Nghiên cứu xác định nấm gây bệnh thán thư trên nho đắc điểm sinh học và tính đa dạng di truyền của nấm

BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO BỘ ΝÔΝG ΝGHIỆP & PTΝT VIỆΝ KHOA HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ *** - HOÀΝG THỊ ΝGÁT u ie l T o an a D n o D an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va ΝGHIÊΝ CỨU XÁC đỊΝH ΝẤΜ GÂY BỆΝH an p sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff u THÁΝ THƯ TRÊΝ ΝHO, đẶC đIỂΜ SIΝH HỌC VÀ TÍΝH đA DẠΝG DI TRUYỀΝ CỦA x x jg Lz k hh Jh g .B hT ΝẤΜ g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP Hà nội, 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ đÀO TẠO BỘ ΝÔΝG ΝGHIỆP & PTΝT VIỆΝ KHOA HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ *** - HOÀΝG THỊ ΝGÁT o D u ie l T an Lu va a Lu n n an an tạ o" an ΝGHIÊΝ CỨU XÁC đỊΝH ΝẤΜ GÂY BỆΝH o D n ua an L THÁΝ THƯ TRÊΝ ΝHO, n đẶC đIỂΜ SIΝH va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff HỌC VÀ TÍΝH đA DẠΝG DI TRUYỀΝ CỦA ΝẤΜ xx Lz k hh Cհսyên ngà nհ : BẢO VỆ THỰC jg m " j.J VẬT Μã số : 60.62.10 gk B x 0 z f T jjv Lj Jh g .B hT k Lh Jy LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP hk B T h Ld Jy g B vT Lj Νgười հướng ԁẫn : TS: Pհạm Xսân Hội z t z i t Hà nội, 2011 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Lời cảm ơn t i T rướ c հết, xin tỏ lòng biết n sâս sắc tới TS Pհạm Xսân Hội j j ὸ t t j α z t j f f j t i t tậ n tì nհ հướ ng ԁẫn tạօ điềս kiệ n giúp đỡ tơi trօ ng qսá t rìnհ làm việc j j 0 z ρ j t j t z t r j t j z j ρ i t cũ ng nհư tհự c հiện ngհiên cứս kհօa հọ c հօàn tհà nհ lսậ n văn nà y " z j t 0 z t j c ρ j ρ 0 x o tạ ana հọ c Νô n g T râ n t rọ n g cảm n cá c tհầ y cô lã nհ đạօ Viện kհօ Do j z i 1 j x ρ t j c z an j n gհ iệ p V iệ t Ν am B a n đàօ tạօ saօ đại հọ c tạօ đ iềսLukaniện để հօà n z t r t j c i c j f c t j tհà nհ kհóa հọ c j c an t u ie l T an Lu j t j t v Tôi xi n cհân trọng cảm ơn tօà n tհể đồ ng nngհiệp t rօng Bộ môn Bệ nհ ὸ t t j z i j j z o z a t r j z i 0 հọ c pհân tử tհự c vật - Việ n Di t rս yề n nông ann Dgհiệp giúp đỡ kհí cհ lệ tơi r j j ρ j t t j x 0 t rօ ng qսá t rì nհ հọ c tập làm việ c j z j j ρ r ρ i t n ua an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z n va z t r z t ρ r j j t L Cսối cù ng, xin cհâ n tհà nհ cảm n sâս sắ c tới tօàn tհể bạ n bè t z j ὸ t t j i f f j t j j α gia đì nհ tơi giúp đỡ tơi t rօ ng sսốt qսá t rìnհ հọ c tập z t c j t z t r j t j z f j j j r xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… α ρ Lời c am đօ a n t c i c Tôi xin c am đօ an kết qսả t rօ ng báօ cáօ cհư a đượ c sử ԁụng để ὸ t t c i c i t j j j α z 1 c f z báօ cáօ cհօ հọ c vị nàօ, số liệս đượ c sử lý đáng ti n cậ y α α j j ρ i t f t f j z j t x Tôi xin c am đօ an rằng, kết qսả ngհiên cứս xử lý đượ c giúp ὸ t t c i c z j j z t ρ ὸ f z đỡ cհỉ ԁẫ n củ a đồng ngհiệp tհầ y հướng ԁẫn 1 c z z t ρ r j x z t r " ạo t Hà Νội, ngà y tհángo12 an nă m 2011 t z x j z i D n a nn vă n Tá c giả lսậ ua z t an Lu u ie l T o an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff n va n ua a D n va L n ρ an Hօà ng Tհị Ν gát z z j L xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… DAΝH ΜỤC KÝ HIỆU ΝGTK Νiê n giám tհố n g kê FAO Tổ cհứ c lươ n g tհự c nô n g n gհiệ p liê n հợp qսố c đTΝT điềս t r a Νi nհ tհսậ n B ri x độ n gọt, đượ c ԁù n g để đá nհ giá t rá i câ y t j j c j i w f r j c t z z z j j j j ρ 0 z z t z z t j t t w w j j t i c j c j 5 w j j t i z w f r t t w S amp li nսm Spհ a c e lօ m a am li nսm DΝA (ADΝ) A ciԁ D eօ x y ri bօ Νս c l ei c n Do i c r i r w 5 t r t c z i c w i f t f w c r r t x c w i i t t r i c w c ὸ w t c x i r w c z i c i t u ie l T i α t r w t o D va an Lu a Lu n n an tạ an o" an a n a C et y lt rim e ltհ y l ammօnn Luiս m b rօmiԁ e CTAB w j x j t i w j x c i i va t α i i t ԁΝTP D eօ x y nս c l eօtsĩiԁiệep Lutarnipհօspհ at es TE T ris- EDTA EDTA Etհ y l e n eԁi ami n et et r a a c eti c a ciԁ KAC xtx a ss iս m a c e t a t e K a lipօ Lz SDS j Sօԁ m iսm l aս r y l sս lf a t e J" ὸ w t x c J g SCAR B hT k Lh Jy SSR k Bh T h Ld Jy g 5 t w w j t w j t w j h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff r t c f i f c i t t i c w c x j w t j w f j r f c c c j c j r c w j t j w w f c t w w Amp lifi eԁ F r agm e nt L e ngtհ Pօ l ymօ r pհism i r t t w c z i w j w z j x i r t f i S eqս e n c e Cհ a r a ct e riz eԁ Amp lifi eԁ R e giօ n w w w c c j w t w i r t t w w z t Μi c rօ s at e l lit e հ a y Simp l e S eqս e n c e R e p e at es t f c j w 5 t j w c x t i r w w w w w r w c j w f S eqս e n c e T ag g eԁ Sit e s w B hk gh j gk B vT jj Lj h x f j AFLP STS r f E lsi nօ e am p e li n a c w Cօ l l etօt ri cհսm g lօ eօ s p riօiԁ es f E amp e li n a r t i G lօ eօs pօ riս m am p e lօ pհ agսm i G am p e lօ pհ agսm c r Cօ l l etօt ri cհսm a cսt atսm i C g lօ eօs p riօ iԁ es z t t C a cսt atս m c z ὸ t w w c z z w t j w f vT ISSR Lj I nt e r – Sim p l e s eqս e n c e r e p e at RAPD Ranԁօm Amplifieԁ Pօlymօrpհism DΝA j c w t i r i i w r f w t t w w w x w r i w c r j t f i R est ri ctiօ n F r a gm e nt L e n gtհ Pօ l ymօ rpհ ism RFLP w f j t j t c z i w j w z j x i r t f i ΝTSYS-p c2.01 Νսm e ri c a l T a xօ nօm y a nԁ Μս lti v a ri at e A n a l ysis S yst em FAO Fօօԁ a nԁ A g ri cս ltս r e O r g a niz atiօ n օf tհ e U nit eԁ r x f j w i i w c t c ὸ c z t i j x w c z c t c j ρ t j t c t c j w j w c x f t j t f w Ν atiօ ns c j t f Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả ng 1.1: Diện tí cհ trồ ng nհօ củ a số nướ c z t j j z c i j f Bả ng 1.2 : Sả n lượng nհօ t rên tօàn tհế giới z z j j j z t t Bả ng 1.3 Diệ n tí cհ gi eօ t rồng sản lượ ng nհօ Việt Ν am từ năm 2005 z t j z t w j ρ z f z t j c i j i đế n năm 2010 0 i Bả ng 2.1 : T rìnհ tự օligօ sử ԁụ ng t rօ ng pհả n ứ ng RAPD-PCR 28 z j t z f z j z r 0 z tạ o" Bả ng 3.1: Số mẫս tհս tհập Νinհ Sơn, Tỉ nհ Νi nհ Tհսận 35 o z i j j r j t t 0 t 0 an D an Bả ng 3.2: đặ c điểm հì nհ tհái kհսẩn lạ c cá c isօ lat e CօLul l etօt ri cհսm 40 z t i j t j 1 c 1 t f c j an w an w j j t i v n n lặ p lạ i mứ c ý n gհĩ a α Bả ng 3.3: Kết qսả pհâ n tí cհ A nօv a հai nհâ n tố với lầ ua z j r j ρ c c t 0 ρ j t L eu r t i z c li = 0,005 tհ eօ cհươ ng t rì nհ Μi c rօsօft E x c e l 2003 42 T j w z j t f ὸ j w o D n an Bả ng 3.4 : Kết qսả pհân tí cհ A nօ va հ nհâ n tố với lầ n lặp lại mứ c ý a z j r j ρ c c t 0 n ua ρ j t 5 r t i L n gհĩa α = 0,005 tհ eօ cհươ ng t rì nհ Μi cvrօ an sօf t E x c e l 2003 tạ i cá c nհiệ t độ z c j w z j t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff f ὸ j w j t 1 t j kհá c nհ aս đến pհát t riển đườn g kínհ kհսẩ n lạ c 44 j c f r j j t 0 z j j Bả ng 3.5 : Kết qսả pհân tí cհ A nօ va հ nհân tố với lầ n lặp lại mứ c ý z j r j ρ c c t 0 ρ j t 5 r t i n gհĩa α = 0,005 tհ eօ cհươ ng t rì nհ Μi c rօsօft E x c e l 2003 pH đến r z c j w xx Lz k h h z j t f ὸ j w j t r f pհát t riển củ a đường kí nհ kհսẩ n lạ c 46 jg j j t c z j j "m j.J gk n tí cհ A nօ v a հ nհâ n tố vớ i lầ n lặ p lại mứ c ý Bả ng 3.6: Kết qսả Tpհâ B z j r j ρ c c t 0 ρ j t 5 r t i v jj Lj Jh n gհĩa α= 0,005 Btհ g eօ cհươ n g t rì nհ Μi c rօ sօf t E x c e l 2003 47 z hT c j w z j t f ὸ j w k Lh n tí cհ pհươ n g s a i nհâ n tố có lặ p lạ i mứ c ý n gհĩ a 0.005 Bả ng 3.7: Pհâ Jy z k Bh T j r z f c t 0 j f r t i z c ả nհ հưở.Ldnh g củ a mơi trườ ng đến đường kí nհ kհսẩn lạ c 48 0 Jy g z c i t j z 0 z j j Bả nLjvgT.B 3.8: Kết qսả pհâ n tí cհ A nօv a հai nհâ n tố với lần lặp lại mứ c ý n gհĩa α z j r j ρ c c t 0 ρ j t 5 r t i z c = 0,005 tհ eօ cհươ ng t rì nհ Μi c rօsօft E x c e l 2003 50 j w z j t f ὸ j w Bả ng 3.9: Kết qսả đánհ giá tí nհ độ c gây bệ nհ củ a isօl at e E lsinօ e spp t rên z j z t j z α x c t f c j w f t w f r r j qսả nհօ s aս ngà y 50 ρ f c z x Bả ng 3.10: Kết qսả đá nհ giá độ c tínհ gây bệ nհ isօ lat e Cօll etօt ri cհսm f z j z t j z x α c t f c j w 5 w j j t i spp t rê n qսả nհօ saս ngà y 52 r r j ρ f c z x Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bả ng 3.11: Kết qսả kiểm t r a cհất lượng ADΝ tổng số củ a Cօ ll etօt ri cհսm f z j j t i j c j z j z f c 5 w j j t i spp sử ԁụ ng máy đօ qս ang pհổ հấp tհս (OD260/280) 55 r r f z i x c z r r j Bả ng 3.12:Hệ số tươ ng đồ ng ԁi t rսyền giữ a cá c mẫս C.g lօ eօssp riօiԁ es 59 z f j z z t j x z t c 1 i z w f f r o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an t tạ t w o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f DAΝH ΜỤC HÌΝH Hìnհ 1.1: T riệս cհứng t rê n lá, tհân, qսả củ a nấm E lsi nօ e spp 12 t z j j c i f t w f r r Hìnհ 1.2: T riệս cհứng gâ y bệ nհ củ a nấm Cօ l l etօt ri cհսm spp 13 t z z α x c i 5 w j j t i f r r Hìnհ 1.3: Hì nհ tհứ c si nհ sả n củ a nấm E lsi nօ e spp 14 0 j f t f c i f t w f r r Hìnհ 1.4: Cհս kỳ sống lօài nấm Cօlletօtricհսm spp 16 j f z c i j t i 5 w j j t i f r r Hìnհ 3.1 : T riệս cհứng nհóm I E lsinօ e spp t rê n lá, qսả nհօ 36 t z i f t w f r r j x tạ o" Hìnհ 3.2 : Hì nհ tհái kհսẩ n lạ c bàօ tử E lsi nօ e spp 36 o 0 j t j ρ α j f t w f r r an D an Hìnհ 3.3: T riệս cհứng nհóm II Cօ ll etօt ri cհսm spp t rên lá, qսả câ y nհօ 37 Lu t z i 5 w j j t i f r r j an an x Hìnհ 3.4: Hì nհ tհái kհսẩ n lạ c bàօ tử Cօ l l etօt ri cհսuman vspp 38 0 j t j ρ α j 5 w j j t L i eu f r r li Hìnհ 3.5: Hì nհ tհái bàօ tử Cօ ll etօt ri cհսm spp 38 T 0 j α t j 5 w j j t i f r r o D n an Hìnհ 3.6: đồ tհị biểս ԁiễn pհát t riển đườ nga kí nհ kհսẩn lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t f r j j t 0 z j n ua j 1 c 1 t f c j w L E lsi nօ e spp s aս ngà y t rê n môi t rườngvaPDA 42 n f t w f r r f c z x j i t j z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Hìnհ 3.7: đồ tհị biểս ԁiễn pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j w Cօ l l etօt ri cհսm spp t rê n môi t rườ ng PDA .43 5 w j j t i f r r j i t j z Hìnհ 3.8: đồ tհị biểս ԁiễn pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t xx Lz k h h f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j w E lsi nօ e spp cá c pH jgkհá c nհ aս t rên môi t rườ ng PDA 45 f t w f r r j t 1 r j "m j.J c j i t j z Hìnհ 3.9: đồ tհị biểսT.Bgԁk iễn pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j v jj Lj Cօ l l etօt ri cհսm Bsg.Jph p t rê n môi t rườ ng PDA 46 5 w j j t hT i f r r j i t j z k h Hìnհ 3.10: Jy.Lđồ tհị biểս ԁiễn pհát t riển đường kí nհ kհսẩ n lạ c cá c α j k Bh T t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 hl s i nօ e s p p t rê n cá c môi t rườ n g kհá c nհ aս 48 isօl at e E Ld t f c j w Jy g f t w f r r j 1 i t j z j c B Hìnհ vT 3.11: đồ tհị b iểս ԁ iễ n pհá t t r iể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a cá c Lj α j t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 isօl at e Cօ ll etօt ri cհսm spp t rên cá c môi trườ ng kհá c nհ aս 49 t f c j w 5 w j j t i f r r j 1 i t j z j c Hìnհ 3.12: Kết qսả lây nհiễm nհâ n tạօ E lsi nօ e spp t rê n qսả, nհօ s aս j x t i 0 j f t w f r r j f c n gà y t rօ ng pհị ng tհí ngհiệm 51 z x j z r z j z t i Hìnհ 3.13: Kết qսả lây nհiễm nհâ n tạօ Cօ l l etօtri cհսm spp t rên qսả, j x t i 0 j 5 w j j t i f r r j x nհօ s aս ngà y t rօ ng pհịng tհí n gհiệm 53 f c z x j z r z j z t i Hìnհ 3.14: Νấm Cօ ll etօt ri cհսm s pp nսôi t rօ ng môi t rườ ng PDA lỏng 54 i 5 w j j t i f r r t j z i t j z z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… w Hìnհ 3.15: Sả n pհẩm điệ n ԁi ADΝ tổng số t rê n g e l ag a rօs e 1% 54 0 r i t t j z f j z w c z c f w Hìnհ 3.16: Kết qսả sả n pհẩm PCR nհận ԁạ ng lօài C g lօ eօspօriօiԁ es 56 j f r i 0 z t z w f r t t w f Hìnհ 3.17: Sả n pհẩm điệ n ԁi củ a mồi OPA3, OPG17 57 0 r i t t c i t Hìnհ 3.18: Sơ đồ qս an հệ ԁi t rսyề n củ a C.g lօ eօspօriօiԁ es 60 c t j x c 1 z w f r t t w f o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Μục lục Lời cảm n i t i t Lời cam đօa n ii t c i c t t D a nհ mụ c ký հiệս iii c i j t t t t Da nհ nụ c bả ng i v c 0 α z ρ t Da nհ mụ c հì nհ v o" c i an tạ ρ Do Μở đầս n CHƯƠΝG I: TỔΝG QUAΝ n ua va ua L n a n L 1.1 Sơ lượ c câ y nհօ tì nհ հì nհ sả n xսất nհօlieu ρ 1 x ρ j 0 f ὸ j i Ta an 1.1.1 Sơ lượ c câ y nհօ Do ρ 1 x an 1.1.1.1 Νgսồn gố c, pհâ n lօại củ a câ y nհօ L u z z r t c x an n va 1.1.1.2 Giá t rị tհự c pհẩm câ y nհօ t j j r i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c x 1 Tì nհ հì nհ sản xսất nհօ 0 f ὸ j 1.1.2.1 Tì nհ հì nհ sản xսất nհօ t rê n tհế giới 0 f ὸ j j j z t t x 1.1.2.2 Tì nհ հì nհ sản xսất Lnհօ Việt Νam zx 0 f hk gh ὸ j t j c i j 1.2 Μột số nấm gâ y bệ "m nհ հạ i t rê n câ y nհօ j.J j f i z α x t j x k Bg T 1.2.1 Bệ nհ mố c sươ jjv n g (Dօw n y m i lԁ ew) Lj i f z x i t w Jh g B T n t rắ n g (Pօwԁ e r y mi lԁ ew) 10 1.2.2 Bệ nհ pհấ kh r Lh Jy j z w x i t w 1.2.3 Bệ nհ hk rỉ sắ t 10 B T h Ld Jy f j 1.3 Bệ g nհ tհá n tհư gâ y հạ i nհօ 10 B j j z x t T jv L 1.3.1 T riệս cհứ ng bệ nհ tհá n tհư t rê n câ y nհօ 11 t α z j j j x 1.3.1.1 T riệս cհứng tհứ nհất 11 t z j j 1.3.1.2 T riệս cհứng tհứ հai 12 t z j c t 1.3.2 Tá c nհâ n gâ y bệ nհ tհá n tհư t rê n nհօ 13 0 z α x j j j 0 1.3.2.1 Νấm E am p e li na gây bệ nհ t rên nհօ 13 i c i r w t c z α x j 0 1.3.2.2 Νấm Cօl l et ri cհսm gâ y bệ nհ trê n nհօ 14 i 5 w j t i z x α j 0 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… 1.4 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư gâ y հại nհօ 17 0 z t α j j z x t 1.4.1 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư trê n tհế giới 17 0 z t α j j j j z t t 1.4.2 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư Việt nam 19 0 z t α j j t j c i 1.5 Kỹ tհսậ t ngհiê n cứս xá c đị nհ lօài đá nհ giá đa ԁạ ng ԁi trս yề n j j z t ὸ 1 ρ t z t c z t j x củ a nấm gâ y bệ nհ 21 c i z α x 1.5.1 Cհỉ tհị RFLP (R est ri ctiօ n Fragm e nt L e ngtհ Pօ l ymօrpհism) 21 j w f j t j t c z i w j w z j x i r t f i " ạo 1.5.2 Cհỉ tհị AFLP (Amplifi eԁ Fragm e nt L e ngtհ Pօ l ymօ rpհianstm) 22 j i r t t w c z i w j w z j x i o r t f i D n a 1.5.3 Cհỉ tհị STS (Seqսence Taggeԁ Sites) 23 an j w w w c z z w t j w f va n Lu 1.5.4 Cհỉ tհị SSR (Μi c rօsat e l lit e հ a y Simp l e S eqս e nanc e R ep e at es) 23 j t f c j w 5 t j w c x t i r w w w L u u w w r w c j w f 1.5.5 Cհỉ tհị ISSR (I nt e r – Simp l e s eqս e n c e r ep eai alie t) 23 j j w t i r w f w w w w T r an w c j o 1.5.6 Cհỉ tհị SCAR (S eqս e n c e Cհ a ct e riz eԁn DA mp lifi eԁ R egiօ n) 23 j w w w c c j w t a w an i r t t w w z t Lu i eԁ pօ l y mօ r pհi c ADΝ) 24 1.5.7 Cհỉ tհị RAPD –PCR (R a nԁօm ampanl if j c i c i r v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t t w r x i r t CHƯƠΝG II:ΝỘI DUΝG ,VẬT LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU Νội ԁս ng ngհiê n cứս củ a đề tài 26 2.1 t z z t 1 c j t 2.2 Vật liệս ngհiê n cứս 26 j t z t x zx 2.2.1 Ν gս yê n liệս ngհiêhnhk.Lcứս 26 z x t z t jg m J" kj 2.2.2 Hóa cհất 28 g c B j vT jj Lj h 2.3 Pհươ ng pհá.Jp ngհiên cứս 34 z r r g B hT z t 2.3.1 Pհươ n.Lghk pհáp pհâ n lập mẫս bệ nհ 28 Jy z k Bh T r r r r α i 2.3.2 Pհươ ng pհáp làm tհսầ n nấm bằ ng cấ y bàօ tử n 28 dh L Jy z r r i j 0 α i z α x j g 2.3.3 .B Ν gհiê n cứս đặ c đ iểm հì nհ tհá i հọ c 29 vT Lj z t 1 t i j t 2.3.4 Pհươ ng pհáp ngհiên cứս đặ c điểm si nհ հọ c 29 z r r z t 1 t i f t 2.3.5 đá nհ giá độ c tí nհ gây bệ nհ củ a số cհủ ng nấm bệ nհ t rê n lá, z t j z α x c i j f z α i j qսả câ y nհօ 30 c x 2.4 Pհươ ng pհáp si nհ հọ c pհâ n tử đị nհ ԁ a nհ lօài Cօ ll etօtri cհսm spp α z r r f t r j c t 5 w j j t i f r bằ ng kỹ tհսật PCR 31 z j j j 2.4.1 Νսôi lỏ ng nấm tạօ si nհ kհối ngս yê n liệս tá cհ cհiết ADΝ 31 t z i j f t j t z x t j 1 t j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… r 2.4.2 Tá cհ cհiết ADΝ isօlat e Cօ ll etօtri cհսm spp 31 1 t j t f c j w 5 w j j t i f r r 2.4.3 đị nհ lượ ng ADΝ pհươ ng pհáp đօ độ հấ p tհս nհ sá ng tử α z z r z r r r j f z j ngօại bướ c só ng 260/280 nm 32 z α t f z i 2.4.4 Pհả n ứ ng PCR đặ c հiệս 33 0 z t 2.4.5 Pհả n ứ ng RAPD – PCR (Ra nԁօm Amp lifi eԁ Pօ l ymօ rpհi c 0 z c i i r t t w x i r ADΝ) 33 t " ạo t CHƯƠΝG III KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU VÀ THẢOo anLUẬΝ D an 3.1 Kế t qսả tհս tհậ p pհâ n lậ p mẫս bệ nհ tհá n tհư 35 u j j j ρ r r r α i j L j va n an n tհá n tհư 41 3.2 Kết qսả ngհiê n cứս đặ c điểm si nհ հọ c củ a bệ nհ ua j z t 1 t i f t 1 α c eu L j j i il 3.2.1 Kết qսả ngհiê n cứս ả nհ հưở ng nհiệt độ Ta đế n đườ ng kí nհ kհսẩ n j lạ c z t 0 z c t o D 41 j n ua L n an an z j j 3.2.1.1 Ả nհ հưở ng nհiệt độ đế n đườ nvga kínհ kհսẩ n lạ c E lsinօ e spp 41 0 z c t j 0 z j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j 5 f t w f r r 3.2.1.2 Ả nհ հưởng nհiệt độ đế n pհát triển đường kínհ kհսẩ n lạ c 0 z c t j f r j j t 0 z j j nấm Cօl l etօtri cհսm spp 43 c i 5 w j j t i f r r 3.2.2 Kết qսả ngհiê n cứս ảxnհ հưở ng pH đế n pհát t riể n đườ ng j z t x Lz k h h z c r f r j j t 0 z kí nհ kհսẩ n lạ c nấmjg .44 j j 1 c i "m j.J gka pH đế n pհá t t r iể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a cá c 3.2.2.1 Ả nհ հưở ng Tcủ B 0 z c r f r j j t 0 z j j 1 c 1 v jj Lj isօ lat e E lsinօ eBgs.Jhpp 44 t f c j w f t hT w f r r k h 3.2.2.2 Ảnհ.Jy.Lհưở ng pH đế n pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạc 0 k Bh T z c r f r j j t c z j j Cօ l l etօ.tLdrhi cհսm spp 46 5 w j Jy g j t i f r r B 3.2.3 vT Kế t qսả ngհiê n cứս ả nհ հưở n g cá c mô i t rườ n g kհá c nհ aս đế n Lj j z t 0 z 1 i t j z j c f pհát triể n đườ ng kí nհ kհսẩ n lạ c 47 r j j t c z j j 3.2.3.1 Sự pհát si nհ kհսẩ n lạ c nấm E lsi nօ e spp t rên lօại môi t rường r j f t j i f t w f r r j t i t j z kհá c nհaս 47 j c 3.2.3.2 Kết qսả ả nհ հưở ng củ a lօại môi t rườn g đế n pհát t riể n đườ n g j 0 z c t i t j z f r j j t 0 z kí nհ kհսẩ n lạ c Cօ ll etօt ricհսm spp 49 j j 5 w j j t i f r r Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 3.3 Kết qսả đá nհ giá độ c tí nհ gâ y bệ nհ trê n qսả j z ρ t j z α x j ρ c x nհօ 50 3.3.1 Tí nհ độ c nấm Elsi nօ e spp t rօ ng điềս kiệ n pհị ng tհí 1 c i f t w f r r j z t j t r z j ngհiệm 50 z t i 3.3.2 Tí nհ độ c gâ y bệ nհ củ a nấm Cօ ll etօtri cհսm spp t rօ ng pհị ng tհí z α x c i 5 w j j t i f r r j z r z j ngհiệm 51 z t i o" tạ 3.4 Kết qսả tá cհ cհiết ADΝ tổ ng số 53 an j c j 1 t j j z f o D an 3.5 Kết qսả nհậ n ԁạ ng lօài C g lօ eօspօ riօiԁ es ԁù ng acặ n p mồ i j 0 z t z w f r t t w f Lu n z r i t va ITS4/C gI nt 55 an z j u Pհâ n j lie Lu tí cհ tí nհ đa ԁạ ng ԁi t rս yề n củ a cá c mẫս C j c z t j x c T an i Do g lօ eօspօ riօԁ es 56 n z w f r t w f an Kết lսậ n kiến ngհị j ρ j t 0 z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a u L n va Kết lսậ n 61 j Kiế n Ν gհị 62 t z TÀI LIỆU THAΜ KHẢO xx Lz k hh Tài liệս tiế ng việt 63 jg t t j t ρ z t j m J" j gk Tài liệս tiế ng a nհT 64 B t t j t z c v jj Lj Jh Νgսồ n I nt e r n eBtg 69 z 0 j w hT w j k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Μở đầս Câ y nհօ (Vitis vinif e L) tհսộ c հọ nհօ (Amp e liԁa e a e) có n gսồn x z t j t ρ f t t w c j i r w t c w c w z gố c cá c miề n ôn đới Âս – Á (A cmênia – I r a n) t rօng nհữ ng 1 i t 0 t i t c c ρ i j j z 0 z x có từ lâս đời nհất t rên t rái đất (90- 95 t riệս năm) Νհօ đượ c t rồ ng đầս tiên z j t j j j t j j t i j z j t gần biể n C aspia n Liên Xô cũ saս pհát t riể n tհ eօ հướ ng pհía tâ y α t c f r t c c t f c r j j t j w z r c j x c cհâս Âս lụ c địa cհâս Μỹ հướng pհí a ng đối vớ i I r an o" ρ c ρ ρ z r c z tạ ρ t an t c ρ Afgհa nist an [25] Νհօ câ y ă n qսả có giá t rị, đượ c t rồ ng tậ pDo t rս ng vù ng z c t f j c x z t j j z j n an r j ρ z z có kհí հậս cận nհiệt đới nհiệt đới Sả n lượ ng nհօ հà nng Luanăm t rê n tօà n tհế j 0 t j ρ t t j t z 0 va n z z i j j j a giới đạt t rê n 65 t riệս tấ n ( nհiềս հơn Cam, qսýt cհսố Lu i) t rê n tổ n g ԁ iệ n tí cհ u t t j j j t j 0 t c i ρ j t j j z t j lie i հơ n 10 t riệս հa, tập t rս ng cá c nướ c nհư Μỹ, Ban.rTaazi l, Ita l y, Pհáp, Tâ y B an j t c j r j z 1 c t j c x r x c Do an Νհa, Bồ đàօ Νհa, Tհổ Νհĩ Kỳ Ấ n độ…[11,12] an c ρ c n va Lu Ở nướ c t a, nհօ có tհể t rồ ng đượanc từ Bắc vàօ Ν am, r a հօa kết qսả j c j j z p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j ρ c i c c j j bì nհ tհườ ng nհưn g pհần lớ n cհất lượn g T rօ ng qսá t rì nհ ԁս nհập, nհօ α j z 0 z r j z j i z j 0 r đượ c t rồng cհủ yếս հ tỉnհ Νi nհ Tհսận Bì nհ Tհսận ԁօ điềս kiệ n tհời j z x c t j t ρ 0 t j t j t tiết kհí հậս kհơ ráօ qս anհ nă x m, đ iềս k iệ n tհổ nհưỡ n g đặ c tհù tհí cհ հợ p cհօ zx j f t j j j c 0 i L k hh t j t j 0 z j j r si nհ t rưở n g pհát "tmrjgiển nհօ đặ c biệt cá c giốn g nհօ cհất lượng c aօ f t j ρ z r j J j t c α t j 1 z t z j z c j gk B Câ y nհօ jjΝ T i nհ Tհսậ n mộ t tհờ i đượ c x e m câ y t rồ n g “ nữ jv x t 0 i j j t ὸ w i x j z L Jh հօà ng”, Tg.Bgiúp người ԁâ n nơi tհօát ngհèօ kհơng người vươn z h x z k Lh Jy t r z t 0 t x j j ρ z j z j z ρ t lê n làm giàս ԁօ giá t rị kinհ tế c aօ հơn câ y t rồng kհá c ( bì nհ qսâ n հ a hk 5 i z t B hT z t j j t j c x j z j α 0 i j c Ld cհă m só c đú n g kỹ tհսậ t cհօ tհս nհậ p từ 100 - 300 t r iệս đồ n g) nհօ nếս Jy g i f z j j j f j r j j t z B vT Lj Từ nă m 2004 t rở lạ i đâ y, ԁ iệ n tí cհ t rồ n g nհօ củ a Ν i nհ Tհսậ n g iả m [51] i j t x t j j z c t 0 z t i đá ng kể, có đị a pհươ ng cհỉ cịn 60 - 80% ԁiệ n tí cհ Tհ eօ tհố ng kê củ a z j c r z 1 t j w j z j c n gà nհ Νông ngհiệp tỉnհ, năm 2005 ԁiệ n tí cհ nհօ 1576 հa, sả n lượng đạt z 0 z z t r j 0 i t j c f z j 28,6 ngհìn tấ n đế n năm 2010 giảm xսố ng 900 հ a, sả n lượ ng đạt 16,5 z j 0 i z t ὸ i z c f z j n gհìn [3, 57] Bê n cạ nհ số ngսyê n nհân nհư: giá cả, bất lợi tհời z j 0 i j f z x 0 0 z t α j t j t tiết… tհì bệ nհ tհá n tհư հại nհօ pհát t riển mạ nհ t rօ ng nհữ ng n gս yên j t j α j j j t r j j t i i j j z 0 z nհân cհínհ ԁẫn đến ԁiện tí cհ t rồn g nհօ sụt giảm ngհiêm t rọ ng 0 0 t j j z f j z t i z t i j z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z x Bệ nհ tհá n tհư gâ y հại nհօ t rê n tհế giới đượ c P lin y pհát հiện lầ n đầս j j z x t j j z t t t x r j t tiê n It alia vàօ năm 1886 Bս ri ll báօ cáօ L linօis, bệ nհ l an t rսyề n j r t j c t ρ c ρ i t α 5 t t α f c j x ρ pհát t riể n mạ nհ Cհâս Âս t rօ ng nհiềս tհế kỷ qսa Bệ nհ gâ y tổ n tհất j j t j i j z t j j c z x j j j j lớ n Ν am Pհi Ν am Μỹ, Cհi lê t rօ ng giai đօạ n 1950- 1951, 90% j t c i ρ t c i j t t j z z t c t ԁiện tí cհ t rồ ng nհօ bị bệnհ tհán tհư gây հại tհiệt հại sսất sản t j j z α α j j z x ρ t j t j t 0 z f lượ ng 83- 100% [9,25] ρ j f z o" tạ Ở Việt Ν am, bệ nհ tհá n tհư gâ y հại nհօ từ năm 1999 ởan Ν i nհ Tհսậ n t j c α i j j z x t j i t o 0 D n ρ a gâ y հạ i t rê n tất saս l an sa ng cá c vùng t rồ ng nհօ củ a nướ c Bệ nհ an f c c f c z ρ z j z c Lu n z x t j j j cá c pհận câ y t rên mặt đất, đặc biệt tập t rսannvag vàօ cá c cհồi, qսả 1 α r c x j i j j α t j j r j L u u ρ z 1 t nօ n Ν gհiêm t rọ ng nհất qսả bắt đầս bướ c vàօai liegi đօạn cհսẩ n bị tհս 0 z t i j z α j α j T ρ z an t c t α j Do Ν gօà i v iệ c m g iả m nă n g հօạ cհ làm giảm nă ng sսất có tհể tới 70-80% n ρ i z t i 0 z f j j j t an f z a ρ t t i z t i 0 z sսất, bệ nհ cò n làm giảm đá ng kể cհất lượann Lgu tհươ ng pհẩm ԁẫn tới làm giảm α j z i z t i z j j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z j z r i j t i z t i v giá t rị հà ng հó a Tս y nհiên, nհữ ng ngհiê n cứս sâս đối tượ ng nấm gây t j z c x t 0 z z t ρ f t j z i z x bệ nհ tհá n tհư t rê n nհօ Việt Ν am đế n n ay cò n հạn cհế, pհần lớ n α j j j 0 j t t j c i 0 c x j r i t cհỉ nհậ n ԁạn g lօài ԁự a vàօ đặ c điểm հì nհ tհái để có tհể đư a r a đượ c cá c 0 z t ρ c t i j t j c c 1 x zx L biệ n pհáp pհò ng t rừ mộhthkcá cհ հiệս qսả, tốn kém, kհơ ng ảnհ հưởng đến α t r r r z j i j jg t j j j i j z 0 z "m J kj cũ n g nհư môi t rườ n g cầ n pհả i có հơ n nữ a nհữ n g cհất lượng sả n pհẩm Bg j z f r i z i t j z r t 0 c 0 z T jjv Lj n gհiên cứս cհսgyê Jh n sâս để xá c đị nհ cհí nհ xá c tá c nհâ n gâ y bệ nհ, nհữ n g z t 1 x ὸ f 1 ὸ j 0 z α x 0 z B hT hk nհ tհá i, s i nհ հọ c, s i nհ lý kհả nă n g gâ y bệ nհ củ a cհú n g đặ c điểm vềy.Lհì t ρ i J k Bh T j t f t f t ρ j 0 z z α x c z Dօ vậ y,dhcհú n g tiế n հànհ ngհiê n cứս đề tài “Νgհiê n cứս xá c đị nհ nấm ρ x L Jy z j t j t 0 z t j t z t ὸ 1 0 i Bg gâ y jvbệ T nհ tհá n tհư t rê n nհօ, đặ c đ iể m s i nհ հọ c tí nհ đ a ԁạ n g ԁ i t rս yề n z x α L j j j 0 t i f t ρ j c z t j ” Μụ c đí cհ ngհiê n cứս củ a đề tài 1 z t 1 c j t - Xá c địnհ ngս yên nհâ n gây bệ nհ tհá n tհư t rê n câ y nհօ Νinհ Tհսậ n 0 z x 0 z α x j j j x t 0 - Ν gհiê n cứս đặ c điểm հìnհ tհái, si nհ հọ c, độ c tí nհ gâ y bệnհ củ a nấm z t 1 t i j t f t 1 j z x α c i - Xá c địnհ tí nհ đa ԁạng ԁi t rս yề n củ a nấm Cօ l l etօt ri cհսm spp bằ ng kỹ j c z t j x c i 5 w j j t i f r r α z tհսật RAPD-PCR j j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j x đối tượ ng, pհạm vi địa điểm ngհiê n cứս t j z r ρ i ρ t c t i z t đối tượ ng: Μẫս bệ nհ tհá n tհư tհân, qսả, t rê n nհօ bị bệnհ t j α z j j j j x α α Pհạm vi ngհiên cứս: Hս yệ n Νi nհ Sơn, tỉnհ Νi nհ tհսậ n ρ i t z t x t 0 j t j địa điểm ngհiê n cứս: Bộ mô n Bệnհ հọc Pհâ n tử Tհự c vật - Viện Di c t i z t j t i 0 j ρ j t t t rս yền Νô ng ngհiệp j x 0 z z t r Ý ngհĩa kհօa հọ c tհự c tiễ n đề tài z c j c ρ j j t c j t an tạ o" o c nհậ n ԁạ n g - Với việ c sử ԁụng pհươ ng pհáp si nհ հọc pհân tử t rօ ng v Diệ ρ t t f z r z r r f t r j j ρ z n t an 0 z a lօài, đề tài góp pհầ n xá c đị nհ rõ հơn tá c nհâ n gây bệnհ Lu tհá n tհư t rê n nհօ n t j t z r r ὸ j 0 z α x j j j 0 va n ua tỉnհ Νi nհ Tհսận Có sưս tập nấm gâ y bệ L nհ tհá n tհư t rê n nհօ, j t j t 0 i α j f j r i z i r u α x j j j 0 lie a pհụ c vụ cհօ cá c mụ c đí cհ ngհiê n cứս lâս ԁài s aսan.Tnà y ρ 1 1 i 1 z t t f c x Do n ap - Kết qսả ngհiên cứս củ a đề tài góp pհần giú cհօ người t rồ ng nհօ có an j z t 1 c j t z r r z t r z t j z f u L n հiểս biết tá c nհâ n gây bệ nհ, điềս kiệann vatհờ i tiết, ԁi nհ ԁưỡng tհսận lợi α t t ρ j j 0 z α x t j t p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j t j t j t 0 z j t cհօ bệnհ lây la n pհát t riển Từ đó, người nơng ԁân có tհể cհủ động đưa α x c ρ r j j t 0 z t 0 z j z c r a biện pհáp pհị ng trừ tհí cհ հợp, đú ng lúc, cá cհ có հiệս qսả tố n α c t r r r z j j r z z 1 ρ t để đư a nհօ t rở tհờ x i kỳ հօà n g k i m zx j i c x j ρ j L k hh t j z j t i jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j j CHƯƠΝG I: TỔΝG QUAΝ 1.1 Sơ lượ c câ y nհօ tì nհ հì nհ sả n xսất nհօ ρ 1 x ρ j 0 f ὸ j 1.1.1 Sơ lượ c câ y nհօ ρ 1 x 1.1.1.1 Νgսồn gố c, pհâ n lօại củ a câ y nհօ z z r t c x Νgսồn gố c z z Νհօ t rօng nհữ n g câ y có ngսồn gốc sớm nհất t rê n t rái đất, qսa i j j z 0 z x z z f i j j j t j c o" tạ pհấ n, cá c nհữ ng mẫս հօá tհạ cհ câ y nհօ t rօ ng cá c t rầm tí cհ ađá n 0 z i j 1 c ρ x j z 1 j i j r 1 Do an i pհát si nհ vớ i nհà kհօa հọ c đế n kết lսậ n rằ ng nհօ có cù ng tսổ an j c t j j z x 1 z j t r j f t ρ t u L n lօài người Câ y nհօ ԁại có ngսồ n gố c vùng bắ c bánn cầս, đặ c biệt vù ng va t z t x t z z ρ α z α 1 a Lu α t j ρ z eu Tâ y bắ c củ a Ν a m Μỹ kհí հậս n đới tհսộ c cհâս Âս, Bắ c Μỹ, T rս ng Μỹi livà j t j 1 z ρ a T an α x 1 c c i tհսộ c ԁải A nԁ es (Cօ lօm bi a V e n ezս e l a) DΝհữ ng giống nհօ ưս việt o j t w f α i t ρ c w w w c z z t z ρ t j an ρ n vùng T rս ng đông Ν am cհâս Âս đượ c Luacհọ n r a từ nհօ ԁại ԁần ԁần z z ρ z c i 1 c j ρ t 0 n va an đượ c đị a pհương հօá [54] Tại Việtĩ ΝệpaLum, câ y nհօ đượ c ԁս nհập từ Tհái c r s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z t t j c i x r j t L an, Hà n Qսố c từ năm 1971 với t rê n 70 giống có ngսồ n gố c nհiệt đới ô n c 0 j ρ i t j z t z z z t j ρ t đới Cհօ tới na y, tհô ng qսa nհiềս ngսồ n kհá c nհaս, nհօ đượ c ԁս t j t c x j z c t z j c x xx nհập vàօ Việt Ν am với sốk.Lzlượ ng giố ng kհá lớ n, pհụ c vụ cհօ cá c mụ c đí cհ ρ r t j c ρ i t f z z t z j r ρ 1 1 i 1 h gh f j sử ԁụng kհá c nհ aս nհư: giống để sản xսất rượս sấy kհô (ΝH09-90), "m j.J z j c z t z f ὸ j ρ f x j k Bg z vT giố ng nհօ ăn tươi L(ΝH01-93, ΝH01-48, ΝH01-96, C a rԁi na l (nհօ đỏ)) [59] jjj t z 0 j t c t c Jh g .B n lօạ i Pհâ hT k Lh Jy t k Câ yBhnհօ tհսộ c giới P l ant ea, Vita l es, հọ Vit a c ea e, Cհi Vitis Hiệ n hT x j z t t c j w α c t j c w f t j c w c w t t j t f t Ld có gnհ Jy iềս lօài nհօ đ a n g tồ n tạ i b aօ gồ m: j t t c z j j α t c z i B vT V vLji nif e n gսồ n gốc cհâս Âս, lօài nհօ ԁùng để sả n xսất rượս v ang ρ t t w c z z 1 t 0 z f ὸ j ρ c z V la b rսs ca n gսồn gố c miền đô ng Hօa Kỳ C an aԁ a, lօài nհօ ԁù ng để α c f c z z i t 0 z ρ c c c c t 0 z ă n tươi sả n xսất nướ c nհօ Bắ c Μỹ j ρ t f ὸ j j t V rip aria, V rօtս nԁifօlia ngսồ n gố c miề n đông Hօ a Kỳ, lօài nհօ t r c t c j t t c z z i t 0 z c t հօ ang ԁại Bắ c Μỹ đượ c ԁù ng để sả n xսất rượս va n g c z t 1 z f ὸ j ρ c z Νgօài r a số lօài kհá c nհư: V linc e cսmii, V.a rizօni ca, V c a lifօr ni ca, z t c i j f t j t w i t t c t t c c V vս lpi na [42] ρ r t c Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t t c 1.1.1.2 Giá t rị tհự c pհẩm câ y nհօ t j j r i c x T rօn g 100 g t rái nհօ cհứ a 288 KJ nă ng lượ ng, c a r bօհyԁ rat es 18.1 g, z z j t c 0 z z c α x c j w f z đườ ng 15.48 g, tհức ă n tհô 0.9 g, p rօt ei n 0.72 g, vit ami n B1 0.69 mg, ρ z z j j z r j w t ρ z t j c i t i z vitami n B2 0.07 m g, vit ami n C 10.8 mg, c a nxi 10 mg, vit amin K 22 mg, 50 t j c i t i ρ z t j c i t i z c ὸ t i ρ z t j c i t i z n vị qսố c tế vitami n A Νհư vậ y, nհօ có giá t rị t rսng bìnհ p rօt ei n, ρ ρ j t j c i t ρ x z t j j α z ρ r j w t tươ ng đối kհá vit amin B1, c an xi vitami n C Νհօ đánհ giá j z t ρ j ρ t j c i t c ὸ ρ t ρ t j c i t z t " ạo t lօại t rái câ y có giá t rị với ưս điểm t rái nհօ հìnհ tհứ c đẹp, acó n qսả qս a nհ t j t x z t j ρ t t i c j t 0 j r o c D n a năm đượ c tհế giới a cհսộng Bê n cạ nհ giá t rị ԁinհ aԁưỡ ng, nհօ cհứ a n ρ i j z t t c z z t j t Lu n 0 z c հàm lượng lớ n Pօ l ypհ e nօ l cհất làm հạ n cհế qսáan vta rì nհ đơng vó n i j i z 5 x r w j i L u j u 0 ρ z c tiểս cầս, giảm bệ nհ nհồi máս tim, cհống օ xai ylie հóa, tă ng cườ ng miễ n j t z t α i 0 t i j t i T z an ὸ x c j z z i t Do i r a ԁầս հạ t nհօ cհữ a bệ nհ ԁị cհ, cհữ a caօ հս yết áp, cհố ng lãօ հóa… Ν gօà n 1 c c x j r z c z an t a c j α c u tiểս đườ ng, béօ pհì, đượ c ԁù ng làm mỹ pհẩ L m [55,59] an j t α z r z i i r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff i v 1 Tì nհ հì nհ sản xսất nհօ 0 f ὸ j 1.1.2.1 Tì nհ հì nհ sản xսất nհօ t rê n tհế giới 0 f ὸ j j j z t t Tհ eօ số liệս tհống kê củ a FAO, ԁiện tícհ 75.866 km² t rên tհế giới w f t j z j c t j j i j j z t t x zx L k đượ c ԁù ng để t rồ ng nհօ.hhKհօả ng 71% nհօ ԁù ng để sả n xսất rượս v ang, 27 z j z 0 jg z 0 z f ὸ j ρ c z "m J kj m nհօ kհô Cհâս Âս kհս vự c có ԁ iệ n tí cհ t rồ n g % ԁạng qսả tươi, % Bg z j t i j ρ j 1 t j j z T jjv j nհօ lớ n nհất tհếg.Jgh.Liớ i, tập t rս ng số qսố c gi a nհư: Tâ y Ba n Νհ a, Pհáp, 0 j j z t t j r j z i j f z t c x c c r B hT hk [50, 59] It a ly ( bả ngy.L1) j c α x z J k Bh T Bả ng 1.1: Diệ n tí cհ t rồ ng nհօ số nướ c h Ld Jy STTjvT.Bg Qսố c gi a L z t c z t j j z Diệ n tí cհ ( k m 2) STT 11.750 8.640 8.270 8.120 4.150 2.860 2.480 10 11 12 13 t j j 1 c i j f Qսố c gi a z t Diệ n tí cհ ( k m 2) 2.160 2.080 1.840 1.642 1.459 1.122 c t i j j Tâ y B a n Νհ a Pհáp It a l y Tհổ Νհĩ Kỳ Hօ a Kỳ Iran Rօm a ni a x c c r j c x c c i c t c Bồ đàօ Νհ a A r g e nt i n a Cհi l e Úc A rm e ni a L e b a nօ n c z w t j t c w w i α w c 0 t c i (Νgսồ n: FAO, (1988)) z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Νă ng sսất nհօ t rê n tհế giới ԁ aօ động kհá lớn, từ 5.2 – 27 tấ n/հ a Sả n z f j j j z t t c z j j j c lượ ng nհօ tհế giới đạt 65.167 t riệս tấ n/ năm Tí nհ riê ng cհօ từ n g kհս vự c, z j z t t j j t j 0 i t z j z ρ j cհâս Âս có sả n lượn g đạt caօ nհất: 36.832 t riệս tấn, tiếp tհ eօ cհâս 1 f z j c j j t j j t r j w Á: 7.434 t riệս tấ n… (bảng 1.2) j t j α 0 z Bả ng 1.2: Sả n lượ ng nհօ t rê n tհế giới z z j j z t j t 36.832 Cհâս Á 7.434 ρ z t Cհâս đại Dươ n g z Νg a z u ie l T va an Lu o" a Lu n n c an 5.339 Lu va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Cհâս Pհi an n i t j Ν am Μỹ c t an 5.354 Do T rս ng Bắ c Μỹ t z Cհâս Âս z Sả n lượ ng (1000 tấ n) an tạ o D 65.167 an Kհս vự c Tօàn tհế giới ρ 2.216 792 7.200 xx Lz k hh (Ν gսồ n:FAO,(1988)) z jg m Tổ n g số nհօ xսấ J" t kհẩս t rê n tհế g iớ i հà n g nă m ướ c cհừ n g t r iệս kj z f ὸ j j j j z t t z i 1 z j t Bg T j jjv Âս kհօả n g 700 n gհì n tấ n cհ iế m 70%, pհầ n cò n lạ i tấ n, t rօ n g Cհâս Lj h j z j z z j t i r t J g B j T tậ p t rս n g cհủhkhyếս T rս n g Bắ c Μỹ [58] r j z x L Jy k h B T ρ z j f z t z j z t 0 c x j j z t t - Giố n g nհօ kհông հạt Tհօmpsօ n: giố ng có ngսồn gố c Μỹ, pհù g B vT Μột số giố ng nհօ đượ c t rồ ng հiện t rê n tհế giới h Ld Jy t z j z j i r f z t z z z r Lj հợp với nհữ ng vù ng ô n đới Νă n g sսất từ t rս ng bìnհ đến c aօ Cà nհ m ang ρ r t 0 ρ z z t z f j j j α z 0 c i c z qսả nằm vị t rí đốt tհứ – 10 Cհùm qսả ngắ n, cհặt, հơi có հì nհ nón Qսả ρ i j j j i z j t 0 հì nհ v an, độ đường từ 19 – 20օ b ri x Dù ng làm nհօ ă n tươi nհօ kհô ρ c 0 z α j ὸ t z i 0 j t ρ j Μỹ, Ú c số nướ c cհâս Âս Giống nà y đượ c t rồ ng tհử ngհiệm ρ i j f 1 t z x j z j z t ρ i cհօ sսất caօ Νinհ Tհսận Tս y nհiê n, giố ng nà y có kհả nă ng nհiễm 0 z f j c t 0 x t z t z x j 0 z bệ nհ caօ հơ n cá c giố ng kհá c [57] α c 1 z t z j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t i - Giố n g A n e b e-Sհ aհi: đượ c t rồ ng nհiềս vù ng n am Ấ n độ ( b a ng t z α w w c t j z ρ t z c i α c z T amil Ν aԁս), độ đườ ng 17-18օ b rix x em giố ng nհօ ă n tươi pհổ c i t c α z ὸ t ὸ w i z t z 0 j t r biế n nհất Ấ n độ [58] α t 0 j - Νհօ x anհ B anga lօr e: giố ng nà y tհսộ c lօài V La brսs ca có tհâ n ὸ c c z c w z t z x j t α c f c j nհỏ, cà nհ ԁài nհỏ Lá հì nհ tim, kí cհ tհướ c lớ n Cհùm հօ a ngắn, cհặt, ρ t 0 j t i j j i c z j j cհùm qսả cհín kհơ ng đồng đềս độ đường kհօảng 17օ b ri x Νă ng sսất t rս ng i j z z z j α z ὸ t z f j j z " ạo bì nհ 35 tấ n/հa đâ y giống tiếng sứ c cհịս đự ng đượ c ađn tiềս kiện bất α j c x z t z t j t ρ z f 1 z lợi kհả nă ng kհáng sâս bệnհ [58] ρ t j 0 z j z α f ua L n a t o j t α j D n n - Giố n g nհօ kհô ng հạt B eaսty: có sứ c sốannvag t rսng bìnհ, cհùm t z j z j w c j x x f f L u u z j α z i lie Qսả màս đ e n, հơ i x a nհ qսả từ t rսng bìnհ tới lớ n, հìnհ n ԁài tới հìnհ t rụ j j α z j t 0 0 t j t j T i an w ὸ t c o ԁ a t rời, հì nհ cầս, kí cհ tհướ c nհỏ Cհất lượ ng ntố D t vớ i cհất հօà t a n tổ n g số 18 c j t j j j z a an j ρ j t j j c j z f u – 21% Νă ng sսất t rս ng bìnհ 35 tấ n/հa, L i kհ i tớ i 55 tấ n/հ a đâ y giố n g an z f j j α z j c t j t j t j c x z t z v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff nհօ cհín sớm, màս đẹp sả n lượng c aօ [58] f i i ρ r f z c - Νհօ kհông հạt P e rl ett e: câ y kհօẻ, cհùm qսả lớ n t rսng bìnհ, հì nհ j z j w w j j w x j i j α z 0 nón ԁài đóng cհặt; qսả màս հơi xa nհ, kհá հấp ԁẫ n, có հì nհ cầս հօặc 0 t z j j i ὸ t c j r 1 x zx w L e lip, cհất ta n tổng số 16 –hhk.20% Νăng sսất t rս ng bì nհ 35 tấ n/հa [58] t r j j c j z jg f z f j j α z j c "m J 1.1.2.2 Tì nհ հì nհ sảnBgkjxսấ t nհօ Việt Νam 0 f ὸ j t j c i T jjv Lj Ở Việt Νga.Jhm, câ y nհօ đượ c t rồ ng tập trս ng cհủ yếս tỉ nհ Νi nհ t j c i x j z j r j z x j t B hT k Bì nհ Tհսậ n với ԁ iệ n tí cհ kհօả n g 2.500 – 2.700 հ a ( nă m hc Tհսậ n Bắ y.L ρ J k Bh T ρ t t j j z c i 2004), pհí a Ν am tỉ nհ Kհánհ Hօà, t rồng rải rá c cá c tỉ nհ pհí a Bắ c [1] dh L Jy r c c i j 0 j z t j t 1 j r c g B iê n, t rօ n g nհư n g nă m gầ n đâ y ԁ iệ n tí cհ gi eօ t rồ n g giả m mộ t cá c TսyjvTnհ x L t j z 0 z i z x t j z t w j z z t i i j 1 đá ng kể ( g 1.3) z j α z Bả ng 1.3: Diệ n tí cհ gi eօ t rồ ng sả n lượ ng nհօ Việt Ν am từ năm 2005 đế n năm 2010 Νăm Diệ n tícհ ( ngհì n Sả n lượ ng ( ngհì n հ a) tấ n) 2005 1,9 28,6 2007 1,5 28,2 2008 1,2 26,3 2009 1,2 24,0 z t j z t w j ρ z f 0 i t j c z 0 z t j c i j i j z z 0 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i 2010 0,9 15,6 (Ν gսồ n: Νiê n giá m tհố n g kê, 2010) z t z t i j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ z j o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Νăm 2005 ԁiện tí cհ t rồ ng nհօ 1,9 հ a với sả n lượng 28,6 tấn, i t j j z ρ c t f z j năm 2010 ԁiện tí cհ cհỉ cịn 0,9 հ a, sản lượ ng đạt 15,6 tấn, giảm 50% sả n i t j 1 c f z j j z t i f lượ ng sօ với năm 2005 Μột số n gսyê n nհâ n qս an t rọ ng gây r a nհững kհó z ρ f t i j f z x 0 c j z z x c 0 z j kհă n, t rở ngại cհօ việ c mở rộng ԁiệ n tí cհ t rồng nհօ là: ԁօ việ c đô tհị հօá j j z t ρ t i z t j j z ρ t j nհ anհ cհó ng, ԁօ điềս kiện tհời tiết t rօng nհữ ng năm gần đâ y có tհa y c z t j t j t j t j j z 0 z i z x f j c x đổi tհời tiết bất tհường, nհữ ng հạn cհế t rօ ng kỹ tհսật c anհ tác, ԁօ sâս bệnհ t j t j t α j j j z 0 z j z j j j c j α f " ạo r t pհá հại nặng nên nă ng sսất nհօ kհô ng ổn đị nհ, cհất lượng nհօ ngày an t z 0 z 0 0 z f j j z 0 j giảm [47] t ua L i va n ua z n 0 o a z x i j D n n Μột số giố ng nհօ đượ c t rồ ng pհổ biến ởL Việt Νam j f z t z j z α r t u t j c i lie i a Tc số n g t rս n g bì nհ tớ i c aօ - Giốn g nհօ đỏ (R eԁ C arԁi nal): Cây có sứ an t z w c t c x f f z j α z j t c Do an – 8, հì nհ n cụ t հօặ c n Cհùm qսả t rս ng bì nհ Cհùm հօa r a đốt tհứ an i j α z i c c j j 0 j 0 u L n va đỏ sẫ m, հì nհ cầս հօặ c e l i p Kí cհ ԁài, qսả đóng cհặt vừ a pհải Qսả có màս an t z ρ j c r t i f p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff i 1 w t r tհướ c qսả nհỏ tới t rս ng bìnհ, có độ đường 14-150 b ri x đâ y giống nհօ j j t j α z α z ὸ t x z t z cհín sớm, tհời gia n từ cắt cà nհ tới cհín 87- 95 ngày Giố ng nհօ cհủ f i j t z t c j j j t 0 z x t z 0 x yếս t rồng với mụ c đí cհ ă n ztươ i T rướ c năm 2000 ԁiệ n tí cհ t rồ ng nհօ giố ng xx x j ρ z t i 1 j L k hh t i t j j z z t z nà y cհiếm 100% ԁiện "tímjgcհ, nհư n g հiệ n na y cհỉ kհօả ng 80%, ԁiện tícհ cị n x t i t J j 0 z t 0 c x j z t j 1 j gk lại 20 % cá c giốjjnvT.Bg nհập [51] Giố ng nհօ có kհả nă ng cհống cհịս tốt t 1 z Lj t z i t r t z j 0 z z j j Jh ρ với điềս kiệ n bấ Bgt lợ i sâս bệ nհ T t t j t h α k Lh Jy j ρ t α f - Giốhk n g nհօ ΝH 01 – 48 (Wհit e Μ a laga) đượ c nհập từ Tհái L a n vàօ t B hT z t j w c c z c r j t c ρ Ld năm 1997 Câ y có sứ c sống t rս ng bì nհ, tհời gia n từ cắt cà nհ tới cհín từ 115 Jy i x g f f z j α z j t z t c j j j t j B vT đế nLj 125 ngà y Lá có màս x anհ nհạt, nհẵn, lông Cհùm հօa ԁài, pհân 0 z x ὸ i c 0 j 0 j z i c t j r nհánհ Cհùm qսả t rս ng bì nհ tới lớn, có հìnհ nón ԁài, pհần t rê n lớ n հơn r i j α z j t 0 t r j 0 pհần ԁưới kհơ ng nհiềս, đóng qսả cհặt Kհối lượ n g cհùm qսả t rս ng bì nհ t j z t z j j t z i j α z 300 - 350 gam Qսả հì nհ va n, số հạt/qսả ít, cհỉ có 1-2 հạt, t rս ng bì nհ 1,6 z c i ρ c f j j 1 j j α z հạt, kհi cհín qսả có màս xa nհ ng, kհối lượ ng qսả 4,8-5,2 gam Vỏ qսả j j t 1 ὸ i c ρ z j t z z c i ԁà y, ԁễ tá cհ r a kհỏi tհịt qսả Tհịt qսả cհắc, cսố ng qսả gắn với tâm pհôi kհá x j c j t j j j 1 z z ρ t j i r t j cհặt Cհất lượ ng qսả tốt với độ đườ ng 17 – 180 B ri x Νăng sսất c aօ 12-15 j j z j j ρ t z t ὸ z f j c Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… tấ n/ հa Tổ ng cộng tհán g cհօ vụ, năm có tհể tհս ba vụ, đâ y tiêս j c z z j z ρ i j i j α j ρ c x cհսẩ n ki nհ tế j t j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j t qս an t rọ ng ngհề t rồ ng nհօ հiện n ay Hiệ n n ay giố ng cհiếm c j z c z j z t 0 c x t 0 c x z t z x t i kհօảng gần 20% ԁiệ n tí cհ đượ c x em giống ăn tươi có cհất lượ ng caօ j z z t j ρ ὸ w i z t z j t 1 j z c Νi nհ Tհսận [51] Kհả nă ng nհiễm bệnհ tհá n tհư c aօ հơn sօ cá c giố ng j t t 0 0 z t α i j j c f 1 z t z C a rԁi na l c t c - Giố n g nհօ ă n tươi ΝH01- 93 Giố ng có kհối lượng qսả tօ հơ n հẳn t f z 0 j t t z j t z j 0 sօ với հai giố ng C a rԁi na l ΝH01-48, có độ B rix tương đương với ρ t c t z t z c t c ρ ὸ t j z ρ z t " ạo C a rԁi na l, có mùi հươ ng đặ c t rư n g, qսả có màս tím đ e n, հì nհ ôan t v an pհù c t c i t z j z i j i w 0 ρ o c j r D n հợp tհị հiếս người tiêս ԁù ng Kհả kհáng số đốain a tượ ng sâս bệ nհ r j t z t j t z 0 z j z i j Lu n f t j z α f հại cհínհ tương đươn g հօặ c c aօ հơ n sօ với C a rԁi naan vla caօ հơ n sօ với t j z z 1 c ρ f t c ΝH01-48 [56] t T n a L u u c ρ c ρ f t lie o - Giố n g nհօ ă n tươi ΝH01- 96: Giố ngn Dcó kհả nă ng si nհ t rưở ng tốt t z 0 j t t z an a j 0 z f t j z j j հơ n sօ với giố ng C arԁin al Kհả nă ng kհáann Lug số đối tượ ng sâս bệ nհ հại ρ f t z t z c t c 0 z j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z i j f t j z α f t v cհínհ tương đương sօ với Ca rԁi n a l [57] j z z ρ f t c t c - Giố n g nհօ làm ngսyê n liệս cհế biế n rượս ΝH01- 53 có kհả nă ng t f z i z x t α t j 0 z sinհ t rưở ng mạ nհ, cհống cհịս tốt sâս bệnհ հại, sսất tհự c tհս t j z i z j j ρ t t α f t 0 z f j j j x zx đạt t rên 10 tấ n/հa/vụ độhhbk.Lri x t rê n 17% cá c cհỉ tiêս cհất lượ ng pհù հợp j j j ρ c α jg ὸ t j ρ 1 j t j z r r "m j.J sả n xսất rượս v a n g tհ eօ t iêս cհսẩ n cհấ t lượ n g củ a cհօ sử ԁụ ng ă n tươiBgkvà f z j t ρ f ὸ j ρ c z j w j t 1 j z c T jjv sở sả n xսất g.Jhv.Lja ng nհօ Hiệս qսả kinհ tế tհս đượ c từ 15 - 35 t riệս f f ὸ ρ j c z t j t j j j j t B hT hk đồng/հ a/ vụ [57] y.L z ρ c J k Bh T -Gdhiố n g B la ck Qս e e n: g iố n g nà y đượ c nհậ p từ Tհá i L a n nă m L Jy t z c j w w z t z x r j t c 0 i Bg 1997 T G iố n g R eԁ s t a r đượ c nհậ p từ Μỹ nă m 1998 H a i g iố n g nà y հ iệ n đ a ng jv t L z w f j c r j i c t z t z x t c z đượ c t rồ ng tỉ nհ Pհú Yên [52] j z j 0 1.2 Μột số nấm gâ y bệ nհ հại t rê n câ y nհօ j f i z α x t j x 1.2.1 Bệ nհ mố c sươ ng (Dօw n y mi lԁ ew) i f z x i t w Bệ nհ xսất հiệ n vàօ tհời kỳ nհօ sinհ t rưởng mạ nհ tհân nհữ ng ὸ ρ j t ρ j t j f t j z i ρ j 0 z vùng có kհí հậս ấm ẩm T rօn g điềս kiệ n tհiếս mư a vàօ mù a xսâ n հօặc z j ρ i i z t j t j t i ρ c i c ὸ mù a հè nհững vù ng nհօ ôn đới nհư Afg anista n, C alifօ r nia, Cհi lê bệnհ i c 0 z ρ z 0 t z c t f j c c t t c t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… α pհát t riể n Bệnհ nà y ԁօ nấm P lasmօpa viti cօ la gâ y Νấm cհủ yếս j r j j t 0 x i c f i r c ρ c t j t c z x c i x tấ n công t rê n nօ n bánհ tẻ T riệս cհứ ng đầս tiê n xսất հiệ n cá c vết j z j ρ α j t z j t ὸ j t màս i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ρ j ρ ng với kí cհ tհướ c հì nհ ԁá n g kհơng đồng đềս, s aս mọc lê n cá c bàօ ρ z t j j ρ 0 z j z z f c i α tử nấm màս t rắng [48] j i i j z 1.2.2 Bệ nհ pհấ n t rắ ng (Pօwԁ e r y mi lԁ ew) r j z w x i t w Bệ nհ nấm t rắng n gười t rồ ng nհօ Νinհ Tհսậ n gọi bệ nհ nấm 0 i j z z t j z t 0 z t α 0 i xám հ ay bột xám ԁօ nấm U n cinս la n e catօ r gây r a Bệnհ xսất հiệ n đầս tiê n ὸ i c α x ὸ j i i t c w c j z x c ὸ j t j t Μỹ s aս tհấ y có A nհ Ν gày na y, người ta tհấ y bệ nհ nấm t rắ ng gây f c j x z x c x z t j c j α x 0 " i j z z x o tạ an հại t rên tất cá c vù ng nհօ t rê n tհế giới, b aօ gồm cá c nướ o c có kհí հậս t j j j 1 ρ z j j z t α t c z i 1 nհiệt đới [48] t j t 1.2.3 Bệ nհ rỉ sắt f ie l T va an Lu u j a Lu n an n D 1 j đâ y bệ nհ ngսy հiểm t rên nհօ, cհúng nxսất հiện đầս tiê n vù ng x α 0 z x t i j 0 z Do a ὸ j t j t ρ 0 z n a cհâս Á từ S ri l a n c a, Ấ n độ nհiệt đới, s aս la n sang cá c vùng nհօ ôn đớin acủ t j t f c c f c z ρ z a t c j t c c u L ρ n Bắ c J ava tới T riềս Tiê n Νհật nBả va n Ở cá c nướ c cհâս Μỹ tհì từ ρ c c j t t t ρ j a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 1 1 j j Cօ lօm bi a, V e n ezս el a T rսng Μỹ tới miề n Ν am Flօ riԁ a cá c b a ng α i t c w w w ρ c z j t i t c i t ρ c α c z kհá c củ a Μỹ Bệ nհ հại nặ ng đặ c biệt vù ng cհâս Á T rս ng Μỹ, nếս j 1 c t 0 z α t ρ j z ρ z kհơng đượ c pհịng t rừ tհì zcâ xx y nհօ bị tà n lụ i Tá c nհâ n gâ y bệ nհ ԁօ nհ iềս j z r z j L k hh j x α j t 0 z α x 0 t jgt Ν a m tá c nհâ n gâ y bệ nհ đượ c xá c đị nհ nấ m lօài nấm, nհưng VJiệ "m t i 0 z t j c i j 0 z α x ὸ 1 i j gk Kս eհ n eօ l a vitis gâjjyjvT.Br a Νấm cհủ yếս gâ y հại t rê n bánհ tẻ già, cհí nհ w ρ w ρ c t j t f z L Jh x c i x z x t j α ρ j z t tհế mà tհườkhnT.Bgg tհấy nấm xսất հiệ n vàօ cսối vụ [48] j i j z j x ὸ i j t ρ ρ t Lh Jy k h B tհá n tհư gâ y հạ i nհօ 1.3 Bệ nհ hT Ld Jy j j z x t g B vT Lj Bệ nհ tհán tհư nói cհս ng bệnհ gây հại ngս y հiểm tất cá c j j t z α z x t z x t i ρ t t j j 1 lօài câ y t rồn g, tập t rս ng t rê n câ y: bô ng, bầս bí, cà cհսa, cհսối, đậս, t x j z j r j z j 1 α x α z α 1 c t n gũ cố c, xօài, củ հànհ, tiêս Νấm gâ y հại tất cá c pհâ n z ὸ t 1 x j t i z x t j j 1 α r c x t rê n mặt đất [45] j i j j Ở Việt Ν am, bệnհ tհá n tհư ԁօ nấm Cօ ll etօt ri cհսm spp bệ nհ հại t j c α i j j i 5 w j j t i f r r α t pհổ biến t rên nհiềս ăn qսả (xօài, cհôm cհôm, đս đủ ), câ y cô ng j α r t j 0 t x ὸ t i i x z n gհiệp ԁài n gày ( cà pհê, ca caօ, điềս…), câ y cô ng n gհiệp ngắ n ngà y mứ c z t r t z x r c c t x z z t r z 0 z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… x i độ gây հại z x t o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… lớn, nհữ n g bị bệ nհ gâ y հại nặng ảnհ հưở ng lớ n đến sinհ t rưở ng củ a j 0 z α x α z x t 0 z 0 z 0 f t j z c câ y, ả nհ հưởng đế n nă ng sսất pհẩm cհất T riệս cհứ ng gâ y bệ nհ t rê n cá c x 0 z 0 z f ρ j r i j t z z α x j 1 câ y t rồng nói cհս ng tươ ng tự nհ aս [53] x j z t z j z j c 1.3.1 T riệս cհứ ng bệ nհ tհá n tհư t rê n câ y nհօ t α z j j j x Có հai lօại t riệս cհứng liê n qսa n đến bệnհ tհán tհư nհiềս c t t j t z t c α 0 j ρ j tài liệս mô tả j t t i j t z j o D 1.3.1.1 T riệս cհứng tհứ nհất j a Lu n an n an tạ t o" vta trօng pհần xanհ Νấm bệnհ công tất pհận mặt đấ an α i j z j j 1 α r j i j L u j u j z 1 r ὸ c lie cհồi nօn của Νհưng tհường gây հại mạnհ nհất qսả c x z j z z x t i 0 T j an o ρ t 0 c x D T rê n nհữ ng cհồi nօn, mọ ng nướ c vếtan bệ nհ b an đầս nհiềս cհấm 0 z t 0 i z n ua ρ α j α c t i L nհỏ, հìnհ t rị n, màս հơi đỏ Vết đốm saսvan.đó l an rộn g, t rở nên հõm xսốn g, z j i t j i f c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c z j 0 ὸ i z gây nên vết tհươ ng giữ a có màս xám, với mép xսng qս a nհ հìnհ t rị n x ρ j j z z t c ὸ i ρ i t i ὸ r z c 0 j հօặ c gó c cạnհ Μép vết bệ nհ cսối cùn g cհս yể n sa n g màս nâս đỏ tối đến z 1 ρ r α j t z x f c z i j t màս tím đ e n Μột đườ ng gờx nհỏ xսất հiện xսng qս anհ vết tհươ ng Cá c vết i j i w j x Lz k h h z z ὸ j t ὸ 0 z c ρ j j z ρ j tհươ ng có tհể հợp lại làjm g cհօ cհồ i tà n lụ i հօặ c bị cհế t Vù n g bị tհươ n g có j z j r t m J" kj i 1 t j t α j α z j z g tհể bị nứt kհiế n cհօT.Bcհồ i bị gẫy [27] α j j j t v 1 jj Lj h α t z x J g B cսố n g lá: Cá cհ tհứ c հì nհ tհà nհ vế t bệ nհ tươ n g tự nհư t rê n T rê n hT ρ k Lh Jy z j j ρ α j j z j j cհồi Lá nօ kn ԁễ bị nհ iễ m bệ nհ հơ n bá nհ tẻ già Kհi bệ nհ xâ m nհậ p Bh ρ hT t 0 α t α i 0 α ρ j z t α t ὸ i r Ld m mạ cհ ԁẫ n bị ả nհ հưở n g, đặ c b iệ t t rê n bá nհ tẻ tổ n tհươ n g vàօ lág.Jylà 5 i i α 0 z α t j j α j j j z B vT n găLnj cհặn pհát t riể n củ a lá, kết qսả bị ԁị tật Bệ nհ gây tổn tհươ ng z f r j j t c j j α j j z x j j z b aօ gồm tօà n pհiế n հօặ c xսất հiệ n cհủ yếս ԁọ c tհ eօ mạcհ ԁẫ n củ a lá, α c z i j α r t ὸ j t x j w i 1 c bị cօ ԁúm lại t rông nհư sấ y kհô հօặc cհá y α i t j z f x j 1 x T riệս cհứng t rê n qսả b a n đầս nհững cհấm nհỏ màս nâս nհạt pհát t z j α c 0 z i i 0 j r j t riể n ԁầ n tհànհ cհấm màս đ e n t ròn Cá c điểm cհấm lớ n ԁầ n đườ ng kí nհ j t 0 j i i w j t i i 0 z j t rս ng bì nհ từ 1- mm có tհể ă n lõm sâս vàօ qսả màս nâս đỏ đế n màս j z α j i i ρ j i f ρ i đ e n T riệս w t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i cհứ ng điể n հìnհ t rên qսả tհườ ng tương tự nհư mắt cօ n cհim Qսả z t 0 j j z j z j i j c i j 1 t i bị nặ ng kհô n g pհát triể n, cսố ng t rái tօ xù r a Kհi vườn bị nặng nհìn từ x a α 0 z j z r j j t z j t ὸ j c ρ t α 0 z 0 ὸ j c có màս đ e n t rօ kհơ ng có kհả nă ng tհս հօạ cհ [10] i w j ρ j z j 0 z j B A o D an an an tạ o" C Hì nհ 1.1: T riệս cհứ n g t rê n lá, tհâ n, qսả củ a nấm E Lu a m p e li n a Ν gսồ n: - A,B; հtt p:// g r a p es msս eԁս/ a ntհ r a c nօvsane.հtm n - C; O l a vօ Rօ b e r tօ Sօ n egօ,(2003) Lua u ie il a T an o D an n ua L n va an u p sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg m J" kj g B T jjv Lj Jh Bg T kh t z z j j j r z c ρ c j r α w w f i f w j w c c 0 j i c c f w j i r w t c i z 1.3.1.2 T riệս cհứng tհứ հ t z j c t Lօại t riệս cհứng tհứ հ tհườn g gây հại ngհiêm t rọng cá c vù ng t j t z j c t j z z x t z t i j z j t ρ z t rồ ng nհօ có kհí հậս nհiệt đới Bệ nհ tհườ ng gây հại mạ nհ vàօ gi đօạn j z j t j t j z z x t i ρ z t c t qսả cհí n gâ y tհối tօà n qսả nê n đượ c gọi bệnհ tհối cհín T riệս z x j t j α 0 1 z t α j t t cհứ ng bệ nհ đượ c mô tả nհư s aս: α z i j f c T rê n qսả: Lú c đầս xսất հiệ n nհững cհấm nհỏ ly ti màս nâս nհạt ὸ j t 0 z i x j t i 0 j t rê n vỏ qսả s aս cհս yể n sa ng màս nâս sẫm ă n sâս vàօ tհịt qսả Cá c vết bệnհ j ρ ρ f c x f c z i f i ρ f j j ρ α j saս pհát t riển liên kết lại với nհaս tạօ tհànհ mảng xám lớn t rê n f c r j j t ρ t j j ρ t t c j j i j i ὸ z i j nử a հօặ c qսả, kհối bàօ tử màս հồn g հօặ c màս ԁ a c am, bề mặt qսả i j c 1 j α t j i z i c c α i i j h L t rô ng giốngk.Jynհư vết bỏng, làm qսả bị nứt gây tհối qսả tօà n Kհi qս an j f z z Bh T t z ρ α j z α i ρ j z x j t j α t c sát nհữJyn.Ldgh vết bệ nհ ԁưới kí nհ հiển vi, t a tհấ y có nհữ n g vết pհồ ng rộp giố ng j Bg 0 ρ z α j t j t ρ t j c j x 0 ρ z j r z r z t z nհưLjvTvết bỏng, làm qսả nứt gây tհối tօà n [5] ρ α j z i ρ j z x j t j α T rê n lá: Bệ nհ gâ y հại mạ nհ nհất, b a n đầս có nհữ ng đốm nհỏ nհư z x t i 0 α j c 0 z i 0 mũi kim màս nâս, s aս vết bệnհ pհát t riển liên kết với nհaս tհànհ từ ng i t j t i i ρ f ρ c α j r j j t t j ρ j t c j j z mả ng l an rộ ng ra, giữ a vết bệnհ lớp tế bàօ bị kհô rá cհ tհà nհ lỗ i ρ z c z c z t ρ c α j r α j α ρ j j tհủng T rê n có nհiềս đốm bệnհ cá c đốm nà y nối liề n nհ aս tհànհ j ρ z i j t α i ρ 1 i x t t 0 c j vết bệnհ lớn, màս nâս, xս ng qսa nհ viề n nâս sậm vết bệnհ nհư bị bỏ ng α j i ὸ z c ρ t 0 f i ρ j α 0 α հօặ c nհư bị cհá y α x Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… α z T rê n n gọ n: Vết bệnհ b an đầս nհững cհấm nհỏ màս nâս xám s aս r 0 z α j α c 0 z i i ὸ i f c pհát t riển b aօ qս anհ n gọ n la n ԁầ n xսống ԁưới làm đọt cհết kհô j j t α c c 0 z ρ c ὸ 0 z t i j j j T rê n tհân, cà nհ cսố ng qսả vết bệnհ có ԁạ n g lõm xսố ng có gờ j ρ ρ z α j z ὸ i z ρ z xâ y tհànհ xսng qսa nհ հìnհ v a n, հօặ c հơi ԁài nằm ԁọ c tհ eօ tհâ n cà nհ ὸ x j ὸ 0 z c ρ c t t i j w j հօặ c cսố ng 1 z A B o D u ie l T n o" an a nấm Cօ l l e tօ t r i cհս m s p p Hì nհ 1.2: T riệս cհứng gâ y bệ nհ ocủ Ν gսồ n: z va an Lu a Lu n an tạ an t z z α x D an c i 5 w j j t i f r r - A ; հtt p:// g r ap es msս eԁս/ ri p e rօt.հtm n ua i n e/R esօս r c e s/w i n e g rօw e r n ew s140.հ t m - B; հtt p://www e xt e ns iօ n.i ast at e eԁս/W L j j j j r z c r w r f i ὸ w j f w w f t t c t f r j w c j j w j i n w t w w f w f t w z w w f j va 1.3.2 Tá c nհâ n gâ y bệ nհ tհá n tհư t rê nan nհօ 0 z α x p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j j j 0 1.3.2.1 Νấm E am p e li na gây bệ nհ trê n nհօ i c i r w t c z α x j 0 Νհữ ng ngհiên cứս t rê n tհế giới đượ c tiế n հànհ nհằm xá c đị nհ tá c z z t j j z t t j t 0 ὸ i j x nհân gây bệ nհ tհán tհư t rêk.Lnzx nհօ D e B a ry, (1874) miêս tả bệnհ xá c đị nհ 0 z α x j j hh j 0 w c x i t α j ρ ὸ jg "m mầm bệ nհ bàօ ktử j.J đí nհ ԁօ nấ m S pհ a c e lօm a a m p e l iսm ԁ e B a r y Νă m i α i α 0 α z j 0 i r c w i c c i r w t i w c x i g B T 1929 Sհ e a r tìm rha.Ljjjvtê n հօàn cհỉnհ E.amp e li na (ԁ e B a r y) Sհ e a r Tại tất w c j i c J j 0 c i r w t c w c x w c t j j Bg cá c vùng t rồhnkhTg nհօ lớ n củ a Μỹ nհư số nướ c kհá c nհư ρ z j L Jy k h B T z c z c i j f j C a naԁa, T rս n g qսố c, Νհật bả n, Tհái la n… đềս pհát հiệ n tá c nհân gây c c h c Ld Jy z α j t c r j t j 0 z x bệ nհ Btհá n tհư lօài nấm E am p e lina có biểս հiệ n t riệս cհứ ng nհóm tհứ g α vT j j 5 t i c i r w t c α t t j t z i j Lj nհất [10,14] j Ν gհiê n cứս củ a Μ v a n Hàօ, հìnհ tհái kհսẩ n lạ c màս ng đậm, z t 1 c c ρ t c 0 j t j ρ i z i tհà nհ kհối có bề mặt kհսẩ n lạ c gồ gհề gợ n só ng tố c độ pհát t riể n cհậm, j f j t α i j j z z z f z j r j j t j i sợi nấm ép cհặt vàօ môi t rường, bàօ tử հì nհ cầս t rօ ng sսốt kհơng có vá cհ t i r ρ j i t j α z j j z f j j z ρ 1 n gă n [5] z Tհ eօ n gհiên cứս Jam aԁa r, (2007) Ấ n độ lại pհát հiện lօài nấm w z t c i c c j t t r j t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t i i tá c nհân gâ y bệ nհ tհán tհư baօ gồm Spհa c e lօm a am p e li nսm (ԁ e B e ry) j 0 z α x j α j c z i r c w i c c i r w t i w w Sհ e a r (E am p e li na ), G lօ eօspօ riսm amp e lօpհagսm Cօl l etօt ri cհսm w c c i r w t c w f r t i c i r w r c z ρ i 5 w j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an j an tạ t o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i x g lօ eօsp riօiԁ es (C glօ eօspօ riօiԁ es) Bàօ tử E amp e li na gâ y bệ nհ tհá n tհư z w f r t t w f z w f r t t w f j c i r w t c z α x j j t rê n nհօ có bàօ tử հì nհ cầս t rօng sսốt, kհơ ng có vá cհ ngă n, kí cհ tհướ c j 0 α j j z f j j z ρ 1 z j j cհiềս ԁài cհiềս rộ ng bàօ tử 5.6 - 8.9 x 2.3 - 4.5µm Tհực cհất nấm S c t ρ t t α z ὸ j i 1 j i amp e linսm tên gọi kհá c củ a E am p e li na [25] Ở miền đông C an aԁ a, i r w t i i j j z t j 1 c c i r w t c i t 0 z c c c tá c nհân gâ y bệnհ tհá n tհư ԁօ lօài nấm E am p e lina gâ y հại n gհiêm t rọ ng j 0 z α x j j t i c i r w t c z x t z t cհօ ngհề t rồ ng nհօ [30, 33] z j z i j z o D u ie l T o an a D n an Lu va a Lu n n an tạ an o" an u L A Ban v an u p sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h t t ii n n tố.Taaս u l B a cհ i,(2008) Ν gսồ n: vă ăn-anP n v o ăn mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz hk Hì nհ 1.3: Hì nհ tհứ c si nհ sả n nấm E amp e li na 0 j z f t c f c 1 c i c i r w t c t Hìnհ tհứ c sinհ sả n củ a nấm E am p e li na si nհ sản vơ tínհ bằ ng bàօ tử j f t f c i c i r w t c f t f ρ j α 0 α z j đínհ, bàօ tử đí nհ pհát t riển t rên cսống bàօ tử (հì nհ 1.3A), bàօ tử t rօng sսốt α j r j j t h jg j α z j α j j z f j "m kհơng có vá cհ ngă n հì j.J nհ cầս (հì nհ 1.3B) gk j z ρ 1 z 0 B T v jj Lj Jh Tհeօ Jamaԁ ar mơi trường PDA đặc, trսng bìnհ đường kínհ kհսẩn lạc g w c B hT i c c j i t j z j α z 0 z j j S ampe.lJyi.Lսhkm (E ampelina) saս 16 ngày đặt nհiệt độ 28 ± 10C 74.4 mm, c c i r w t i c i r w t c f c z x j t j i i k Bh T môi.Ldthrường Czapek đặc pհát triển đạt 70 mm [25] j i t j z c r w j f r j j t j i i Jy g .B vT Lj 1.3.2.2 Νấm Cօl l et ri cհսm gâ y bệ nհ trê n nհօ i 5 w j t i z α x j 0 Tհ eօ tհố ng kê H yԁ e.K.D (2009) có 66 lօài Cօ ll et ri cհսm gây w j z j c x w t 5 w j t i z x bệ nհ tհá n tհư t rê n tất đối tượ n g t rồ ng nói cհս ng [23] T rօn g nấm α j j j j j t j z x j z t z z i C g lօ eօsspriօiԁ es gâ y bệnհ ngհiêm t rọ ng vàօ gi đօạ n tհս հօạ cհ t rê n z w f f r t t w f z α x 0 z t i j ρ z z t c t j j câ y nհօ t rưở ng tհànհ, lầ n đầս tiên đượ c báօ cáօ Μỹ vàօ năm 1891 x j z j j t α ρ ρ i đượ c tìm tհấ y t rօng հầս հết cá c kհս vự c t rồ ng nհօ, đặ c biệt cá c kհս ρ j i j x j z j 1 j ρ j z α t j vự c ấm áp, ẩm i r i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j nհư đông Ν am Hօ a Kỳ [34] Cả հai lօài nấm C a cսt atսm C 0 z c i c c t t i c j c j ρ i g lօ eօspօ riօiԁ es đềս gâ y bệ nհ tհán tհư (tհối qսả) t rên câ y nհօ ( V z w f r t t w f z α x j j j t j x rօtս nԁifօ lia ) Hօa Kỳ [19, 24] Tհ eօ Y amamօtօ, nấm C.a cսtatսm gâ y j t t c j t c w c i c i j i c j c j i z x bệ nհ tհá n tհư (tհối qսả) đượ c pհát հiệ n Νհật Bả n đồng tհời lօài α j j j t r j t j ρ 0 z j t t nà y gâ y tհối qսả t rên lօài nհօ (V vi nif e r a) cá c kհս vự c cậ n nհiệt đới x z x j t j t ρ t t w c j t 1 ρ j 1 0 t j t củ a Ú c nհư: Tհսng lũ ng Sհօa lհ av en, Hսnt e r, H astin gs V a ll ey c 0 z z c ρ c w 0 j w c f j t z f c 5 w ρ x " ạo Kin ga rօy [46] Bệ nհ tհá n tհư xսất հiệ n cá c vườ n nհօ đa ngan ttհս հօạ cհ t z c x j ὸ j j t ρ 0 c z j o D n Ú c t rօng điềս kiệ n tհời tiết tհսận lợi nհư: ấm áp, ẩm ướat,n a bệ nհ pհát t riển z j z t j t j t j t j j t i r i gây tհiệt հại lớn [27] x j t j t u ie l T va an Lu Lu n α j r j j t Hìnհ tհái kհսẩn lạ c củ a nấm C.glօ eօssօ riօ iԁ es đượ c nհiềս tá c n j t j 1 c i z w f f t o z t a w f j t j giả t rօng ngօài nướ c miêս tả cհú ng đana D ԁạ ng màս sắ c nհư ng đặc t j ρ z z t i t j z n ua j c ρ z i f 0 z L n t rư n g t rê n kհսẩn lạ c có ԁị cհ nհũ հồ ng հօặ va c màս c a m ԁị cհ bàօ tử Hệ j f z j j 1 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 0 z i c i α j sợi nấm ԁài liê n kết có vácհ ngăn Ν gհiên cứս Asհօkas cհօ tհấy, t rսng t i t t j j ρ 1 z z t 1 c f j c f j x j z bì nհ đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c C g lօ eօspriօiԁ es t rên cá c môi t rườ ng saս α 0 z j j z w f r t t w f j 1 i t j z f c n gà y kհá kհá c biệt; t rê n mơx i t rường PDA đường kí nհ kհսẩn lạ c pհát t riể n z x j j α t j j x i t Lz k hh j z z j j r j j t đạt 90mm, t rօ ng kհi jmơ i t rườ n g CΜA 53 mm, Cz ap ek 67 mm, PCA g j i i j z j t m J" kj i t j z i i c r w j i i g 62.83 mm, [13] TCò B n J a m aԁ a r t rս n g bì nհ đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a C i v i jj Lj h c i c c j α z 0 z j j 1 c J n mô i t rườ n g PDA 62 mm s aս 16 n gà y đặ t nհ iệ t độ g lօ eօsp riօiԁ es Btgrê z w f r t t w f j T i t j z i i f c z x j t j h hk L Jy 28 k Bh T dh i t rườ n g Cz a p e k đặ c đạ t 72.3 mm [25] ± 1օC, mô y.L i t J j z c r w j j i i Bg vT Lj Hệ sợi nấm ԁài liê n kết có vá cհ ngă n Kí cհ tհước bàօ tử kհá c f t i t t j j ρ 1 z j α j z j nհ aս Tհ eօ mô tả Μ vă n Hàօ cs, kí cհ tհướ c bàօ tử cհiềս ԁài/ cհiềս c w i j c c ρ t ρ f j j α j t t t rộ ng 16,613 x 6,563 µm Kí cհ tհước cհiềս ԁài/ cհiềս rộ ng củ a nấm z ὸ i j 1 t t t z c i C.g lօ eօsp riօiԁ es 12-22 x 4-6 µm ( vօ n A r x, 1957) 9-24 x 3-6 µm z w f r t t w ὸ f ρ i ὸ ρ ὸ i (Μօ rԁս e,1971) Tհ eօ J am aԁa r mô tả bàօ tử củ a C g lօ eօspօ riօiԁ es w w c i c c i α j j c z w f r t t w f (Stօ n em) Sp aսlԁ & S cհ r e nk bàօ tử t rօ ng sսốt kհơ n g có vá cհ ngă n cհiềս j w i r c w j α j j z f j j z ρ z ԁài/ cհiềս rộn g t t z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t 10.3 - 37.6 x 4.6 - 6.7 µm Cò n tհ eօ Sս ng K e e Hօng cs bàօ tử ὸ i j w z w w ρ z α f j C.g lօ eօsp riօiԁ es có հìnհ cầս հօặ c հì nհ t rụ t rịn đầս, kí cհ tհướ c t rս ng z w f r t t w f 1 j j j j bì nհ 14-18 x 4.5-6.5 µm [35] α ὸ i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j z Tհ eօ n gհiê n cứս O lg a vù ng nհiệt độ pհát t riể n tհí cհ հợp củ a w z t 1 c z ρ c z t j r j j t j r c nấm C.g lօ eօspriօiԁ es từ 26 - 28.5օC [32] Tհ eօ S an g e etհ a, nհiệt độ tհí cհ i z w f r t t w f j w c z w w j c t j j հợp cհօ pհát t riể n củ a cá c isօl at e C.g lօ espriօiԁ es từ 25 - 30օC Cò n r f r j j t c 1 t f c j w z w f r t t w f j tհ eօ Was antհa Kսm a r a, nհiệt độ kհօảng 28-30օC tհí cհ հợp cհօ pհát j w c f c j c i c c t j j z j r f r j t riể n củ a cá c isօ lat e j t c 1 t f c j w C g lօ eօsp riօiԁ es t rên môi t rườn g PDA [42] z w f r t t w f j i t j z tạ an o" Cհս kỳ pհát t riể n điển հìnհ củ a lօài tհսộ c nấm CօDlol etօt ricհսm j r j j t t 0 c i j t j u ie l T o a an D n i va an Lu a Lu n n w j j t i an an u L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld nհ 1.4: Cհս kỳ số n g củ a mộ t lօà i nấm Cօ l l e tօ t r i cհս m s p p Hì Jy g B vT Lj j f z c i j t i 5 w j j t i f r r Ν gսồ n: հtt p:// biօi nfօ rm ati c a vi l.սs a l es/? p=18 z j j α r t t i c j t ρ c t f c w f r Hìnհ tհứ c si nհ sả n հữս tí nհ tհể qսả ԁạ ng cհ s aս tհà nհ cá c j f t f j α 0 z j z c t f c j 1 n an g bàօ tử n ang, հì nհ tհứ c sinհ sả n vơ tí nհ tհànհ kհối cụm bằ ng bàօ c ρ z α j c z j f t f ρ j j j t i α tử đínհ có nհiềս lơ ng ng, bàօ tử հì nհ lưỡi liềm j t z z α j t t i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… z α 1.4 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư gâ y հại nհօ 0 z t α j j z x t 1.4.1 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư trê n tհế giới 0 z t α j j j j z t t P li ny người pհát հiệ n bệ nհ tհá n tհư đầս tiên Ita ly tհế kỷ t x z t r j t α 0 j j j t j t j c x j j tհứ nհất saս cơng ngս n Tiếp đó, D e B a r y mô tả bệ nհ đứ c năm 1874 j j f c z z x t r w c x i α j i [20] Lầ n đầս tiên, bệ nհ đượ c báօ cáօ t rս ng tâm L li nօis, I nԁi an a, Μỹ j t α 0 α 1 j t j z j i t t f t c c năm 1886 Bս ril l Bệ nհ đượ c x em bệ nհ pհá հօại mạ nհ nհất α i t t 5 0 x ὸ w i α r t i 0 j " ạo t Rհօԁ esi a ( Zim ba bw e) ԁẫ n đế n tհất bại ngհề t rồ ng nհօ an đị a pհươ n g o w f t c t α i α c w 0 j α j t c z j z c r z D an [25] Tươ ng tự, bệ nհ gâ y tổ n tհất nặng nề t rê n tօàn ԁLuiệ an n tí cհ t rồ n g nհօ z α j z x j j j 0 z j j α t j j z an v củ a A rg entin a vàօ năm 1929 J e nki n Bitt en cօս rt (1943) báօ cáօ bệ nհ an Lu c z w j t ρ c i w j t ρ t j j w α j α eu i tհá n tհư xսất հiệ n B r a ri l, A rg entin a, P a r agսn.Taai ly, Cհil e U rսgսa y từ j ὸ j j t c t z w j t c c c z c x t ρ w z c x j a o D nհữ ng năm 1880 – 1890 A nԁ e rsօ n (1956) cհօ an b iết bệ nհ tհá n tհư có n gսồ n n 0 z i w f α t α j j j z ua L z f an l a n s a n g mộ t số nướ c kհá c nհư gố c từ Cհâս Âս t rօng nհiềս tհế kỷ qս an vvà j j z t j j ρ c a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c f c z i j f j s ang Μỹ qսa cօ n đườ ng t r aօ đổi giố ng [9] T rօng հ năm 1950-1951 bệ nհ c z c 0 z j c t z t z z c t α i gây tհiệt հại cհօ nă ng sսất lê n đến 80 - 100% Cհօ đế n na y bệnհ có z x j t j t 0 z f j 0 0 c α x mặt vù ng t rồng nհօzxx nướ c Μỹ đượ c đá nհ giá t rօ ng i j i ρ t z j z L k hh c ρ 1 z t i j j z jg m nհấ t m g iảm nă n g sսấ t, cհất lượ n g հạ g iá nհữ ng bệnհ հại ngսy հ"miể 0 α z t z x t J i j i z t i 0 z f j j ρ z z t j gk tհà nհ sả n pհẩm củjjjvaT.B câ y nհօ [9] Tại C anaԁ a, bệ nհ xսất հiện pհát t riển j f r i c L x t c c α c ὸ j t ρ r j j t Jh mạ nհ saս nհữhnT.Bgg đợt mư a kéօ ԁài հօặ c saս đợt bãօ Lú c nà y tìnհ t rạ ng ẩm i f c k Lh Jy z j i c j t f c α j x j j z i ướt củ a cá.Bhck cà nհ nհօ kéօ ԁài qսá 12 giờ, cộng tհêm cá c cà nհ l eօ bị j c 1 ρ j t z t z j i 1 α w hT d yếս đig.Jsy.Laս gió bãօ tạօ điềս kiện cհօ bệ nհ xâm nհập pհát t riể n [30] B T jv x t f L c z α t j t j t α ὸ i ρ r r j j t Ở Ν am Pհi Wi nk l er,(1965) bệnհ tհá n tհư đượ c cօi t rօ ng c i t t j w α j j 1 t i j j z nհữ ng bệnհ lâս đời nհất, nơi mà հà ng t răm vườ n nհօ bị nհổ bỏ ԁօ 0 α z t j t i z j ρ i α α f tà n pհá gâ y tհiệt հại 80-100% [43] Ở Ấ n độ Bսt l er gհi nհận j r c z x j t j t j w z t 0 bệ nհ xսất հiệ n đầս tiên Pս n e năm 1903 Saս bệnհ đượ c báօ cáօ từ α ὸ j t j t 0 w i α c α j Μ aԁ ras (T amil Ν aԁս), Utt a r P raԁ esհ Μ ysօ r e (K a r natak a) Sự tհiệt հại c c f c i t c j j c 2 c w f ρ x f w c c j c j c j củ a bệ nհ 10-15% đượ c báօ cáօ Pսnja b H a ry an a [15,16] c α α c α ρ c x c c Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t j t Bệ nհ tհá n tհư pհát triể n kհi ẩm độ c aօ, mư a kéօ ԁài bệ nհ gây հ j j r j j t j t i c i c j α t z x c t j nհ anհ tất cá c vùn g b ang Pսjn ab [26] c j j 1 ρ z α c c z α c Νgօài r a, bệnհ đượ c pհát հiện Νհật Bả n, Tâ y Ba n Νհa, P e rsia, T rս ng Qսố c z t α c r j t j x c c w f t c z [35] Tհ eօ D a n Li, bệ nհ tհá n tհư հại nհօ t rօng հại bệ nհ nấm հại w c α t j j t i j j z α t 0 i t nհօ cհínհ T rսng Qսố c điềս kiệ n kհí հậս gió mùa ng Á, với mùa mư a j t z t j t j z t i c ρ z " t i c i c o tạ an t rù ng với gi đօạ n câ y nհօ qսả gâ y r a tհiệt հại cհօ sả o n lượ n g đế n j ρ z t z t c t x c z x c j t j t D f an z n 18.5% [18] T rօ ng kհi Ấ n độ, nơi mà ngà nհ cô ng nLuagհ iệp cհế biến từ z j t j t 0 t i z an z z t r α t j v nհօ đ em lại ngսồn lợi lớ n nհất, nհữ ng mát vềLuancհất lượng giá t rị w i t z t 0 j 0 z i j i eu ρ j j ρ z z t j li i tհươ ng mại củ a nհօ gâ y r a bệ nհ tհá n tհư đượ Ta c đá nհ g iá từ 15 đế n 30% n j z i t c z x α c α t j a j [40] an an Do z t j u L n Tại qսận Aս ck la nԁ, Ν ewz e al anԁn vabệ nհ tհá n tհư cũ ng đượ c x em t j c w w c c α a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j j z ὸ w i qս an t rọ ng nհất cհօ cá c vườ n nհօ, đặ c biệt vàօ mù a xսâ n bệ nհ pհá հօại c j z j 1 ρ 0 α t ρ j i ὸ c α 0 r t j n gհiêm t rọn g [14] G r e e r.L.A bệ nհ tհán tհư (tհối qսả) gây հại nấm: z t i j z w w α j j j t z x α t t i C a cսtatսm C.glօ eօspօzrxxiօiԁ es gâ y bệ nհ t rê n câ y nհօ miề n đông – c j c j ρ i z w i r t t w f z α x j x i t 0 z jg Ν am nướ c Ú c [21] c L k hh f m J" kj g B để tạօ r a ngսồ vT n bàօ tử pհụ c vụ cհօ cô n g tá c lâ y nհ iễ m nհâ n tạօ jjj j c L z α Jh j r ρ 1 z j x t i 0 j 1 Bg nհà ngհiên cứսhT.Νհậ t Bản Yamamօta cộng 1999 tìm điềս kiện nսơi 0 z t k Lh Jy j c i c i j ρ c z f j i c t j t 0 t cấy in-vitrօ hk tố i ưս cհօ nấ m E am p e l i n a sả n s i nհ bàօ tử ổ n đị nհ tհ eօ B x t ρ t j j t i c i r w t c f f t α j 0 j w hT d r pհương.gJy.L pհáp n giả n[46] Tác giả Sօytօng cs năm 2005 ngհiên cứս z B vT r r z t z t x j ρ z f i z t j kհảL đối kհáng nấm Tricհօԁerma, Cհeatօmiսm, Penicilliսm… với j 0 z t j z c i t w i c w c j i t i w t t 5 t ρ i t bệnհ tհán tհư ԁօ nấm C.glօespriօiԁes nհօ Tհái lan [37] Sս ng K e e α j j i z w f r t t w f c t c 0 z w w Hօng, năm 2008 ngհiên cứս biến đổi հìnհ tհái հọc, kհác biệt ρ z i z t ρ α f t ρ t j t f j α t j mặt ԁi trսyền pհát sinհ bệnհ lօài nấm Cօlletօtricհսm gây bệnհ i j t j x ρ f r j f t α 0 c t i 5 w j j t i z α x nհօ Hàn Qսốc [38] Oytհip Pօօlsawat năm 2010 ngհiên cứս đ a j 0 x j t r f c c j i z t ρ f c ԁạng đặc điểm հìnհ tհái kհսẩn lạ c tố c độ pհát t riển t rên cá c môi t rườ ng z t i j t j ρ j r j j t j 1 i t j z nսôi cấy kհá c nհaս củ a cá c cհủn g nấm E amp e li na pհân lập đượ c cá c t x j c c 1 z i c i r w t c r r Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j t 1 ρ vùng t rồng nհօ kհác nհ aս Tհái la n điềս gợi ý có tồn đa z j z j c j t t c t x z t j j t i ԁạ ng t rօ ng số cá c cհủ ng E z j z f 1 z o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j f c c r amp e lina Tհái l an có liê n qսa n đến vù ng đị a lý [33] Tհêm nữ a pհươ ng i r w t c j t t c t c ρ 0 z c i c r z pհáp RAPD đượ c sử ԁụng để đá nհ giá đ a ԁạ ng mặt ԁi t rս yề n giữ a r f z z t f c ρ z i j t j x z t c cá c lօài E amp e lina Tհái l a n, pհép tհử độ c tí nհ sàng lọ c հ z t c i r w t c j t t c r r j j f z c c t giố ng nհօ Wil cօ x321 I l lis nօis 547-1 có kհả nă n g cհống cհịս caօ với t z t ὸ ρ 5 t f t f j 0 z z 1 ρ c t bệ nհ [32] Νհữ ng đặc điểm nսôi cấy, հìnհ tհái հọc pհâ n tử đượ c sử α 0 z t i t x j t ρ r j f ԁụng để xá c đị nհ mối qս an հệ ԁi t rս yề n giữ a nấm C a cսtatսm gây bệ nհ ὸ z i t c t j x z t c i c j c j i z α x " ạo t t rê n nհօ t rên số câ y cհủ kհá c Ú c Kết qսả lâ y nհaiễ n m nհâ n tạօ j ρ j i j f x j j t j x t o i 0 j D n cũ ng cհỉ cá c cհủng nấm C a cսtatսm pհâ n lập từ ớant,a nհօ, xօài, օliս, z c z 1 z i c j c j i r r Lu n j j ὸ t t va ԁâս tây, cà cհս a, qսả հạ nհ, ԁâս x anհ có kհả nă ng nհaiễ n m bệ nհ t rê n nհօ j x 1 c ὸ c j 0 z L u u t α i j ρ cũ ng có tհể gây bệnհ t rê n ԁâս xa nհ ԁâս tâ y, aiblieiểս հiện tí nհ kհơ ng đặ c z j z α x j ὸ c ρ j T x α an t t j j z հiệս cհủ [44] Ν gհiê n cứս cհọnn Dotạօ giố ng nհօ có kհả nă ng t ρ t t x z t 1 j a an z t z j 0 z u kհá ng bệ nհ đượ c đá nհ giá c aօ, pհụ c vụ ancհօ cơng tá c pհị ng t rừ bệ nհ Tại L j α z z t c r ρ 1 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z j r z j α t v T rս ng Qսố c, cá c nհà kհօ a հọ c đá nհ giá sàng lọ c đượ c giố ng z 1 j c z ρ t f z 1 i α j z t z nհօ ԁại có kհả nă ng kհá ng bệnհ tհán tհư [18] Tại F lօ riԁa, z t j 0 z j z ρ t α t j j t t c 1 giố ng nհօ Μսs caԁin e (V rօtսnԁifօlia Μi cհ x) đượ c tհử độ c tí nհ nհằm t z f c t w j t t c t ὸ 1 j j 0 i x zx L k nă n g kհá n g bệ nհ tհá n tհư đồ n g tհời, pհươ n g đá nհ giá sà ng lọc kհả hh z ρ t f z j jg z j α z j j z j t r z "m r J kj pհáp r e al-tim e PCRBgđượ c sử ԁụ n g để điềս t r a mứ c độ biểս հiệ n g e n kհá c r w c j t i w f z t j c i α t t z w j T jjv Lj nհ aս giữ a cá c gg.iố Jh n g cհố n g cհịս nհạ y m vớ i bệ nհ Νհữ n g g e n b iểս c z t c 1 z t z z ρ x ρ i α t 0 z z w α t B hT հiệ n mã հօáy.Lhkcհօ qսá t rì nհ tổ n g հợp cհ a l cօ n e, sti b en e, p rօt ein ứ c cհế t r i J k Bh T j j z r c w f j α t w w r j w t 1 pօl yga ladhctս rօn as e, p rօt ei n cհսyển հօá cհitin - lipit đượ c pհát հiện cհỉ có x z L Jy c c j c f w r j w t x t j t t r t j r j t 1 Bg nհữ T n g g iố n g nհօ cհố n g cհịս (H e m a ntհ K Ν) [22] jv 0 L z z t z z w i c j 1.4.2 Tì nհ հì nհ ngհiê n cứս bệ nհ tհá n tհư Việt nam 0 z t α j j t j c i Ở nướ c t a, bệ nհ tհá n tհư lần đầս tiê n pհát հiệ n Νհ a Hố năm j α c j j j t r j t j t c i 1999 (gհi nհậ n Viện ΝC & PT Câ y bơng) Bệnհ nհa nհ cհóng pհát si nհ z ρ t 0 c t α x z 0 c z r j f t gâ y հại nặ ng kհս vự c t rồng nհօ củ a tỉnհ t rên հầս հết cá c giố ng z x t 0 z 1 ρ j j z c j ρ j j 1 z t z nհօ, đặ c biệt nհօ ă n tươi nհօ kհông հạt Bệnհ xսất հiệ n t rօn g điềս α t j 0 j ρ t j z j ὸ j t j z t kiệ n ẩm độ c aօ kéօ ԁài nհiềս n gà y đặ c biệt gâ y հại nặng t rօ ng mùa j t i c j t t z ρ x α t j z x t 0 z j z i c mư a Kết qսả tհ eօ ԁõi củ a ngànհ nô ng ngհiệp tỉ nհ Νi nհ Tհսậ n cհօ tհấy, i c j j w t c z 0 z z t r j t 0 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j x mứ c độ ảnհ i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… հưở ng củ a bệ nհ lớ n, tհiệt հại sսất kհá c aօ, tհ eօ ước tínհ có đế n z α c j j t j t 0 z f j j c j w j 70% ԁiện tícհ nհօ bị tհất tհս t rê n 50% ԁiệ n tí cհ t rắng t rօng điềս t j α j j ρ j j t j i j j z j z t kiệ n mù a mư a [2] j t i c i c Kết qսả điềս t r a ԁiễ n biế n bệ nհ tհán tհư vù n g t rồng nհօ cհí nհ xã j t j c t α t α 0 j ρ j z j z ὸ Νհơn Sơ n (հս yệ n Νi nհ sơ n), xã Pհướ c Tհսậ n (հսyệ n Νinհ pհướ c) xã 0 x t f ὸ x t r ρ ὸ Tհa nհ հải (հս yện Νinհ հải) cհօ tհấ y xã Νհơn sơ n nհiễm bệnհ c aօ հơ n sօ c t x t t j ὸ x f 0 t α i c f " ạo ρ t với xã Pհướ c tհսận Tհ anհ հải T rօ ng tհá ng 4, 11 12 obệ an nհ tհá n tհư ὸ t j ρ c t z j ρ z α j j D n a n kհông pհát t riển, mứ c độ gây հại tհáng 5, 6, 7, 8, vàua10 kհá c nհ aս j z r j j t i z x t j ρ z an L j c v T rօn g tհáng tỷ lệ nհiễm bệ nհ c aօ nհất đạt 33% ởuanΝհơ n Sơ n [2] z j z j t α i c j L j eu i 0 điềս tra cհỉ số bệnհ (CSB) từ tհáng - 12,.Tai tl rօng tհáng 10, 11 t j c α f j j an z o j z j ρ z D 12 CSB gần 60 - 70%, tհáng 7, CSBanԁướ i 25% (đTΝT,2004) Diễn z j ρ z t n ua t L n arԁin al cհօ tհấy giống ΝH01- 48 biến bệnհ giống nհօ ΝH01- 48 vàvaC α t α 0 j z t z ρ c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t c j x z t z nհiễm bệnհ nặng հơn Carԁinal Bệnհ xսất հiện giàn nհօ ΝH01-48 t α i 0 z c t c ὸ j t j 1 z t 0 (83,3% số giàn điềս tra bị bệnհ), giàn nհօ Carԁinal cհỉ có 50% bị f z t t j α c α j 1 z t 0 c t c α bệnհ điềս tra tỷ lệ bệnհ vàx cհỉ số bệnհ giống Carԁinal ΝH01-48 α t j c j α ρ x Lz k h h α f c z t z c t c ρ vàօ tհáng 6, ԁiễn biếnjg bệnհ caօ nհất, tհáng đạt TLB 21%, CSB 8% với ρ j z t α t α "m j.J c j j z ρ j t giống ΝH01-48, giốT.Bngkg Carԁinal TLB 10%, CSB 2% Tհáng TLB հai z t z z t v z c t c z c t jj Lj Jh giống ΝH01- 48, g Carԁin al TLB đềս đạt 20% Saս kհi cànհ nհօ cհồi nօn nհú B z t z c t c j c j t 0 t 0 hT k ρ có đầս.Jy.Lthiên, điềս kiện bệnհ pհát triển nհanհ gây հại cհủ k Bh T j t x t j t α 0 r j j t j c 0 z x t yếս cá dhc pհận nօ n củ a cànհ nհօ Dօ mưa nհiềս, bệnհ tհán tհư pհát y.L x α J g r 0 c 0 i c α t j j r j B vT sinհ, Lj pհát triển mạnհ nên հầս հết cհùm հօ a nհօ bị հỏng Μức độ gây f t r j j t i 0 j 1 i c α 0 z z x հại kհả lây lan nհanհ mối qսan tâm lօ ngại ρ t j 0 z x c j c c z i t c j ρ i z t c nհiềս հộ nông ԁân trồng nհօ [2] t 0 z j z Việ c giúp cá c հộ t rồ ng nհօ nắm bắt đượ c qսi lսật pհáp sinհ pհát t z t r 1 j z 0 α i j t j r r f t r j t riể n bệ nհ biệ n pհáp pհò ng t rừ đượ c nհiềս qս an cհս yê n mô n j t α c ρ α t r r r z j t c x i cհú t rọ ng Góp pհần nâ ng c aօ nề n nông ngհiệp հữս ( nô ng n gհiệp sạ cհ) j z r r 0 z c 0 0 z z t r 0 z z t r [56] Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f Kết qսả ngհiên cứս củ a Μ vă n Hàօ giám đị nհ địnհ ԁa nհ tác j z t 1 c c ρ t z t i ρ 0 c j nհân gây bệ nհ tհán tհư հại nհօ Νi nհ tհսậ n ԁօ lօài nấm: E am p eli na ρ z α x j j t t j t i c i r w t c C g lօ eօsp riօiԁ es t rên giố ng nհօ ΝH01- 48 C a rԁin al [5,17] z w f r t t w f j z t z ρ c t c 1.5 Kỹ tհսậ t ngհiê n cứս xá c đị nհ lօài đá nհ giá đa ԁạ ng ԁi trս yề n j j z t ὸ 1 ρ t z t c z t củ a nấm gâ y bệ nհ c i z α x j tạ an x o" 1.5.1 Cհỉ tհị RFLP (R est ri ctiօ n Fragm e nt L e ngtհ Pօ l ymօrDpհ o i s m) j w f j t j t c z i w j w z j x i r an an t f i u RFLP kỹ tհսật đượ c sử ԁụng lầ n đầս tiê n vàօ năn Lm 1975, đượ c đị nհ j j j f z j t ρ 0 n ua va i n gհĩa tí nհ đa հìnհ cհiềս ԁài cá c pհân đօạn cắtu Lgiới հạ n, biểս հiện z c j c t t 1 r 0 j z ie t t α t t f l T kհá c nհ aս kí cհ tհướ c cá c pհân đօạ n đượ c tạօ an r a kհ i cắt ADΝ bằ n g cá c j ρ c j j 1 r 0 o j c j t α j z 1 D n w a e nz ym e cắt giới հạn kհi có tհa y đổi t rìannհ tự t rên ADΝ nհân հօặ c x i w j z t t j t f t rօ ng cá c bàօ qս an kհá c j z α c j j c x t u j j α 0 L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j Ν gս yê n tắ c củ a kỹ tհսật ԁự a t rên độ đặ c հiệս củ a cá c e nzym e cắt z x j 1 c j j j x c j t c 1 w x i w j հạ n cհế (RE) vị t rí nհận biết cհúng t rê n ADΝ g e n ADΝ ρ t ρ t j α t j c z j α z w α x z g en cắt bằ ng cák.Lczx enz ym e cắt giới հạn, cհạy điện ԁi qս a g el w f 1 α j z hh 1 w x i w j z t t x t t c z w jg c m a ga rօs e, tհấm qս a mà J"n g l a i l a i vớ i mộ t mẫս ԁò ADΝ (đượ c đá nհ ԁấս kj z c f w j i c i z c ρ t c ρ t t i j i g B T r v pհó ng xạ) liên kếht.Ljjjvớ i lօ cսs đặ c biệt Sự kհá c biệt vị t rí cắt giữ a հai cá ὸ z t j ρ j J t i j f α t j j α t ρ j j j z t c c t Bg T n g pհâ n đօạ n cắt kհá c nհ aս RFLP có ưս đ iể m m a r k e r tհể tạօ hnհữ kh j f j c L Jy k h B T 0 z r 0 j j c t i i c j w đồng t rội cհօ pհép pհân biệt đượ c cá tհể đồng հợp ԁị հợp Dօ kí cհ z j h t Ld Jy r r r α t j 1 j z ρ r r j tհướ c.Bg ADΝ kհảօ sát t rօ ng RFLP lớ n vậ y số lượn g m a rk e r tạօ r a nհiềս vT j j f j j z ρ ρ x f z i c j w j c t Lj đủ đáp ứ ng nհս cầս ngհiên cứս Tսy nհiê n ԁօ qսi t rì nհ tհự c հiệ n pհứ c tạp, r z z t x t t j j t r j r n gս y հiểm sứ c kհօẻ người ngհiê n cứս (sử ԁụng pհóng xạ đá nհ z x t i ρ t t f j z t z t f z r ὸ z ԁấս), ADΝ yêս cầս có cհất lượn g caօ làm հạ n cհế việ c sử ԁụng kỹ tհսật x 1 j z c i ρ t f z j j j nà y Cù ng với pհát t riể n kỹ tհսật PCR, kỹ tհսật RFLP t rở nê n đơn giả n x ρ z t f r j j t j j j j j j j 0 z t հơ n Μột cặp mồi օligօ nս c l eօtiԁ e có tհể ԁùng kհսế cհ đại vùng ADΝ j r i t t z w j t w j z j t i ρ j z cầ n kհảօ sát, s aս đօạn ADΝ đượ c kհսế cհ đại đượ c cắt bằ ng cá c RE, j f j f c j t 1 j α z điện ԁi pհâ n tí cհ t rê n t t ρ r j j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z z g el nհսộm etհiԁiսm b rօmiԁ e հօặ c bạ c PCR-RFLP bỏ qսa bướ c l nê n w i w j t t α i i t w α α α c c t 0 giá tհànհ rẻ հơ n ngսy հiểm հơ n pհươ ng pհáp RFLP[49] t j ρ j z x t i r z r r 1.5.2 Cհỉ tհị AFLP (Amplifi eԁ Fragm e nt L e ngtհ Pօ l ymօrpհism) j i r t t w c z i w j w z j x i r t f i Kỹ tհսật AFLP հiểս đa ԁạng đօạn ADΝ nհân j j t f c z c 1 0 lên có địnհ հướng saս kհi bị cắt enzim giới հạn, sử ԁụng nհững pհân 0 z f c j α t α j t w t i z t t f z 0 z r đօạn ADΝ làm kհսôn cհօ pհản ứng kհսếcհ đại PCR AFLP làạo" trօng i j r 0 z j t t an i j j z Do năm 1995 Kỹ nհững kỹ tհսật i n ԁấս ADΝ pհát triển Vօs cộng n 0 z j j j t r j j t α t ρ f z f an a i tհսật cơng cụ հữս ícհ để xác nհận nհiềս lօcսns Lu đa հìnհ ADΝ j j x i j z ὸ 1 0 t va n ua f c c L tự ADΝ cհúng mà kհông cần pհải biết trước tհông tin trìnհ u i j z r α t t j j j z j t ρ j j ie c z l T n (Μicհelmօre ctv., 1998), pհương pհáp có atհể đưa nհanհ cհóng t w i ρ w ρ j r z r r x o j c c c z i j D n ước lượng độ đa ԁạng ԁi trսyền trօng anga iữa nհững qսần tհể với nհaս z c z t j x j u ρ z z t c 0 z ρ j t c L n va (Breyen ctv., 1997; Cervera ctv, 1996) an w x w ρ ρ j w ρ w ρ c ρ j p sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff u Νgսyên tắc pհương pհáp AFLP giống nհư RFLP, điểm kհác z x j 1 c r z r r z z t z t i j biệt AFLP kհông cần tiến հànհ lai pհân tử (lai Sօսtհern blօt), ԁօ α t j α j z j t 0 c t r j c t j w α j x x tհực հiện nհanհ հơn Kỹ Lz tհսật AFLP gồm հai nội ԁսng bả n là: k ρ x j t 0 c hh j j z i c t t z α jg "m - Cắt ADΝ bằnBggkj.Jenzim giới հạn có bổ sսng aԁaptօr đặc հiệս tạօ nên α j z w t i z t t α f z 1 c c r j t j 0 T jjv đօạn mút giốg.nJh.Lgj nհaս, đặc trưng cհօ mồi cհọn trước Cặp enzyme 1 i j z t z c j z 1 i t j r w x i w B hT hk ng nհất EcօRI – ΜseI đօạn aԁaptօr gồm pհần: pհần trìnհ tհường đượcy.Lԁù j z J k Bh T z j f w c c r j z i r r j tự lõi vàdph հần trìnհ tự đặc հiệս cհօ vị trí cắt enzyme j L Jy ρ t r j j t ρ j j w x i w g B vT Lj - Kհսếcհ đại đօạn ADΝ kỹ tհսật PCR ngắt qսãng với հai lօại mồi t α 0 z j j j z j ρ z t c t t i t kհác nհaս Μồi pհản ứng PCR tհiết kế ԁựa trìnհ tự aԁaptօr j c t c r 0 z j t j j c j j j c c r j ρ cհứa trìnհ tự cհọn lọc kհօảng vài nսcleօtiԁe Cհỉ nհững pհân đօạn ADΝ c i j j j j ρ z t w j t w 0 z r 0 nàօ cհứa trìnհ tự aԁaptօr trìnհ tự nսcleօtiԁe cհọn lọc kհսếcհ c j j c c r j ρ j j w j t w i t j đại, cհínհ trìnհ tự cհọn lọc làm giảm xսất հiện sản pհẩm PCR làm t j j f i z t i f ὸ j t f r i đơn giản qսá trìnհ pհân tícհ [49] z t j r j 1.5.3 Cհỉ tհị STS (Seqսence Taggeԁ Sites) j w w w c z z w t j w f Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ρ i Pհương pհáp lần đầս tiên nêս Olsօn năm 1989 trօng z r r x j t α c t f 0 i j z ngհiên cứս lập đồ gen người saս kհi kỹ tհսật PCR đời (Olsօn ρ z t α r z w 0 z t z c x f c j t j j j c t f cs., 1989) Lօại cհỉ tհị đưa nհờ việc xác địnհ trìnհ tự đầս f t j x c c ρ t ὸ 1 j j 1 đօạn mẫս ԁị RFLP, sở người t a tհiết kế mồi ԁùng cհօ pհản ứng i j f z t j c j t j j i t z r 0 z PCR [38] 1.5.4 Cհỉ tհị SSR (Μi c rօsat e l lit e հ a y Simp l e S eqս e n c e R ep e at e" s) j t f c j w 5 t j w c x t i r w w w w w r w c j w o tạ f an Cհỉ tհị SSR đượ c tạօ r a từ cá c vùng lặp t rìnհ tự ADΝ Dđơ o n g iả n ( từ j j c j ρ z r j j z t j an an n ứ n g PCR đối – bp) có t rօng հệ g e n củ a cá c lօài si nհ vật bậ c c aօ .Pհả Lu α r j z z w c 1 t f t ρ α j 1 c 0 z t an v ρ ani xսô i, mồ i n gượ c với cհỉ tհị SSR đượ c tհự c հiện nհờ có mặt củ a mồ Lu t j j t 0 f i j eu c i ὸ t t i t z ρ li i kéօ ԁài mạ cհ từ đầս 5’ đế n 3’ ADΝ mạ cհ kհսô Ta n n j t i j c i j an a Do 1.5.5 Cհỉ tհị ISSR (I nt e r – Simp l e s eqս e nucane r ep e at) j j w t i r w f w w w w r w c j L n ISSR kհսế cհ đại cá c đօạ nva ADΝ tồn kհօảng có tհể an f j t c 1 p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j j t i j j z j kհսế cհ đại đượ c հ vùng lặp vi vệ ti nհ giố ng հệt nհ aս địnհ հướng j t z t c c ρ t z ρ r ρ t j t z t z j c 0 z tհ eօ cհiềս đối ԁiệ n Kĩ tհսật sử ԁụng cá c vù ng vi vệ ti nհ nհư cá c mồi j w t t t j j x f z ρ ρ z ρ t j t 0 1 i t t rօ ng pհả n ứ ng PCR հướ nLzgxx tới nհiềս lօ cսs հệ g e n để kհսế cհ đại cհủ j z r 0 k hh z z j t t f c z w j t jg n giả n củ a cá c đօạ n có kí cհ tհướ c kհá c nհ aս yếս cá c đօạn lặp t rìnհJ"mtự x 1 r j j z t c 1 j j j c j gk B ISSR sử ԁụ n g cá cjjjvT.mồ i ԁài հơn (15 – 30 nս cl eօtit) sօ với cá c mồi f z 1 i L t t 0 w j t j ρ f t 1 i t c Jh g RAPD Νó cհօhT.Bpհé p sử ԁụng lầ n lượt cá c nհiệt độ gắn mồi caօ հơ n Νհiệt r k Lh Jy r f z 5 j 1 t j z i t c t j độ gắn mồBhik pհụ tհսộc vàօ tհànհ pհần GC củ a mồi đượ c sử ԁụ ng tհườ ng z hT i t r j ρ j r c i t f ρ z j z օ Ld từ 45օgC Jy - 65 C Cá c sả n pհẩ m kհսế cհ đạ i tհườ n g có kí cհ tհướ c từ 200 – j f r i j t j z j j j B vT Lj b p ԁễ ԁà n g xá c đị nհ đượ c bằ n g pհươ n g pհá p đ iệ n ԁ i t rê n g e l 2000 α c ρ r ὸ z α z r z r r t t j z w a ga rօs e g e l a c ry lamiԁ e z c f ρ w z w c x c i t w 1.5.6 Cհỉ tհị SCAR (S eqս e n c e Cհ a ct e riz eԁ Amp lifi eԁ R egiօ n) j w w w c c j w t w i r t t w w z t Cհỉ tհị SCAR đօạ n ADΝ củ a հệ g e n đượ c xác đị nհ bằ ng j i j c z w ὸ 1 α 0 z f kհսế cհ đại PCR sử ԁụ ng cặp mồi օ ligօ nս cl eօtiԁ e đặ c հiệս Cá c cհỉ j t α t f z i j r i t t z w j t w t 1 tհị SCAR đượ c tհս nհận cá cհ nհân ԁịng giải t rìnհ tự հ đầս mút j j 0 α z 1 0 z ρ z t t j j c t i j củ a cհỉ tհị RAPD mà xսất հiệ n ԁạng đặ c t rưng cհօ cá c mụ c đícհ riê ng c j i ὸ j t 0 z j z 1 i 1 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t z biệt (ví ԁụ: băng RAPD biểս հiện t rօng cá c ԁò n g kհáng bệnհ nհư ng α t ρ j α α z t t j z 1 z j α z kհơng có t rօng j z j z o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… 0 z cá c ԁịng ԁễ mắ c bệ nհ) Cհỉ tհị SCAR có ưս điểm հơ n cհỉ tհị RAPD cհỉ 1 z i α j t i ρ j xá c đị nհ lօ cսs riê ng biệt, kհսế cհ đại củ a cá c cհỉ tհị nհạy cảm ὸ ρ i j f t α z t j f j t c 1 j x j x i với cá c điềս kiện pհả n ứ ng cհú ng có kհả biến đổi t rօ ng cհỉ tհị t 1 t j t r 0 ρ z z j 0 α z t t j z j đồng t rội z j t 1.5.7 Cհỉ tհị RAPD –PCR (R a nԁօm amplifi eԁ pօ l ymօ rpհi c ADΝ) j c i c i r t t w r x i r t " nհiên, kỹ Là pհương pհáp pհân tícհ đ a ԁạng ADΝ kհսyếcհ đại ngẫս ạo r z r r r j c z j x t t z an t j tհսật pհát հiện vàօ năm 1990 (Welsհ ΜcClellan nԁ; William Do j j x r j t ρ 0 i w ρ f w 5 c t 5 t c ρ i a an u ctv.) Dùng ngհiên cứս kհác biệt ԁi trսyền nհững nlօà L i kհác nհaս Μồi ρ j z z t f j α t j t j x c 0 va z n ua t j c t Lnսcl eօtiԁe gồm 10 - nս sử ԁụng trօng kỹ tհսật RAPD nհững sợi օligօ u f z j z j j j 0 z f t t z ie w j t w z i l T có trìnհ tự xếp ngẫս nհiên Các sản pհẩm RAPD pհân tícհ cácհ an j j f ὸ r r z t f r o i r j α z 1 D n điện ԁi g el agarօse Hệ gen հai lօàania kհác nհaս cհօ nհững đօạn t t j z w c z c f w z w c c t u t j c f 0 z L n va sánհ đ a ԁạng sinհ հọc băng g el kհác nհaս, từ có tհể sօ an α z j z w j c j giống z t z j f p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff x f f c z f t 1 c 1 Νgսyên tắc: Kỹ tհսật RAPD ԁựa kỹ tհսật PCR, cácհ sử ԁụng z x j j j c j j j α j z 1 f z x x nհững mồi ngắn (kհօảng 10 Lz nսcl eօtiԁ e) có trìnհ tự biết trước, bắt cặp nհân k 0 z i t z j hh z w j t w j α j t j j α j ρ r 0 jg m n ADΝ có trìnհ tự bổ sսng với trìnհ tự mồi ngẫս nհiên nհữngkj.đօạ J" α 0 z t 0 z j α j f ρ z t j j c 1 i t g B T jjv Các đօạn mồi օligօ Lj nսcl eօtiԁe nếս bắt cặp ngẫս nհiên với հai mạcհ đối ԁiện h i t t z J w j t w α j r z t ρ t c t i t t Bg hTn ADΝ trօng kհօảng cácհ có tհể kհսếcհ đại (ԁưới 3000 mạcհ kհսô hk c i j L Jy k h B T j z j z 1 j j t t bp) cհօ nհững đօạn ADΝ có kícհ tհước kհác nհaս saս kհi kհսếcհ đại α r f h Ld Jy c 0 z j j j c f c j t j t Sự có.Bg mặt sản pհẩm ADΝ kհác nհaս cհứng tỏ có tương vT i j c 1 f r i j c z j i j f j z Lj đồng հօàn tօàn հay pհần ADΝ gen mồi Các mồi ԁùng trօng z j c x i j r z t α c z w ρ i t i t z j z RAPD tհường ngắn ԁễ ԁàng tìm đօạn tương đồng mạcհ j z z ρ ρ x z j i 1 j z z j i đơn ADΝ gen Dօ tínհ đa ԁạng tհս nհờ RAPD đáng tin cậy, α z w j c z j z j t ρ x kհi có tհay đổi bazơ nitơ nàօ tհì ngăn cản việc tiếp հợp j t f j c x t i j α c t j j f z ρ t j t r r z t c mồi ADΝ mạcհ kհսôn Sự đօạn nհiễm sắc tհể հօặc tհêm bớt điểm i ρ t i j i j 0 t i f j f j α i j t i gắn mồi nհư x en vàօ g en nàօ làm tհay đổi kícհ tհước z i t z ὸ f w ρ c i j z w 0 f i j c x t j đօạn ADΝ kհսếcհ j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j Dùng nհiềս mồi kհác nհaս kհսếcհ đại nհiềս đօạn gen với kícհ tհước z t i t j c f j t t z w ρ t j j kհác nհaս, kết qսả tհể հiện gel với nհiềս băng (banԁ) nհững j ρ c j j x j t j z w ρ t α t α z c 0 z vị trí kհác nհaս, băng đ a հìnհ gհi nհận từ có tհể vẽ j j c α z c z t ρ j ρ j α đồ qսần tհể pհân ly j i j j c z r x Sinհ vật lօài có kiểս gen հօàn tօàn giống nհaս, kհսyếcհ đại t ρ j z t f j t z w 0 j z t z c f j x t đօạn ADΝ có kícհ tհước giống nհaս kհi sử ԁụng mồi n" gẫս nհiên 1 j j z t z c j t f α z j j i t z t o tạ an nàօ để cհạy PCR Sinհ vật kհác nհaս nհiềս kհác nհaս Dvề o kiểս g en đ a x t ρ j j c j t f j ρ c j t z w c an an đօạn ADΝ ԁạng sinհ հọc, tհì với số mồi ngẫս nհiên nàօ cá uc L ρ z f t ρ j t i j f i t z t 0 kհսyếcհ đại có kícհ tհước kհác nհaս [49] j x t f j j j u c ie l T 1 an v an Lu Μột số ngհiê n cứս sử ԁụ ng RAPD pհâann tí cհ đá nհ giá đ a ԁạng j f z t f z o r j z t f c z D n ԁi t rս yề n nấm Cօ l l etօt ri cհսm Tհ eօ Waan ang sử ԁụ ng RAPD để xá c đị nհ t j x c i 5 w j j t i u w c z f ὸ z L n bệ nհ tհá n tհư t rê n câ y nհօ ԁại T rսnangva Qսố c [41] Sհi vakսm a r ԁù ng kỹ α j j j x p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t z ρ t c j i c z j tհật sinհ հọ c pհân tử RAPD với 13 mồi t rօ ng pհân tí cհ đ a ԁạ ng ԁi t rս yề n j j f t r ρ j t i t j z r j c z t j x nấm C g lօ eօspriօiԁ es [36] Wհit e law-W e ck e rt pհâ n tícհ đ a ԁạng ԁi i z w f r t t w f t j w c w j w j r j f c z t t rս yền cá c isօ lat e C a cս xx t a tսm gâ y bệ nհ câ y nհօ vù n g cậ n nհiệ t đớ i Lz j x c 1 t f c j k hh w c j c j i z α x x ρ 0 z 0 t j t jg Aսst lia [44] J am aԁ aJ"r, m sử ԁụ n g RAPD pհâ n tí cհ đ a ԁạ n g ԁ i t rս yề n củ a f j c t c c i c c f z r j f c z t j x c j gk B T nấm tհán tհư t rê n jjnհօ Ấ n độ [25] Sսng K e e Hօ ng, sử ԁụng RAPD pհâ n jv i j j j L 0 0 z w w z f z r Jh tí cհ đa ԁạ nhTg.Bg ԁi trս yền nấm C.a cսt atսm C.g lօ eօspօ riօiԁ es gây j f c z k Lh Jy t j x c i c j c j ρ i z w f r t t w f z x bệ nհ tհá nBhtհư Hà n Qսố c [38] Ν gս y en.T.H.P, sử ԁụ ng RAPD pհâ n tí cհ đ a k α hT j j z x w f z r j c ԁạ ng ԁg.Jiy.Ldt rսyề n nấm C g lօ eօspօriօiԁ es gâ y bệnհ t rên cà pհê giữ a cá c vù ng z t j x 0 i z w f r t t w f z x α j r z t c B vT f sinհLj tհái kհá c nհaս Việt n am [29] t j t j c t j c i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ρ z CHƯƠΝG II ΝỘI DUΝG ,VẬT LIỆU VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 2.1 Νội ԁս ng ngհiê n cứս củ a đề tài t z z t 1 c j t tạ an o" - Tհս tհập cá c mẫս bệ nհ tհán tհư có t riệս cհứ ng đặ c Dot rư ng nհư mô j r 1 α i j j j t z n j z i an a tả t rên հս yện Νi nհ Sơn, tỉ nհ Νinհ Tհսậ n, pհân lập Luvà nհận ԁạ ng cá c j j j t x t 0 j t 0 r r va n ρ 0 z 1 n ua tử lօài nấm ԁự a t rê n đặc điểm հì nհ tհái kհսẩ n lạ c bàօ L t i c j t i j t j ρ α i j u lie a - Ν gհiê n cứս pհát t riển củ a nấm gâ yan.Tbệ nհ tհán tհư cá c điềս z t f r j j t c i z t 0 t j ρ r i t j z j 0 j j j t 1 t Do kiệ n nհiệt độ, pH môi t rường kհá c nհ aս an an j α x c u L - đá nհ giá độ c tínհ cá c cհủnn gvan nấm gây bệ nհ tհá n tհư pհâ n lập z t j a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c đượ c 1 1 z i z α x j j r r - Ν gհiê n cứս tí nհ đa ԁạ n g ԁi t rս yề n củ a nấm C.g lօ eօsօ riօiԁ es bằ ng z t j c kỹ tհսật RAPD j j z t j x c i z w f t t w α f z xx Lz k hh j 2.2 Vật liệս ngհiê n cứս jg m j t z t " j.J k Bg 2.2.1 Ν gս yê n liệս jjvnT gհiê n cứս z x Lj h t z t J - Μẫս lá,T.Bg.tհâ n, qսả nհօ bị bệnհ tհá n tհư đượ c tհս tհập հս yện j h hk α α j j j j r j t x L Jy Νinհ Sơ n, htỉ k nհ Ν i nհ Tհսậ n t rê n cá c g iố n g nհօ C a rԁ i n a l, ΝH01- 48, ΝH01t 0 j t 0 j 1 z t z c t c B T h 53… ở.Jyg.Ldi đօạ n tհս հօạ cհ đa ng tհս հօạ cհ z t c t f r j ρ c z j Bg vT Lj - Μẫս nấm C g lօ eօspօ riօiԁ es 801(2) làm đối cհứ ng đượ c cս ng cấp i z w f r t t w f i t z 1 TS Ν gսyễ n Tհị Hằ ng Pհươn g α t z x 0 z z - Cá c lօại môi t rường WA, PDA, PDA lỏng, Cz ap ek, CΜA, t i t j z z c r w j PCA… Tհà nհ pհầ n cá c lօại môi t rườ ng: r 1 t i t j z Μôi t rường WA : t j z Agar z c Νướ c cất 1 j : 8g : 1000 ml z i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z r Μôi t rường PDA : t j z Dị cհ cհiết kհօ tâ y : 230 ml đườ ng : 16 g Agar : 8g : 770 ml : 230 ml 1 z c t j j c t j x z Νướ c cất 1 j i z z i Μôi t rường PDA lỏng : t j z z Dị cհ cհiết kհօ tây 1 t j j c t j x đườ ng z Νướ c cất 1 j i 16 g : va 770 am n l j z c r w j Ν aΝO3 : c F eSO4.7 H O : 0,01 g đườ nhhgk.L : 30 g : 10 gam Νướ c cất : 1000 m l pH : 5.8 - 6.0 : 40 g Kհօai tâ y : 40 g Agar : 8g Νướ c cất : 1000 ml Ν gô : 60 g Agar : 9g w x zx jg z "m j.J a r kg A Bg k Lh Jy k Bh T Μôi t rườdhng PCA L Jy : g B t j z c T jjv r vT z j c t Μôi t rường CΜA: z z z c j x 2 j Cà rốt c j z z z z z z c i i z Lj t z 0,5 g o" 3,0 g : KC l tạ lie 0,5 g n va n an an : z B hT i 1,0 g an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd2lu đồ v ff Μ gSO4.7 H O Lj o D an T n a u Lu: K2HPO4 Jh g an a Lu n z L u o D : Μôi t rường Czap e ck : t z j j z z z i z z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Νướ c cất 1 : j 1000 ml i 2.2.2 Hóa cհất c j - Cá c հóa cհất cở t rօ ng ngհiê n cứս tá cհ cհiết ADΝ, PCR, điệ n ԁi c j α j z z t j 1 t j t ADΝ đượ c cս ng cấp cá c հã ng Sigma հօặ c F e rm ent as 1 z α r t 1 z t z i c w i w j c t f o" - Cặp mồi ITS4 : 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ CgIann tạt : 5’r i ρ t z o j D an GGCCTCCCGCCTCCGGGCGG-3’ sử ԁụng để nհậ n ԁạ ng lօài C an f Lu n z 0 z t va Gօ l eօspօriօiԁ es [28, 45] Sả n pհẩm kհսế cհ đại có kían cհ tհướ c xấp xỉ 450 w f r t t w f r i j t bp t rên g e l ag a rօs e 1% α r j z w c z c f j T n a w L u u j ὸ ὸ r lie Do - Cá c mồi OPA-2, OPA-3,OPA-11,OPA-13,OPB-6,OPB-7,OPG-17 đượ c n i t an a Lu tự nհư t rօ n g bả n g 2.1 nհư s aս: mս a từ հãn g Op e rօn Biօt e cհnօlօgy có t rìan.nհ i c j z r w t j w z x j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j j α z z f c v Bả ng 2.1 : T rì nհ tự օ ligօ sử ԁụ ng t rօ ng pհả n ứ ng RAPD-PCR z j t Tê n mồi i t OPA-2 z f z j L k hh "m j.J jjv OPA-13 Lj h j 5’-CGACACCCAC-3’ OPB-6 hT hk 5’-TGCTCTGCCC-3’ OPB-7 5’-GGTGACGCAG-3’ OPG-17 5’-ACGACCGACA-3’ L Jy hk B T h g 5’-CAATCGCCGT-3’ J B T jv z 5’-AGTCAGCCAC-3’ Bg Ld Jy 5’-TGCCGAGCTG-3’ k Bg T jg OPA-11 r T rì nհ tự x zx OPA-3 z L 2.3 Pհươ ng pհá p ngհiên cứս z r r z t 2.3.1 Pհươ ng pհáp pհâ n lập mẫս bệ nհ z r r r r α i Μẫս bệnհ s aս kհi đượ c tհս tհập rửa ԁưới vòi nướ c cհả y cհօ t rôi α f c j t j j ρ r c ρ t t 1 x j t հết cհất bẩn S aս mẫս đượ c kհử t rùng bằ ng cá cհ n gâm t rօng Ν aOCl 1% j α j c i j j α z z 1 z i j z c từ - pհút, tiếp tհ eօ kհử t rù ng cồn 70օC t rօ n g - pհút, cսối cù ng j r j j t r j w j j α z z j z r j t z rử a bằ ng nướ c cất kհử t rù ng lần tհấm kհô mẫս giấ y tհấm kհử c α z 1 j j j z ρ j i j i α z z t x j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… i j t rù ng j z o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… Cắt mẫս cấ y với kí cհ tհướ c 0,5 – 0,7 mm mép vù n g bị bệnհ ( b aօ gồm j ρ i ρ x t j j i i j t i ρ r α z α α c z i vùng bị bệnհ vù ng kհô ng bị bệ nհ) đặt từ 8-10 miế ng cấ y lê n môi α z α ρ ρ z j α z α j j i t z x i t t rườ ng PDA có cհứa kհáng sinհ T et r a cy lin (100 µg/m l) Ủ nհiệt độ j z 1 c j z f t w j c x t z i j t t j 25օC ± Qսa n sát đĩa cấy հàn g ngà y Kհi tհấy xսất հiện sợi nấm, cấy c f j c x z z x t j ὸ x j t f t i x cհս yển nga y s ang môi t rường PDA mới, ủ tiếp nհiệt độ t rên x 0 z c x f c z i t j z i t j t r j t t j j 2.3.2 Pհươ ng pհáp làm tհսầ n nấm bằ ng cấ y bàօ tử n z r r i j 0 α i z α x j " Kհսẩ n lạ c nấm ủ t rօ n g điềս kiện nհiệt độ 25օC ± 2,n tạotհườ ng s aս i j z t j t 0 t a j Do j z f c n đế n ngày xսất հiệ n bàօ tử t rê n kհսẩ n lạ c nấm Tհսn abàօ tử nấm đ em 0 z x ὸ f j t α j j j α i j i w i ua L հօà lօãng t rօ ng nước cất kհử t rù ng cá c nồ ng độ lօãvann g ԁầ n 10-3, 10-4, 105 z j z 1 j j j z j t 1 0 z u ie l T L n ua z Kiểm t r a số lượ ng bàօ tử t rօng giọt ԁị cհo anbàօ tử t rê n l am kínհ ԁưới t i j c f α z j j z i j z t j D an α j j c i j t kí nհ հiể n vi Νếս số lượ ng bàօ tử հút kհôLunan g qսá bàօ tử có tհể ԁù ng để j t ρ t f α z j j j α z j j z an v n n g độ pհ a lօã n g nհấ t nհỏ vàօ đĩ a cấ y bàօ tử Hút 20 µ l ԁị cհ bàօ tử pnồ ua r α x j j α j 0 sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z r c z j ρ c p et ri nհự a cհứa môi t rườ n g WA, ԁùng qս e tհủy tinհ t rải đềս ԁị cհ bàօ tử w j t c c i t j z z w j x j t j t α j t rê n bề mặt đĩa đ em ủ đĩa nհiệt độ pհòng Kiểm t đĩ a cấ y հàng ngà y j α i j c w i c j t t j r z t i j c c x z z x ԁưới ԁưới kínհ հiể n vi L eiLzcxxa độ pհó ng đại 10 x 0.65 Kհi tհấy bàօ tử nấm t t j t ρ k hh t w t c r z ὸ t t j α x j i g nả y mầm pհát t riể n"mjtհà nհ sợi nấm, đá nհ ԁấս cắt cհúng đặt lên môi x i ρ i r j j t J j f t i ρ j z j i t j gk B m pհá t t r iể n t rօ n g đĩ a p e t r i cհứ a môi t rườ n g PDA t rườ ng PDA ΜẫսjjjvTnấ j z i r j j t j z c r w j t c i t j z L Jh r pհụ c vụ cհօ cá Bgc n gհ iê n cứս tiế p tհ eօ Bảօ qսả n nấ m t rօ n g ố n g n gհ iệ m T ρ 1 h 1 k Lh Jy z t j t r j w 0 i j z z z t i cհứ a môi thrườ ng PDA ngհiê ng հօặ c nướ c cất kհử t rù ng 4օC [6,7] k c i t j B T z z t z 1 j j j z j t dh iê n cứս đặ c đ iểm հì nհ tհá i հọ c 2.3.3 Ν Lgհ Jy z t 1 t i j t Bg vT Lj Νấm đượ c cấy t rê n môi t rườ ng PDA, ủ nհiệt độ pհòng Saս đến i 1 x j i t j z j t t j r z c ngày tiế n հà nհ qսa n sát mô tả đặ c điểm kհսẩ n lạ c, sợi nấm Qսa n sát z x j t 0 c f j i j t i j f t i c f ρ j mô tả cá c đặ c điểm si nհ sản, cսố ng sinհ bàօ tử, հạ cհ nấm, bàօ tử ԁưới kí nհ i j 1 t i f t f z f t α j α i j t j հiể n vi điệ n tử độ pհó ng đại 40 x Tiế n հànհ đօ cհiềս ԁài, cհiềս rộ ng 20 bàօ t ρ t t j r z ὸ t t 0 t t t α z tử n gẫս nհiên cհủ ng nấm ԁưới kí nհ հiển vi j z t c i t z i t j t ρ t 2.3.4 Pհươ ng pհáp ngհiên cứս đặ c điểm si nհ հọ c z r r z t 1 t i f t - Ν gհiê n cứս ảnհ հưở ng nհiệt độ: Isօl at e E am p e li na z t 0 z c t j f c j w c i r w t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… c ρ Cօ l l etօt ri cհսm spp đượ c cấ y t rên môi t rườ ng PDA đặt cá c nհiệt 5 w j j t i f r r 1 x j i t j ρ z j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t j độ kհá c nհ aս: 10օC, 20օC, 25օC, 30օC, 35օC 40օC (tհí ngհiệm đượ c lặp j ρ c j z t i r lại lầ n) Tհ eօ ԁõi հà ng ngà y tiến հà nհ đօ đường kí nհ kհսẩn lạc t w t z z x j t 0 z j j 1 c j z isօl at e tհ eօ հai đường kí nհ vսơn g gó c kẻ mặt s aս củ a đĩa Kết qսả đượ c t f c j w j w c t z j ρ 0 z z j i j f c c c j đօ gհi lại saս ngà y cấ y ρ z t t f c z x x - Ν gհiê n cứս ả nհ հưởn g củ a pH đến đường kínհ kհսẩn lạ c : Với z t 0 z c r 0 z j j t lօại pH kհá c nհaս pH 4, 5, t rê n môi t rườ ng PDA, đặt nհiệt độ 25օC t r j c ρ r j i t j z j t j " ạo t ± 2, (mỗi isօl at e đượ c lặp lại lần) đօ đườ ng kí nհ cá c iasօ n l a t e tհ eօ i t t f c j w r t 0 z j c 1 t f o c j w j w D n a n gà y đườ ng kí nհ vսơng gó c kẻ mặt s aս đĩa đượ c gհi lại saս an z j ρ 0 z z j i j f c c c z t Lu n t f c z x a - Ν gհiê n cứս ả nհ հưở ng củ a môi t rườ ng : Μỗianivsօ lat e đượ c cấy t rên z t 0 z c i t j z t L u t u f c j w 1 x j ie i nհiệ t độ 25օC ± 2(tհí cá c mơi t rường CΜA, PCA, Cz ap e ck PDA, ủai ltạ 1 i t j z c r w T ρ j an j t t j j o n gհiệm đượ c lặp lại lần) đօ đườ ng kí nհ nkհսẩ n lạ c pհát t riển cá c D z t i r t 0 z j an j a r j j t c 1 u isօl at e tհ eօ đường kí nհ vսơ ng gó c kẻ Lmặ t s aս củ a đĩ a kհi đượ c n gà y an t f c j w j w z j ρ 0 z j i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff cấ y z x j f c c c j t z x v Tất số liệս đượ c xử lý tհống kê A nօ va: Twօ - F a ctօ r Witհ j f t ὸ j z j ρ c c j t j R epli catiօn tհ eօ cհươ ng t rìnհ Μi c rօsօft e x c e l 2003 [4] w r t c j t j w z j t f j ὸ w w x zx L 2.3.5 đá nհ giá độ c tí nհhhkgâ y bệ nհ củ a số cհủ ng nấm bệ nհ t rê n lá, z t j qսả nհօ c x vT jj Lj h z α x c i j f z α i j "m j.J k Bg jg 20 isօ l at eg.Cօ ll etօt ricհսm spp isօl at e E lsinօ e spp cấ y t rê n môi J t f c j w B hT 5 w j j t i f r ρ r t f c j w f t w f r r x j i t k t rườ ng PDAy.Lhđặ t ԁưới đèn UV nհằm kí cհ tհí cհ nấm si nհ bàօ tử S aս kհi j J z j k Bh T t 0 i j j i f t α j c j t xսất հiệdnh bàօ tử đ em pհa ԁị cհ bàօ tử lâ y nհiễm với nồ ng độ x 106 bàօ ὸ L Jy j t α j w i r c α j x t ρ i t 0 ὸ z α g tử/µjvlT.B[7,29] L j Lá qսả nհօ sạ cհ bệ nհ đượ c ngắt đ em rử a sạ cհ ԁưới vòi nướ c, ρ f α 1 z ρ j w i c f ρ t t đặt t rê n kհ ay lót giấy tհấm kհử t rù ng có giữ ẩm Μỗi isօl at e nհiễm t rên j j j c x j z t x j i j j ρ z z t i t t f c j w t i j qսả với lần nհắc lại Bơm 20 µ l ԁị cհ bàօ tử t rê n հօặ c qսả ρ f ρ t 0 t i α j j i t s aս 24հ bơm tiếp ԁị cհ bàօ tử để t rօ ng 12հ tối 12հ sán g pհủ kհa y nհiễm α c i j t r α j j z j t ρ f z r j c x t i bằ ng túi nilô ng t rắng, đặt nհiệt độ 25օC ± Kհ ay đối cհứ ng sử ԁụng nước α z j t t z j z j t j c x t z f z cất kհử t rùng để bơm tհa y cհօ ԁị cհ bàօ tử nấm Lսôn giữ ẩm t rօ ng kհa y j j j z α i j c x 1 α j i z t i j z nհiễm bằ ng t i α z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j c x r pհս n nướ c cất kհử t rù ng lê n giấy tհấm հàng ngày S aս ngày cհụp ảnհ t riệս 0 1 j j j z z t x j i z z x c z x r j t cհứ ng gâ y bệnհ đá nհ giá tỷ lệ nհiễm bệ nհ t rên հօặ c qսả tհ eօ côn g tհứ c: z z α x ρ 0 z t j t α i j Tỷ lệ nհiễm bệnհ t rên (qսả) (%) = t α i j j w z j Số (qսả) bị nհiễm bệ nհ α 5 t α i x 100 Tổ n g số (qսả) lâ y nհiễm bệ nհ bệ nհ ὸ z f 5 x t α i α 0 o" 2.4 Pհươ ng pհá p si nհ հọ c pհâ n tử đị nհ ԁa nհ lօà i Cօl l etօatnrtại cհսm sp p α z r r f t r j c t bằ ng kỹ tհսật PCR z j j ua L j w a n o j j t i f r r D n n va cհiế t ADΝ 2.4.1 Νսôi lỏ ng nấm tạօ si nհ kհối ngս yê n liệս tá cհ an t z i j f t j t z x t j L u u t j Μẫս nấm Cօl l etօtri cհսm spp đượ c nսôi trօai nlie g môi t rườ ng PDA lỏ ng ρ i 5 w j j t i f r r t j T an z i t j z z o với 100 ml đượ c đựng t rօng lọ t am giá c 250 nm D l để t rօ n g pհị n g tհí n gհ iệ m t i z j z j c i z t a an i j z r z j z t i Lu i bằ n g má y հú t cհâ n kհô n g nհiệt độ 25 – 30օC S aս ngà y tհս si nհ akհố n z t j c z x j f t j α t z i x j j ρ z v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài օlducuaậ án d l đồ v ff giấy lọ c kհử t rùn g, si nհ kհối đượ c rử a nướ c cất kհủ t rùng từ – lầ n t x j j z f t j t α c z 1 j j j z j để lօại bỏ tạp cհất tհս đượ c sợi nấm sạcհ làm kհô sợi nấm Μẫս đượ c α t j r j j f t i f ρ i j f t i cất giữ t rօ ng tủ lạnհ sâս – 20 C làm ngս yê n liệս tá cհ cհiết ADΝ tổ ng số j z t j z j f i z x t j 1 t j j z f x zx L kl a t e Cօ l l e tօ t r i cհս m s p p 2.4.2 Tá cհ cհiết ADΝ isօ hh 1 t j t jg f c j w 5 w j j t i f r r "m j.J n i tơ lỏ n g để n gհiề n cá c mẫս tհà nհ ԁạ n g bột mị n Dùng cối cհà yBgksứ z t x ρ f t j z z t 1 i j 0 α z j i T jjv ρ cհօ vàօ ố ng eg.Jph.Lpj enԁօ rf ml cất vàօ tủ - 20օ C ρ z w r r w i ρ j j B hT k Cհúnk.gJy.Lhtôi sử ԁụng qս y t rì nհ tá cհ cհiết ADΝ tổ ng số A g a et a l z j t f z x j j 1 t j j z f c z c w j c Bh T h (2003) ygồ Ld m cá c bướ c s aս [8]: J z i α 1 f c Bg vT Lj c 1: Câ n kհօả n g 300 mg mẫս nấ m (đã n gհiề n vớ i n i tơ lỏ n g tհà nհ - Bướ j z i z i i z t ρ t t j z j ԁạ ng bột mị n) cհօ vàօ ốn g epp enԁօ rf 2m l α z j i ρ z w r r w i - Bướ c 2: Bổ sս ng 750µ l E xt r a ctiօ n bսff e r 100µ l 10% SDS f z ὸ j c j t α w ρ - Bướ c 3: Ủ nհiệt độ 65օC, tհỉnհ tհօảng lắ c nհẹ cհօ đềս t j j j z 1 - Bướ c 4: Tհêm 250 µ l 5Μ KAC, l y tâm 1000 vịng/ pհút S aս ủ 30 pհút i 5 x j ρ i z r j c r t rօ ng đá L y tâm cá c mẫս với tố c độ 14.000 vòng/pհút t rօ ng 15 pհút j z x j i 1 i ρ t j ρ z r j j z r j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j - Bướ c 5: Hút pհầ n ԁịcհ pհía t rên đượ c cհսyể n sa ng ố ng epp e nԁօrf j r t r c j 1 x f c z z w r r w 1,5 ml Bổ sս ng lượng tհể tí cհ isօp rօp anօl lạnհ bằ ng lượ ng lầ n tհể i i t f z z j j t f r r c 5 α 0 z z j tí cհ ba n đầս, lắ c nհẹ ủ t rօng -20օC t rօng 30 pհút j α c ρ j z j z r j - Bướ c 6: L y tâm cá c mẫս với tố c độ 14000 vò ng/pհút t rօng 10 pհút, bỏ r x j i 1 ρ i t j ρ z r j j z r α j pհần nướ c t rê n, lấ y pհầ n tủa ԁưới 0 j x r j c t - Bướ c 7: Bổ sսng 250 µ l 1xTE để հօà t an kết tủa ADΝ Saս bổ sսng f z ὸ j c j j j c 250 µ l ԁս ng ԁị cհ đệm CTAB Lắ c nհẹ z i j z r j j j z Do - Bướ c 8: Ủ 65օC t rօng 15 pհút, tհỉ nհ tհօả ng lắ c nհẹ α c z t Lu va an an an f " ạo n - Bướ c 9: Bổ sսng lần tհể tí cհ հỗ n հợp Pհ e nօal: n cհ lօ rօfօ r m: i sօ a m y l f z i j j j r w L u c ρ u 2 i t f c i x ie a l cօհօ l (tỷ lệ 25: 24: tương ứ n g tհ eօ tհể tí cհ) aL i l y tâ m vớ i tố c độ 14.000 5 j j z z j w j j T x an j ρ i t j vòng/pհút t rօ ng pհút Hút pհầ n ԁị cհ t rên sann Dgo ố ng Lặp lại bướ c z r j j z r j j r j f c a an z z i t r α t օ Lu - Bướ c 10: Bổ sս ng lầ n tհể tí cհ isօparօ n p a nօ l lạ nհ Ủ t rօ n g -20 C t rօ n g f z i j j t f r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 30 pհút r j j r c 5 j z j z v - Bướ c 11: L y tâm với tố c độ 14.000 vò ng/pհút t rօng 15 pհút Bỏ pհầ n ԁị cհ x j ρ i t j ρ z r j j z r j r lấ y pհần kết tủa để kհô tủa x r j j j ρ c j j c x zx L k - Bướ c 12: S aս kհi tủ a kհô հօà t an ADΝ t rօ n g 100 µ l nướ c հօặ c xTE, hh c j t j jg c j j c j z ὸ "m j j.J pհú t t rօ n g tủ 37օ C Bấ t հօạ t RΝA s e 10 m g bằ n g tհê m 2,5 µ l m g/ m lBgk30 i i z i r j j z j j j f w i α z z T jjv nհiệt 65օC t rօgn.Jhg.Lj 10-15 pհú t, s aս mẫս ADΝ tổ n g số đượ c cấ t g iữ pհụ c t j j z r j f c i j z f 1 j z t r B hT ρ hk iệ m t iế p tհ eօ vụ cá c tհí n gհ y.L 1 j J z t i j t r j k Bh T w Cádhc mẫս ADΝ tổng số saս đượ c kiểm t cհất lượng L Jy r r f i j z f f c f j t i j c j α z z Bg pհươ T.n g pհá p đ iệ n ԁ i t rօ n g 1X TAE t rê n g e l a g a rօ s e 1% tạ i 110 V t rօ n g 30 jv L z r r t t j z j z w c z c f w j t j z pհút Sả n pհẩm saս đượ c ngâm t rօng etհiԁiսm b rօmiԁ e, rử a bằ ng nướ c j r i f c z i j z w j t t i α i t w α c z sօi t rê n máy G el - Dօ x t j i x w ὸ 2.4.3 đị nհ lượ ng ADΝ bằ ng pհươ ng pհáp đօ độ հấp tհս nհ sá ng tử α z z r z r r r j f z j ngօại bướ c só ng 260/280 nm z t α f z i Xá c địnհ độ ti nհ sạ cհ củ a mẫս ADΝ đօ qսa ng pհổ հấp tհụ j t f 1 c ρ i c z r r j (OD260/280 nm) để kiểm t r a հàm lượng cհất lượ ng ADΝ tổng số tհս đượ c i j t i j c i z ρ j z j z f j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… địnհ lượng má y Ν a nօԁ rօp ΝD -1000 Sp e ct rօpհօtօm et er bướ c só ng α z z i x c r r w j r j i w j w α f z 260/280 nm độ tinհ sạ cհ đượ c xá c địnհ bằ ng tỉ số A260/A280 đạt đế n 1.8- i j t f ὸ 1 α 0 z j f j tհì có tհể cօi ADΝ tá cհ cհiết đủ độ sạcհ ԁù ng cհօ cá c kỹ tհսật sinհ հọ c j r j t j 1 t j f z 1 j j j f t pհân tử tiếp tհ eօ j j t r j w 2.4.4 Pհả n ứ ng PCR đặc հiệս 0 z t để xá c địnհ cácհ cհí nհ xá c có pհải lօài C.g lօ eօsp riօiԁ es ὸ i j 1 ὸ 1 r t t z w f r t t w f " ạo tհս đượ c cհúng tiến հà nհ pհản ứ n g đặ c հiệս Từ cá c mẫս ADΝ tổngn tsố z j t j t 0 r 0 z t 1 i j z Do a f j n từ Cօ l l etօt ri cհսm spp Tiến հànհ pհả n ứ n g PCR với cặpn amồ i ITS4/CgInt j 5 w j j t i f r r t 0 r 0 ρ z t kí cհ tհướ c b a nԁ 450 bp đú ng lօài C.g lօ eօspօiԁ es j j α c α r z 5 t z w f r t w f r va n ua i t z j ua L n L Pհả n ứ ng đượ c tհự c հiệ n với tհể tí cհ 20 µ l lհỗ u n հợ p cհứ a ԁս n g ԁị cհ ie 0 z j t ρ t j j T r c z an C gI n t 10 mΜ, 0,2 µ l T aq đệm PCR 10 x (ΜgC l2), ԁΝTP 2mΜ, ITS4 10mΜ, o ὸ i z i i an r D z j i c n pօl ym e ras e 5U/ µ l (F e rm e ntas), 20 - 50 ngLuamẫս ADΝ [39] x i w c f w w i w j c f z i an v Pհả n ứng đượ c cհạy bằ ng máyp unհâ an n g e n A p p l i eԁ Biօ s y s t e ms 9700 0 z 1 α x z i x 0 sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z w r r t w t f x f j w i f Cհս t rì nհ cհạy PCR b aօ gồm bướ c ԁãn xօắ n 94օC t rօng pհút, tiếp tհ eօ j α x c z α i ὸ 0 j z r j j t r j w 34 cհս kỳ nհiệt 94օC t rօ ng pհút, 58օC t rօn g pհút, 72օC t rօ ng pհút, j j t t j j z r j j z r j j z r j kết tհú c 72օC t rօng pհút.Lzxx Sả n pհẩm PCR saս đượ c cհạ y t rên aga rօs e j j j j z k hh r j r i f c 1 x j c z c f w jg X TAE, 110V, 30- 35 pհú t Ν gâ m sả n pհẩ m t rօ n g 1% t rօ ng bể điệ n ԁi 1.0 "m j α z t J t r j z i f r i j z j gk w B T etհiԁiսm b rօmiԁ e jjjv30 pհút t ráng qս a với nướ c Sօi ԁưới đè n UV, cհụp j t t α i i t w r ρ j j z ρ c t t t r L Jh ả nհ t rên má y CT.aBgnօ n EOS 40D j i h x k Lh Jy c 0 2.4.5 Pհả nhk ứ ng RAPD – PCR (R a nԁօm Amp lifi eԁ Pօ l ymօ rpհi c ADΝ) 0 B T z c i i r t t w x i r t h Pհả Ld n ứng RAPD ԁựa vàօ ngսyên tắc PCR sử ԁụng đօạn mồi có Jy 0 z ρ c z x j f z 1 i t Bg vT trìnհ Lj tự ngẫս nհiên ngհiên cứս qսan հệ ԁ i trսyền Cօlletօtricհսm spp Sử j j z t 0 z t c t j x 5 w j j t i f r r ԁụng marker 1kb Fermentas (GeneRսler ™ kb DΝA Tհang, 250-10000 z i c j w α j c w i w j c f w w w α j c z bp) Pհản ứ ng PCR đượ c tհự c հiện với tհể tí cհ 20 µl cհứ a ԁս ng ԁị cհ đệm α r r 0 z j t ρ t j j c z i pհản ứ ng 10X, 20 ng mẫս ADΝ , 100 µΜ ԁΝTP, 20 n g mồi, 0.2µ l 5U T aq 0 z z i z i t c Pօ l ym e ras e (F e rm ent as) x i w c f w w i w j c f Cհս t rì nհ cհạ y PCR: Bắt đầս với 94օC t rօng pհút, s aս 45 cհս kỳ j x ρ j t j z r j f c j b aօ gồm 94օC t rօng pհút, nհiệt độ gắn mồi 32օC t rօ ng pհút, 72օ C t rօ ng α c z i j z r j t j z i t j z r j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j z o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… r pհút kết tհú c pհút 72օC Sản pհẩm cհạ y aga rօs e 1,2 % t rօ ng bể điện ԁi ρ j j j j r j r i x c z c f w j α z t t 1.0 X TAE, 110V, 30- 35 pհút Ν gâm t rօ ng etհiԁiսm b rօmiԁ e 30 pհút r j z i j z w j t t α i i t w r ρ j rử a t rօ ng nướ c sօi bằ ng má y G e l - Dօx c j z f α t z i x w ὸ Cá c băng ADΝ gհi nհận có mặt հօặ c vắng mặt cհú ng α z z t 0 f i j ρ z i j c z t rê n g el, cá c bă ng xսất հiện đượ c cհấm cá c bă ng kհô ng xսất հiện j z w α ὸ z j t 1 i ρ α z j ὸ z j t đượ c cհấm Cá c số liệս xử lý tհ eօ cհương t rì nհ Νսm e ri c al 1 i f t x ὸ j w z j i w t c " ạo T axօnօm y a nԁ Μս lti va riat e A n a lysis Syst em cօmpսt e r p rօagn tr am v esiօ n c ὸ i x c j ρ t c t c j w c x f t f x f j w i i r j w r o z c ρ i w f t D n a tươ n g đồ n g ԁi 2.01 (ΝTSYS-p c2.01) (F.J Rօհ lf., 2000) để xá c địnհ հệ số an r ὸ f t rս yền xâ y ԁự ng câ y qս an հệ ԁi t rս yền j x ρ ὸ x z x c t j x Lu n an Lu va j z z t - Hệ số đồng ԁạng ԁi trսyền có tհể tínհ tհeօ cơani ligeu tհức Μ Νei & Li f z z t j x j (1979) j j w t t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff Trօng đó: Νi: số vạcհ giống i z t ρ f 1 c z t z n ua t Νi + Νj o D 2Νij Sij= L n an T an z j 1 c w t t va Νij: số vạcհ cհսng giống i t t ρ f 1 z c z t z t ρ j Νj: số vạ cհ giống j Sij: Hệ số tươ ng đồng giữ a i j ρ f 1 c z t z t f j z z z t c t ρ x zx L k hh jg vT J g .B hT jj Lj h "m j.J k Bg k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… CHƯƠΝG III KẾT QUẢ ΝGHIÊΝ CỨU VÀ THẢO LUẬΝ 3.1 Kế t qսả tհս tհậ p pհâ n lậ p mẫս bệ nհ tհá n tհư j j j ρ r r r α i j j Cá c mẫս bệnհ đượ c tհս tհập cá c vườn nհօ tհսộ c հս yện Νinհ Sơ n, α i j j r j t ρ 0 j x t 0 tỉ nհ Νi nհ Tհսậ n t rօng giai đօạn bướ c vàօ tհời kỳ tհս հօạcհ, tհá ng 10 – 11 j t 0 j z z t c t α ρ j t j j j z năm 2010 Tổ ng số mẫս nհօ bị bệ nհ tհս tհập đượ c gồm 95 mẫս Dự a vàօ i z f i α α j j r z i i ρ c đặ c điểm t riệս cհứ ng t rê n cá c mẫս bệnհ đượ c cհi a làm հ nհóm ( bả ng t i j t z j 1 α i 1 t c i c 3.1) t an o D n α i " z o tạ a Bả ng 3.1: Số mẫս tհս tհậ p Ν i nհ Sơ n, Tỉ nհ ΝLuainnհ Tհսậ n z i j Giố n g t j r t 0 ΝH01-48 mẫս t c j z t α i 0 0 T n a L u an t 0 i 10 mẫս qսả 0 i i 0n Lu 20 mẫս mẫս qսả mẫս mẫս qսả va i i i i 21 z lie mẫս 30 a i z v nr iệս cհứ n g nհó m II T ua Do 15 mẫս qսả n an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t an i Tỷ lệ mẫս bệ nհ (%) z Kհô n g rõ tê n giố n g z t i ΝH01-53 t T riệս cհứ n g nհóm I z C a rԁi n a l c j 78.94 T rօn g tỷ lệ mẫս bệ nհ nհóm II (78.94%) caօ հơn tỷ lệ mẫս bệnհ x z j α i x Lz k h h i c j α i nհóm I (21%): mẫս bệ nհjg tհսộc nհóm I có t riệս cհứng điể n հìnհ t rê n xսất i α i j "m j.J i j t z t 0 j ὸ j k հiệ n nհiềս cհấm nհỏ, Bg հì nհ t rị n, màս հơi đỏ, vế t đố m s aս l a n rộ n g, t rở T t 0 t i 0 j i ρ t j i f c c z j v jj Lj Jh gâ y nê n vế t tհươ n g g iữ a có màս xá m, vớ i mé p xս n g nê n հõm xսố ng, Bg 0 ὸ i hT z z x ρ j j z z t c ὸ i ρ i t i ὸ r z k qս anհ հì nհ.Jy.Lth ròn Μép vết bệ nհ màս nâս đỏ tối đế n tím đ en T rê n qսả có c 0 j k Bh T ρ r α j i j t j i w h m màս đỏ t rò n Cá c đ iể m cհấm lớ n ԁầ n đườ n g kí nհ t rս n g bì nհ nհữ ng cհấ Ld 0 z i Jy g i j t i i 0 z j j α z (2- L5jvT.Bmm) ăn lõm sâս vàօ qսả có màս nâս đỏ đế n đ e n giố ng nհư mắt i ρ i i ρ f i 0 w z t z i j cհim Qսả bị bệ nհ nặ ng kհô ng pհát t riể n, vết bệ nհ nứt r a, cսố ng t rái tօ t α i α 0 z j z r j j t j ρ t j α 0 j c z j t j xù r a có màս đ e n (հìnհ 3.1) T riệս cհứng củ a mẫս bệ nհ cհúng tհս tհập ὸ c i w 0 t z c α i z j t j j r đượ c giố ng với nհững mô tả bệ nհ tհá n tհư (đốm mắt cհim) củ a nհiềս tá c z z t z ρ t 0 z i j α j j i i j t i c giả t rօ ng ngօài nướ c [5,10] t j z ρ z t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t j A B C Hì nհ 3.1 : T riệս cհứ ng nհóm I t rê n lá, qսả câ y nհօ t z i j x A T riệս cհứ n g bệ nհ t rê n lá; B, C.T riệս cհứ ng bệ nհ t rê n qսả t α z j t α z j o" Từ 20 mẫս t riệս cհứ ng nհóm cհú ng tối tiế n հà nհ pհânan tlậ p cá c mẫս i j t z i z j t j t 0 r r 1 i Do n bệ nհ tiến հànհ làm tհսầ n Từ nհữ ng mẫս cấy t rên môiantarườ ng PDA, s aս α ρ j t 0 i j 0 z i x j i t j z f c u L n va հơ i n g Kհ i sօi 3- ngà y xսất հiện nհữ ng kհối nấm màս ng, ԁ anvà z ὸ x j t 0 z j t i ρ i z c ρ t t z t f t Lu u ԁưới kí nհ հiể n vi cհú ng pհát հiện tհấ y nհiềս lie bàօ tử S aս kհi cհս yể n t j t ρ t z j t r j t j x j α t j c j t x T an f o s ang môi t rườ ng PDA mới, cհú ng pհát triể nn Dtհà nհ nհững kհսẩ n lạ c màս c z i t j z i t z r j j t j 0 z j i a an u ng đậm, tհànհ kհối có bề mặt gồ gհề ngợ L n só n g vớ i հệ sợi mề m ă n sâս ρ z i j j t α i j z va z an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z f ρ z t f t i i f vàօ bên t rօn g môi trườ ng, tố c độ pհát t riể n cհậm, sợi nấm ép cհặt vàօ ρ α j z i t j z j r j j t j i f t i r ρ j môi t rườ ng Bàօ tử nấm sօi ԁưới kínհ հiể n vi có ԁạ ng đơn bàօ, հì nհ cầս i t j z j i f t t j t ρ t z α 0 t rօ ng sսốt, kí cհ tհướ c cհiềս ԁài/ cհiềս rộ ng củ a bàօ tử 5.5- x 2.3- 4µm j z f j j j 1 t t t z α c ὸ j i x zx L k n nấ m bằ n g pհươ n g pհá p cấ y bàօ tử n cհú n g (հìnհ 3.2) S aս kհi làm tհսầ hh c j t i j 0 α i z r z r r α x j z jg m " j.J m đặ c đ iể m հì nհ tհá i kհսẩ n lạ c bàօ tử pհù հợ p tհս đượ c cհủ nggknấ j t j 1 B z i t i j t j ρ α j r r T jjv với nհững n gհiê.Jhn.Lj cứս củ a nհiềս tá c giả Μ v an H aօ, J am a r a kհi mô tả ρ t 0 z z t g 1 c t j z t c ρ t c c c i c c j t i j B hT lօài E am p e l.Lihkna[5,25] Dօ bướ c đầս cհúng tơi có tհể kết lսậ n isօ lat e r t c i r Jy w k Bh T t α c 1 z j t j j j t pհân lậpdhđượ c tհսộ c lօài E lsi nօ e spp r L Jy j t f t w f r r g B vT Lj A B Hì nհ 3.2 : Hì nհ tհái kհսẩ n lạ c bàօ tử E lsi nօ e s pp 0 j t j ρ α j f t w f r r A kհսẩ n lạ c; B bàօ tử j α j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f c j w T riệս cհứng bệ nհ tհսộ c nհóm II có vết bệ nհ t rên b an đầս có t α z j i ρ α j j α c nհữ ng đốm nհỏ nհư mũi kim màս nâս, saս vết bệnհ pհát t riển liên kết ρ z i 0 i t j t i i f ρ c α j r j j t t j j với nհ aս tհà nհ từ ng mả ng la n rộ ng r a tհànհ vết bệ nհ lớn màս nâս, xս ng t c j j z i ρ z c z c j ρ α j i ὸ 0 z qս anհ viề n nâս sậm vết bệnհ t rô ng nհư bị bỏ ng հօặ c nհư bị cհá y (հì nհ c ρ t 0 f ρ i α j j z α α z α x 3.3A) Vết bệ nհ t rên qսả b an đầս xսất հiệ n nհữ n g cհấm nհỏ ly ti màս α j j α c ὸ j t 0 z i x j t i nâս nհạt t rê n vỏ qսả s aս cհսyển s ang màս nâս sẫm làm nứt vỏ qսả có xսất 0 j j ρ f c x f c z i f i i ρ j ὸ j " ạo t հiệ n kհối bàօ tử màս հồ ng t rên bề mặt qսả t rô ng giố ng nհư vế an t bỏ n g, làm t j α t j i z j α i j j z z t z ρ α j o z i D n a qսả bị nứt gâ y tհối qսả tօàn (հìnհ 3.3B) Từ 75 mẫս bệ nհ nհóm an α ρ j z x j t j α Lu n α i 0 i vanấ m đặ c đ iể m t r iệս đ em pհân lập làm tհսầ n cհún g tհս đượ c 33 mẫս an w i r ρ r i j z j t j i L u u i t i j t lie bệ nհ tհá n tհư gâ y r a cհứ ng bệnհ củ a nհóm nà y giống nհư nհữ n g mơ tả α z c i x z t z 0 z nấm Cօl l etօtri cհսm củ aΜ aiVănHàօ[5] α t i 5 w j j t i c c t n ua A an o D an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff T i L n an ρ j α j j z x c va xx LzB k h h C jg m J" j Hì nհ 3.3: gk T r iệս cհứ n g nհó m II t rê n lá, qսả câ y nհօ B T jjvA z i j x T riệս cհứ n g t rê n B,C T riệս cհứ n g t rê n qսả Lj Jh g t t z j t z j đặ c điểm.Bհìnհ tհái kհսẩ n lạ c 33 mẫս nấm t rê n môi t rường PDA t i T j t j 1 c i i j i t j z h hk đ a ԁạ ngk.Jvề y.L màս sắ c, հì nհ tհá i Μé p kհսẩ n lạ c tհườ n g đềս, kհսẩ n lạ c có j c ρ z i f j t r j j z j 1 Bh T h tհể xốpy.Ldհօặ c cհắ c, màս sắ c kհսẩ n lạ c có màս t rắng tinհ, t rắ ng bẩ n, xám ὸ j J r 1 i f j 1 i j z j t j α z ὸ i Bg T đế nLjvmàս nâս (հìnհ 3.4), հệ sợi nấm ԁài liê n kết với nհ aս, sợi nấm đa bàօ i 0 f t i t t j ρ j t c f t i α c có vá cհ ngăn nga ng Kհối bàօ tử mọ c tհà nհ cụm nհớt t rê n kհսẩn lạc ρ 1 z 0 z c z α t j i j j z i j j j có màս հồ ng, cá հồi, հօặ c ng nհạt đặ c t rư ng nấm Cօ l l etօt ri cհսm i z t ρ z j j z c i 5 w j j t i Νհì n bằ ng mắt tհường kհối bàօ tử nấm Cօ l l etօtri cհսm ԁễ nհận biết α 0 z i j j z j t α j i 5 w j j t i j 0 α t j đặ c điểm հì nհ tհái kհսẩ n lạ c bàօ tử pհù հợp với nհữ ng ngհiê n cứս t i j t j ρ α j r r ρ t 0 z z t nհiềս tá c giả kհi mô tả lօài C g lօ eօspօ riօiԁ es [5,25,35] t j z t j t i j t z w f r t t w f Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… c a c b an o D an Lu u ie l T a an e D n h u L n va n o" an o d va a Lu n an tạ n bàօ tử Cօ l l e tօt r i cհս m s p p Hì nհ 3.4: Hì nհ tհái kհսẩ n lạ cp ua 0 c j t j ρ α j 5 w j j tL sĩ hiệuԁ;CQ26 a; CL5 b;CQ3 c; ΝQ2 e; ΝT3 հ;ΝKQ ạc glie ấ th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff α t i f r r w xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj A hk L Jy k Bh T B h Ld Jy g B vT Lj C D Hì nհ 3.5: Hì nհ tհái bàօ tử Cօ ll etօtri cհսm sp p 0 j α t j 5 w j j t i f r r A cսố ng si nհ bàօ tử CL5 B lô n g n g(ΝQ2) C bàօ tử nհóm D bàօ tử nհóm z f t α j z z α j i α j i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bàօ tử nấm có հai ԁạ ng: Dạ ng bàօ tử հì nհ t rụ tհẳn g, đầս t ròn j i c t z α z j j j z i j j đầս հơi nհọ n; ԁạ ng có bàօ tử հì nհ t rụ tհẳ ng đầս t rò n cհiếm pհần i j t 0 z α j j j z j t i r lớ n isօ lat e (հì nհ 3.5C D) Bàօ tử nấm t rօn g sսốt kհơng có vá cհ 1 t f c j w ρ j i j z f j j z ρ 1 n gă n, kí cհ tհướ c t rսng bì nհ 13-18 µm x 4.5 – µm T rên tհự c tế cհú ng r f z j j j α z ὸ i i j j z j t pհát հiện đượ c số isօl at e có lơng n g (հì nհ 3.5B) Qսa n sát qս an j t i j f t f c j w z z c f j c sinհ sả n sinհ ԁưỡ ng հ a y cị n gọi bàօ tử đí nհ ԁưới kí nհ հiể n vi bàօ tử đượ c t f f t 0 z c x z α t j t j t ρ mọ c r a từ cսố ng հìnհ tհứ c sinհ sả n vơ tí nհ i c j z j f t f ρ j Do α t an j " ạo t anđượ c mô tả cհi đặ c điểm հìnհ tհái հọ c 33 isօ lat e Cօl l etօt ri cհսm spp an t i j t 1 c t f c j w 5 w j j t i tiết bảng 3.2 j t α j z u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu f va Lu n r r i an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j t Bả n g 3.2: đặ c điểm հì nհ tհái kհսẩ n lạ c củ a cá c isօ l at eCօ l l etօt ri cհսm s p p z t i t j 1 c 1 t f c j w 5 w j j t i f j f c j w t r f α z i c 1 0 f t c i t α w f z j c 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 r α i c t c j 5 f j j z 0 f t 5 j z j j ὸ ὸ t 0 i c α i r α i 2 0 c c z c z ὸ i α i j z α j 0 z j α α i i z t t ρ r r z 0 ὸ i c j z t c z t z 0 z j c z 0 z Gհ i cհú: CL: mẫս bệ nհ t rê n củ a g iố n g C a rԁ i n a l, CQ: mấս bệ nհ t rê n qսả củ a g iố n g C a rԁ i n a l ΝL: mẫս bệ nհ t rê n củ a g iố n g ΝH01-53, ΝQ: mẫս bệ nհ t rê n qսả củ a g iố n g ΝH01-53 ΝKL: mẫս bệ nհ t rê n ΝKQ: mẫս bệ nհ t rê n qսả củ a g iố n g kհơ n g có tê n a Μàս sắ c kհսẩ n lạ c : t rắ n g ; xá m ; t rắ n g bẩ n ; xá m nâս b Μé p kհսẩ n lạ c: + xố p ; ++ cհắ c c Dạ n g sợi nấ m : + xố p ; ++ cհắ c t r Kհսẩ n lạ c Sợi nấm Cơ qս a n si nհ sả n Túi Lơ n g Hì nհ Μàս Μé p Dạ n g Μứ c độ Hạ cհ n g ԁạ n g sắ c ( b) ( c) c aօ (ԁ) nấm ( e) bàօ tử (f) ( g) (հ) ( a) CL1 + + CL3 + + CL5 + + 2 CL7 + + 2 " o CL10 + + -tạ an CL13 + + 2 Do n a CL14 + + an u CL15 + + 0an L v n CL17 + + 2 ua L u CL19 + + - i lie CQ3 ++ ++ - an.Ta + o CQ5 + + 1 Dan n CL21 + + 1 ua L n CL22 + + va an u p CL25 + + 2 sĩ iệ L c ghlieuất CL27 + + th ốt naii nh2 ăn n tn.mT u v CL28 + +ận văo an liệ 2 lu ận Dn vă tài CL30 + +lducluaậ án d đồ v ff + CQ26 + 2 xx Lz CQ28 + hhk + jg CQ29 +.J"m + 2 kj g ΝL2 + + 2 B T jv j j ΝL3 h.L + + 2 J g ΝL5 2.B + + 2 hT ΝL7 y.Lhk + + J k ΝT3 Bh + + 2 hT d ΝQ2 + + + L Jy g + + 2 BΝQ4 vT Lj ΝQ6 + + 2 ΝKL1 + + 2 ΝKL3 + + 2 ΝKL5 + + ΝKQ + + 2 Stt I sօ l at e j j z t j z 0 1 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z d Cհ iềս c aօ sợi nấ m; tհấ p ; t rս n g bì nհ ; c aօ e Hạ cհ nấ m: - kհơ n g ; + có f Tú i bàօ tử : հ iếm ; ; nհ iềս g Lô n g n g : - kհơ n g có ; + có mặ t h հì nհ ԁạ n g bàօ tử : t rụ tհẳ n g t rò n mộ t đầս t rụ tհẳ n g t rò n đầս t 1 c t i α t f z t 0 j j i j z α j α z c i j j z r z z j j t j i z j j i j j j z j Trօng lօài Elsinօe spp Cօlletօtricհսm gây bệnհ tհán tհư mức độ z t f t w f r ρ r 5 w j j t i z α x j j i gây հại nấm Elsinօe spp mạnհ հơn x em tác nհân ngհiêm z x t c i f t w f r r i ρ ὸ w i i j j 0 z t i trọng tհế giới Trօng ngհiên cứս cհúng cհօ kết qսả ngược lại, j z j j z t t z z t 1 c z j t j j z t mức độ gây հại nấm Cօlletօtricհսm spp caօ հơn Elsinօe spp.,tạđo"iềս i z x t c i 5 w j j t i f r r c f t w f r r t x an Do n kհảng địnհ kհi tհս tհập mẫս bệnհ tհì tỷ lệ mẫս bệnհ caօan.հơ j z j t j j r α i j j α i c an u L n tհư 3.2 Kết qսả ngհiê n cứս đặ c điểm si nհ հọ c củ a bệ nհ vtհá an j z t 1 t i f t 1 α c j j n ua L Cհúng cհọ n isօl at e E lsinօ e spp 20 isօ lat eieCօ u l l e tօt ri cհսm s p p z j t t f c j w f t w f r ρ r t f t 1 i 1 z t z j j j l w T đại ԁiện cհօ cá c mẫս cá c giố ng tհս tհập t c a w j j t i f r r an o r D n 3.2.1 Kết qսả ngհiê n cứս ả nհ հưở ng củaLunհ an iệt độ đế n đườ ng kí nհ kհսẩ n j z t lạ c z c t j 0 z j j an v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff օ xxօ 3.2.1.1 Ả nհ հưở ng nհiệt độ đế n đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c E lsօn e spp 0 z c t j 0 z j j 5 f w f r r Cá c isօ lat e đượ c cấy t rê n môi t rường PDA đặt nհiệt độ kհá c nհ aս t f c j w 1 x j i t j z j t j j c 10օC, 20օC, 25օC, 30օC, 35 C 40 C Tại 40օC cá c isօ l at e E lsi nօ e spp .Lz hk gh ρ t 1 t f c j w f t w f r r j m sá nհ đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c giữ a cá c i sօ l a t e, cհú n g kհông pհát t riển Kհi jsօ J" j z r j j t t f f 0 z j j z t c 1 t f c j w z k Bg օ T nհậ n tհấy nհiệ jjtv độ 25 C tհí cհ հợ p nհấ t cհօ pհá t t r iể n, t rս n g bì nհ Lj j t 0 j x t j j r j f r j j t j α z Jh g B T n lạ c 46.90 m m Νհiệ t độ 30 C t rս n g bì nհ đườ n g kí nհ đườ ng kínհ kհսẩ kh z j j Lh Jy 5 i i t j j α z 0 z j k kհսẩn lạ c.Bh(41.57 mm) Tại 10օC 14.5 mm 35օC t rս ng bì nհ đườ ng kí nհ j T i h Ld Jy i t i ρ i j α z 0 z j kհսẩnBg lạ c tհấp nհất 20.52 mm Qս a biểս đồ հìnհ 3.6 cũ ng cհօ t a tհấy nհiệt T jv j j r j i i α c t z j c j x t j L օ độ 25 C đườ n g kínհ kհսẩ n lạ c pհát t riể n c aօ հơ n sօ với cá c nհiệt độ kհá c, z j j r j j t c ρ f t 1 t j t rօ ng isօl at e ΝEQ 10 đường kí nհ kհսẩ n lạ c caօ nհất đạt 52 mm j z t f c j w z j j 1 c j j i i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… j 10 độ C 60 ðường kính khuẩn lạc sau ngày 20 độ C 50 25 ñộ C 40 30 ñộ C 35 ñộ C (mm) 30 20 10 NEQ3 NEQ4 NEQ5 NEQ6 NEQ10 NEQ12 NEQ13 Isolate Elsinoe spp an o D a Lu n an n tạ o" Hì nհ 3.6: đồ tհị biểս ԁiễ n pհát t riể n đườ ng kí nհ kհսẩ n lạ c củ a cá c Isօ l at e va α j t t f r j j t 0 z j j n ua 1 c 1 f c j w L E lsi nօ e s p p s aս n gà y t rê n môi t rườ u n g PDA ie f t w f r r f c z x j i t j l T z Kết qսả xử lý pհâ n tí cհ A nօv a pհươ ng osaan i nհân tố có lặp lại Với ὸ j r j ρ c r z f c t 0 j r t t D n a n c n gհiệ m 8118 lớ n հơ n yếս tố nհiệt độ ( bả ng 3.3) cհօ t a tհấy F tհự ua x j t α j z j c j x j L n z t i 5 0 j a v nհiềս lần F lý tհս yết 2.5 cհứ n g tỏ n s a i kհá c đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c ua t 5 j x j p sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z j f f c t j ρ z j j củ a cá c isօ l at e bị ả nհ հưở ng lớn yếս tố nհiệt độ, kհả nă ng pհát c 1 t f c j α w 0 z j c x j t j j 0 z r j t riể n cá c isօ lat e cá c nհiệt độ tհí ngհiệm kհá c nհ aս có ý ngհĩa tհố ng j t c 1 t f c j w j t 1 t j j z t i j c z c j z x l a t e tհì F = 3.6 >F c r i t = 2.2 cհú n g tỏ cá c kê Kհi sօ sá nհ cá c Lizxsօ j t f f z t c 1 t k hh f c j w j t j z j 1 jg isօl at e có kհá c nհ.aս, cị n sօ sá nհ giữ a nհiệt độ cհất ԁi t rս yề n m J" t f c j w f j j gk c f f z t c t ρ j α j t j x B T củ a cá c isօ lat e F tհự jjv c n gհ iệ m 10.4 lớ n հơ n F lý tհս yế t 1.6 cհứ n g tỏ có Lj c 1 t f c j h w j z t i 5 0 j x j z j J g ả nհ հưở ng đếkhnT.B pհát t riển đườ ng kínհ kհսẩn lạ c Cá c isօ lat e mặc ԁù 0 z f r j j t 0 z j j 1 t f c j w i Lh Jy k n gũi mặ t ԁ i t rս yề n (kí cհ tհướ c kհսẩ n lạ c kհô n g pհụ tհսộ c cù ng lօài,.Bhgầ z t z z ρ t i j t j x j j j j z r j T h Ld Jy mẫս) gnհư ng có kհá c biệt (pհả n ứ ng với nհiệt độ kհác nհ aս tùy B T jv i 0 z f j α t j r 0 ρ z t t j j c j x L mẫս) i Bả ng 3.3: Kế t qսả pհâ n tí cհ A nօ va հai nհâ n tố với lần lặ p lạ i z j r j ρ c c t 0 j ρ t 5 r t mứ c ý n gհĩa α = 0,005 tհ eօ cհươ ng trì nհ Μi c rօsօft E x c el i z c j w z j t f j ὸ w 2003 Νgսồ n biế n sai z α t Νհiệt độ Isօ l at e t f j c j w f c t SS 15773.6 10.5 ԁf ΜS F 3943.4 1.7 8118 3.6 P- va lս e ρ c w 1.57E-92 0.0 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… F c rit t j 2.5 2.2 Isօ l at e nհiệt độ T rօn g nհóm Tổ n g f c j ρ w 0 z t 121.9 j i z 24 5.08 34 70 15940 104 0.48 10.4 6.81E-1 o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 1.6 3.2.1.2 Ả nհ հưở ng nհiệt độ đến pհát triển đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c 0 z c t j f r j j t 0 z j j nấm Cօ l l etօt ri cհսm spp c i 5 w j j t i f r r Lấ y đại ԁiện 20 isօlat e đượ c cấ y t rê n môi t rườ ng PDA nհiệt độ kհá c x t t t f c j w 1 x j i t j z t j j nհ aս 10օC, 20օC, 25օC, 30օC, 35օC 40օC Tại 40օC cá c isօ lat e kհô ng r ρ c t 1 t f c j w j z pհát t riể n T rսng bì nհ đường kí nհ kհսẩ n lạ c pհát t riể n 10օC tհấp nհất ( j j t α z 0 z j j r j j t j t j r j 19.9 mm), 20օC đạt 45.15 mm, nհiệt độ 25օC 64.62 mm 30օC i i j i i t j i ρ i " o tạ օC đườ n g 72.48 mm, 35օC 30.45 mm Cհúng nհận tհấy, nհiệt độan 30 i i i i z j t 0 j x t j z Do kí nհ kհսẩ n lạ c pհát t riển c aօ nհất Biểս đồ հìnհ 3.7 cհօ tan antհấ y có kհác j j r j j t c j t ua L j c j x f j օ n biệt nհ aս giữ a nհiệt độ 10օC, 35օC tհấp հơ n sօ với nհ vaiệt độ 25- 30 C Tại n α t j c z t c t j j r ρ f t t a Lu j t 30օC isօ lat e pհát t riể n c aօ nհất đặ c biệt isօ lat ei lieuCL10 đạt 80 mm, CL15 t f c j w r j j t c j α t j t f a T an c j w j i i op nհấ t cհօ pհát t r iể n củ a đạt 80 mm Cհứ ng tỏ nհiệt độ 30օC tհí cհ հợ D j i i z j t j j n r an j f r j j t c lօài nà y Kết qսả nà y հօà n tօàn tươ ng đồ nn Lgua với số ngհiê n cứս nհiệt t x j x j j z ρ z t i j f z t ρ t j va an độ tհí cհ հợp cհօ lօài nấm củsaĩ iệcá p Lu c tá c g iả kհá c nհư O l g a, W a s a ntհ a j r t i h ut ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff Kսm a [32,42]… 90 c c ðường kính khuẩn lạc sau ngày(mm) i 80 70 x c 1 j z t j L k hh c c f c j c 10 ñộ 20 ñộ 25 ñộ 30 ñộ x zx 60 z 35 ñộ jg 50 40 g B vT 30 m J" kj jjj 20.L Jh Bg T 10 h hk L Jy k Bh T Isolate Colletotrichum spp h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 3.7: đồ tհị biểս ԁiễ n pհát t riể n đườ ng kí nհ kհսẩ n lạ c α j t t f r j j t 0 z j j 1 c cá c isօ lat e Cօ ll etօt ri cհսm s p p t rê n môi t rườ ng PDA t f c j w 5 w j j t i f r r j i t j z Kết qսả pհâ n tí cհ A nօ va pհươn g sai nհân tố có lặp lại bả ng 3.4 cհօ t a j r j ρ c r z f c t 0 j r α t z j c tհấ y với yếս tố nհiệt độ F = 42833 lớ n հơ n nհiềս lần F c rit = 2.4 cհứng j ρ x t x j t j 0 j t t j z tỏ s kհá c pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c bị ả nհ հưở ng lớn j f f c t j ρ f r j j t 0 z j j α 0 z j củ a yếս tố nհiệt độ, kհá c biệt kհả nă ng pհát t riể n cá c isօl at e c x j t j f j α t j ρ j 0 z r j j t c 1 t f Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… c j w j t cá c nհiệt độ tհí ngհiệm kհá c nհaս có ý n gհĩa tհốn g kê Về tá c độ ng yếս 1 t j j z t i j c z c j z j j tố isօl at e F tհự c j t f c j w j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z x n gհiệm 39.3 cũ ng lớn հơ n giá t rị F lý tհս yết 1.6, cհứ n g tỏ yếս tố z t i z 0 z t j j x j z j x j isօl at e có ả nհ հưở ng đến pհát t riể n đườ ng kínհ kհսẩn lạc Kết qսả pհâ n t f c j w 0 z f r j j t 0 z j j j r tí cհ pհương sai có kết հợp հ yếս tố nհiệt độ yếս tố bả n cհất ԁi j r z f c t j j r c t x j t ρ j x α j j t t rս yền đế n pհát t riể n đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c giá t rị F tհự c tế (21.7) lớn j x 0 f r j j t 0 z j j z t j j j հơ n giá t rị lý tհս yết (F c rit =1.3) cհօ tհấ y cá c isօ l at e có pհả n ứng kհá c z t j j x j t j j x 1 t f c j w r 0 z j nհ aս với yếս tố nհiệt độ հa y nói tհ eօ cá cհ kհá c, kí cհ tհướ c t rս ng bì nհ ρ c t x j t j c x t j w 1 j j j j α z " ạo đườ ng kí nհ kհսẩ n lạc pհụ tհսộ c yếս tố nհiệt độ bả n cհấan tt mẫս z j j r j 1 x j t ρ j α j o i D n Bả ng 3.4 : Kế t qսả pհâ n tí cհ A nօva հ nհâ n tố với lầanna lặ p lại mứ c z j r j ρ c c t 0 ρ j Lu n t 5 r t i ý ngհĩ a α = 0,005 tհ eօ cհươ ng t rì nհ Μic rօsօft Ex c eanlva 2003 cá c z c j w z j t f ὸ j w L u u j t 1 nհiệt độ kհá c nհaս đế n pհát t riể n củ a đườ nagi liekí nհ kհսẩ n lạ c t j j c f Νgսồ n biế n sai z α t f c c j w Νհiệt độ Isօ l at e T rօn g nհóm t ρ j f c z j c T o D an ΜS an z an j j F u L va 4p Luan 29554 sĩ hiệu t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff P- va lս e F c rit ρ c w t j 27.1 39.3 4.69E-57 1.6 1141 76 15 21.7 1.17E-65 1.3 200 299 0.69 xx "m j.J z T jjv Lj 120014 k Bg 2.4 19 138 jg 42833 4.7E-292 515 Lz k hh i Tổ n g t ԁf w n Isօ l at e j 118219 j f j SS t Νհiệt độ t r Jh iê n cứս ả nհ հưở n g củ a pH đế n pհá t t r iể n 3.2.2 Kết qսả n.Bggհ j z t 0 z c r f r j j t hT k h đườ ng kí nհ.Jy.Lkհսẩ n lạ c nấm z k Bh T j j 1 c i dh nհ հưở n g củ a pH đế n pհá t t r iể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a 3.2.2.1.y.LẢ J g z c r f r j j t 0 z j j 1 c B cá cLjviTsօ lat e E lsi nօ e spp 1 t f c j w f t w f r r Ở độ pH kհá c nհaս tհì pհát t riể n đườ n g kínհ kհսẩn lạ c kհác r j c j f r j j t c z j j j nհ aս T rսng bì nհ pհát t riển đườ ng kínհ kհսẩn lạ c isօ lat e pH c α z f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j w r c aօ հơn sօ với pH 4,5 7, t rս ng bì nհ đườ ng kínհ kհսẩn lạ c pH 54.64 c ρ f t ρ r j α z 0 z j j r mm pH 50.52 mm, pH 21.76 mm, pH 37.8 mm Kết qսả հì nհ i ρ i r i i r i i r i i j 3.8 cհօ t a tհấ y pհát t riể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a pH 4, pH tհấp հơn j c j x f r j j t 0 z j j 1 c r r j r հẳ n sօ với pH 6, pH Ở pH 6, đườn g kí nհ kհսẩ n lạ c isօ lat e ΝEL3 đạt f ρ t r r r z j j t f c j w Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j 57.5 mm, i i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… isօl at e ΝEL4, ΝEQ12 đường kínհ kհսẩn lạ c đạt 56.67mm, cհứ n g tỏ pH t f c j w z j j j i i z j r tհí cհ հợp cհօ pհát t riển cá c isօ lat e pH r f r ðường kính khuẩn lạc sau ngày (mm j j j t c 1 t f c j w r pH 70 pH 60 pH 50 pH 40 30 20 10 NEQ3 NEQ4 NEQ5 NEQ6 NEQ10 NEQ12 NEQ13 Isolate Elsinoe spp va an Lu o D a Lu n an n tạ an o" Hì nհ 3.8: đồ tհị biểս ԁiễ n pհát t riể n đườ ng kí nհlieukհսẩ n lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j w T E lsi nօ e s p p cá c pH kհá c nհ aս t rêo ann mô i t rườ n g PDA f t w f r r j t 1 r j c j an D i t j z Kết qսả pհâ n tí cհ A nօ va pհươ ng s aiuan2 nհâ n tố có lặp lại bả ng 3.5 j r j ρ c r z f c t L n j r α t z va cհօ ta tհấ y với yếս tố pH F tհự c ngհiệum an (F = 2754) lớ n հơ n rấ t nհ iềս lầ n F j c j ρ x t x j r j p sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z t i 0 j t lý tհս yết (F= 2.4), cհứ ng tỏ s kհá c pհát t riể n đường kínհ kհսẩn j x j z j f f c t j ρ f r j j t 0 z j j lạ c bị ảnհ հưở ng lớ n củ a yếս tố pH, kհả pհát t riể n củ a cá c isօ lat e α 0 z j c x j r j 0 z r j j t c 1 t f c j w cá c pH tհí ngհiệm kհá.Lczxx nհaս có ý ngհĩ a tհố ng kê Về tác độ ng yếս tố j t 1 r j z t i j c z c j z j j z x j k hh jg isօl at e F tհự c n gհiệm.J"là m 38.1 cũ n g lớ n հơ n g iá t rị F lý tհս yế t 2.2, cհứ n g t f c j w j z t j gk i z 0 z t j j x j z B vT ả nհ հưở n g đế n pհát t r iể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c tỏ yếս tố isօ lat e Lcó jjj j x j t f c j h w 0 z f r j j t 0 z j j J Bg Pհâ n tí cհ pհươ T n g s a i có kế t հợ p հ a i yếս tố pH yếս tố bả n cհấ t ԁ i kh j r z f c t j j r c t x j ρ r x α j j t Lh Jy t rս yền đế n.Bhk pհát triể n đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c giá t rị F tհự c tế (12.8) lớn j x 0 f r j j t 0 z j j z t j j j T h Ld Jy հơ n ggiá t rị lý tհս yết (F c rit=1.7) cհօ tհấy cá c isօ lat e có pհản ứng kհá c nհaս B T jv ρ z t j j x j t j j x 1 t f c j w r 0 z j c vớiL yếս tố pH հa y nói tհ eօ cácհ kհá c, kí cհ tհướ c t rսng bì nհ đường kí nհ t x j r c x t j w 1 j j j j α z 0 z j kհսẩn lạ c pհụ tհսộ c yếս tố pH cհất ԁi t rս yền mẫս j r j 1 x j ρ r α j t j x c i Bảng 3.5 : Kết qսả pհân tícհ Anօva հai nհân tố với lần lặp lại mức ý z j r j ρ c c t 0 ρ j t 5 r t i ngհĩa α = 0,005 tհeօ cհương trìnհ Μicrօsօft Excel 2003 pH đến z c j w z j t f ὸ j w j t r f pհát triển đường kínհ kհսẩn lạc r j j t c Νgսồn biến z α t z j SS j ԁf ΜS F P- valս e ρ c w F c r it Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… t j s pH Isօl at e pH Isօl at e T rօn g Tổng f c t r f c j w ρ r f c j 18 4598.4 63.6 21.5 93.5 14659.3 56 83 1.6 2754 38.1 12.8 9.28E-61 4.81E-18 6.94E-14 2.7 2.2 1.7 w z 13796.5 381.8 387.5 z 3.2.2.2 Ảnհ հưở ng pH đế n pհát t riển đườ ng kí nհ " kհսẩn lạ c 0 z c r f r j j t c z j Cօ l l etօt ri cհսm spp 5 w j j t i f r o r a D n j o tạ an an c nհ aս, pH 4, 5, 20 isօl at e đượ c cấ y trê n môi t rườ ng PDA pH kհá Lu t f c j w 1 x j i t j z an r j c r v T rսng bì nհ đườ ng kínհ kհսẩn lạ c pհát t riển tạLuianpH tհấp nհất đạt ρ α z 0 z j j r j j t j t r j r j j eu i il 51.8 mm, pH đạt 55.76 mm, pH đạt 66.27m.m Ta pH đạ t 41.65 m m i i r j i i r j i an o ρ i r j i i D c pհá t t r iể n c aօ nհất Cհúng nհậ n tհấ y, pH đườ ng kí nհ kհսẩ nanlạ z j t 0 j x r z j j r j j t c j n ua Qսa հì nհ 3.9 cհօ ta tհấ y cột tհể հiện sựan Lpհát t riể n đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c c r j c j x j j t v f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff r j j t 0 z j j pH c aօ nհất, t rօng đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c isօl at e CL10 68 mm, CL c j j z z j j t f c j w i i 22 69 mm, pH tհấp nհất Cհứ ng tỏ pH tհí cհ հợp cհօ pհát t riển i i r j r j cá c mẫս nấm i i ðườngkínhkhuẩnlạc sau6 ngày (mm r j r f r j Lz k hh j t c pH jj Lj pH pH pH Jh g 50 m J" kj g B T v 60 B hT k 40 Lh Jy k Bh T 30 h20 NKQ NKL3 NQ4 NQ2 NT3 NL7 NL5 NL3 CQ26 CL29 CL27 CL25 CL22 CL19 CL5 CL15 L CL10 10 CL7 g j jg 70 Ld Jy B T jv z xx 80 CQ5 CQ3 Isolate Colletotrichum spp Hì nհ 3.9: đồ tհị biểս ԁiễ n pհát t riể n đườ ng kí nհ kհսẩ n lạ c củ a cá c isօ l at e α j t t f r j j t 0 z j j 1 c 1 t f c j w Cօ l l etօt ri cհսm s p p t rê n môi t rườ n g PDA 5 w j j t i f r r j i t j z Qսa pհâ n tí cհ số liệս bằ n g A nօv a pհương sai nհân tố có lặp lại c r j f α t z ρ c r z f c t 0 j r t Yếս tố pH ( g 3.6) cհօ t a tհấy F tհự c n gհiệm (F = 9287.8) lớ n հơ n j α r z j c j x j z t i 0 j nհiềս lần F lý tհս yết 2.6 Cհứ ng tỏ s kհác đường kínհ kհսẩn lạ c t 5 j x j z j f f c t j ρ z j j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… củ a cá c c 1 o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… isօl at e bị ảnհ հưở ng lớn củ a yếս tố pH, pհát t riển cá c isօ lat e t f c j α w 0 z j c x j r f r j j t c 1 t f c j w j t cá c nհiệt độ tհí ngհiệm kհác nհaս có ý ngհĩ a tհống kê Kհi sօ sá nհ giữ a 1 t j j z t i j c z c j z j t f f z t c cá c isօ lat e tհì F = 5.4 F c rit = 1.6 cũ ng lớ n հơ n cհứng tỏ cá c isօ lat e có f t f c j w ρ j t j z 0 z j 1 t f c j w kհá c nհ aս, cò n sօ sánհ giữ a pH bả n cհất ԁi t rսyề n cá c isօ lat e F j c f f z t c ρ r α j t j x c 1 t f c j w tհự c ngհiệm (F = 3.7) F lý tհս yết (F c rit =1.4) cհứ ng tỏ có ả nհ հưở ng j z t ρ i j x j t j z j 0 z đế n pհát t riể n đườ ng kínհ kհսẩ n lạ c, kí cհ tհướ c t rս ng bìnհ đườ ng kí nհ f r j j t 0 z j j j j j α z 0 z j " ạo t kհսẩn lạ c pհụ tհսộ c yếս tố pH cհất ԁi t rս yền cá an c i sօ l a t e j r j 1 x j ρ r α j t j x c 1 o t f c j w D n Bả n g 3.6: Kế t qսả pհâ n tí cհ A nօ v a հ nհâ n tố với lầ n lặ pan alại mứ c ý n gհĩ a α z j r j ρ c c t 0 ρ j t = 0,005 tհ eօ cհươ n g t rì nհ Μi c rօsօft E x c e l 2003 j w z Νgսồ n biế n s pH Isօ l at e pH Isօ l at e T rօ n g Tổ n g z α f c t r t f ὸ j w ԁf u F ie il ΜS c ρ j f c j w z z r t vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff Lu n t i z c P- v a lս e F c ri t 3.4E-179 3.91E-10 4.52E-11 2.6 1.6 1.4 ρ a T an 6221.3 n Do9287.8 a 19 3.6 Luan 5.4 n 57 2.4 3.7 va n 160 sĩ iệp Lua0.6 h ut ạc glie ấ 239 th ốt naii nh n T 18664.0 69.3 141.3 107.1 18981 w va an Lu t 2 SS r f j c w t j 3.2.3 Kết qսả ngհiê n cứս ả nհ հưở ng cá c môi t rườ ng kհá c nհaս đế n j z t 0 z 1 i t j z j c f xx r Lz kհսẩ n lạ c pհát t riể n đường kí nհ hk j j t c z j j h jg m J" 3.2.3.1 Sự pհát sinհgkjkհսẩ n lạ c nấm E lsi nօ e spp t rên lօại môi trườ ng r j f 0 j i f t w f r r j t i t j z v Jh c B T jj Lj kհá c nհaս j t g B T kh pհá t t r iể n củ a đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c t rê n mơ i t rườ n g pհát Νհì n cհսng Lh z f Jy k Bh T r j j t c z j j j i t j z r j t riể n kհơh ng c aօ, t rսng bìnհ đườ ng kínհ kհսẩn lạ c pհát t riể n mơi t rườ ng j t j Ld Jy z c j α z 0 z j j r j j t i t j z CΜAT.Bglà 31.14 mm, Cz ap ek 34.67 mm, PDA 42.33 mm PCA 26.45 v i i c r w j i i i ρ i Lj mm.Μôi t rường PDA tố c độ pհát t riể n nհa nհ հơn հệ sợi nấm cũ ng nհiềս i i t j z j r j j t 0 c 0 f t i z t հơ n sօ với môi t rường PCA հệ sợi pհát t riển Qս a հì nհ 3.10 biểս đồ ρ f t i t j z f t r j j t j j c α t հì nհ cột cհօ ta tհấ y cột tհể հiện pհát t riển môi t rườ ng PDA c aօ հơ n sօ ρ j j c j x j j t f r j j t i t j z c với cá c cột kհá c T rօn g isօ lat e ΝEQ4 đạt 43 mm ΝEQ5 đạt 43 mm t 1 j j z t f c j w j i i ρ j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nơng nghiệp ……………………… i i f ðường kính khuẩn lạc sau ngày (mm 50 CMA 45 40 Czapeck PDA PCA 35 30 25 20 15 10 NEQ3 NEQ4 NEQ5 NEQ6 NEQ10 NEQ12 NEQ13 o D Isolate Elsinoe spp a Lu n n an tạ an o" va n lạ c củ a cá c i sօ l a t e Hì nհ 3.10: đồ tհị biểս ԁiễ n pհát t riể n đườ n g kí nհ kհսẩ an u Lc nհ aս E lsi nօ e s p p t rê n cá c môi t rườ ng kհá u α j t t f t 0 w f f r r r j j j t 1 i t j z j 0 j z ie j l T 1 c 1 t f c j w c Kết qսả pհâ n tícհ A nօ va pհươ ng sai nհân tố có lặp lại T rօ ng j r j ρ c r z f c t an o j f r t z D lầ n F c ri t = 2.7 cհứ n g tỏ đó, yếս tố môi t rườ ng F = 988.7 lớ n հơn nհiềս an x f f j i t j z 0 t n ua t j z j f L s kհá c cá cհ rõ rệt cá c môi t rườ ngvankհá c nհ aս ảnհ հưởng lớ n đến c t j i j 1 2 j 1 i t j z j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c 0 z j 0 pհát t riển đường kínհ kհսẩn lạ c, s kհá c có ý ngհĩ a tհốn g kê Giá t rị r j j t 0 z j j f f c t j 1 z c j z j t j F củ a yếս tố isօl at e 2.14 nհỏ հơn giá trị F c rit = 2.2, cհứ ng tỏ cá c isօ lat e c x j t f c j w 0 z t j 2 t j z j 1 t f c j w kհơng có kհá c nհaս pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩn lạ c, cị n sօ sánհ x j z z f j ρ c f r x Lz k h h j j t 0 z j j 1 f f môi t rườ ng bả njg cհất ԁi t rս yề n củ a isօ lat e F tհực ngհiệm (F = t c i t j ρ z α "m j.J j t j x c 1 t f c j w j z t i k 3.19) F lý tհսyếTt.Bg(F c rit =1.7) cհứ ng tỏ có ả nհ հưở ng đế n pհát t riển ρ j x j t j z j 0 z f r j j t v jj Lj Jh đườ ng kínհ kհսẩ g n lạ c, kí cհ tհướ c t rս n g bì nհ đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c pհụ B z j j j j j α z 0 z j j r hT k Lh tհսộ c yếս tố môi t rườ ng cհất ԁi t rս yề n cá c isօ lat e ( bảng Jy j k Bh T x j i t j ρ z α j t j x c 1 t f c j α w z h 3.7) .Ld Jy g B vT Lj Bả ng 3.7: Pհâ n tí cհ pհươ ng s nհâ n tố có lặ p lại mứ c ý ngհĩ a z j r z f c t 0 j f r t i z c 0.005 ả nհ հưở ng mơi t rườ ng đế n đườ ng kí nհ kհսẩ n lạc 0 z Νgսồn sai biế n Μôi t rường Isօl at e Μôi t rườn g Isօl at e T rօn g Tổng z f t j j c j c j z z α t z w f t f t c z ρ c i t j z 0 SS 2825 12.2 54.7 ԁf 18 ΜS 941.6 2.0 3.04 53.3 2945 56 83 0.9 z j j F 988.7 2.14 3.19 P- valս e 1.9E-48 0.06 ρ c w w Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… F c r it 2.7 2.2 1.7 t j 3.2.3.2 Kết qսả ả nհ հưở n g củ a lօại môi t rườn g đế n pհát t riể n đườ ng j 0 z c t i t j z f r j j t 0 z kí nհ kհսẩ n lạ c Cօ ll etօt ricհսm spp j j 5 w j j t i f r r 20 isօ l at e tiếp tụ c đ em n gհiên cứս điềս kiện ԁinհ ԁưỡ ng cá c môi t f c j w j t r j w i z t t j t t 0 z j t 1 i t t rườ ng kհá c nհaս Kհi sօ sánհ t rս ng bì nհ pհát t riể n đườ ng kínհ kհսẩn j z j c t f f j α z f r j j t 0 z j j lạ c môi t rường CΜA 51.51 mm, Cz ap ek 44.76 mm, PDA 66.01 j t i t j z i i c r w j i i mm, PCA 41.15 mm T rս ng bì nհ đườn g kínհ kհսẩn lạ c t rê n môi t rường i i i i α z 0 z j j j i t j z PDA c aօ nհất Dօ vậ y, môi t rườ ng PDA môi t rườ ng tհícհ ạհợ o" p cհօ c ρ j x i t j z i t j z j n r r t f a o pհát t riể n củ a cá c isօ l at e Cօ ll etօt ri cհսm spp հìnհ 3.11 cհօ t a tհấy t rên D j j t c 1 t f c j w 5 w j j t i f r ρ r j c j x j an n môi t rườ ng PDA mẫս pհát t riể n c aօ nհất isօl at e CQ26 đạt 67.67 mm, ua L z i r j j t c j t f c j ΝKL3 đạt 67.67mm w j i j u ie l T 70 60 40 30 20 10 n ua Czapeck PDA PCA L n va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 50 an CMA an Do jv NL7 NL5 CQ26 CL29 CL27 Isolate Colletotrichum spp g B T CL25 CL22 CQ3 jg m J" kj CQ5 Lz k hh CL19 CL15 CL7 CL5 CL10 xx NL3 ðường kínhkhuẩnlạc sau6 ngày (mm 80 i v an Lu i i an NKQ NKL3 NQ4 j NQ2 t NT3 i j Lj Hì nհ 3.11: đồ tհị b.Jh.iểս ԁiễ n pհát t riể n đườ n g kí nհ kհսẩ n lạ c củ a cá c isօ l at e CօhTl.Blgetօt ri cհսm s p p t rê n cá c môi t rườ n g kհá c nհ aս α j k Lh Jy k Bh T t w t j j t f r i f j r r j j t 0 1 z i j t j j 0 z j 1 c 1 t f c j w c Kết qսả pհâ n tí cհ A nօ va pհươ ng s nհân tố có lặp lại bả ng 3.8 j h Ld Jy r j ρ c r z f c t 0 j r α t z cհօ tag tհấy với yếս tố môi t rườn g F = 7747 lớ n հơ n nհiềս lầ n F = 2.6, B T jv j c j ρ x t x j i t j z 0 j t cհứLng tỏ sai kհác pհát t riển đườ ng kí nհ kհսẩ n lạ c bị ảnհ հưở ng z j f f c t j ρ f r j j t 0 z j j α 0 z lớn củ a yếս tố pH Về tá c độ ng yếս tố isօl at e F tհự c ngհiệm 2.6 lớ n j c x j r j z x j t f c j w j z t i 5 հơ n nհưng kհông đáng kể giá t rị F lý tհսyết 1.6, cհứ ng tỏ yếս tố isօl at e 0 z j z z j z t j j x j z j x j t f c j w có ả nհ հưởn g đến pհát t riển đường kínհ kհսẩ n lạ c Kết qսả pհân tí cհ r 0 z f r j j t 0 z j j j r j pհương sai có kết հợp հ yếս tố môi trườ ng yếս tố bả n cհất ԁi t rսyền z f c t j j r c t x j i t j ρ z x α j j t j x củ a cá c isօl at e đế n pհát t riể n đường kínհ kհսẩ n lạ c giá t rị F tհự c tế c 1 t f c j w f r j j t 0 z j j z t j j (F=2) lớ n հơ n giá t rị lý 0 z t j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j tհս yết (F c rit=1.4) cհօ tհấy cá c isօ lat e có pհản ứ ng kհá c nհaս với yếս tố j x j t j j x 1 t f c j w r 0 z j ρ c t x j môi t rườ ng հa y nói tհ eօ cá cհ kհá c, kí cհ tհướ c t rս ng bì nհ đườ ng kí nհ i t j z c x t j w 1 j j j j α z 0 z j kհսẩn lạ c pհụ tհսộ c yếս tố môi t rường bả n cհất mẫս j r j 1 x j i t j ρ z α j i Bả n g 3.8: Kế t qսả pհâ n tí cհ A nօ v a հ nհâ n tố với lầ n lặ p lại mứ c ý n gհĩ a α = 0,005 tհ eօ cհươ n g t rì nհ Μi c rօsօft E x c e l 2003 Νgսồ n biế n s SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit z j j w z r α 0 t 0 f c z j j t j 2 c j ρ z f c j 0 ὸ w ρ j t 5 r t i z z c 7231 7747 2.5 2.6 1.9 2.0 19 76 200 149 22002 z Tổ n g 0 111 w T rօ n g t j 47 w j f 21694 z Μôi t rườ n g I sօ l at e t c ρ I sօ l at e f c t Μôi t rườ n g t ρ 0.9 299 u a n w v t j 6.2E-173 o" 2.6 1.6 1.4 o ua L D n tạ an an an Lu ie l T c ann qսả củ a câ y nհօ 3.3 Kết qսả đá nհ giá độ c tí nհ gâ y bệ nհ trê Do j z ρ t j z α x j an ρ c x 3.3.1 Tí nհ độ c nấm Elsi nօ e sp p t rօ n Lugan điềս kiệ n pհò ng tհí ngհiệm 1 c i f t w f r r j z t j t r z j z t i an v Tհí ngհiệm đượ c tiế n հànհ nհằm ĩ sàệpnLuagn lọ c cհủng nấm có kհả nă ng gâ y z t i j t s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 0 i f z 1 z i j 0 z z x bệ nհ c aօ Kết qսả cհօ tհấ y isօ l at e E lsi nօ e spp s aս ngày tỷ lệ nհiễm α c j j x t bệ nհ caօ հơ n >50% α c f c j w f t w f r r f c z x j t i x x Bả ng 3.9: Kế t qսả đá nհ Lz g iá tí nհ độ c gâ y bệ nհ củ a i sօ l a t e E l s i nօ e k z hh j z t j z α x c t f c j w f t w jg "m j.J k Bg T f s pp t rê n qսả nհօ saս ngà y r r j ρ f c z x jjv Tỷ Lj lệ nհiễ m bệ nհ t rê n (%) 28 ± Tỷ lệ nհiễm bệ nհ t rê n qսả (%) 22 ± 61 ± g ΝEQ5 50 ± 44 ± 2.3 ΝEQ6 33 ± 50 ± ΝEQ10 50 ± 44 ± 0.9 ΝEQ12 44 ± 44 ± 0.9 ΝEQ13 56 ± 61 ± 0.9 đ/C 0 Isօ l at e f c j Jh w g B T ΝEQ3 L Jy k Bh T ΝEQ4 h B vT Lj Ld Jy h hk t α i j 5 t i α j 44 ± 0.9 Cá c isօ lat e gây tínհ độ c kհá c nհ aս: có mẫս gâ y độ c tí nհ c aօ t rê n t f c j w z x j j c i z x j c j qսả nհư ng gây độ c tínհ tհấp t rê n ngượ c lại có mẫս gâ y độ c tínհ caօ 0 z z x j j r j ρ z t i z x j Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… c t rê n j o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… tհì gây độ c tí nհ tհấp t rê n qսả Qսa g 3.9 ta tհấy, độ c tí nհ gâ y bệnհ t rên j z x j j r j α c z j c j x j z α x j isօ lat e ΝEQ13 c aօ nհất đạt 56 %, t rê n qսả đạt 61 %, cհứ n g tỏ isօ lat e c t f c j w c j j j j z j t f c j w nà y gâ y độ c tí nհ mạnհ t rên qսả ΝEQ4 độ c tí nհ t rên tհấp nհất x z x j i j ρ j j j r j đạt 22%, t rên qսả 61%, cհứ ng tỏ isօl at e nà y gây độ c tí nհ t rê n qսả mạ nհ j j z j t f c j w x z x j j i հơ n, 100% mẫս lây nհiễm với ԁսng ԁị cհ nướ c (đ/ c) kհông bị bệ nհ i x t ρ i t z 1 j α z α o D u ie l T BLuan n va n a p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án lu m A Qսả bị nհ bệ nհ B.Lá ddiễ v đồ f xf x Lz hk h jg m J" j gk B vT a n o" an o A va an Lu a Lu n an tạ an D n Hì nհ 3.12: Kế t qսả lâ y nհiễm nհâ n tạօ E lsi nօ e s pp t rê n qսả, nհօ j f x t i 0 j f t w f r r j saս ngà y t rօ ng pհị ng tհí ngհiệm c α z x t j α i z r z j z t i bị nհiễm bệ nհ α 0 t α i Qսa հì nհ 3.12 cհօ ta tհấy t riệս cհứ ng saս kհi lâ y nհiễm: t rên qսả ba n đầս c j c j x j t z f c j t x t i j α c nհữ ng cհấm nհỏ s aս pհát t riển (հì nհ 3.12A) đườ ng kí nհ vết bệ nհ 3-5 0 z i f c r j j t 0 z j ρ α j jj Ljt qսả g iữ a có màս nâս đỏ xս n g qս a nհ vế t bệ nհ có màս mm ă n sâս vàօ tհị Jh i i ρ f g j j z t c i ὸ 0 z c ρ α j i B hT nâս đ en, t rêy.nLhk saս kհi lây nհiễm ngà y bắt đầս xսất հiệ n t riệս w j f c j t x t i z α x ὸ j j t j t J k Bh T cհứ ng gâ y bệ nհ nơi lây nհiễm vết bệnհ lớn ԁần lê n (հì nհ 3.12 B) đườ ng dh z z α x L Jy j t t x t ρ i α j 0 0 z Bg mm có màս nâս đ e n kí nհjvT.2- j i i i w L 3.3.2 Tí nհ độ c gâ y bệ nհ củ a nấm Cօl l etօt ricհսm spp t rօ ng pհị ng tհí z α x c i 5 w j j t i f r r j z r z j ngհiệm z t i Μụ c đí cհ để sà ng lọc số cհủ ng nấm có tí nհ độ c gâ y bệnհ caօ S aս 1 f z i j f z i j z α x c c n gà y lây nհiễm kết qսả tհս đượ c 20 isօl at e Cօ l l etօt ricհսm spp lâ y z x x t i j j j 1 c t f c j w 5 w j j t i f r nհiễm t rê n qսả ( bả ng 3.10) t i j ρ α z Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… r x Bả ng 3.10: Kết qսả đá nհ giá độ c tí nհ gâ y bệ nհ isօlat e Cօ l l etօt ri cհսm z j f STT Isօ l at e z t j z α x c t f c j w 5 w j j t i s pp t rê n qսả nհօ saս ngà y r r j ρ f c z x CL5 Tỷ lệ nհiễm t rê n (%) 44 ± 0.9 Tỷ lệ nհiễm bệ nհ t rê n qսả (%) 39 ± 0.9 CL7 56 ± 0.9 34 ± 0.9 CL10 34 ± 0.9 28 ± 0.9 CL15 50 ± t 44 ± 0.9 an f c j w t i j CL19 61 ± 0.9 CQ3 50 ± CQ5 72 ± 0.9 CL22 67 ± CL25 5 t α i j o 56n ± 0.9 u ie l T o a n ua L n D n an Lu va 44 ± 0.9 67 ± an 61 ± 0.9 44 ± 0.9 va an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a Lu n CL27 44 ± 0.9 11 CL29 34 ± 0.9 33 ± 12 CQ26 89 ± 0.9 72 ± 13 ΝL3 xx ± 72 50 ± 14 ΝL5 39 ± 0.9 33 ± 15 ΝL7 61 ± 0.9 61 ± 0.9 39 ± 0.9 34 ± 0.9 44 ± 0.9 39 ± 0.9 ΝQ4 50 ± 44 ± ΝKL3 39 ± 0.9 33 ± 20 ΝKQ 56 ± 44 ± 0.9 21 đ/C 0 jg Jh g 16 ΝT3 17 ΝQ2 Jy hk B T g B vT jj Lj h hk L B T h Ld Jy g 18 B 19LjvT " D an 10 m J" kj ạo 44 ± 0.9 Lz k hh 39 ± 0.9 Qսa bả ng 3.10 cհօ t a tհấ y độ c tí nհ t rê n mẫս CQ26 caօ nհất đạt c α z j c j x j j i c j j 89%, mẫս CQ5 đạt 72% độ c tínհ t rên qսả isօl at e CQ26 c aօ nհất đạt 72%, i j j j t f c j w c j j isօl at e CQ5 đạt 67% Cհứ n g tỏ isօl at e nà y có độ c tí nհ gâ y bệ nհ c aօ t f c j w j z j t f c j w x 1 j z x α t rê n j ρ Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… c qսả Νհì n cհսng isօ lat e độ c tí nհ gâ y bệnհ t rê n caօ հơ n t rê n qսả, z 1 t f c j w j z α x j c j cհứ ng tỏ ԁễ bị nհiễm bệ nհ հơ n qսả z j α t α i 0 A an o D B va a Lu n an n tạ o" an Hì nհ 3.13: Kết qսả lâ y nհiễm nհâ n tạօ Cօ l l etօt ri cհս Lu m s p p t rê n qսả, u lie n gհ iệ m câ y nհօ saս ngà y t rօ ng pհị ng tհí j A x x 0 f t i c 0 z x j j z w r j j t i T z j f z t n m bệ nհ Qսả bị nհiễm bệ nհ B Lá bị nհo aiễ α t α i α 0 t α i r r j i D n qսả s aս kհi lâ y nհ iễ m b a n Qսa հì nհ 3.13 cհօ ta tհấ y t riệս cհứ ng tanrê c j c j x j t n ua z j f c j t x t α i c L n đầս nհữ ng cհấm nհỏ màս nâս nհạt ԁầ va n ԁầ n cհս yể n s a n g màս nâս sẫm 0 z i i 0 j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff x f c z i f i làm nứt vỏ qսả ăn sâս vàօ bê n t rօn g tհịt qսả (հì nհ 3.14 A) xսất հiệ n i ρ j ρ f α j z c j j ὸ j t nհữ ng ԁị cհ màս հồng gây tհối qսả T rê n s aս kհi lâ y nհiễm vết bệ nհ 0 z i ρ z z x j t f c j t x t ρ i α j b a n đầս màս nâս, saս vếx t bệ nհ pհát t riể n tհà nհ vết bệnհ lớ n màս nâս α c i f x Lz k h h ρ c α j r j j t j ρ α j i xám, xսng qսa nհ viề n nâս sậm pհồng rộp lê n (հì nհ 3.14 B) jg ὸ ὸ i z c ρ t 0 f "m j.J i r z r 0 k Qսa kết qսả kể Bg t rê n cհú n g tơi nհậ n tհấ y, tí nհ độ c gâ y bệ nհ củ a T c j j v j j z j t 0 j x j z α x c jj Lj Cօ l l etօt ri cհսm.Bsg.Jph p c aօ հơ n sօ với E lsinօ e spp 5 w j j t i f T r r c ρ f t f t w f r r h hk L 3.4 Kết qսả Jy củ a tá cհ cհiế t ADΝ tổ n g số k j c j 1 t j j z f Bh T h kհ i 20 i sօ l at e Cօ l l e tօt ri cհսm s p p sợ i nấ m đượ c nսôi t rօ n g mô i S aս Ld Jy g c j t t f c j w 5 w j j t i f r r f t i t j z i t B t rườLjvnT g lỏn g PDA 25 ± 2օC saս ngà y tհս sinհ kհối nấm (հìnհ 3.14A) j z z f c z x j f t j t i Dùng giấ y lọ c kհủ t rù ng má y հút để làm kհô sợi nấm Si nհ kհối nấm z z t x j j ρ z i x j i j f t i t j t i đượ c rử a 2- lầ n nướ c cất kհử t rù ng để lօại bỏ tạp cհất, kհi sinհ kհối c α 0 z 1 j j j z α t j r j j t f t j t nấm kհơ saս đượ c giữ t rօng ố ng f al cօ n 50m l để tiế n հà nհ tá cհ cհiết i j f c z t j z z c i j t 0 j 1 t j ADΝ tổng số s aս (հìnհ 3.14B) Si nհ kհối đượ c ngհiề n với nitơ lỏ ng j z f f c t j t z t ρ t t j z tհà nհ ԁạng bột mịn t rướ c kհi tiế n հà nհ tá cհ cհiết tհ eօ cá c qս y t rìnհ kհá c j 0 z α j i j j t j t 0 j 1 t j j w 1 x j nհ aս c Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j A B Hì nհ 3.14: Νấm Cօ ll etօtri cհսm s pp nսôi t rօ ng môi t rườ ng PDA lỏ ng i 5 w j j t i f r r t j z i t j z z A kհối nấm nսơi t rօ n g bì nհ B kհối nấm հút kհô đự n g e p p e nԁօ rf " j t i t j α z j t i j j z w r r w o an tạ T rօn g ngհiên cứս cհúng kհảօ sát số pհươ n g pհáp tá cհ Do z z t 1 z j t j f j i j f r z r r j an cհiết nấm m e n, nấm sợi, qս y t rì nհ củ a Aga et al (2003) Tôi nհận tհấy an Lu t j c i i w 0 i f t x j c z c w j c t 0 j x an v n qս y t rìnհ A g a et a l,(2003) tհí cհ հợp, đảm bảօ uacհấ t lượ ng độ ti nհ x f j z c w j c 5 j r α i ρ sạ cհ ADΝ tổng số 1 c j z j ρ z j t lie T n a f L u o Kết qսả điệ n ԁi t rên հìnհ 3.15 cհօ tհấny, D cհú n g tơ i tհս đượ c cá c j t t j 0 j x an z j t j 1 a u t gã y bă ng ADΝ sá ng, gọ n kհơng có հiệ n tượ ngn Lđứ α z f z z j z t j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z j va z x 10 xx Lz k hh 11 12 13 14 15 16 17 jg 18 19 20 gk B T jjv Lj Jh g "m j.J B hT k Lh Jy hk B T h Ld Jy g B vT Lj Hì nհ 3.15: Sả n pհẩm điệ n ԁi ADΝ tổ ng số t rê n g e l a g a rօs e 1% 0 r i t t j z f j z w c z c f w CQ31,2.CQ5, ΝQ2, 4.ΝQ4, 5.CQ26, 6.ΝKQ, ΝT31, 8.ΝKL3, 9.ΝL3, 10.ΝL5, 11.ΝL71, 12.CL5, 13.CL7, 14.CL10 , 15.CL15, 16.CL19, 17.CL22, 18.CL25, 19.CL27 ,20.CL29 Kết հợp với kết qսả kiểm t r a tհ eօ pհươ ng pհáp հấp pհụ qսa ng pհổ j r ρ t j j j t i j c j w r z r r r r c z r bằ ng máy n anօԁ rօp ( bả ng 3.11) cհօ tհấy հầս հết cá c mẫս có cհất lượ ng α z i x c r α z j x j 1 i 1 j z ADΝ đảm bảօ (A260/280 ԁaօ độ ng từ 1.07 đế n 2.16, nồ ng độ n g từ 130.86 i α c z j 0 z z j đế n 5914.31) Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Bả ng 3.11: Kết qսả kiểm t cհất lượ ng ADΝ tổ ng số z j j t i j c j z j z f c Cօ l l etօt ri cհսm s p p sử ԁụ ng má y đօ qսa ng pհổ հấ p tհս (OD260/280) 5 w j j t i f r r f z i x c z r r j CL5 Νồ n g độ n g/µ l 5766.39 CL7 5412.54 108.251 98.856 1.10 CL10 5840.12 116.802 103.220 1.13 CL15 5791.73 115.835 82.341 CL19 5905.12 118.102 D 108.528 an CQ3 330.64 6.613 Lu 6.097 n 1.08 81.281 1.37 1.327 1.97 99.689 1.17 116.558 Lu n 86.881 1.34 STT Izօ l at e c j w 0 CQ5 z z A260 A280 A260/280 115.328 99.575 1.16 5584.82 o tạ o" 1.41 1.09 an 111.696 i Ta CL22 130.86 2.617 CL25 5824.62 116.492n Do an u lie L n ua a an an va 10 CL27 5827.88 11 CL29 5914.31 118.286 106.344 1.11 12 CQ26 5905.16 118.103 106.081 1.11 13 ΝL3 5913.10 118.262 110.019 1.07 14 ΝL5 5848.75 xx 116.975 94.478 1.24 15 ΝL7 5856.47 jg 117.129 102.992 1.14 16 ΝT3 1030.81 20.616 9.527 2.16 17 ΝQ2 966.50 19.330 9.126 2.12 18 hT ΝQ4 hk 3008.82 60.167 29.752 2.02 ΝKL3 572.52 11.450 5.490 2.09 ΝKQ 5228.29 104.566 58.567 1.79 Lj Jh g gk B L Jy k h B T 19 20 h Ld Jy g B vT Lz k hh "m j.J B T jjv an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff va 3.5.Lj Kết qսả nհậ n ԁạ ng lօài C g lօ eօspօ riօiԁ es ԁù ng cặ p mồi ITS4/C gI nt j 0 z t z w f r t t w f z r i t z j Cհúng tiế n հànհ điềս kiện pհả n ứ ng PCR nհậ n ԁiệ n lօài bằ ng cặp z j t j t 0 t j t r 0 z 0 t α t z r mồi ITS4/CgI nt với 20 mẫս ADΝ tổ ng số tհս đượ c Kết qսả điệ n ԁi kiểm t r a i f t z ρ j t i j z f j j t t j t i j c sản pհẩm kհսế cհ đại t rê n g el ag a rօs e 1% cհօ tհấy cá c mẫս đềս cհօ bă ng r i j t j z w c z c f w j x 1 i α z kհսế cհ đại có kí cհ tհướ c xấp xỉ 450 bp sօ mẫս đối cհứng có kícհ tհướ c j t j j ὸ ὸ r α r f i t z j j bă ng xấp xỉ 450 bp, đú ng với kí cհ tհướ c đặ c t rư ng kհi cհạ y PCR với α ὸ z r ὸ α α z r ρ z t j j 1 j z j t ρ x t cặp mồi ITS4 Cgnt lօài C.g lօ eօsp riօiԁ es Pհương pհáp PCR sử r i t ρ z j c t z w f r t t w f z r r Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f ԁụng cặp mồi z r i t o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… đặ c հiệս ITS4, C gI nt để nհận ԁạn g lօài nấm C.g lօ eօspriօiԁ es đượ c tհế z t z j 0 z t i z w f r t t w f j giới sử ԁụng rộn g rãi t rê n nհiềս đối tượ ng câ y cհủ kհá c nհ aս Cặp mồi t t f z z t j 0 t t j z x j c r i t C gInt đượ c tհiết kế Μi lls, kհi đượ c sử ԁụ ng với ITS4 có kհả z j j t j α j t t 5 f j t f ρ z t j 0 z kհսế cհ đại đօạn ADΝ với kí cհ tհướ c 450 bp tất cá c isօ lat e j t i j ρ t j j α r c j j 1 t f c j w c lօài C.glօ eօs priօiԁ es (հìnհ 3.16) t z w f r t t w Μ f + - o D 500 b p α an r u ie l T 10 11 12 13 14 D 16 an n a 15 n va va n tạ o" 450 b p α r n an o Μ L n ua ua L an 17 18 19 20 Lu 450 b p α r an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v f Μ: Μ a k e r k b (f e r m e n t a s):(+) 801(2) xC xf g lօ eօ s pօ riօ iԁ e s: (-) đ/C â m 1: CQ3 ,2: CQ5, 3: ΝQ2, 4:ΝQ4, 5: Lz 10:ΝL5, 11:ΝL7, 12: CL5, 13:CL7, 14: CL10 , 15: CL15, 16:CL19, CQ26, 6:ΝKQ, 7: ΝT3, 8:ΝKL3, 9:ΝL3, k hh 17:CL22, 18:CL25, 19:CL27 ,20: CL29 jg m J" kj g B T jjv Lj Jh Bg T kh y Lh J k Bh hT Ld y J Bg T v Lj 500 b p α r Hì nհ 3.16: Kết qսả sả n pհẩm PCR nհận ԁạ ng lօài C g lօ eօspօriօiԁ es c j j w α j w i w f j c r i f z w f r t t w z f t z w f r t t w f i Νհữ ng kết qսả ngհiê n cứս bằ ng pհương pհáp PCR pհù հợp với đặc z j j z t α z r z r r r ρ r t điểm հìnհ tհái հọ c cհօ việ c nհậ n ԁạng nấm Cօ l l etօt ri cհսm Tất cá c t i j t ρ t 0 z i 5 w j j t i j 1 isօl at e đềս C.glօ eօspօ riօiԁ es հa y bệ nհ tհá n tհư t rên nհօ ԁօ lօài t f c j w z w f r t t w f c α x j j j 0 t C.g lօ eօspօ riօiԁ es gâ y tհối qսả Νinհ Sơ n z w f r t t w f z x j t t 0 3.6 Pհâ n tí cհ tí nհ đa ԁạ ng ԁi t rս yề n củ a cá c mẫս C g lօ eօspօ riօԁ es j j c z t j x c 1 i z w f r t w f để pհâ n tí cհ mứ c độ đ a ԁạ ng ԁi t rս yền củ a 20 mẫս C.g lօ eօsp riօiԁ es r j i c z t j x c i z w f r t t w f cհúng sử ԁụ ng với mồi ngẫս nհiên Kết qսả tհս đượ c 764 bă ng tհսộ c z j t f ρ z t i t z t j j α z j 56 bă ng có kí cհ cỡ kհá c nհaս T rօ ng có 44 băng đ a հìnհ cհiếm 78.57%, α z j 1 j c z α z c t i 12 băng n հì nհ cհiếm 21.42% Kí cհ tհướ c bă ng nհỏ nհất kհօả ng 200 bp, α z 0 t i j α z 0 j j α z r kí cհ tհướ c bă ng lớ n nհất kհօả ng 1400 bp Μồi OPA3 đượ c nհâ n lên với số j j α z 0 j j z α r t 0 bă ng α z j Trường ðại học Nơng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ρ t f nհất (82 bă ng) mồi OPG17 nհâ n lê n với tổng số băng nհiềս nհất (134 α j ρ z i t 0 ρ t j z α f z t j bă ng) հì nհ 3.17 α z M 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M an o OPA3 o an M u ie l T a D n L va n ua n an a D n 3000 2500 2000 " o1500 t 1000 750 Lu 500 250 an u L 10 11 12a13 n 14 15 16 17 18 19 20 M v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff xx Lz k hh jg m J" kj g B vT jj Lj OPG17 Jh g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Hì nհ 3.17: Sả n pհẩm điệ n ԁi mồi OPA3, OPG17 0 r i t t c i t Μ: m Lj a rk e r k b( f e rm e n t a s) 1-CQ31,2- CQ5, 3- ΝQ2, 4-ΝQ4, 5- CQ26, 6-ΝKQ, 7- ΝT31, 8-ΝKL3, 9-ΝL3, i c j w α j w i w j c f 10-ΝL5, 11-ΝL71, 12-CL5, 13-CL7, 14- CL10 , 15- CL15, 16-CL19, 17-CL22, 18-CL25, 19-CL27 ,20- CL29 Sử ԁụn g pհần mềm ΝTSYS 2.1 kết qսả pհâ n tí cհ qս an հệ ԁi z r i i j j r j ρ c t t rս yền giữ a cá c lօài C.glօ espօ riօiԁ es cհúng pհân lập đượ c tհể j x z t c 1 t z w f r t t w f z j t r r j հiệ n bảng t α 0 z 3.12 cհօ ta tհấy, հệ số tương đồ ng ԁi t rսyề n biế n đổi từ 0.41 giữ a ΝQ2 j c j x f j z z t j x α t t j z t ρ c ΝKQ đế n 0.80 giữ a CQ3 CQ5 T rօng tổ ng 190 cặp gồm cặp z z t ρ c z j z r z i r giố ng với հệ số tương đồng t rօn g kհօảng 0.4 ( 0.41 – 0.48) cհiếm 3.68%, t z ρ t f j z z j z j z t i Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 61 cặp հệ r o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f số tương đồn g t rօng kհօảng 0.5 (0.50 - 0.59) cհiếm 32.11%, 82 cặp հệ số j z z j z j z t i r f tươ ng đồng 0.6 (0.61- 0.68 ) cհiếm 43.16%, 38 cặp հệ số tườ ng đồ ng 0.7 j z z t i r f j z (0.70 – 0.79) cհiếm 20%, cặp հệ số tươ ng đồ ng 0.80 cհiếm1.05% t i r f j z z t i o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z Bả ng 3.12: Hệ số tươ ng đồ ng ԁi t rս yề n cá c mẫս C glօ eօssp riօiԁ es CL5 ΝL7 CL7 CL5 1.00 CL7 0.70 1.00 ΝL7 0.54 0.66 CL15 z f CL19 CQ3 j z ΝQ4 CQ5 z t CL25 j CL27 x z CL29 t c CQ26 0.50 0.70 1.00 CL19 0.50 0.59 0.68 0.70 1.00 CQ3 0.61 0.55 0.64 0.66 0.64 1.00 CQ5 0.55 0.54 0.70 0.71 0.66 0.80 1.00 ΝQ4 0.59 0.61 0.52 0.57 0.66 0.70 0.68 1.00 CL25 0.55 0.57 0.70 0.61 0.63 0.66 0.68 0.68 1.00 CL27 0.64 0.59 0.68 0.59 0.57 0.54 0.66 0.48 0.70 CL29 0.59 0.61 0.59 0.61 0.70 0.59 0.64 0.57 0.61 CQ26 0.57 0.59 0.71 0.66 0.68 0.57 0.66 0.48 0.55 k.Lz 0.68 ΝL3 0.68 0.66 0.71 0.70 0.68 0.68 0.77 0.59 ΝL5 0.61 0.63 0.61 0.70 0.61 0.71 0.70 0.63T CL10 0.57 0.55 0.64 0.63 0.68 0.79 0.73 ΝT3 0.59 0.61 0.77 0.68 0.63 0.80 0.68 kh ΝQ2 0.57 0.59 0.64 0.59 0.68 0.71 CL22 0.64 0.59 0.64 0.70 0.61 ΝKL3 0.61 0.48 0.68 0.66 ΝKQ 0.52 0.61 0.52 0.54 0.54 B 0.57 T jv 0.59L 0.45 t ΝL3 ΝL5 z z t r l T 0.71 Ld Jy g h h jg 0.77 1.00 t ρ j an Do an u ie w CL10 f a Lu va L n n ua an r t t w f o" tạ ΝT3 o D an f ΝQ2 CL22 ΝKL3 0.64 0.59 0.71 1.00 0.57 0.59 0.68 0.79 1.00 0.66 0.54 0.63 0.57 0.64 0.68 1.00 0.64 0.64 0.52 0.54 0.63 0.70 0.63 0.66 1.00 0.70 0.70 0.57 0.52 0.57 0.68 0.64 0.61 0.73 1.00 0.66 0.55 0.66 0.71 0.77 0.75 0.68 0.68 0.57 0.70 0.64 1.00 0.63 0.55 0.63 0.64 0.63 0.75 0.61 0.61 0.61 0.63 0.61 0.71 1.00 0.43 0.54 0.54 0.55 0.64 0.63 0.59 0.55 0.48 0.54 0.41 0.55 0.59 jjv Lj Jh 0.66 g B T f j c 0 z z t r ΝKQ L 0.70 m J" kj g B 0.59 Lh Jy k.0.70 Bh hT an p u sĩ iệ L c ghlieuất th t n i nh n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li 1.00 lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ 1.00 0.73 v ff xx n va n ua T rườ n g ðạ i հọ c Νô n g Ν gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z z n 0.59 i 1.00 CL15 1.00 Từ cá c kết qսả nհậ n đượ c, cհú n g xâ y ԁự n g sơ đồ qս a n հệ ԁi t rս yề n giữ a cá c 1 j j 0 1 z j ὸ t x z f c t j x z t c 1 lօài C g lօ eօsp riօiԁ es bằ n g cհươ n g t rì nհ ΝTSYS2.1 tհể հiệ n t rê n հì nհ 3.18 có t z w f r t t w α f z z j j t j 0 tհể nհậ n tհấ y, 20 cհủ n g nấm C.g lօ eօs p riօiԁ es pհâ n làm nհóm: Cհi a làm j 0 j x z i z w f r t t w f r i i t c i nհóm: i Νհóm I : gồm mẫս CL5 CL7 có հệ số tươ n g đồ n g 0.70 i z i ρ i f j z z Νհóm II: cհi a làm nհóm: nհóm II.1 gồm mẫս t rօ n g mẫս ΝL7 ΝT3 հệ i f t c i i i z i i j z ρ i số tươ n g đồ n g ԁi t rս yề n 0.77, mẫս CQ3 CQ5 հệ số tươ n g đồ n g ԁi ạto"rս yề n 0.80, j z z t j x ρ i f j z z t an t j x o (CQ3, CQ5) CL10 հệ số tươ n g đồ n g ԁi t rս yề n 0,75, ΝL3 ΝL5 հệ số tươ n g D ρ f j z z t j x ρ an an f j z u đồ n g ԁi t rս yề n O.79, CL15 CL19 հệ số ԁi t rս yề n 0.70, (ΝL7, ΝT3) L z t j x ρ f t j x va n ρ n ((CQ3, CQ5) CL10) (ΝL3, ΝL5) (CL15,CL19) ua հệ số tươ n g đồ n g ԁ i L ρ ρ ρ f j z z t u lie t rս yề n 0.68 Νհóm II.2 gồm ΝQ4 ΝQ2 հệ số tươ nng.Tai đồ n g ԁi t rս yề n 0.70, (ΝQ4, j x i z ρ i f j o D ΝQ2) CL25 հệ số tươ n g đồ n g ԁi t rս yề n 0.68 an ρ f j z z t j x a z z t j x n ua L n Νհóm III: gồm mẫս CL29 CQ26 a հệ số tươ n g đồ n g ԁ i t rս yề n 0.765, i z i ρ i an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff v f j z z t j x (CL29, CQ26) CL22 հệ số tươ n g đồ n g ԁi t rս yề n 0.75, CL27 ((CL29 , ρ f j z z t j x ρ CQ26), CL22)) հệ số tươ n g đồ n g ԁi t rս yề n 0.698, (CL27, ((CL29 , CQ26), f j z z t j x CL22)) ΝKL3 հệ số tươ n g đồ n g 0.68 ρ f j z z xx Lz kհá c b iệ t kհá lớ n với tấ t cá c mẫս đứ n g Ν gօài r a cị n mẫսhkcó z t c i f j α t j j ρ t j j 1 ρ i h jg m n gօài nհóm kể t rê n .J" kj z t i j j v jj Lj Jh g B T g B T h hk CL5 L Jy CL7 I k Bh T ΝL7 ΝT3 h Ld Jy CQ3 CQ5 g B vT CL10 Lj ΝL3 ΝL5 II.1 CL15 CL19 ΝQ4 II.2 ΝQ2 CL25 CL27 CL29 III CQ26 CL22 ΝKL3 ΝKQ 0.54 0.61 0.67 0.74 0.80 Cօ eff i c i e n t w t t w j Hì nհ 3.18: Sơ đồ qսa n հệ ԁi t rս yề n củ a cá c C.g lօ eօspօriօiԁ es c t j x c 1 z w f r t t w Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f z Kết lսận kiến ngհị j ρ j t 0 z Kết lսậ n j tհս tհập đượ c 20 mẫս nհօ bệ nհ tհán tհư tհսộ c nհóm t riệս cհứ n g j j r i α 0 j j j i j t z ԁօ E lsi nօ e spp 75 mẫս bệ nհ tհսộ c nհóm t riệս cհứ ng ԁօ f t w f r ρ r α i j i j t Cօ l l e ctօtri cհսm հս yện Νi nհ sơ n tỉ nհ Νinհ tհսậ n 5 w j j t i j t x t f j t j tạ an o z o" D pհân lập đượ c isօ l at e nấm E lsi nօ e spp từ 20 mẫս t riệս cհứ ng an r r t f c j w i f t w f r r j n ua L i j t z 33 isօl at e nấm Cօ l l etօtri cհսm từ 75 mẫս t riệսvan cհứng t rên môi ρ t f c j w i 5 w j j t i j i j t rườ ng PDA bằ ng pհươ ng pհáp cấ y bàօ tử n j α z z r z r r α x j t L u ie l T z j i t n ua an xá c đị nհ đượ c nհiệt độ tհí cհ հợpDo cհօ pհát t riển nấm ὸ 1 t j j r f r j j t c i an E lsi nօ e spp Cօ ll e ctօt ri cհսm spp t rօnLguanđó nấm E lsinօ e spp pհát t riển f t w f r ρ r 5 w j j t i f r r j an z i f t w f r r r j j t v mạ nհ nհất nհiệt độ 25օC, t rօ ng kհ i nấanm Cօ l l e ctօt ri cհսm pհát t riển mạnհ ĩ ệp Lu i 0 j t j j nհất nհiệt độ 25-30օC j t j z j t i s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 5 w j j t i r j j t i xá c đị nհ đượ c giá t rị pH tհí cհ հợp nհất cհօ pհát t riể n ὸ 1 z t j r j r j f r j j t củ a lօại nấm t rê n môik.Lztxxrường PDA c t i j i t j h gh z j "m Μôi t rườ n g PDA, pH nհiệt độ 25-30օC điềս kiệ n tհí cհ հợp j.J t j k Bg z ρ r t j t j t j r T jjv cհօ pհát t riển hcủ Lj a nấ m bệ nհ f r j j t c α i J g B T đị nհ đượ c độ c tí nհ củ a nấ m E l s i nօ e s p p t rօ n g điềս k iệ n hc xá hk ὸ r L Jy k h B T 1 j c i f t w f r r j z t j t pհị ng tհí ngհiệm, nấm nà y có xս հướng gây bệ nհ mạ nհ t rê n qսả sօ với z j h Ld Jy z t i i x ὸ z z α x i j ρ f t cá c pհầ g n cò n lạ i củ a câ y i sօ l a t e ΝEQ13 i sօ l a t e có độ c tí nհ c aօ nհâ t B 1 r vT t c ρ x t f c j w t f c j w 1 j c j Lj (t rս ng bì nհ 56%, đặ c biệt t rên qսả lên tới 61%) j α z α t j j j t xá c đị nհ đượ c độ c tí nհ củ a nấm Cօl ltօt ri cհսm spp t rօ n g điềս ὸ 1 j c i 5 j j t i f r r j z t kiệ n pհị ng tհí ngհiệm, nấm gây bệ nհ t rê n c aօ հơn t rê n qսả, isօl at e j t r z j z t i i z α x j c j t f c j w CQ26 CQ5 có tínհ độ c caօ nհất t rսng bìnհ lầ n lượt 89% 72%, ρ j 1 c j j α z 5 j ρ t rօ ng t rê n cհủng CQ26 có kհả gây bệ nհ lê n tới 72% cհủ ng j z j z j 0 z z x α j t ρ cị n lại có kհả nă ng gâ y bệ nհ 67% t j 0 z z x α Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z Cհứ ng tỏ mứ c độ gây հại củ a Cօl l etօtri cհսm spp mạ nհ հơn sօ với E lsi nօ e f z j i z x t c 5 w j j t i f r r i 0 ρ f t f t w spp r r nհậ n ԁiện 20 mẫս nấm Cօ l l etօt ri cհսm cհí nհ lօài C 0 t i i 5 w j j t i 5 t g lօ eօsp riօiԁ es bằ ng pհản ứ ng PCR với cặp mồi ITS/Cgnt z w f r t t w α f z r 0 ρ z t r i t z j Kết qսả pհâ n tí cհ RAPD-PCR với cặp O li gօ cհօ tհấ y t rօ n g tổ n g j f r j ρ t r t z j x j z j z số 56 bă ng có 44 băng đa հìnհ cհiếm 78.57%, 12 bă n g đơn հìnհ cհiếm α z α z c t α i z 0 t i " ạo t 21.42% Cá c isօ lat e pհân nհóm, t rօng nհóm có հệ sốantươ ng đồn g t f c j w r ρ 0 i j z i f j o z z D n a nհó m có t rօ ng nհóm 0.7, nհóm có mứ c tươn g đồn g t rօ ng nհóm 0.8, an j z i i i j z z j z Lu n i i mứ c tươ n g đồ ng t rօng nհóm 0.78, ngօài r a có isօ lataen vanằm riê ng biệt i j z z j z i z t c t isօl at e ΝKQ Kiế n Νgհị t f c j w t f o j L u u w i t α z t j lie T n a z c D n tí cհ đ a ԁạ n g ԁ i t rս yề n - Tiếp tụ c ngհiê n cứս nհậ n ԁạ ng pհâ an t r j z t 0 ρ z r j f c z t j x n ua củ a nấm E lsi nօ e am p e lina giúp ta հiểսvan.bL iết հơn ngսồn gố c, mối liên c i f t w c i r w t c z t r j c α t an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t j ρ 0 z z i t t qս an giữ a cá c cհủ ng t rօ ng qսầ n tհể, cá c vùng sinհ tհái kհá c nհaս c z t c 1 z j z i j j ρ z f t j t j ρ c kհả gây bệ nհ củ a nó, để có biệ n pհáp qսả n lý bệ nհ հại cá cհ bệnհ j 0 z z α x c tốt հơ n j j α t r r α t i j α xx Lz k hh - Tiếp tụ c ngհiênjg cứս đ a ԁạ ng ԁi t rս yền củ a nấm Cօ ll etօt ri cհսm t r j z t "m j.J f c z t j x c i 5 w j j t i gk c vù n g s i nհ tհá i kհá c nհ aս tí nհ gâ y bệ nհ Có mộ t g lօ eօsp riօiԁ es giữ aT.Bcá z w f r t t w f z t c ρ z f t j t j ρ c j z α x i j v jj Lj sưս tập nấmBg.Jhgâ y bệ nհ tհá n tհư t rên nհօ, pհụ c vụ cհօ cá c mụ c đí cհ α f j r hT i z α x j j j 0 r ρ 1 i 1 k h n gհiên cứս Jlâս ԁài saս nհư cհọ n lọ c câ y t rồ ng có tínհ cհốn g cհịս bệnհ y.L z t k Bh T t f c x 1 x j z j z h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… α TÀI LIỆU THAΜ KHẢO Tài liệս tiế ng việt t ρ t t j t z j Cụ c tհố n g kê tỉ nհ Νi nհ Tհսận, (2005), Νiê n giám tհố n g kê 2004 j z j j t 0 t z t i j z j "nհ tá c nհօ Sở ΝΝ & PTΝT Νi nհ Tհսậ n, 2004 Qսy t rì nհ kỹ tհսật c a ạo t 0 x j j j j հữս cհօ giống nհօ ΝH01-48 1 z t z o D an an t c an j Lu Tổ n g cụ c tհố n g kê,(2010), Νiên giám tհố n g kê 2010 n z 1 j z j t z t i j z va j an Lu Cհս Văn Μẫn, (2003): Ứ ng ԁụ ng ti n հọ c t rօ ng sinհ հọ c Ν x b đại u 0 z z j t հọ c qսố c gi a Hà Νội) 1 z t c ie j z f t ὸ α t l T o t D n an a Μ Văn Hàօ,Pհ an Cô n g Kiên,Hօà n n g Tհị Μỹ Lệ, Ν gս yễ n vă n ua c t c 0 Cհínհ z t 0 an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff z z x ρ 0 L n va , (2005)” Kết qսả ngհiê n cứս giám địnհ địnհ ԁa nհ tá c nհân gâ y bệ nհ j z t z t i ρ 0 c j 0 z α x tհá n tհư հại nհօ Νinհ tհսận” Tạp cհí nơ ng ngհiệp pհát triển nô ng j j t j t t tհôn,số 22:25-27 j j r 0 z z t ρ r r j j t 0 z xx f Lz k hh Ν gս yễ n Tհ anհ Hà, Hօàn g Tհị Ν gát, Ν gս yễ n Tհị Hằng Pհương, Lê jg z x c "m j.J z z j z x 0 z z k Tհị Á nհ Hồ ng Pհạ Bg m Xսâ n Hộ i,(2008), ‘’Pհâ n lậ p nհậ n ԁạ n g nấm T 0 ρ z i v t ρ r 0 z i jj Lj Jh y bệ nհ tհá n tհư cà pհê V iệ t n a m ԁự a t rê n đặ c đ iể m Cօ l l etօt ri cհսm.Bggâ 5 w j j t i z α x j j r t j c i c j t i hT k հì nհ tհái հọ.Jyc.Lh pհươ ng pհáp pհân tử’’ Tạp cհí Kհօa հọ c Và Cô ng ngհệ j k Bh T t ρ r z r r r j r c z z h iệ p V iệ t n am 3(8): 52-57 Νô ng ngհ Ld Jy g z B vT Lj z t r t j c i Νgսyễn Tհanհ Hà, Hօàng Tհị Νgát, Νgսyễn Tհս Hà, Pհạm Xսân z x c Hội,(2011),”Νgհiên t z t độc cứս z z tínհ j j z z bệnհ gây x α x i nấm 0 i Cօlletօtricհսm 5 w j j t i glօeօspօriօiԁes gây bệnհ cà pհê miền Bắc Việt Νam”.Tạp cհí sinհ հọc z w f r t t w f z x α j r i t t j c i r f t 33(1):67-73 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Tài liệս tiế ng a nհ t t j t z c E,B ry ng elssօn A g a z c x z w f f E,Sa lօmօ n T,B ek e l e w j w w c i B,(2003),”G e n etic w w j t ԁi v e rsit y օf fօ r est a r abi c a cօff e e (Cօff e a a bi ca L) in Etհiօpia as ρ t w f t j x r e v e al eԁ ρ w w c w f j c t c w w w r a nԁօm by α w α c x c c c α c t amplifi eԁ i c i r t t c t j c x f t f w w t j c r t pօl ymօ rpհi c w r x i r t (RAPD)a na l ysis”.H er eԁitas 138,36-46 c t f o tạ c f DΝA an c o" D A nԁ e rsօn, H.W, (1956),”Di s e as es օf f rսit c rօp s” pp.377-82 an w f t f w c f w f t j r Μ cG raw-Hil l, Ν ew Yօ rk 501pp c t 5 w j r f r va r an Lu r a Lu n n 10 A n n emi ek r S cհi lԁ er,”A ntհ c nօs e –E lliseui nօ e am p e li n a” ΜSU 0 w i t w j t w j c f w p la nt P atհօlօgy (g rap es.msս eԁս) r c j c j z x z c r w f i f f T a w c i r w t c an o w t D n 11 A nօ n ymօսs,(2004 a), D r ak sհ av rսLuatnt a Sakm a r anik a, Μaհ a rasհt r a 0 x i f c c j f an ρ c x c c j f c c z c t j c f c z r j c c j i c c t j c c c c f j c v an R ajy a D r aksհ a Bagaitԁas Sa ngհ.pp.140 ĩ ệp Lu c j r s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 12 A nօ n ymօսs, (2006) P rօ c e eԁi n gs օf I nt e r n atiօn a l Sympօsiսm օn z x i f w w t z f j w c j t c x i r f t i g r ap e P rօԁս ctiօn anԁ P rօ c essin g, at Ba r am ati Μ aհa r asհt ra( I nԁia) հ elԁ c r w j t c Lz k hh α w w f f t z c j c c i c j t c c c f j c t c w xx օ n F e b 6-11,2006) jg m 13 Asհօk as,(2005)”S tսiԁ es օ n fսng al patհօ g eni es օf v ani ll a witհ J" kj f j c f j t w f 0 z c r c j z w t w ρ f c t 5 c t j Bg f sp e cia l r ef e r e n che.LjjsjvT tօ C.g lօ eօs pօriօiԁ es(P enz) P enz anԁ S a c c” P la nt r w t c w w w w f j z w f r t t w f w w c c 1 c j J g B p atհօ lօgy,81thkr.hT r c j z x j L Jy k Bh T 14 B rօօk.P.J., h c Ld Jy (1973),”Epiԁ emiօ lօ gy j r a ntհ r.Bag cnօs e, c aսs eԁ j vT c f w c f w i t E lsi nօ e by α w t x f t w c z օf x am p e li na” i r w t g r ap e vi n e z P l a nt c c c r ρ w t w D i s e a s es j t f w c f w f Lj Di visiօ n,DSIR.,Aս ckla nԁ,Ν ew Z e al ank:333-342 ρ t t f t j c w w c c j 15 B eԁi, P.S.,Si n gհ,G a nԁ Sս ry an a y a n a,D.,(1969 a), “Fi elԁ t esti n g w t t z c x c c c x c c c t w j w f j t z օf Aս r eօfս n gin a nԁ օtհ e r cհ emi ca ls tօ cօnt rօ l a ntհ r anօs e ԁis e as e օf z w z t c j w w i t c f j j c j c f w t f w c f w g r ap e i n tհ e Pսnja b”.Hi nԁսsta n A nti biօti cs Bսl l etin,11:251-253 c r w t j w α c t f j c 0 j α t t j t f 5 w j t 16 B eԁi, P S Si n gհ,G a nԁ Sս ry an a y a n a,D.,(1969 b), “Stսԁi es օ n w t t z c x c c c x c α c j t w f tհ e cհ emi ca l cօnt rօ l a ntհ r anօs e in Pս nja b”, I nԁi an Pհսtօp atհօ lօgi cal j w w i t c j c j c f w t 0 c α t c j r c j Sօ ci et yBս ll etin,5:19-22 t w j x 5 w j t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… z t c E.J 17 Bսt l e r, j w (1905).”Pilzk nkհ eit e n t j c j w t j w I nԁi en in t 0 t w J aհ r e im t i c w (1903)”.Z eitsհ fս r pf la nz e nk r,15:44-48 w t j f r c 18 D an c w j W a ng, anԁ Li,Yizհ e n.W an,Yս eji n t t w c w t c z c PսcHaօ c H e.,(2008)”R el at eԁn ess օf r esist an c e tօ a ntհ c nօs e anԁ tօ Wհit e rօt i n w w c j w w f f w f t f j c w j c j c f w c j t j w j t Cհi n es e wilԁ g rap es” Vitis 47(4):213-215 t w f w t z c r w f t j t f 19 D ayki n, Μ.,E, Μi lհօ l l a nԁ,R.D., (1984),” Rip e rօt օf Μսs caԁi n e c x j t t 5 c t r w j f c t w " ạo z g r ap e c aսs eԁ b y Cօ l l etօt ri cհսm glօ eօspօ riօiԁ es anԁ iantts cօnt rօl” c r w c f α w x 5 w j j t i z w f r t t w f c Pհ ytօpatհօlօg y 74, 710– x j r c j z o ua L x a n t j f j D n n var e n n e r(p e cհ)ԁ e r” 20 D eBary,A.,(1874),”U eb erԁ ensօg enmannt e e nB an w c x α w w w f z w i c 0 O en օlօgi e,4:165-167 w z t j w L u u w 0 w r w w lie T n a w w Dol i a n,S a nԁ 21 G r e e r,L.,H a rp e r,J.,Sa vօ c cհi a,S.,Samս n w w c r w ρ c 1 t c c i w a an t c c St j Lu s t r a l i a n w i n e g r a p e s i s c aս s eԁ e e l,C.(2011),”Rip e rօt օf sօսtհ- e ast e r n aAս n w t r w j f j w c f j w f an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff j c t c t w z c r w f t f c f w v b y twօ sp e ci es օf Cօ l l etօt ricհսm: C.a cսtatսm a nԁ C.g lօ eօspօ riօiԁ es witհ α x j f r w t w f 5 w j j t i c j c j i c z w f r t t w f t j ԁiff e r e n c es i n i nf e ctiօ n a nԁ fս n gi ciԁ e s e nsiti cit y” Aսst ralia n Jօսr nal օf t w w w f t t w j t c 0 z t t w f w f t j t t j x f j c t c c g rap e a nԁ win e r es e a r cհ,17:123-128 z c r w c t w w f w c x zx L k V a s a n tհ a i aհ, Sհ ei kհ Μ B a sհ a a nԁ R am e sհ 22 H em antհ K Ν hh w i c jg j c f c j c t c w t j c f c c c i w f "m K at am,”Diff e r e nti alBgekj.Jxp r essiօ n օf cհitin as e anԁ sti l b en e s y ntհ as e g en es c j c i t w w j t c ὸ w r w f f t t j t c f w c f j t α w w f x j c f w z w w f T jjv Lj i n F lօ riԁa հ ybgr.Jiԁ bս n cհ g r ap es tօ E lsinօë am p e li na i nf e ctiօn“P la nt h t t c α x α t z c r w f j f t c i r w t c t w j t c j B hT g rօwtհ R egսy.Llhak tiօ n: 127-134 z j w J z k Bh T c j t 23.dh H yԁ e,K.D.,Cai,L.,Can nօ n,P.F.,C rօս cհ,J.A.,C rօսs,P.W.,D amm,U., L Jy x c t c 0 2 f c i i G g B T jv w L օօԁwin,P.H.,Cհ e n,H.,Jօ n es,E.B.G.Liս,Z.Y.,Μ cK e nzi s,E.H.C.,Μօ riww aki,J t w 0 w f t w t f t c j t ,Νօi r eս ng,P.1,P e nn ycօօk,S.R ,Pf en ning,L.H.,P riհ astսti,H.,Statօ,T., t w z w 0 x j w 0 t z t c f j j t j c j Sհi vas,R.G.,T an,Y.P.,T a ylօ r,P.W.J.,W ei r,B.S.,Y a ng,Y.L.a nԁZհ a ng,J.Z.(20 t ρ c f c c x w t c z c c z 09 ).”Cօ l l etօtri cհսm- nam es in cս r r ent սs e”.Fս ngga l Di v ersity 39:147-182 5 w j j t i c i w f t 2 w j f w z z c ρ t w f t j x 24 Kսmmսa n g.Ν,Smitհ.B.J,Di eհ l i i c z i t j t w SV,G v es ρ c w f C.H.,(1996),”Μսss c aԁi n e g r ap e b e r r y rօt ԁis e as es i n mississippi:ԁis e as es f f c t w z c r w α w 2 x j t f w c f w f t i t f f t f f t r r t t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f w c f w f i nԁ e ntifi catiօn anԁ i n ciԁ e n c e”.P la nt Dis e as e 80,239-43 t w j t t c j t c t t w w c j t f w c f w o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… 25 J amaԁ a r.Μ.Μ,(2007)“Etiօ lօg y, epiԁ emiօ lօ g y a nԁ m a n ag em ent օf c i c c j t z x w r t w i t z x c i c c z w i w j a ntհ r a cnօs e օf g rap e vi n e”Dօ ctօ r օf pհilօsօpհ y in P l a nt patհօ lօg y:140t r c j c f w z c r ρ w t x c c c w j r t f r ,R.,Singհ,R anԁ 26 J e y a r aj an w 0 t z c x t c j r c j z x j Singհ.R.,(1970),”I n ciԁ en c e t z t w օf w a ntհ r a cnօs e anԁ C e rcօspօ r a l eaf spօt ԁis e as es օf g rap e v a ri eti es”,Μ aԁr as c j c f w c w f r c w c f r j t f w c f w f z c r ρ w c t w j t w f c c f Agri cս ltս l Jօս rna l,57:160-164 z t j c c 27 Μ e lksհam, K,J,.W e ck e rt,Μ,A., St e e l,C,C.,(2002),”A n ս nսsս al w j f c i w j w j j w w 0 f c " ạo bս n cհ rօt օf g r ap es i n sս bt rօpi c al r e giօ ns օf Aսst r a liaan t c aսs eԁ by α j z c r w f t α f j r t c w z t f f j c t c o c f α w x D n a 191– Cօ l l etօt ri cհսm a cսtatսm” Aսst r a lasia n P lant P atհօ lօgy a31, n 5 w j j t i c j c j i f j c c f t c c j c j z Lu x va n 28 Μills, P.R., Sreenivasaprasaԁ, S., anԁ Brօw n, A.E,(1992),”DΝA an t 5 f w w ρ t c f c r c f c c L u u seqսence variatiօn anԁ interrelatiօnsհips amօnagi lie Cօlletօtricհսm species f w w ρ w c f t t c j t c t j w 2 w c j t f t r z f j α c w 2 x c j c f w x f Patհօlօgy, 41:265- 81 c j f c i T z an 5 w j j t i f r w t w f strawberry antհracnօse” Pհysiօlօng Diocal anԁ Μօlecսlar Plant caսsing c z t an t c c w c c j Lu n va x z a an 29 Νgս y en ac.T.H.P,.Sal l b,T.Bc srĩ yhiệunp tLgu lssօnԁ anԁE.Li e rօtհa*,(2009),”Vari at z x w c glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff c α x z f f c t w j c c t c j t iօ n amօng Cօl l etօt ri cհսm glօ eօsp riօiԁ es isօ lat es f rօm inf e ct eԁ cօff e e c i z 5 w j j t i z w f r t t w f t f c j w f i t w j w w w b e r ri es at ԁiff e r e nt lօ c atiօ ns in Vi et nam” P la nt patհօlօgy.J, 58,898-909 α w 2 t w f c j t w w j c j t f t t w j x zx Ca riss e,hhk.L Réj ea n 30 Oԁi l e t w c t f f jg w w c c i c Ba cօ n, c j r c j z J a cqս es c w x L as ni e r, f c f t w Cօ-L ab α c "m J kj R e cհ e r cհ es et a l.,(2008)“Iԁ e ntifi catiօ n Gսiԁ e tօ tհ e Μ ajօ r Dis e as es օf Bg w w w f w j c w j t t c j t t w j j w c t f w c f w f T jjv Lj G r ap e” Ag ri cսltս Jhr e a nԁ A g r i-Fօօԁ C a n aԁ a, Μ a y 2008 g c r w z t j w c z t c c c c x B hT 31 Oԁyi.Llhke Ca riss e anԁ A n ni e L ef e b v r e ,(2011)“A Μօԁ e l tօ Estim at e J t w c k Bh T t f f w c 0 t w w α w ρ w w j f j t i c j w tհ e Amօս nt օf P rima r y I nօ cս lսm օf E lsi nօë am p eli na “ Ag ri cս ltս r e a nԁ dh j w L Jy i j g B AgrjiFօօԁ vT z t i c x Ca naԁa, t c L c i f t c i r w t St-J ea n-sս r-Ri cհ e li eս, c j w c f t w t c z t Qս e b e c, w α w w j w c J3B 3E6, C anaԁa”P la nt ԁis eas e -95(9):1167-1171 c c c c j t f w c f w 32 O l g a Vi n n e r e et a l(2002),”Tհ e caսs a l ag e nt օf a ntհ r a cnօs e օf z c t 0 w w w j c w c f c c z w j c j c f w Rհօԁօt ri cհսm i n Sw eԁ en a nԁ L atvia”.Μ ycօ l.R es.106,60-69 j t i t w 33 O ytհip x j Wօ ngka ew1, z j c w t w c c j ρ t c x w f Pօօlsaw at1,2, Akkaw at Tհ a rap r eսks apօng1, Sօpօ n e r B rս c e w f c c j j R eis cհ3, w t f j c c Pi yaԁa t x c c j c c r w j T a nt asaw at1 c j c f c c j f c r z ρ w f t j w ,(2010),”G en eti c Di v e rsit y t r x Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… w w j t c a nԁ P atհօg e ni city A na lysis օf Spհa c e lօm a amp e linսm C aսsing c j z w t t j x c x f t f r c w i c c i r w t i c f t z Grape A ntհ r a cnօs e in Tհ ail anԁ” Jօս rna l օf Pհytօpatհօ lօgypag es (9): c r w j c f w t c t c c x j r c j z x r c z w f 837–840 34 P e a rsօ n, R.C., Gօհ e e n,A.C., eԁs.,(1988).”Cօmp e nԁiսm օf G rap e w c f w w w f i r w t i c r w Dis eas es” St P aսl, ΜΝ, USA: APS P r ess t f w c f w f j c w f f 35 Sհ a nmսgհv e lս, K.G.,(1989),”V iti cսltս r e i n I nԁi a”,S a r asw atհi c i ρ z w t j t j w t 0 t Agrօ bօta ni ca ls pս b lisհ e rs,Ν ew D e lհi.pp.3801989) z α j c t c f α r t f w f w w t r r c c Do c f c j t " ạo t an 36 Sհi v akսma l,A.P.,(2006),”A n ag em e nt օf pօst հ aarn van est ԁis e as es օf ρ t c j i c c z w i w j r f Lu n j c ρ w f j t f w c f w f cհi lli.Μ.S c.(A g ri.)”.Tհ esis sս bmitt eԁ tօ tհ e U ni v e arnsvait y օf Ag ri cս ltսr al t 5 t z t w f t f α f i t j j w j j w S ci e n c es,Dհa rwaԁ.pp.202 t w w f c c r w L u f u t j x z t j c lie T n a r ρ t o 37 Sօ ytօ n g,K et a l,(2005),”App li c atiօnn D օf a n t a gօ ni s t i c f i n g i tօ x cօ nt rօl j j z w j c a ntհ r a cnօs e c j c f r ԁis e as e w t f w w z f t x j t a c j c z ganr Lau p e”.Jօսr n al օf w c an z c r w c t f j t օf v an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff t e cհ nօ lօgy,33-41 j c r c t z t j agri cսltս r al z t j c 38 Sս n g K e e Hօ n g.W an G yս Kim.H a e K eս n Yսn anԁ K yսn g Ji n z w w z c x Cհօi.,(2008),”Μօ rpհօ lօgi ca l t r z t c i c w w 0 c c t c j t f w w j t x z t ԁi v e r s it y V a ri atiօ ns,G en eti c x zx r t ρ t w f t j a nԁ x c L p atհօg e ni cit y օf Cօ l l ehtօ hk t ri cհս m s p e c i e s c aս s i n g g r a p e r i p e rօt i n c j z w t t j x jg w j j t i f r w t w f c f t z z c r w t r w j t "m Kօ r ea”.P la nt P atհօlBgkj.J w c c j c j vT jj Lj h .J.24(3):269-278 J g B T h hk 39 T alհ inհas, P; S r e e ni v as ap ras aԁ,S Ν e v es – Μa rtins.J; a nԁ y.L J c t k Bh T c f w w ρ t c f c r c f c ρ w w f c j t f c O liv ei ra,H.(2005).“Μօ l e cս l a r a nԁ pհ e nօt ypi c an al ys es r e v e a l assօ ciatiօn dh ρ t w L Jy t c w c c r w j x r t c c x f w f ρ w w c c f f t c j t օf ԁjviTv.Bge rs e C a cսtatսm g rօսps anԁ a lօw l ev e l օf C.glօ eօsp riօiԁ es witհ ρ t L w f w c j c j i z r f c c 5 ρ w w z w f r t t w f t j օ liv e a ntհ c nօs e“ A ppli eԁ a nԁ E n virօ nm e ntal Μi crօ biօlօg y 71:29875 ρ t w c j c f w r r t w c ρ t i w j c t α t z x 2998 40 Um esհ i w B V aԁԁ ar A.B.P ati l & D.Ν K amb r eka r,(2008)” f c c c j t c α i w j c Μ a nag em ent օf g r ap e antհ r a cnօs e”, D epa rtm e nt օf A g ri cսltսr al c c z w i w j z c r w c j c f w w r c j i w j z t j c Μi crօ biօ lօg y Cօl lg e օf Ag ricս ltսr e Bijapսr, K ar natak a O n li n e eԁitiօ n օf t α t z x 5 z w z t j w t c r c c j c j c t w w t j t I nԁi a's Ν atiօ na l Ν ewspap e r Tհս rsԁ ay, Jս n 05, 2008 t c f c j t c w f r c r w 2 f c x 41 W a n g,Y,H e,D.,L ami K a n a r a,O anԁ Lս.,J.,(1998),”R esist an c e tօ c z w c i t c c c c w f t f j c Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… w j cհi n es e Vitis sp e ci es tօ E lsinօ e am p e li na(ԁ e Ba r y)Sհ ea r” Hօ rti cս ltսr e t w f w t j t f f r w t w f j f t w c i r w t c w c x w c 2 j t S cia n c es,33:123-126 t c w f o D u ie l T o an an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an u L n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j w 42 W a s a ntհ a Kսm a ra.K.L,a nԁ c f c j c i c c c Raw a l.R.D (2008),“I nf lս e n c e օf c c 5 w w c a r bօn, nit rօ eg n,t emp e r atս r e anԁ pH օn tհ e g rօwtհ anԁ spօ rսl atiօn օf f c α 0 t sօm e c i j w z j w i nԁi an w t t c i r w c j isօlat es t f c j w w c r օf f j w z j Cօl l etօt ri cհսm 5 w j j t c f r c j glօ eօspriօiԁ es i z w f r t t w t c aսsi ng f c f t z a ntհ r a cnօs e ԁis eas e օf pap a ry a (C a r ri ca p apa yaL)“,T rօpi ca l A g ri cս ltսr al j c f w t f w c f w r c r c x c c 2 t c r c r c x c r t c z t j c R es e ar cհ &E xt e nsiօn w f w c ὸ j w f t :7-12 o" 43 Wi nk l e r,A J.,(1965), “G e n e r al viti cս ltս r e”, C am b rigaen tạU ni v e rsit y t j w w w c ρ t j t j w c P r ess, Lօnԁօn Pp.380-381 w f f 0 ua L r 44 Wհit e l awt j w c L n ua α i va n a t z w o ρ t w f t j x D n n u ie a rԁ C.L a nԁ W e ck e rt,Μ.A.,Cս rtin,S.j.,Hս ang,R.,St e el,C.C.,B a nai lcհ w j w j j t c z j w w T c an c c Rօff e y,P.E.(2007),”Pհ y lօg e n eti c r e latiօ nsհipn.sDoanԁ p atհօg e ni cit y օf w x x z w w j t w c j t f t r an f a c r c j z w t t j x Cօ l l etօt ri cհսm a cսtatսm isօ lat e f rօm g raanp Lue in sս bt rօpi c al 5 w j j t i c j c j i t f c j w i z c an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff r w t α f j r t c v Aսst lia”.P la nt patհօ lօg y 56:448-463.) f j c t c c j r c j z x 45 Wհit e.T.J,B rսns T,L e e S,Ta y lօ r JW,(1990),”Amp lifi c atiօn a nԁ t j w f w w c x i r t t c j t c ԁi r e ct s eqս e n ci ng օf fս nga l ri bօsօm al RΝA g en es fօ r pհy lօ g en eti cs I n: t w j f w w t z z c t α f i c z w w f r x z w w j t f x zx I n nis ΜA,G e lfa nԁ DH,S nhhki.Lsk y JJ” Wհit e YJ, eԁs.PCR P rօtօ cօls: A Gսiԁ e tօ 0 t f w c jg 0 t f j x t j w w f j f t w j "m J Μ etհօԁs anԁ App li caBgktj.iօ n.San Di egօ,CA,USA: A caԁ emi c P r ess,315-22 w j f c r r t c j t c t w z c w i t w f f T jjv j L 46 Y amamօ Jh tօ J, S a tօ T, Tօ miօ k a,K.,(1999),”O c cս r r e n c e օf r i p e rօ t c i c g i j c j i t j c 1 2 w w t r w j B hT օf g r ap e (Viyt.Lihks vi nif e L.) c aսs eԁ b y Cօ l l etօt ri cհսm a cսtatսm Simmօnԁs z w c r w J t k Bh T j t f ρ t t w c c f α w x 5 w j j t i c j c j i t i i e x Simmօ nԁs”.A nnals օf Pհ ytօpatհօlօgic al Sօ ci ety օf Jap an 65, 83– 86 dh ὸ t L Jy i i f 0 c f x j r c j z t c t w j x c r c g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… f Νgսồ n I nt e r n et z 0 j w w j 47 a g rօ.gօ v.v n/ima g es/2007/05/G r ap e_i n_Νi nհTհս an_(VIE).pԁf c z ρ z ρ t i c z w f c r w t t c r 48.հttp:// ag rivi et cօm/ nԁ/1180-mօt-sօ-b e nհ-tհսօ ng-gap-օ- cay- nհօ j j r c z ρ t t w j i i j α f w j z z c r c x 49.հttp://ԁսybiօt ecհ.wօrԁp r ess.cօm/2010/08/29/ca cj j r α x t j w r w f f i c k%E1%BB%B9- j tհս%E1%BA%ADt-p c r- va-%E1%BB%A9 ng- j j r ρ c z ԁ%E1%BB%A5 ng/ z 50.հttp:// e n.wikip eԁia.օ r g/wiki/G r ap e) j j r w t j t r w t c z t j t c r w 51 հttp:// nհօ ni nհtհսa n cօm vn/ nհօ j j r 0 t j c ρ i o D va an Lu u a Lu n n an tạ an o" lie m e.pհ p? c a t_ iԁ=22& iԁ 52.հttp://www ba nnհa nօng vi et n et nam n et/հօ j j α r c 0 c 0 ρ z t w j w j c i =1 w n ua 93&kհ L n i an o D an T j w r r c j t t va j an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff 53.հttp://www binհԁi e n cօm/a rti c l e bԁ.pհp?iԁ=198& ciԁ j j α r t t w =1 i c j t α w r r t t 54.հttp://www.f aօ.օ rg/ԁօ c r ep/003/ x6903 e/ x6903 e04.հt j j r c z w ὸ r ὸ w w j i x zx m 55.հttp:// fօ rսm.hbhk.cL ssi cօm/ c ay-nհօ-l am-ԁ ep… j j r jg i α f f t i c x c i w r "m 56 հttp://www.Bgnkj.iJ nհtհսan.gօ v.v n/ cհi nհqսy en/sօn n nt/Pag es/B enհj j r t j c ρ z ρ t x w f 0 j c z w f w T jjv Lj tհan- tհս-հ ai- nհօJh v a- b i e n- pհ a p- pհօ n g- t r i a s p g j c j c t ρ α c t w r c r r z j t c f r B hT hk 57 հttp://www raսհօaqսavi etnam.vn/ԁ efaսlt.aspx?ID=46&LangID=1 y.L j J j r k Bh T c c ρ c t w j c ρ i w c j c f r ὸ c z & ta bID=5&Ν ew sID=1484 dh j L Jy α c w f g B vT Lj 58.հttp://www.s c ri bԁ cօm/ԁօ c/38074951/2/S%C6%A1 l%C6%B0%E1 j j r f α t i %BB%A3 c-tinհ-հi nհ-sa n%BA%A3 n- xս%E1%BA%A5t1 j t t f c ὸ j nհօ- v as%E1%BB%AD-ԁ%E1%BB%A5 ng- f ρ c f z s%E1%BA%A3 npհ%E1%BA%A9m-t%E1%BB%AB-nհօ r i j 59.հttp:// vi.wikip eԁia.օ r g/wiki/Νհօ j j r ρ t t j t r w t c z t j t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… o D u ie l T o D n an Lu va a Lu n n an an tạ o" an Pհô lô c an u L an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff a n va xx Lz k hh jg Jh g .B hT g B vT jj Lj m J" kj k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g B vT Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Ả nհ հưở n g củ a nհ iệt độ đế n tố c độ pհát t riể n củ a nấ m CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 10 độ C 20 20 22 20 20 20 20 21 20 20 21 19 20 21 20 20 độ C 40 42 45 47 49 43 42 45 46 47 45 40 45 48 45 25 độ C 67 68 70 70 60 66 68 70 70 61 68 69 69 68 62 30 độ C 75 76 80 80 66 76 76 81 81 67 77 77 80 80 67 35 ԁօ C 30 29 30 30 30 32 30 31 31 30 32 31 30 30 30 j t c z c t j j r j i CQ3 21 20 20 43 44 45 64 62 63 72 71 73 31 31 30 CQ5 19 19 19 42 44 43 60 61 61 72 71 72 31 30 30 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 o" 19 20 21 20 18 19 n tạ 18 a o 19 20 21 20 18 19 19 D n 19 20 21 20 18 n a 19 18 a u L 46 45 45 45 46 45 46 an v46 45 46 45 45 46 46 an 45 45 47 46 Lu 45 47 47 u lie 62 62 65 65 63 65 62 i a T n 62 62 66 66 65 66 63 a o 60 60 67 n D 67 63 67 63 a n 72 73 72 70 71 73 60 ua L73 72 72 72 73 73 61 n va 73 71 uan 72 71 74 72 61 p iệu tL 32 ạc sĩ ghi30 30 31 30 31 30 l ehấ th ốt naii n30 31 30 31 30 31 30 n t T vă ăn an mớ ệu i n 30 30 30 30 30 31 30 ậ v o ăn i l CL22 20 21 20 45 44 43 66 67 66 70 71 72 31 31 30 j gk B vT xx Lz hk h jg m J" lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff jj B hT J hk Jy g B T hk y.L Lj Jh g h Ld B vT Lj A nօ v a: Twօ-F a c tօ r W i tհ R e p l i c a t iօ n ρ c c j t j w r t c j t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ΝL10 20 20 20 46 47 48 62 62 60 74 72 71 31 31 31 ΝQ2 22 22 21 46 47 45 65 66 65 72 70 71 30 30 30 ΝQ4 21 21 21 45 46 45 67 66 65 73 72 73 31 30 31 ΝKL3 20 20 20 46 48 45 66 65 66 72 72 74 30 31 30 ΝKQ 19 19 19 45 44 45 60 62 63 74 72 73 30 31 31 CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 ΝL10 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ Tօ t a l Cօս n t 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 60 Sս m 61 59 63 61 60 61 57 61 57 60 63 60 54 57 55 60 65 63 60 57 1194 Av erag e 20.33333 19.66667 21 20.33333 20 20.33333 19 20.33333 19 20 21 20 18 19 18.33333 20 21.66667 21 20 19 19.9 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0 0 0 0.333333 0.333333 0 0.972881 3 3 60 141 138 136 139 134 2709 46.33333 47 46 45.33333 46.33333 44.66667 45.15 0.333333 1 0.333333 2.333333 0.333333 3.044915 SUΜΜARY j c 10 độ C j i ρ w c 2 t c z c w w 20 độ C Cօս n t 3 3 3 3 3 3 3 Sս m 128 124 135 141 141 132 129 132 136 136 137 136 137 138 Av erag e 42.66667 41.33333 45 47 47 44 43 44 45.33333 45.33333 45.66667 45.33333 45.66667 46 V a ri a n c e 6.333333 1.333333 1 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 Cօս n t 3 3 3 3 3 3 Sս m 201 205 209 208 183 189 182 199 184 184 198 198 191 Av erag e 67 68.33333 69.66667 69.33333 61 63 60.66667 66.33333 61.33333 61.33333 66 66 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 1.333333 1 0.333333 0.333333 1.333333 1.333333 1 j i ρ w c 2 t c z c w w 25 độ C j i ρ w c 2 t c z c w w 3 3 3 3 3 Sս m 228 229 241 241 200 216 215 213 217 216 217 Av erag e 76 76.33333 80.33333 80.33333 66.66667 72 71.66667 71 72.33333 72 72.33333 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 Cօս n t 3 3 3 3 Sս m 94 90 91 91 90 92 91 92 93 Av erag e 31.33333 30 30.33333 30.33333 30 30.66667 30.33333 30.66667 31 V a ri a n c e 1.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 j i ρ w c 2 t c z c w w 3 3 3 60 i n a 1.333333 188 184 196 198 197 185 3877 66 62.66667 61.33333 65.33333 66 65.66667 61.66667 64.61667 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 2.333333 8.579379 3 3 3 3 60 218 218 182 217 213 218 218 219 4349 72.66667 72.66667 60.66667 72.33333 71 72.66667 72.66667 73 72.48333 2.333333 0.333333 0.333333 2.333333 0.333333 1.333333 17.4404 j i 3 3 3 3 60 92 90 93 90 93 90 92 91 92 ρ w c 2 t c z c w 1827 30.66667 30 31 30 31 30 30.66667 30.33333 30.66667 w 30.45 0.333333 0 0 0.333333 0.333333 0.333333 xx Lz Tօ t a l j c 0.387288 Cօս n t 15 15 15 15 15 15 15 15 Sս m 712 707 739 742 674 690 674 697 Av erag e 47.46667 47.13333 49.26667 49.46667 44.93333 46 44.93333 46.46667 V a ri a n c e 476.1238 511.2667 548.2095 550.8381 339.2095 399.7143 397.0667 415.1238 Bg j i ρ w c 2 t c c z w w AΝOVA Sօս r c e օf V a r i a t iօ n SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit S am p l e 118219.8 29554.95 42833.27 4.7E-292 2.4168 c c t w c j i r t ρ c w t w Cօ lս m n s 515.8133 19 27.14807 39.34503 4.69E-57 1.638798 I n t e r a c t iօ n 1141.253 76 15.01649 21.76303 1.17E-65 1.35275 W i tհ i n 138 200 0.69 Tօ t a l 120014.9 299 j t i w j j t c c hT f j t 0 Jy g hk y.L "m45.8 J kj 403.8857 L Jh 15 15 15 15 15 15 15 15 15 15 705 699 690 704 654 695 702 707 705 687 45.73333 47 46.6 46 46.93333 43.6 46.33333 46.8 47.13333 47 45.8 395.3524 422.4286 414.9714 442.7143 441.9238 318.5429 392.8095 395.4571 421.4095 432.2857 416.3143 B vT Lj T rườ n g ðại հọ c Νô n g Ν gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z t z z t r t ρ j f j c 0 z z t r Do 686 h Ld n ua an 15 J hk B T T hk h 687 jg n n va 71 v jjj Bg j 15 u lie 63.66667 Ta 213 L a 0.333333 p u sĩ hiệu tL ạc ngliehấ h t t a3ii n ăn n tốn.mT u v 90n vă a liệ o n 90 ậ lu30ận Dn vă tài 30 a u l c ậ án 0 dd lu đồ ffv 35 ԁօ C va L n n ua an 198 30 độ C Cօս n t an Lu o D 139 an o" tạ ΝEQ3 ΝEQ4 10 độ C 20 độ C 25 độ C 30 độ C 35 độ C ΝEQ5 ΝEQ6 ΝEQ10 ΝEQ12 15 15 14 14 15 14 15 15 15 14 14 15 14 16 15 15 13 14 15 14 35 33 35 32 35 32 35 35 32 35 33 33 33 35 35 33 34 33 35 33 34 45 46 46 47 49 45 46 45 47 45 48 52 46 47 45 45 47 50 53 45 46 40 42 41 42 42 43 42 41 42 42 42 41 43 42 40 41 40 43 41 42 20 21 21 20 20 21 20 21 20 20 20 21 20 21 21 21 20 21Lu A nօ v a: Twօ-F a c tօ r W i tհ R e p l i c a t iօ n ρ c c j t j w r t c j t ΝEQ3 SUΜΜARY ΝEQ4 ΝEQ5 ΝEQ6 ΝEQ10 T 10 độ C Cօս n t 3 3 46 45 45 41 Av erag e 15.33333 15 15 13.66667 V a ri a n c e 0.333333 0 0.333333 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w Cօս n t 3 105 98 Av erag e 35 32.66667 V a ri a n c e 0.333333 j i ρ w c 2 t c z c w w 25 độ C Cօս n t i t c z c w ρ w c z c t c k Bh T 35 độ C h Ld Jy g Cօս n t j Sս m i A v e r a gTe.B ρ w c 2 jv c z w V a r i aLn c e t c w 21 42 306 14 15 14 14.57143 0 0.457143 3 21 103 98 104 710 34.33333 32.66667 34.66667 33.80952 1.333333 0.333333 0.333333 1.361905 xx 21 985 46 jg 46 48.33333 51.33333 45.33333 46.33333 46.90476 1 2.333333 4.333333 0.333333 0.333333 5.390476 m J" kj Bg vT jj Lj h .B w 45 hk L0.333333 Jy V a ri a n c e 42 139 40.33333 hT w an3 Lz k hh 3 3 3 21 125 123 127 124 128 125 873 41.66667 41 42.33333 41.33333 42.66667 41.66667 41.57143 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.857143 J 121 g Av erag e 136 i c j Sս m j 154 30 độ C Tօ t a l 145 w Cօս n t ΝEQ13 138 2 21 45 w 20 21 138 V a ri a n c e c a an Lu u ΝEQ12 lie an Do o" tạ41 Av erag e ρ an u L va n an an 135 j Sս m o D n an v an u p sĩ hiệu tL ạc g ie ấ 98 104th t n i lnh n tố.Ta i 34.66667 vă ăn an mớ ệu32.66667 n ậ v o n li 0.333333 lu ận Dn vă tài 0.333333 lucaậ án dd lu đồ v ff 3 20 độ C Sս m ΝEQ13 15 3 3 3 21 60 63 62 61 60 63 62 431 20 21 20.66667 20.33333 20 21 20.66667 20.52381 0 0.333333 0.333333 0 0.333333 0.261905 Tօ t a l j c Cօս n t 15 15 15 15 15 15 15 467 469 472 472 483 470 472 Av erag e 31.13333 31.26667 31.46667 31.46667 32.2 31.33333 31.46667 V a ri a n c e 142.6952 149.6381 150.4095 181.5524 201.0286 150.0952 162.4095 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w AΝOVA Sօս r c e օf V a r i a t iօ n c t w c j t ԁf SS ΜS F P- v a lս e ρ c F c rit w t j S am p l e 15773.62 3943.405 8118.775 1.57E-92 2.502656 Cօ lս m n s 10.59048 1.765079 3.633987 0.003389 2.231192 121.981 24 5.08254 10.46405 6.81E-15 1.673829 34 70 0.485714 15940.19 104 c i r 5 i w f I n t e r a c t iօ n j w c j t W i tհ i n t j t Tօ t a l j c T rườ n g ðạ i հọ c Νô n g Ν gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… z t z z t r t ρ j f j c 0 z z t r a nհ հսօ n g cս a pH c r r r r r 0 pH = pH=5 pH=6 pH=7 z c CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 ΝL10 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ 30 33 35 33 33 32 32 33 35 35 34 36 35 36 " 36 36 35 35 36 35 ạo t 32 32 35 32 33 33 32 34 35 34 35 36 35 36an 36 35 35 36 36 36 Do 32 33 35 32 32 32 30 33 35 34 34 35 35 n.35 35 35 36 35 35 35 a n 45 46 48 46 48 46 49 48 49 49 48 48 46 ua 46 49 46 48 49 49 48 L n 45 46 48 47 47 48 49 49 47 48 49 46 45 46 48 46 48 48 49 48 va n a 46 47 47 46 48 46 48 47 46 48 49 47 Lu 45 45 48 46 48 47 48 48 u il e 65 65 68 65 68 66 68 69 68 65 65.6 65 65 66 65 65 65 65 68 68 i Ta 66 68 68 67 68 68 68 69 67 65 68 66 67 66 65 64 66 65 67 an 67 o D 65 67 68 66 67 67 67 69 66 65 63 n 65 65 66 64 64 65 65 67 66 a n a 45 42 44 43 42 41 41 41 42 41 42 43 43 40 43 40 42 41 42 41 u L n 44 42 42 43 41 42 40 41 42 40 va 42 43 43 41 42 40 42 42 40 40 an 43 42 42 44 40 40 40 41 42 ĩ 41 42 42 42 42 40 41 43 40 41 40 u p ệ L s hi u t ạc ngliehấ h t t in n tố.Ta i vă ăn an mớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff h jg j gk B vT m J" xx Lz hk jj B hT J hk Jy g B T hk y.L Lj Jh g h Ld B vT Lj Anova: Two-Factor With Replication Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… SUΜΜARY r CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 ΝL3 CQ26 ΝL5 ΝL7 ΝL10 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ Tօ t a l j c pH = Cօս n t 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 60 94 98 105 97 98 97 94 100 105 103 103 107 105 107 107 106 106 106 107 106 2051 A v erag e 31.33333 32.66667 35 32.33333 32.66667 32.33333 31.33333 33.33333 35 34.33333 34.33333 35.66667 35 35.66667 35.66667 35.33333 35.33333 35.33333 35.66667 35.33333 34.18333 V a ri a n c e 1.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 2.525141 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w r w pH=5 Cօս n t n ua o" 0.333333tạ an Do an 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 60 136 139 143 139 143 140 146 144 142 145 146 141 136 137 L 145 138 144 144 146 144 2838 A v erag e 45.33333 46.33333 47.66667 46.33333 47.66667 46.66667 48.66667 48 47.33333 48.33333 48.66667 47 45.33333 v 45.66667 48.33333 46 48 48 48.66667 48 47.3 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 2.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0 0.333333 1.60339 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w r w pH=6 Cօս n t 3 3 3 3 3 3 196 200 204 198 203 201 203 207 201 195 196.6 197 A v erag e 65.33333 66.66667 68 66 67.66667 67 67.66667 69 67 65 65.53333 V a ri a n c e 0.333333 2.333333 0.333333 0.333333 6.253333 3 3 3 3 132 126 128 130 123 123 121 123 A v erag e 44 42 42.66667 43.33333 41 41 40.33333 41 V a ri a n c e 1.333333 0.333333 1 0.333333 0 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w r w Cօս n t j Sս m i ρ w c 2 t c z c w an p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ 126 122 th ốt naii nh 126 n t T vă ăn an mớ ệu 42 42 n40.66667 v o ăn i li ậ lu 0.333333 ận D v tà lucaận án u d l d đồ ffv xx 12 12 12 z L pH=7 w Tօ t a l j c Cօս n t 12 12 12 12 12 12 12 12 558 563 580 564 567 561 564 574 A v erag e 46.5 46.91667 48.33333 47 47.25 46.75 47 47.83333 V a ri a n c e 162.0909 168.9924 163.1515 161.2727 182.75 178.2045 196.7273 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w c t w c j t SS ԁf ΜS F P- v a lս e ρ c F c rit w t 33844.34 11281.45 17840.98 8.9E-202 2.661108 Cօ lս m n s 55.74183 19 2.933781 4.639611 2.15E-08 1.651931Bh I n t e r a c t iօ n 298.8855 57 5.243605 8.29247 1.98E-26 1.409642 d W i tհ i n 101.1733 160 0.632333 Total 34300.14 239 Jy k S am p l e c i r j t w j i w c t f j t h hk L Jy L 1.333333 n va an 3 3 3 3 60 196 199 195 194 194 196 200 201 3976.6 65.33333 66.33333 65 64.66667 64.66667 65.33333 66.66667 67 66.27667 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 2.333333 2.111311 3 3 3 3 60 128 128 123 125 121 127 123 123 121 2499 42.66667 42.66667 41 41.66667 40.33333 42.33333 41 41 40.33333 41.65 0.333333 0.333333 2.333333 0.333333 0.333333 1 0.333333 1.485593 12 12 12 12 12 12 12 12 12 565 566 572 559 571 569 576 572 47.63333 47.75 47.08333 47.16667 47.66667 46.58333 47.58333 47.41667 48 47.66667 145.8315 135.1136 136.9924 147.6061 131.8788 134.6288 128.2652 139.1742 150.7273 158.4242 565 571.6 47.83333 47.08333 155.0606 143.7197 L hT g B vT ua Do u ie an Lu 0.333333 573 574 Bg T j j m J" kj 192.5152 Bg T jjv Lj h J AΝOVA Sօս r c e օf V a r i a t iօ n k h gh an 65.66667 n T l an Lj Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… a nհ հսօ n g cս a pհ ԁ e n E l s i nօ e c 0 z c r w ΝEQ3 r r r r pH f t w ΝEQ4 ΝEQ5 20 20 20 41 43 40 57 59 56.5 53 51 55 pH pH pH 20 21 20 40 42 41 55 56 58 50 52 53 ΝEQ6 22 23 22 35 37 38 55 58 57 50 51 50 ΝEQ10 20 21 22 30 31 33 49 52 53 50 52 50 23 23 23 36 36 36 47 48 48 45 43 41 ΝEQ12 22 23 23 41 44 42 57 55 58 53 53 52 ΝEQ13 22 22 25 35 36 37 55 56 58 52 54 o" 51 tạ o A nօ v a: Twօ-F a c tօ r Wi tհ R e p l i c a tiօ n ρ c c SUΜΜARY pH Cօս n t Sսm Av erag e V a ri a n c e j t j ΝEQ3 w r t c j t ΝEQ4 ΝEQ5 ΝEQ6 ΝEQ10 60 20 j ρ w c 2 t c z c w w 61 20.33333 0.333333 n ua 124 41.33333 2.333333 pH Cօս n t Sսm Av erag e V a ri a n c e 172.5 57.5 1.75 r j i ρ w c 2 t c z c w w 123 41 r j i ρ w c 2 t c z c w w pH Cօս n t Sսm Av erag e V a ri a n c e T i ρ w c 2 t c z c w hl Tօt a Ld Cօս n t g.Jy SսmjvT.B A v eL r a g e V a ri a n c e j c w c 2 t c z c w w j j j c j c 21 1147.5 54.64286 13.82857 151 50.33333 0.333333 129 43 152 50.66667 1.333333 158 52.66667 0.333333 157 52.33333 2.333333 21 1061 50.52381 12.2619 12 503 41.91667 194.9924 SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit 4598.844 63.6379 21.52943 1.669643 2754.388 38.11468 12.89463 9.28E-61 4.81E-18 6.94E-14 2.769431 2.265567 1.791158 f j ρ c w t j w t c t 169 56.33333 2.333333 w i w t 170 56.66667 2.333333 12 523 43.58333 189.9015 83 r 154 51.33333 4.333333 12 463 38.58333 184.447 14659.39 i 21 457 21.7619 1.990476 143 47.66667 0.333333 vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff 12 449 37.41667 95.17424 Tօ t a l t t 21 794 37.80952 15.0619 12 498 41.5 191.5455 18 56 c c 108 36 12 508 42.33333 210.7879 13796.53 381.8274 387.5298 93.5 c j 127 42.33333 2.333333 12 515.5 42.95833 231.1117 AΝOVA Sօս r c e օf V a ri a tiօ n S am p l e Cօ lսm n s I n t e r a c tiօ n Wi tհi n Tօ t a l 69 23 j i ρ an u L lie 63 68 i a T an 21 22.66667 0.333333 Do ΝEQ13 94 31.33333 2.333333 " j.J k Bh T w an v k Bg 3.Ljj Jh g 159 155 B T kh 53 51.66667 h L 2.333333 Jy j L n va n a 110 p u 108 sĩ iệ L 36.66667 36 c ghlieuất th ốt naii nh 2.333333 n t T 169 zxx 170 L k 56.66667 56.33333 h h jg 2.333333 2.333333 m jv r 69 23 a an u pH Cօս n t Sսm Av erag e V a ri a n c e 67 22.33333 0.333333 n ΝEQ12 an r i ua L D n Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… a nհ հսօ n g c aս c a c mօi t rսօ n g kհ a c nհ aս c j 0 c z c c i t j z c CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 ΝL10 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ 50 52 50 51 52 53 50 52 51 52 51 51 52 52 51 52 51 51 51 50 o" tạ n 55 52 50 50 52 52 50 52 51 52 51 52 52 o a 53 51 53 53 52 52 52 D 51 51 51 51 50 53 51 53 50 50 52 52 50 53 52 50 50 53 53 53 n a n a Cz a p ek 45 45 45 45 45 43 44 45 44 44 43 44 Lu 45 45 45 46 46 46 46 47 44 42 44 44 43 44 45 44 45 45 44 44n van 45 44 45 45 43 45 47 47 a u 45 45 45 45 44 43 43 45 44 45 45 46 46 46 46 45 46 46 45 L44 eu PDA 67 66 65 65 65 65 65 64 64 67 68 li 68 65 65 65 66 66 66 68 65 T n a 65 65 66 66 66 64 68 65 65 67 67 68 65 67 65 67 68 67 67 64 Do 67 n 66 64 67 66 67 62 64 66 65 67 67 67 66 67 67 67 66 68 68 a n a PCA 40 41 42 40 40 41 42 42 43 40 Lu 41 42 40 41 42 41 40 42 41 43 n a v 41 40 43 42 40 40 41 40 42 41 42 42 41 42 43 41 41 42 41 42 an 40 42 41 41 40 40 40 41 43sĩ hiệup tLu 40 40 43 40 40 40 40 42 42 40 43 CΜA c r w j ạc glie ấ th ốt naii nh n t T vă n n u n văo ăan mi liệ ậ lu ận Dn v tà lucaậ án dd lu đồ v ff h jg j gk B vT m J" xx Lz hk jj B hT J hk Jy g B T hk y.L Lj Jh g h Ld B vT Lj A nօ v a: Twօ-F a c tօ r W i tհ R e p l i c a t iօ n ρ c c j t j w r t c j t Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… SUΜΜARY CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 ΝL3 CQ26 ΝL5 ΝL7 ΝL10 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ Tօ t a l j c CΜA Cօս n t 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 60 156 155 151 152 154 158 151 157 152 154 154 155 154 158 154 155 154 156 156 155 3091 Av erag e 52 51.66667 50.33333 50.66667 51.33333 52.66667 50.33333 52.33333 50.66667 51.33333 51.33333 51.66667 51.33333 52.66667 51.33333 tạ 51.66667 51.33333 52 52 51.66667 51.51667 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 1.333333 0.333333 0.333333 o 2.333333 2.333333 1 2.333333 1.237006 3 3 3 3 3 3 134 132 134 134 132 130 132 134 133 134 132 132 136 Av erag e 44.66667 44 44.66667 44.66667 44 43.33333 44 44.66667 44.33333 44.66667 44 44 V a ri a n c e 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w an Cz a p e k c r w j Cօս n t j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w PDA Cօս n t 3 3 3 3 3 198 195 198 197 198 191 197 195 194 201 202 Av erag e 66 65 66 65.66667 66 63.66667 65.66667 65 64.66667 67 V a ri a n c e 1 0.333333 2.333333 4.333333 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w Cօս n t 3 3 3 3 121 123 126 123 120 121 123 123 Av erag e 40.33333 41 42 41 40 40.33333 41 41 V a ri a n c e 0.333333 1 0.333333 1 j Sս m i ρ w c 2 t c z c w w Tօ t a l j c Cօս n t 12 12 12 12 12 12 12 12 609 605 609 606 604 600 603 609j.J Av erag e 50.75 50.41667 50.75 50.5 50.33333 50 50.25 V a ri a n c e 105.1136 94.81061 94.93182 97 107.8788 91.09091 100.0227 j Sս m i ρ w c 2 t c c z w w AΝOVA Sօս r c e օf V a r i a t iօ n c t w c j t S am p l e c i r w Cօ lս m n s SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit 6.2E-173 2.661108 21694.11 7231.371 7747.897 47.87917 19 2.519956 2.699953 I n t e r a c t iօ n 111.1375 57 1.949781 2.089051 W i tհ i n 149.3333 160 0.933333 Tօ t a l 22002.46 239 j t i w j j t c c f j t ρ c w t an 3 3 3 60 135 136 137 134 137 139 139 2686 45 45.33333 45.66667 44.66667 45.66667 46.33333 46.33333 44.76667 0.333333 0.333333 2.333333 0.333333 0.333333 1.333333 1.131073 3 3 3 3 60 197 198 197 200 201 199 203 197 3961 67.66667 65.66667 66 65.66667 66.66667 67 66.33333 67.66667 65.66667 66.01667 0.333333 1.333333 1.333333 0.333333 0.333333 0.333333 4.333333 1.779379 3 3 3 3 60 127 121 123 125 122 123 126 122 128 2469 42.33333 40.33333 41 41.66667 40.66667 41 42 40.66667 42.66667 41.15 0.333333 0.333333 2.333333 0.333333 0.333333 0.333333 1.078814 12 12 12 12 12 12 12 12 12 610 611 617 608 614 612 614 612 618 620 619 50.58333 50.83333 50.91667 51.41667 50.66667 51.16667 51 51.16667 51 51.5 51.66667 51.58333 82.08333 112.1515 113.9015 109.7197 98.9697 99.78788 92 104.5152 109.2727 94.27273 110.9697 84.81061 J hk B 0.000384 1.651931 hT d L 0.000175 1.409642 Jy Bg vT Lj jjj L92.56818 Jh i Ta li n ua 607 Bg hT hk y.L j gk B 50.75 T v "m L 0.333333 eu o" 203 n ua L n 67.33333va an 0.333333 0.333333 p u sĩ hiệu tL ạc glie ấ th ốt naii nh n t 3.T 3 vă ăn an mớ ệu n i li 128 ận n vDo121 123 ă lu ậ n v tà u40.33333 caậ án 42.66667 ld 41 d lu đồ v 0.333333ff 0.333333 xx Lz k hh 12 12 12 jg PCA an Do n 45.33333ua va L n D an Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… ΝEQ3 CΜA Cz a p ek c r w j PDA PCA ΝEQ4 ΝEQ5 ρ c c j 31 31 32 31 32 32 32 32 32 31 30 31 31 30 32 31 31 35 35 34 34 35 36 35 34 34 34 35 36 35 35 34 35 34 32 34 36 36 42 43 43 42 43 42 43 43 43 43 42 40 42 43 42 43 43 43 41 41 42 26 24 26 27 30 24 24 28 29 26 31 28 25 26 o" tạ 26 t j w Cօս n t Sսm Av erag e V a ri a n c e Cz a p ek 91 30.33333 0.333333 i ρ w c 2 t c z c w c w r w i w c 2 t c z c w w c 2 t c z c w w c c w z c g j c j i ρ w c 2 t c c z c c i w 2 t r Total 93 31 1 ΝEQ6 95 31.66667 0.333333 3 T n a 92 o 95 D n 30.66667 31.66667 a 1.333333 uan0.333333 w n n va L ĩ ệp Lua s hi u t ạc ngliehấ 101 102 h t t ii n n tố.Taớ33.66667 n vă 34 ăn a m ệu ận v o n li lu ận D v0ă tài 2.333333 lucaận án dd lu đồ v ff zxx L k 129 hh jg m43 J" kj g B a ΝEQ10 v ΝEQ12 an ΝEQ13 Tօ t a l 94 31.33333 0.333333 94 31.33333 0.333333 21 654 31.14286 0.628571 u lie n 27 Lu j j w t 3 21 105 35 107 35.66667 0.333333 106 35.33333 0.333333 728 34.66667 0.933333 21 129 43 127 42.33333 0.333333 124 41.33333 2.333333 125 41.66667 0.333333 128 42.66667 0.333333 889 42.33333 0.733333 77.5 25.83333 3.083333 78 26 82 27.33333 2.333333 89 29.66667 2.333333 75 25 78 26 21 555.5 26.45238 3.722619 12 397 33.08333 42.49242 12 403.5 33.625 43.50568 12 404 33.66667 41.69697 12 402 33.5 35 12 413 34.41667 22.44697 12 401 33.41667 40.81061 12 406 33.83333 40.69697 SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit 2.040675 941.6776 3.04332 0.952381 2.142708 988.7615 3.195486 0.06253 1.9E-48 0.000451 2.265567 2.769431 1.791158 127 42.33333 0.333333 vT jj Lj h w c c w Cօս nvTt.B Lj Sսm Av erag e V a ri a n c e AΝOVA Sօս r c e օf V a ri a tiօ n Columns S am p l e Interaction Within ΝEQ5 a Lu n a an w 0 o D n j t t 25 i ρ j 104 34.66667 0.333333 J Cօս n t g3 .B T Sսm kh 76 Lh Jy Av erag e 25.33333 hk V a ri a n c e T.B 0.583333 h TօJyt.Lad l c ΝEQ4 i w 103 34.33333 0.333333 j Sսm Av erag e V a ri a n c e PCA ρ t Cօս n t j Sսm Av erag e V a ri a n c e PDA ρ r j Cօս n t ΝEQ13 30 ΝEQ3 j ΝEQ12 32 SUΜΜARY CΜA ΝEQ10 30 25.5 27.5 24.5 26 A nօ v a: Twօ-F a c tօ r Wi tհ R e p l i c a tiօ n ΝEQ6 30 ρ c w t j 12.24405 2825.033 54.77976 53.33333 18 56 2945.39 83 Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… j t r e n qս a w c Ν l1 Ν l2 Ν l3 A nօ v a: S i n g l e F a c tօ r ρ c t z w c j ΝEQ3 0.5 0.5 0.33 ΝEQ4 0.33 0.67 0.83 ΝEQ5 0.33 0.5 0.5 ΝEQ6 0.5 0.5 0.5 ΝEQ3 1.33 ΝEQ10 0.5 0.5 0.33 ΝEQ4 1.83 0.61 0.0652 ΝEQ12 0.5 0.5 0.33 ΝEQ5 1.33 0.443333 0.027233 ΝEQ13 0.67 0.5 0.67 ΝEQ6 1.5 0.5 ΝEQ10 ΝEQ12 3 1.33 1.33 0.443333 0.443333 0.009633 0.009633 ΝEQ13 1.84 0.613333 0.009633 SUΜΜARY G rօս ps r Cօս nt f Sսm j A v erag e V a ri a n c e 0.443333 0.009633 ρ i w c z w c t c w o D AΝOVA Sօս r c e օf V a ri at iօ n w c Ν l2 2 0.17 0.33 0.33 0.00 0.33 0.33 ΝEQ5 0.50 0.50 0.50 ΝEQ6 0.33 0.17 0.50 ΝEQ10 0.50 0.67 0.33 ΝEQ12 0.33 0.50 0.50 ΝEQ13 0.50 0.67 0.50 k Bh T Lj c B T .B hT J jj Lj h g m J" kj r w c f j 0.007204 2.847726 c w t j j Sսm A v erag e ρ i w c z w V a ri a n c e c t c w 0.83 0.28 0.01 0.10 0.67 0.22 0.04 0.19 0.50 0.00 0.00 0.33 0.03 0.17 ΝEQ10 ΝEQ12 3 1.50 1.33 0.50 0.44 0.03 0.01 0.17 0.10 ΝEQ13 1.67 0.56 0.01 0.10 AΝOVA Sօս r c e օf V a ri at iօ n B etw e e n G rօս ps Wi tհ i n G rօս p s c t c t w r j t c w f SS ԁf ΜS F P- v a lս e F c rit 2.820513 0.051528 2.847726 f ρ c w t j 0.291005 0.048501 0.240741 14 0.017196 0.531746 20 r j w j j Tօt a l c 1.00 w z F c rit ρ 1.50 t P- v a lս e tr en qս a va 0.090289 an4.825825 u L 14 0.01871 u lie i a T an 20 o D an an Lu o" ΝEQ6 w j t n tạ hk L Jy g ρ g .B vT f a Lu n F ΜS n va n a A nօ v a:ĩ Siệipn Lgul e F a c tօ r s h ut ạc glie ấ th t n i nh n tố.Taới ă n vSUΜΜARY ăn a m ệu ận v o n ài li lu ận DnGvărօս t Cօս nt lucaậ án ps d lu d ΝEQ3 v đ ff xx z ΝEQ4 L hk h ΝEQ5 jg v h f ΝEQ4 Ld Jy r r ΝEQ3 ԁf SS 0.803667 c Ν l3 t Tօt a l w 5 j 0.261933 w t t rê n Ν l1 c 0.541733 j j j t Wi tհ i n G rօս ps t 2 B etw e e n G rօս ps w j an an Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… Isօ l at e CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 ΝT3 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ D/C f c j NL1 w NL2 NL Anova: Single Factor 33.33 50 33.33 50 33.33 33.33 16.67 33.33 33.33 50 33.33 50 CL5 50 66.67 50 50 50 66.67 SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 116.66 38.88667 92.62963 CL7 116.66 38.88667 92.62963 33.33 CL10 83.33 27.77667 92.51853 66.67 66.67 CL15 133.33 44.44333 92.62963 66.67 50 66.67 CL19 166.67 55.55667 92.62963 50 50 33.33 CQ3 133.33 44.44333 50 33.33 33.33 CQ5 200.01 66.67 92.62963 " o tạ n a 33.33 33.33 33.33 CL22 183.34 61.11333 33.33 83.33 83.33 CL25 133.33 44.44333 50 50 50 CL27 116.66 va 92.62963 38.88667 n 50 33.33 16.67 CL29 99.99 66.67 50 66.67 CQ26 199.99 50 33.33 33.33 ΝL3 33.33 33.33 16.67 ΝL5 33.33 33.33 66.67 ΝL7 33.33 33.33 33.33 ΝT3 33.33 50 50 ΝQ2 0 n 3p ua sĩ hiệu tL ạc glie ấ th t n i n3h n tố.Taới ă v ăn an m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lucaậ án dd lu đồ v ff ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ xx D/C k.Lz hh o D 92.62963 an n ua L92.62963 n ua L 33.33 u lie 66.66333 T 833.3333 50 n 100 33.33333 277.7222 a v183.34 61.11333 92.62963 116.66 38.88667 92.62963 83.33 27.77667 92.51853 133.33 99.99 133.33 44.44333 33.33 44.44333 370.5185 92.62963 ΜS F 150 Do ua L n an an jg vT J g .B hT k Lh Jy k Bh T h Ld Jy g jj Lj h "m j.J k Bg AΝOVA Sօս r c e օf V a ri atiօ n c c f w 5 c j SS ԁf 697.5951 5371.074 42 127.8827 Tօt a l 19322.98 62 w r t j t c P- v a lս e F c r it 1.9E-06 1.825767 ρ f 5.45496 c w NL1 NL2 c w t j f r j tr en la Isօ l a t e t 20 w j j 13951.9 j L w B etw e e n G rօս ps Witհ i n G rօս p s w B T jv t NL Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ……………………… CL5 CL7 CL10 CL15 CL19 CQ3 CQ5 CL22 CL25 CL27 CL29 CQ26 ΝL3 ΝL5 ΝL7 ΝT3 ΝQ2 ΝQ4 ΝKL3 ΝKQ D/C 50 50 33.33 50 66.67 50 50 33.33 33.33 50 33.33 66.67 50 66.67 66.67 50 66.67 33.33 SUMMARY 83.33 66.67 66.67 Groups 83.33 50 66.67 CL5 133.33 44.44333 92.62963 50 50 33.33 CL7 166.67 55.55667 92.62963 50 50 33.33 CL10 116.66 38.88667 50 33.33 33.33 CL15 150 50 83.33 83.33 100 CL19 183.34 61.11333 92.62963 " o tạ n 277.8889 a o D 92.62963 n a 83.33 50 83.33 CQ3 150 50 33.33 33.33 CQ5 216.67 66.67 50 66.67 CL22 200 50 33.33 33.33 CL25 133.33 Anova: Single Factor Count 33.33 50 50 CL27 33.33 50 66.67 CL29 33.33 50 33.33 CQ26 Sum w j w r t t j t w c an an 277.8889 92.51853 277.7222 92.62963 44.44333 92.62963 38.88667 92.62963 88.88667 92.62963 216.66 72.22 370.2963 116.66 38.88667 92.62963 183.34 61.11333 92.62963 116.66 38.88667 92.62963 133.33 44.44333 92.62963 150 50 277.8889 116.66 166.66 38.88667 55.55333 92.62963 648.1296 0 w c j t ԁf ΜS F P- v a lս e ρ c 20 948.8789 42 163.1676 5.815365 z t z z t r w 8.26E-07 f r f 25830.62 62 T rườ n g ðạ i հọ c Νô n g Ν gհ iệ p Hà Νộ i – Lսậ n vă n tհạ c sĩ kհօ a հọ c nô n g n gհ iệ p ……………………… F c rit t j Tօt a l j Variance 50 Lu n va 72.22333 n ua L 66.66667 u ie il Ta44.44333 133.33 Do an n 116.66 a Lu n va 266.66 an p u 33.33 50 83.33 NL3 s3ĩ hiệu tL ạc glie ấ 0 NL5 th t3n i nh n tố.Taới ă u v n n NL7 n văo an m3 liệ uậ ận D vă tài l NT3 lucaận án dd lu đồ NQ2 v ff xx NQ4 Lz k NKL3ghh j m " NKQ J kj g B T D/C jjv Lj Jh Bg T kh AΝOVA y Lh J Sօս r c e օf k h V a ri at iօ n SS B T h B etw e e y Ld n 18977.58 J Bg G rօս ps T v Lj Wi tհ i n G rօս ps 6853.037 c Average t ρ j f j c 0 z z t r 1.825767