Hướng dẫn lấy mẫu và bảo quản vi sinh, coliform, e. coli trong nước theo tiêu chuẩn việt nam TCVN 88802011. Tài liệu này dùng để tham khảo hướng dẫn chuẩn bị chai, dụng cụ lấy mẫu vi sinh. Tài liệu tham khảo TCVN 6663 1 (ISO 5667 1 Chất lượng nước Lấy mẫu Phần 1 Hướng dẫn lập chương trình lấy mẫu và kỹ thuật lấy mẫu TCVN 8880 201 Chất lượng nước Lấy mẫu và phân tích vi sinh vật TCVN 6663 3 (ISO 5667 3 Chất lượng nước Lấy mẫu Hướng dẫn bảo quản và xử lý mẫu
Tài liệu tham khảo - TCVN 6663-1 (ISO 5667-1), Chất lượng nước – Lấy mẫu – Phần 1: Hướng dẫn lập chương trình lấy mẫu kỹ thuật lấy mẫu - TCVN 8880:201: Chất lượng nước – Lấy mẫu phân tích vi sinh vật - TCVN 6663-3 (ISO 5667-3), Chất lượng nước – Lấy mẫu – Hướng dẫn bảo quản xử lý mẫu Lấy mẫu để làm gì? - Để xác định giá trị thông số vật lý, nồng độ chất hóa học, sinh học phóng xạ liên quan theo khơng gian thời gian - Với cặn đáy, để có thị trực quan chất chúng - Để ước tính thay đổi liên tục đối tượng quan trắc; - Để đánh giá xu qua thời gian không gian - Để tuân thủ để đạt chuẩn mực, tiêu chuẩn mục tiêu Mục tiêu lấy mẫu Phục vụ chương trình quản lý chất lượng nước: Các chương trình quản lý chất lượng nước thường liên quan đến việc kiểm soát nồng độ nhiều chất cần xác định giới hạn định Cần có kết để định liệu cần hành động hay không Các chương trình xác định tính chất lượng nước: Các chương trình xác định đặc tính chất lượng nước có mục đích để ước lượng nhiều thông số thống kê đặc trưng cho nồng độ nhiều chất cần xác định tính biến động chúng quãng thời gian xác định, hai Các chương trình điều tra nguyên nhân nhiễm bẩn nước Yêu cầu bình chứa mẫu vi sinh - Bình chứa mẫu thủy tinh nhựa PE, PP, PEFT … phải có khả chịu nhiệt độ cao 1750C 1h - Trong trình tiệt trùng lưu giữ mẫu, vật liệu bình chứa phải khơng tiết hóa chất ức chế sinh tồn vi sinh vật, khơng tiết hóa chất độc kích thích sinh trưởng Mẫu phải giữ kín mở phịng thí nghiệm cần phải ngăn ngừa nhiễm bẩn - Dung tích chai: với loại vi sinh vật dung tích chai 500ml đủ, lồi u cầu ni cấy tối đa 100 ml Một số trường hợp đặc biệt cần thể tích mẫu lớn như: nước đóng chai (250 ml cho thơng số); Đối với Legionella spp, Salmonella spp (đến lít) Đối với virus, kén Giardia, nang trứng Cryptosporidium, Amip nước sạch, kiểm tra từ 10 đến vài trăm lít nhiều Khử khuẩn chai • Nếu dùng lại, làm chai thủy tinh nút chúng chất tẩy rửa khơng độc, khơng có phospho, sau tráng kỹ nước cất nước loại ion • Khử khuẩn chai nồi hấp (121 ± 3)oC 15 Giữ nút chai lỏng không vặn chặt, để chỗ tất khơng khí nhiệt độ tăng, để tránh tượng chai nhựa bị đổ làm mát Vặn chặt nút sau khử khuẩn Khử khuẩn nồi hấp Nút thủy tinh riêng rẽ với chai, dùng giấy giấy nhôm để ngăn ngừa nút bị kẹt chặt làm nguội • Nếu cần, khử khuẩn chai lị sấy h (170 ± 10) oC Tách riêng nút thủy tinh nhám với chai dải giấy mảnh giấy để tránh dính chặt làm mát Chai phải truy tìm ngày khử khuẩn • Kiểm sốt hiệu q trình khử khuẩn thị hóa học sinh học • Nếu thực khử khuẩn phương pháp khác, khử khuẩn cách nhúng chai mở nước sơi 30 Ngay sau nhúng nước sôi, đổ chai đậy nắp nút nhúng vào nước sôi bọc giấy Khử hoạt tính chất khử khuẩn - Để đánh giá chất lượng vi sinh vật nước khử khuẩn chất oxy hóa (ví dụ clo, cloramin, bromin ozon), dừng hoạt động chất oxy hóa lấy mẫu Thêm tác nhân khử natri thiosunfat vào chai mẫu làm bảo quản trước trường - Thêm 0,1 ml dung dịch natri thiosunphat ngậm phân tử nước (ρ(Na2S2O3.5H2O) = 18 mg/ml) vào chai 100mL khử hoạt tính mg/l đến mg/l clo tự dư cách đủ khử cho phần lớn mẫu nước, tùy thuộc vào động lực khử hoạt tính - Natri thiosunphat khơng có ảnh hưởng lên mẫu dùng cho nước khơng bị clo hóa - Chất tạo phức (EDTA) khuyến nghị để bảo vệ vi khuẩn khỏi tính độc kim loại nặng đồng kẽm Kiểm tra tính vơ khuẩn chai - Phịng thí nghiệm phải đảm bảo tính vơ khuẩn chai chứa mẫu, tự chuẩn bị sản phẩm thương mại, làm thủy tinh nhựa Chai sản phẩm thương mại cần phải có chứng nhận khử khuẩn giống điều kiện chấp nhận, phép thử tính vơ khuẩn tiến hành lô sử dụng Điều liên quan đến lô chai sau dán nhãn, bổ sung chất khử hoạt tính phù hợp, bảo quản Kiểm tra tính vơ khuẩn chai VÍ DỤ: Các ví dụ quy trình thử sau (thường tiến hành với tỉ lệ 100 chai); a) Phương pháp lăn chai Phương pháp gồm cho 20 ml 50 ml thạch dinh dưỡng nóng chảy vào chai thử láng thành chai với thạch cách lăn chai làm mát (dưới điều kiện dòng nước nhỏ chảy qua cần) Ủ (22 ± 2) oC ngày không thấy phát triển khuẩn lạc b) Phương pháp môi trường nuôi cấy lỏng Phương pháp gồm lấy 20 ml đến 50 ml thioglycollat chất dinh dưỡng nuôi cấy khác vào chai, lăn chai để ướt hết thành chai ủ (22 ± 2) oC năm ngày Khơng thấy đục q trình khử khuẩn hồn tất Hóa chất dụng cụ Etanol, phần thể tích (C2H5OH) = 70%, isopropanol, phần thể tích [(CH3)2CHOH] = 70 %, dung dịch hypoclorit, ρ(ClO-) ≈ g/l Dung dịch natri thiosunphat ngậm phân tử nước, ρ(Na2S2O3.5H2O) = 18 mg/ml Bật lửa, diêm Đèn cồn Bình xịt khử trùng Bút đánh dấu, bút chì, nhãn Thiết bị lấy mẫu theo độ sâu Thùng bảo quản mẫu, chai chứa mẫu Găng tay vô khuẩn Đá lạnh Nhiệt kế Lấy mẫu từ vòi a) Để xác định chất lượng nước hệ thống phân phối (hệ thống chịu trách nhiệm nhà phân phối); b) Để biết chất lượng nước chảy trực tiếp từ vòi tiêu thụ - lấy từ vịi nước – (có thể thay đổi mạng cấp nước tòa nhà); c) Để biết chất lượng nước tiêu thụ, nghĩa lúc nước chảy khỏi vịi (có thể bị nhiễm bẩn) - Lấy tốt vòi gần với ống phân phối chính, khử khuẩn lửa thiết bị phù hợp - Để khử khuẩn miệng vòi nhựa, sau làm kỹ, ngâm chúng từ đến phút cốc dung dịch hypoclorit, etanol izopropanol Cách khác, dùng gạc dụng cụ tương tự để khử khuẩn mặt mặt Nước bể bơi Khảo sát thơng thường nước bể bơi liên quan đến lấy mẫu bề mặt (- 10 cm đến 30 cm) Sử dụng chai sạch, vơ khuẩn Nếu khơng có dịng chảy thẳng, ý để chọn điểm lấy mẫu phù hợp điểm lấy mẫu đại diện Chai đưa vào theo chiều ngang để tránh thiosunphat, sau để thẳng đủ lượng nước lấy Nước mặt Lấy mẫu lớp mặt (- 20 cm đến – 30 cm) cột nước sâu m đến 1,5 m Đưa chai úp xuống vào nước tới độ sâu lấy mẫu Tiếp sau, nạp chai cách quay phía hướng lên để tránh nhiễm bẩn Nếu có dịng chảy, giữ chai ngược dịng Nước thải Sử dụng găng dùng lần kẹp vô khuẩn để lấy mẫu bề mặt, để giảm thiểu rủi ro nhiễm bẩn cho nhân viên lấy mẫu Loại bỏ bụi bẩn khỏi bề mặt đầu chai hoặc đặt chúng túi vận chuyển riêng chúng với mẫu nước uống Vận chuyển bảo quản Phiếu lấy mẫu Nhận dạng đầy đủ dán nhãn cho chai, điền chúng vào phiếu lấy mẫu (nhật ký lấy mẫu) trước, sau lấy mẫu Phiếu lấy mẫu phải có tên địa khách hàng, danh sách thông số phân tích, ngày, thời gian địa điểm lấy mẫu tên người lấy mẫu Nguồn gốc mẫu mục đích phân tích cần thiết chúng giúp cho việc lựa chọn phương pháp Chi tiết khác cần cho việc diễn giải kết (ví dụ nhiệt độ, bioxit, điểm lấy mẫu thêm quan sát tượng ảnh hưởng đến chất lượng vi sinh vật mẫu nước) 2 Vận chuyển - Thời gian từ lấy mẫu đến phân tích phịng thí nghiệm ngắn tốt Đối với nước uống, phân tích tốt bắt đầu ngày làm việc - Làm mát mẫu – tốt (5 ± 3) oC q trình vận chuyển (ví dụ dùng hộp đá đá chảy) khơng có quy định khác tiêu chuẩn cụ thể Chú ý khơng làm đóng băng mẫu - Bảo vệ mẫu khỏi ánh nắng chiếu vào - Đối với mẫu có thời gian vận chuyển h, cần phải theo dõi ghi lại nhiệt độ - Điều kiện vận chuyển phải ghi lại Thời gian bảo quản Nhiệt độ bảo quản mẫu tối đa (h) bao nước oC gồm vận chuyển Chỉ thị Faecal, vi khuẩn sinh dưỡng E.coli (và vi khuẩn coliform) Enterrococci Clostridium perfringens (tế bào sinh dưỡng) R A R 12 12 12 18 18 18 5±3 5±3 5±3 Mầm bệnh Faecal Salmonella spp loài khác Enterobacteriaceae 12 48 Enterrovirut Nang trứng Crytosporidium Giardia cysts tháng 24 24 18 72 5±3 5±3 96 96 - 70 5±3 5±3 A - 20 Nhiệt độ xung quanh Quan sáta