọn mức liều nghiên cứu Kế thừa kết sàng lọc số lượng lớn mẫu ruồi giấm thuộc dự án FIRST (dưới tài trợ ngân hàng giới PGS.TS Phạm Thị Nguyệt Hằng chủ trì), kết hợp với việc nhóm nghiên cứu tiến hành sàng lọc dải nồng độ 10, 6, 4, 2, mg/ml, dựa vào tỷ lệ sống sót ruồi trưởng thành cải thiện hành vi cộng đồng với mức liều, nhận thấy nồng độ 2mg/ml 4mg/ml phù hợp đạt tiêu chí để nghiên cứu sâu 4.2 Về kết nghiên cứu 4.2.1 Đánh giá tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ Khiếm khuyết tương tác xã hội đặc trưng người mắc ASD Để đánh giá tác dụng cải thiện triệu chứng BVNC, chúng tơi thực mơ hình đánh giá khả tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ Nghiên cứu Simon cộng [58] cho thấy khác biệt giới tính khơng ảnh hưởng đến hành vi tương tác cộng đồng ruồi Vì vậy, chúng tơi thống kê liệu quần thể bao gồm ruồi đực ruồi Tuy nhiên, để giảm ảnh hưởng tương tác giới tính, ví dụ giao phối, đến mơ hình hành vi, chúng tơi thực thí nghiệm nhóm ruồi đực ruồi riêng rẽ Hình ảnh phân bố quần thể ruồi không gian số khoảng cách đến ruồi gần Hình 3.1 cho thấy ruồi giấm mang gen đột biến bị giảm khả tương tác cộng đồng Các cá thể nhóm bệnh chứng đứng riêng lẻ rải rác khơng gian, di chuyển thành đám giống nhóm ruồi giấm chủng hoang dại Minh chứng cho điều khoảng cách gần hai cá thể nhóm ruồi đột biến gen rugose tăng lên rõ rệt so với nhóm ruồi giấm chủng hoang dại Kết phù hợp với kết công bố giới [58], [66] khác biệt khoảng cách cá thể tương tác xã hội phân bố ngẫu nhiên [58] 38 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Cao BVNC mức liều mg/ml mg/ml làm giảm khoảng cách ngắn hai cá thể ruồi giấm đột biến gen rugose Trong đó, mức liều 4mg/ml cải thiện rõ rệt khả tương tác xã hội ruồi bệnh lý, khoảng cách hai cá thể gần rút ngắn lại đáng kể với khác biệt đạt ý nghĩa thống kê p < 0,001 Như vậy, việc sử dụng cao BVNC có tác dụng cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ 4.2.2 Đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm đột biến gen rugose mang bệnh tự kỷ Sự thiếu hụt khả học tập ghi nhớ ghi nhận số nhóm trẻ em mắc ASD Chúng tơi sử dụng mơ hình đánh giá khả học tập ghi nhớ mùi ấu trùng ruồi giấm (Odor – taste learning) nhằm đánh giá hiệu tác dụng cao chiết cồn BVNC lên khả ghi nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm tự kỷ Kết thực nghiệm khả ghi nhớ mùi lô bệnh lý Rugose hẳn so với lơ chứng sinh lý Canton-S có ý nghĩa thống kê, cho thấy mơ hình hồn tồn phù hợp để đánh giá tác dụng mẫu cải thiện hành vi học tập - ghi nhớ Ruồi giấm đột biến gen rugose thể chức tương đồng với gen neurobeachin người liên quan tới học tập, ghi nhớ Kết hoàn toàn tương đồng với nghiên cứu trước tác giả Volders cộng [64] Kết cao chiết cồn BVNC hai nồng độ 2mg/ml 4mg/ml cho thấy tác dụng cải thiện khả ghi nhớ Chỉ số học tập hai nhóm ruồi tăng lên so với ruồi tự kỷ, khác biệt đạt ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Trong nghiên cứu tác giả Volder học tập ghi nhớ mùi ruồi giấm liên quan trực tiếp tới tế bào Kenyo, hình thành cấu trúc hình thái vùng MB (Mushroom body) thuộc thần kinh trung ương (CNS) ruồi giấm [64] Điều gợi ý cho đích tác dụng cao chiết cồn BVNC cấu trúc MB thuộc hệ thần kinh trung ương, nhiên cần nghiên cứu sâu để khẳng định xác 39 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 4.2.3 Đánh giá tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose 4.2.3.1 Đánh giá khả di chuyển (bò) ấu trùng ruồi giấm Cải thiện tốc độ di chuyển tiêu chí nhằm đánh giá hiệu tác dụng dược liệu lên chức vận động ruồi giấm Kết Hình 3.3 Hình 3.4 ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ có tốc độ bị chậm so với ruồi giấm chủng hoang dại Ngoài ra, quan sát trình thực nghiệm cho thấy ruồi giấm mang gen đột biến có xu hướng di chuyển cuộn trịn, tuyến tính so với đường nhóm ruồi sinh lý Điều phù hợp với kết nghiên cứu trước Wise cộng [66] Sự khác biệt lô chứng sinh lý lơ chứng bệnh lý cho thấy mơ hình phù hợp để đánh giá tác dụng cao BVNC BVNC nồng độ 4mg/ml cho thấy tác dụng cải thiện chức vận động ruồi giấm, làm tăng 19 % tốc độ di chuyển trung bình ấu trùng ruồi giấm đột biến gen, khác biệt đạt ý nghĩa với p < 0,01 Trong đó, mức liều thấp 2mg/ml, BVNC hiệu tác dụng Điều cho thấy tác dụng thay đổi hành vi vận động ấu trùng BVNC phụ thuộc vào liều nghiên cứu Trong trình phát triển, hệ thống NMJ phát triển theo tăng cường kích thước sợi để đảm bảo trì xác synap điều khiển Từ lúc nở tới giai đoạn phát triển thứ ấu trùng diện tích bề mặt sợi tăng tới 100 lần [37] Trong giai đoạn phát triển, số lượng nút thần kinh tiếp tục tăng (một số bị loại bớt), kết trình tăng số lượng nút số vùng hoạt động nút lên 10 lần [16] Các tượng tối ưu cân nội, thay đổi điện sinh lý làm thay đổi giải phóng chất dẫn truyền trung gian thần kinh và/hoặc đáp ứng hậu synap [45] Liên hệ với số nghiên cứu trước dựa phân tích cấu trúc thần kinh NMJ nhóm số ấu trùng ruồi giấm bậc phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang, chúng tơi nhận thấy có mối liên quan [11], [50].Trong nghiên cứu này, ruồi giấm chủng Rugose điều trị cao chiết, có thay đổi cấu trúc thần kinh cơ, cụ thể số lượng, diện tích nút thần kinh, chiều dài sợi thần kinh Nhờ đó, có thay đổi khả vận 40 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an động Do đó, đích tác dụng cao chiết cồn BVNC ấu trùng ruồi giấm bậc ba Tuy nhiên, cần thực nghiên cứu sâu để kiểm chứng 4.2.3.2 Đánh giá nhịp sinh học ruồi giấm Thay đổi nhịp sinh học tình trạng phổ biến trẻ mắc ASD Mơ hình đánh giá nhịp sinh học tiến hành đối tượng ruồi trưởng thành giống đực hoạt động đẻ trứng ruồi giấm ảnh hưởng đến hành vi hoạt động thực chúng Kết Hình 3.5 hình Hình 3.6 cho thấy đột biến gen rugose gây ảnh hưởng làm giảm cường độ hoạt động ruồi giấm Ruồi tự kỷ có xu hướng giảm hoạt động so với ruồi giấm chủng hoang dại Xét trẻ tự kỷ cho thấy kết tương đồng mà tổng thời gian ngủ trẻ tự kỷ nhiều so với trẻ bình thường nghiên cứu trước [51] Sử dụng cao BVNC hai nồng độ 2mg/ml 4mg/ml làm cải thiện cường độ hoạt động ruồi tự kỷ Đặc biệt nhóm ruồi sử dụng BVNC nồng độ 4mg/ml, cường độ hoạt động tăng rõ rệt với khác biệt đạt ý nghĩa thống kê với p < 0,01 Như vậy, cao chiết cồn BVNC nồng độ 4mg/ml có tiềm để cải thiện triệu chứng trẻ mắc hội chứng rối loạn phổ tự kỷ 41 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Cao chiết cồn từ củ Bình vơi núi cao (Stephania brachyanda Diels) có tiềm cải thiện hành vi thần kinh hội chứng ASD hiệu tác dụng phụ thuộc vào nồng độ, thông qua thử nghiệm đánh sau: + Trên thử nghiệm hành vi tương tác cộng đồng: BVNC nồng độ 2mg/ml 4mg/ml cải thiện thiếu hụt hành vi tương tác cộng đồng ruồi giấm đột biến gen rugose trưởng thành + Trên thử nghiệm hành vi trí nhớ ngắn hạn: BVNC nồng độ 2mg/ml 4mg/ml cải thiện trí nhớ ngắn hạn ấu trùng ruồi giấm bậc ba thông qua thử nghiệm học tập, ghi nhớ mùi + Trên thử nghiệm hành vi vận động: BVNC nồng độ 2mg/ml khơng có tác dụng cải thiện hành vi vận động ấu trùng ruồi giấm bậc ba ruồi giấm tự kỷ trưởng thành mang gen đột biến rugose BVNC nồng độ 4mg/ml cải thiện hành vi vận động thông qua thử nghiệm đánh giá khả bò ấu trùng bậc ba thử nghiệm nhịp sinh học ruồi giấm trưởng thành mang gen đột biến rugose Kiến nghị Chúng đề xuất tiến hành nghiên cứu thêm theo hướng sau: + Nghiên cứu tìm hiểu chế hóa sinh BVNC ấu trùng bậc ba ruồi giấm đột biến gen rugose bệnh tự kỷ bao gồm đánh giá thay đồi cấu trúc thần kinh thông số liên quan đến cấu trúc thần kinh chiều dài nhánh, số lượng nhánh, số lượng nút thần kinh… + Tiến hành nghiên cứu sử dụng cao chiết cồn phân đoạn với thành phần hóa học cụ thể BVNC để nâng cao hiệu cải thiện hội chứng rối loạn phổ tự kỷ với mức liều thấp + Triển khai đánh giá tác dụng điều trị thử độc tính cao chiết cồn BVNC thu hái Sa Pa – Lào Cai mơ hình chuột ASD thực nghiệm 42 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng Việt Bộ KH CN, Viện KHCNVN (2007), Sách đỏ Việt Nam, Phần II - Thực vật, NXB Khoa học tự nhiên công nghệ, Hà Nội, tr.284-285 Bộ Y Tế (2015), Hướng dẫn chẩn đoán điều trị số bệnh thường gặp trẻ em, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.731-738 Võ Văn Chi (2012), "Từ điển Cây thuốc Việt Nam", NXB Y học, Hà Nội, Tập 1, tr.181-182 Trần Văn Cơng, Nguyễn Thị Hồng Yến (2017), "Tỉ lệ trẻ rối loạn phổ tự kỷ: Những số thống kê", Tạp chí Khoa học Trường Đại học Sư phạm Hà Nội, 62, tr.322-330 Đỗ Thị Hà, Lê Thị Loan, Phạm Thanh Huyền, Nguyễn Quỳnh Nga, Nguyễn Minh Khởi (2020), "Định lượng rotundin số loài thuộc chi Stephania thu hái việt nam phương pháp hplc-dad", Tạp chí Dược liệu, Số 6/2020, tr.352-356 Vũ Thị Bích Hạnh (2007), Tự kỷ - Phát sớm can thiệp sớm, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.8 Nguyễn Quốc Huy (2010), Nghiên cứu thực vật thành phần hoá học, số tác dụng sinh học số loài thuộc chi Stephania Lour Việt Nam, Luận án Tiến sĩ Dược học, Đại học Dược Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Minh Khởi, Phạm Thị Nguyệt Hằng, Lê Thị Xoan (2015), "Tác dụng cải thiện hội chứng tự kỷ cao chiết rau đắng biển mơ hình chuột nhắt tự kỷ thực nghiệm gây muối valproat", Tạp chí Dược liệu, 20(4), 241-247 Phạm Minh Mục (2020), Nghiên cứu xây dựng mơ hình phát sớm, can thiệp sớm giáo dục cho trẻ em rối loạn phổ tự kỉ Việt Nam dựa vào gia đình cộng đồng, tr.6-7 10 Lê Văn Phú (2004), Công tác xã hội, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội, tr.11 43 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 11 Phạm Thị Bích Phượng (2020), Nghiên cứu tác dụng sinh học bước đầu tìm hiểu chế hóa sinh Ngũ gia bì hương (Acanthopanax gracilisstylus w.w smith), Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Đại học Dược Hà Nội 12 Viện Dược Liệu (2004), "Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam", NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, Tập 1, tr.210-215 13 Nguyễn Thị Hoàng Yến (2013), Tự kỷ vấn đề lý luận thực tiễn, NXB ĐH Sư Phạm, Hà Nội, tr.7-10 Tài liệu tham khảo tiếng Anh 14 Allocca Mariateresa, Zola Sheri, Bellosta Paola (2018), Drosophila melanogaster: Model for Recent Advances in Genetics Therapeutics, 113-156 15 American Psychiatric Association (2013), Diagnostic and statistical manual of mental disorders (DSM-5), American Psychiatric Pub, pp.50-59 16 Atwood HL, Govind CK, Wu C‐ F (1993), "Differential ultrastructure of synaptic terminals on ventral longitudinal abdominal muscles in Drosophila larvae", Journal of neurobiology, 24(8), 1008-1024 17 Bahmani Mahmoud, Sarrafchi Amir, Shirzad Hedayatollah, Rafieian-Kopaei Mahmoud (2016), "Autism: Pathophysiology and promising herbal remedies", Current Pharmaceutical Design, 22(3), pp.277-285 18 Baio J Wiggins L, Christensen DL, et al (2018), "Prevalence of Autism Spectrum Disorder Among Children Aged Years - Autism and Developmental Disabilities Monitoring Network, 11 Sites, United States, 2014", MMWR Surveill Summ 19 Bhandari Ranjana, Kuhad Anurag (2015), "Neuropsychopharmacotherapeutic efficacy of curcumin in experimental paradigm of autism spectrum disorders", Life Sciences, 141, pp.156-169 20 Bölte Sven, Girdler Sonya, Marschik Peter B (2019), "The contribution of environmental exposure to the etiology of autism spectrum disorder", Cellular and molecular life sciences : CMLS, 76(7), pp.1275-1297 21 Buhl Edgar, Higham James P, Hodge James JL (2019), "Alzheimer's diseaseassociated tau alters Drosophila circadian activity, sleep and clock neuron electrophysiology", Neurobiology of disease, 130 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 22 Cao G., Zhang Y., Zhu L., Zhu J., Zhao N., et al (2018), "The inhibitory effect of levo-tetrahydropalmatine on the methamphetamine-induced spatial memory impairment in mice", Neuroscience letters, 672, 34-39 23 Castermans D, Wilquet V, Parthoens E, Huysmans C, Steyaert J, et al (2003), "The neurobeachin gene is disrupted by a translocation in a patient with idiopathic autism", Journal of Medical Genetics, 40(5), 352-356 24 Chaliha D., Albrecht M., Vaccarezza M., Takechi R., Lam V., et al (2020), "A Systematic Review of the Valproic-Acid-Induced Rodent Model of Autism", Developmental Neuroscience, 42(1), 12-48 25 Chao H T., Chen H., Samaco R C., Xue M., Chahrour M., et al (2010), "Dysfunction in GABA signalling mediates autism-like stereotypies and Rett syndrome phenotypes", Nature, 468(7321), 263-9 26 Chaves Soane Kaline Morais, et al (2020), "Palmatine antioxidant and antiacetylcholinesterase activities: A pre-clinical assessment", Cellular and Molecular Biology, 66(4), 54-59 27 Christensen J., Grønborg T K., Sørensen M J., Schendel D., Parner E T., et al (2013), "Prenatal valproate exposure and risk of autism spectrum disorders and childhood autism", JAMA, 309(16), 1696-703 28 DeFilippis Melissa, Wagner Karen Dineen (2016), "Treatment of Autism Spectrum Disorder in Children and Adolescents", Psychopharmacology bulletin, 46(2), 18-41 29 Dhingra Dinesh, Bhankher Arun (2014), "Behavioral and biochemical evidences for antidepressant-like activity of palmatine in mice subjected to chronic unpredictable mild stress", Pharmacological Reports, 66(1), 1-9 30 Gerber Bertram, Biernacki Roland, Thum Jeannette (2013), "Odor–taste learning assays in Drosophila larvae", Cold Spring Harbor Protocols, 2013(3), pdb prot071639 31 Grabrucker S., Jannetti L., Eckert M., Gaub S., Chhabra R., et al (2014), "Zinc deficiency dysregulates the synaptic ProSAP/Shank scaffold and might contribute to autism spectrum disorders", Brain, 137(Pt 1), 137-52 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 32 Halbsguth C., Meissner O., Häberlein H (2003), "Positive cooperation of protoberberine type alkaloids from Corydalis cava on the GABA(A) binding site", Planta Med, 69(4), 305-9 33 Hoang V M., Le T V., Chu T T Q., Le B N., Duong M D., et al (2019), "Prevalence of autism spectrum disorders and their relation to selected sociodemographic factors among children aged 18-30 months in northern Vietnam, 2017", International journal of mental health systems, 13, 29 34 Hul Sovanmoly, Dary Chhavarath, Jacques Frederic, Ollivier Evelyne, Bun Sok-Siya, et al (2017), "The world checklist of Stephania (Menispermaceae), with notes on types", Phytotaxa, 298(2), 101-118 35 Hulbert S W., Jiang Y H (2016), "Monogenic mouse models of autism spectrum disorders: Common mechanisms and missing links", Neuroscience, 321, 3-23 36 Jantrapirom Salinee, Piccolo Luca Lo, Yoshida Hideki, Yamaguchi Masamitsu (2018), "A new Drosophila model of Ubiquilin knockdown shows the effect of impaired proteostasis on locomotive and learning abilities", Experimental cell research, 362(2), 461-471 37 Jarecki J., Keshishian H (1995), "Role of neural activity during synaptogenesis in Drosophila", The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience, 15(12), 8177-8190 38 Julide Bilen, Nancy M Bonini (2005), "Drosophila as a Model for Human Neurodegenerative Disease", Annual Review of Genetics 39(1), 153-171 39 Leo Kanner (1943), ""Autistic Disturbances of Affective Contact."", Nervous Child, 217-250 40 Liu X., Yang Z., Li R., Xie J., Yin Q., et al (2012), "Responses of dopaminergic, serotonergic and noradrenergic networks to acute levotetrahydropalmatine administration in naïve rats detected at 9.4 T", Magnetic resonance imaging, 30(2), 261-70 41 Lord Catherine, Elsabbagh Mayada, Baird Gillian, Veenstra-Vanderweele Jeremy (2018), "Autism spectrum disorder", The Lancet, 392(10146), 508-520 42 Maenner MJ Shaw KA, Baio J, et al (2020), "Prevalence of Autism Spectrum Disorder Among Children Aged Years — Autism and Developmental Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Disabilities Monitoring Network, 11 Sites, United States, 2016", MMWR Surveill Summ 43 Magnusson C., Lundberg M., Lee B K., Rai D., Karlsson H., et al (2016), "Maternal vitamin D deficiency and the risk of autism spectrum disorders: population-based study", BJPsych Open, 2(2), 170-172 44 Mantsch J R., Li S J., Risinger R., Awad S., Katz E., et al (2007), "Levotetrahydropalmatine attenuates cocaine self-administration and cocaine-induced reinstatement in rats", Psychopharmacology (Berl), 192(4), 581-91 45 Menon Kaushiki P, Carrillo Robert A, Zinn Kai (2013), "Development and plasticity of the Drosophila larval neuromuscular junction", Wiley Interdisciplinary Reviews: Developmental Biology, 2(5), 647-670 46 Nair Ramya, Lauks Juliane, Jung SangYong, Cooke Nancy E, de Wit Heidi, et al (2013), "Neurobeachin regulates neurotransmitter receptor trafficking to synapses", Journal of Cell Biology, 200(1), 61-80 47 Nichols Charles D, Becnel Jaime, Pandey Udai B (2012), "Methods to assay Drosophila behavior", Journal of visualized experiments, (61), e3795 48 Nicolini C., Fahnestock M (2018), "The valproic acid-induced rodent model of autism", Experimental neurology, 299(Pt A), 217-227 49 Nuytens K., Gantois I., Stijnen P., Iscru E., Laeremans A., et al (2013), "Haploinsufficiency of the autism candidate gene Neurobeachin induces autism-like behaviors and affects cellular and molecular processes of synaptic plasticity in mice", Neurobiology of disease, 51, 144-51 50 Pham Hang Thi Nguyet, Tran Hong Nguyen, Le Xoan Thi, Do Ha Thi, Nguyen Tue Trong, et al (2021), "Ilex kudingcha C.J Tseng Mitigates Phenotypic Characteristics of Human Autism Spectrum Disorders in a Drosophila Melanogaster Rugose Mutant", Neurochemical Research 51 Richdale Amanda L., Prior Margot R (1995), "The sleep/wake rhythm in children with autism", European Child & Adolescent Psychiatry, 4(3), 175-186 52 Samaco R C., McGraw C M., Ward C S., Sun Y., Neul J L., et al (2013), "Female Mecp2(+/-) mice display robust behavioral deficits on two different genetic backgrounds providing a framework for pre-clinical studies", Hum Mol Genet, 22(1), 96-109 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 53 Sandin Sven, Lichtenstein Paul, Kuja-Halkola Ralf, Larsson Henrik, Hultman Christina M., et al (2014), "The Familial Risk of Autism", JAMA, 311(17), 1770-1777 54 Savelyeva Larissa, Sagulenko Evgeny, Schmitt Jens Guido, Schwab Manfred (2006), "The neurobeachin gene spans the common fragile site FRA13A", Human Genetics, 118(5), 551-558 55 Semwal Deepak Kumar, Badoni Ruchi, Semwal Ravindra, Kothiyal Sudhir Kumar, Singh Gur Jas Preet, et al (2010), "The genus Stephania (Menispermaceae): Chemical and pharmacological perspectives", Journal of Ethnopharmacology, 132(2), 369-383 56 Shapiro, Herbert (1932), "The rate of oviposition in the fruit fly, Drosophila", The Biological Bulletin, 63(3), 456-471 57 Shulin P, Lei C, Guolin Z (1992), "Studies on medicinal isoquinoline alkaloids III: alkaloids of Stephania brachyandra", Natural Product Research Development, 4, 11-15 58 Simon Anne F, Chou M‐ T, Salazar Evelyn D, Nicholson Terriann, Saini Navdeep, et al (2012), "A simple assay to study social behavior in Drosophila: measurement of social space within a group", Genes, Brain and Behavior, 11(2), 243-252 59 Takhtajan Armen (1997), Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University, 10, 11, 89 60 Thomas Flatt (2020), "Life-History Evolution and the Genetics of Fitness Components in Drosophila melanogaster", Genetics, 214(1), 3-48 61 Tick B., Bolton P., Happé F., Rutter M., Rijsdijk F (2016), "Heritability of autism spectrum disorders: a meta-analysis of twin studies", J Child Psychol Psychiatry, 57(5), 585-95 62 Ueoka Ibuki, Pham Hang Thi Nguyet, Matsumoto Kinzo, Yamaguchi Masamitsu (2019), "Autism Spectrum Disorder-Related Syndromes: Modeling with Drosophila and Rodents", International journal of molecular sciences, 20(17) 63 Volders Karolien, Nuytens Kim, WM Creemers J (2011), "The autism candidate gene Neurobeachin encodes a scaffolding protein implicated in Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an membrane trafficking and signaling", Current molecular medicine, 11(3), 204217 64 Volders Karolien, Scholz Sabrina, Slabbaert Jan R, Nagel Anja C, Verstreken Patrik, et al (2012), "Drosophila rugose is a functional homolog of mammalian Neurobeachin and affects synaptic architecture, brain morphology, and associative learning", Journal of Neuroscience, 32(43), 15193-15204 65 Wang Jia Bei, Mantsch John R (2012), "l-tetrahydropalamatine: a potential new medication for the treatment of cocaine addiction", Future medicinal chemistry, 4(2), 177-186 66 Wise Alexandria, Tenezaca Luis, Fernandez Robert W, Schatoff Emma, Flores Julian, et al (2015), "Drosophila mutants of the autism candidate gene neurobeachin (rugose) exhibit neuro-developmental disorders, aberrant synaptic properties, altered locomotion, and impaired adult social behavior and activity patterns", Journal of neurogenetics, 29(2-3), 135-143 67 Wu S., Wu F., Ding Y., Hou J., Bi J., et al (2017), "Advanced parental age and autism risk in children: a systematic review and meta-analysis", Acta Psychiatr Scand, 135(1), 29-41 68 Xu Guifeng, Strathearn Lane, Liu Buyun, O‘Brien Matthew, Kopelman Todd G., et al (2019), "Prevalence and Treatment Patterns of Autism Spectrum Disorder in the United States, 2016", JAMA Pediatrics, 173(2), 153-159 69 Yang Kechun, Jin Guozhang, Wu Jie (2007), "The neuropharmacology of (-)stepholidine and its potential applications", Current neuropharmacology, 5(4), 289-294 70 Yasuda H., Yoshida K., Yasuda Y., Tsutsui T (2011), "Infantile zinc deficiency: association with autism spectrum disorders", Scientific reports, 1, 129 Trang web 71 CABI (2021), "Drosophila melanogaster (fruit fly, common)", Retrieved May 11, 2021, from http://www.cabi.org/isc 72 The United Nations, "World Autism Awareness Day", Retrieved March 05, 2021, from https://www.un.org/en/observances/autism-day/background Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn