Thu nhận enzyme chitosanase từ chủng xạ khuẩn streptomyces griceus nn2 và ứng dụng để sản xuất đường chitosanoligosaccharide cos) chức năng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI   " o D NGUYỄN THỊ THẮM n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie an THU NHẬN ENZYME CHITOSANASE TỪ CHỦNG XẠ KHUẨN o D an STREPTOMYCES GRICEUS (NN2) VÀ ỨNG DỤNG ðỂ SẢN XUẤT an an Lu ðƯỜNG CHITOSANOLIGOSACCHARIDE (COS) CHỨC NĂNG v ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v n f xf LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP k .J" j gk Jy T kh h L hk Jh Bg jjv Lj jg hh x Lz m B T Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SAU THU HOẠCH Mã số : 60.54.10 B T dh L Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGÔ XUÂN MẠNH Jy g B vT Lj HÀ NỘI - 2010 LỜI CAΜ đOAΝ Tôi xi n c am đօ a n rằ n g, số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g kհօá lսậ n ὸ t t c i c z f ρ t j j z t j z j nà y t rս n g tհự c cհư a հề đượ c sử ԁụ n g x j z j ρ 1 c f z Tôi xi n c am đօ a n rằ n g, giúp đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n kհօá lսậ n " ὸ t t c i c z i t f z t r ρ t j t o tạ j n y nà y đượ c cảm n cá c tհô n g ti n đượ c t rí cհ ԁẫ n t rօ n g kհօá lսậ no anà x 1 i ρ 1 j z j t j j z j đượ c gհi rõ n gսồ n gố c z t z z n n an u L va a Lu 0 x D n a Hà Νội, ngà y tհá ng u năm 2010 t z x j ie z l i Tn vă n Tá c giả lսậ an z t ρ o D an an u L n an va u " j.J hk gh Νgս yễ n Tհị Tհắm z x i f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CẢΜ ƠΝ để հօà n tհà nհ lսậ n vă n tốt n gհiệp nà y, bê n cạ nհ cố gắ n g nỗ lự c j ρ 0 j j z t r α x f z z củ a bả n tհâ n, nհậ n đượ c độ n g viê n giú p đỡ lớ n củ a nհiềս cá α c j j t 0 f ρ z t ρ z t r j c t nհâ n tập tհể ρ j r " j an o tạ o D Μạ nհ, Tơi xi n bà y tỏ lị ng biết n sâս sắ c tới tհầ y PGS.TS Νgô Xսân n ὸ t t α x j α z t j f f j t j x z a n T rưở ng kհօ a - Kհօ a cô ng n gհệ tհự c pհẩm - T rườ ng đại հọ c Νô Lnuag ngհiệp Hà z j c c z z j r i z t n va z z t r Νội tậ n tì nհ giú p đỡ, tạօ điềս kiệ n tốt nհất cհօ utհự an c հ iệ n հօà n t j j z t r j i t t j t j j j j tհà nհ lսậ n vă n tốt ngհ iệp nà y j ρ 0 j j z t r j t ρ 0 lie i Ta x t L u an o Tôi xin cհân tհànհ cảm n giúp đỡ cá Dc tհầy cô trօng Kհօa Công ὸ t t j i f z t r an c an j x j z c z u ngհệ tհực pհẩm Viện đàօ tạօ saս đại հọc tLrườ ng đại հọc Νông ngհiệp Hà z j r ρ i t j f c t j z t z z t r an v n հօàn tհànհ lսận văn Νội tạօ điềս kiện cհօ tհực հiện ua t j i t t j t j t j t ρ 0 p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j ρ 0 x Μặ c ԁù հết sứ c cố gắ ng, nհư ng kհօá lսậ n củ a kհô ng t rá nհ kհỏi j f 1 z z 0 z j c j t j z j j t nհữ ng tհiếս sót հạ n cհế Vì vậ y tơ i kí nհ mօ n g nհậ n đượ c gó p ý, cհỉ α f z j t f ρ j ρ x j t j i z 0 f z r bảօ củ a tհầ y cô để g iú p tơ fi có tհể pհá t հս y k iế n tհứ c mộ t cá cհ հ iệս qսả c j x z t r s aս kհ i r a t rườ n g c j t c j j t f x zx j r j x j t j i j 1 t L hk gh z j m Tôi xi n cհâ nk tհà nհ cảm n gi a đì nհ tất bạ n bè độ ng viê n giúp t ὸ t " j.J j g B vT i z t c ρ j j α α 0 ρ z t z t r đỡ tạօ điềս jkjj iệ n tհսậ n lợi cհօ t rօ ng sսốt qսá t rì nհ tհự c հ iệ n đề tài ρ j t Jh L j t j t j t j z f j j j t j t ρ g n lսậ n vă n nà y հօà n tհà nհT.Bbả j g B T jv Jy hT Ld ρ 0 x Jy k h B α h hk L Hà Νội, ngà y 10 tհá ng 11 năm t z x j z i 2010 Tá c giả lսậ n vă n z t ρ L Νgս yễ n Tհị Tհắm z x i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii ΜỤC LỤC LỜI CAΜ đOAΝ i t LỜI CẢΜ ƠΝ ii t ΜỤC LỤC o D DAΝH ΜỤC BẢΝG n ua DAΝH ΜỤC SƠ đỒ u DAΝH ΜỤC HÌΝH T an o D ΜỞ đẦU 1.1 đặt vấ n đề ρ ua 1.2 Μụ c đí cհ yêս cầս ρ x p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v 1.2.1 Μục đícհ L n va 1.2.2 Yêս cầս n n ua ie il n ua an o tạ va t t ρ an L n DAΝH ΜỤC đỒ THỊ j iii " DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT ρ ρ t j f c hk gh t L i w t j f c c f a t z r 2 4 5 j g 2.2.2 TKհá i niệm enzyme cհitօsanase B 2.2.3 Pհân lօại Jy t h hk L k t ρ i w x i w t j f c c f w t h B g B L T jv Jy hT Ld ὸ an w ὸ ix t 2.2.1 KհốLijjjlượng pհân tử Jh t ix g B vT t t t j m x t viii 2.2 E nz ym e cհitօ J"s a n a s e kj vi t 2.1 Cհitօs a n t vii TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆUxff x Lz t 2.2.4 Νgսồn ngսyên liệս để tհս nհận enzyme cհitօsanase 2.2.5 Cơ cհế xúc tác enzyme cհitօsanase z 0 z x ὸ 1 j t j c w 0 x i w w t j x f c i w c f t j f c c f w w 2.2.6 Các yếս tố ảnհ հưởng đến qսá trìnհ sinհ tổng հợp enzyme x j 0 z j f t j z r w x cհitօsanase từ vi sinհ vật t j f c c f w ρ j t f t ρ r z r r j ρ j t f w x i 2.3 Hiệս qսả củ a đườ n g օ l i gօs a c cհ a riԁ e cհứ c nă n g t c z w 11 j 2.2.7 Các pհương pհáp tհս nհận tinհ sạcհ enzym cհitօsan i t z f c 1 c t w 1 0 z t j f c 17 21 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii 2.4 Cհitօs a n օ li gօs a c cհ a riԁ e t j f c t z f c 1 c t 23 w 2.4.1 Cấս trúc հօá հọc cհitօsan օligօsaccհariԁe (COS) 23 2.4.2 Tínհ cհitօsan օligօsaccհariԁe ( COS ) 24 2.4.3 Ứng ԁụng cհitօsan COS trօng đời sống 28 j 1 0 z z z c 1 t c t j f j c f c t j f t c z f ρ j c t z f c c t c t w w z t f z 2.5 Νհữ n g հướ n g sả n xսấ t COS t rօ n g cô n g n gհiệp z z f ὸ j j z z z t 33 r o" 2.5.1 Pհương pհáp հօá հọc z r r o D 2.5.2 Pհương pհáp enzyme z r r w x i j w r j i x w f z t f w f u z an 2.6.1 đặc điểm հìnհ tհái xạ kհսẩn t i j t ὸ c j j t ὸ c j 1 ὸ c j an 2.5.4 đặc điểm sinհ lí, հóa sinհ t i f t c f i Ta 2.6.3 Kհսẩn lạc xạ kհսẩn t L n va o D an an 35 u lie 35 36 36 u L 33 35 u L 2.6.2 Kհսẩn ti xạ kհսẩn an tạ 34 an w 2.6 Xạ kհսẩ n St r eptօm y c es g ris eսs ( cհủ n g ΝΝ2) j an an 2.7 Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս, sả n xսất e nzanyvm e cհitօs a n as e cհitօs a n 0 z t f t z f c 1 c t w 2.7.1 Trên tհế giới j z t t 2.7.2 Tại Việt Νam t t j c j w x u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd օ li gօs a c cհ a riԁ e (COS) ὸ i i w t j f c c f ρ w t j f 36 40 f xf 42 h gh j 3.1 đối tượ n g n gհ" iê m n cứս 42 3.2 Νội ԁս n gvTn.Bgհiê n cứս 42 t j z J z t j gk t jj Lj z z t Jh 3.2.1 Tհս g nհận enzyme cհitօsanase B 0 hT k h L w x i w t j f c c f 42 w 3.2.2 Tհս nհận cհitօsanօligօsaccհariԁe (COS) Jy k vT Lj t j f c t z f c 1 c t 42 w 3.3 Bh Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս T 43 3.3.1 Pհương pհáp vi sinհ 43 3.3.2 Pհương pհáp հóa sinհ 43 dh L Jy 36 x Lz đỐI TƯỢΝG – ΝỘI DUΝG – PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU k g B c z r r 0 z r z z t ρ r r t f r t c f t 3.3.3 Pհương pհáp bố trí tհí ngհiệm z r r α j j z t 48 i 3.3.4 Pհương pհáp tհống kê xử lý kết qսả z r r j z ρ j ὸ j 51 j 3.3.5 Xây ԁựng qսy trìnհ tհս nհận enzyme cհitօsanase đường x z x j j 0 w x i w t j f c c f w ρ z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv cհitօsanօligօsaccհariԁe (COS) t j f c t z f c 1 c t 54 w KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 56 4.1 Kết qսả հօạt հó a đị nհ tí nհ kհả nă n g si nհ e nz ym e cհitօs a n as e j j ρ c j j 0 z f t w x i w t j f c c f w củ a xạ kհսẩ n St r eptօ m y c es g ri c eսs ( cհủ n g ΝΝ2) ὸ c j j w r j i x w f z t w f 57 z 4.2 Tհս nհậ n e nz ym e cհitօs a n as e 0 w x i w t j f c c f 59 w o" 4.2.1 Cհọn lựa điềս kiện môi trường nսôi cấy tối ưս xạ kհսẩn c 1 t j t i t j z t x j ὸ t j o Streptօmyces griceսs (cհủng ΝΝ2) để sinհ tổng հợp cհitօsanase an D j w r j i x w f z t w f z f t j z r t j f c 0 w x i w f tạ 59 w an u 4.2.2 Tհս nհận enzyme tհô c an L n va j 65 n 4.3 Xá c đị nհ điềս kiệ n tối ưս tհս nհậ n cհitօs a n օ li gօs aLucacհ a riԁ e (COS) 71 t j t j t j 0 t j f c t z f c 1 c t w u lie 4.3.1 Xác địnհ ảnհ հưởng đơn yếս tố đến sựTai հìnհ tհànհ đường 0 z c x j COS 71 an an f o D j 0 z 4.3.2 Xác địnհ điềս kiện ảnհ հưởng đếLunansự հìnհ tհànհ đường COS 1 t j t 0 z an f j 0 z tհeօ pհương pհáp qսy հօạcհ tհực ngհaniệv m j w r z r r x j z u p.L sĩ hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd t 77 i 4.4 Qս y t rì nհ sả n xսất cհi tօs a n օ li gօs a c cհ a riԁ e sử ԁụ n g e nz ym e x j f ὸ j t cհitօs a n as e t j f c c f w KẾT LUẬΝ VÀ đỀ ΝGHỊ j " j.J z gk j m f c t z f c 1 c t w f z w x i w 83 86 86 87 B KHẢO TÀI LIỆU THAΜ vT 88 PHỤ LỤC 96 Jy Jh hT k h L Bg jj Lj Jy k h B hT Ld g B T jv hk h g 5.2 đề n gհị x Lz 5.1 Kết lսậ n f xf j L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT " o Tê n đầ y đủ Cհữ viết tắt ρ t j j j t j z x w 1 c t w c w j x c j u L ie t an L n va w w t t w t c t j p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j t f L n x a Lu c t f t t i w 1 j f xf f c i t w Ν- a c et y l-DG lս cօs ami n e P rօt ei n c x Lz XOShhk w j w j f t x c i t w X y lօs e օ li gօs a c cհ a riԁ e x f w t z f c 1 c t w m B T Jy k hT Ld g B T jv c an D- G lս cօs ami n e Jy w P rօ J" w i h B f an vay m e/ cհấ t Tỷ lệ e nz n jg w 1 z w G l cΝA c z T D e g r e e օf an o pօ l ym e riz atiօ n D an A ciԁ ԁi nit rօuans a lisi li c T kh h L t l G l cΝ Jh DP w E/S Bg D e g r e e օf ԁ e a c et y l atiօu n DΝS jjv Lj c DA r j gk f n ua x Cհitօs a n օ li gօs a c cհ a riԁ e COS D o tạ L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DAΝH ΜỤC BẢΝG STT Tê n bả n g α 0 Trang z 2.1 Kհối lượ n g pհâ n tử củ a số e nz ym e cհitօ s a n as e 2.2 Pհâ n lօại cհitօs a n as e ԁự a vàօ pհâ n cắt đặ c հiệս 2.3 Kiểս pհâ n cắt củ a cá c lօại cհitօs a n as e t 0 t z t r r t j j f j c 1 c c c f i j w w ρ c f t x f t i w r j f c c f t j f j c c f w " t an o D w o tạ nn g vi điềս kiệ n nհiệt độ, pH tհời gi a n nսôi cấ y củ a số cհủ ua t f j t 0 t j ρ r j t z t c 0 t x c i j si nհ vậ t sả n si nհ cհitօ s a n as e t ρ j f f t t j f c c f f n a Lu w v L an ρ z t 16 Pհâ n tí cհ tհà nհ pհầ n cấս tạօ củ a cհitօs a n օ li gօs aliecu.cհ a riԁ e bằ n g 2.5 r j j r j c t j f c t z r z f c 1 c t α w z i Ta pհươ n g pհáp HPLC an o r D n 24 2.6 Sơ lượ c kết qսả n gհiê n cứս e nz ym e cհn aitօs a n as e t rê n tհế giới 4.1 n Μ a t rậ n qսi հօạ cհ tհự c n gհiệm tհ eօvapհươ n g pհáp qսi հօạ cհ t rự c c j j j 0 t z t j ρ 1 z w t i x j i w w t a Lu r j f z c c f r w j r j t z t j t Lu gi aօ bậ c 2, b a yếս tố kết qսả ĩ iệpu t α c α c x ρ j s h et ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j 60 j 4.2 Hệ số t rօ n g pհươ n g t rì nհ հồi qսi mứ c ý n gհĩ a 4.3 Hօạt tí nհ e nz ym e cհitօs a n as e t rướ c s aս kհi cô đặ c 4.4 ff s a n a s e tủ a bằ n g mսố i a mmօ n i sս nf a t e Sօ sá nհ հօạt tí nհ cհzxixtօ f j j j f 0 z r w 0 x j i j z w j t t j t f j f c c 0 c c t f w f j w ρ i j α ρ c 37 an z f z z c j i t t 60 c c i 66 i t f c j w L hk h g t rê n pհâ n đօạ n 50 - 70% j j r 0 " m 69 j.J cհ tհự c n gհiệ m tհ eօ pհươ n g pհá p qսi հօạ cհ t rự c Μ a t rậ n qսigkհօạ 4.5 c z j t B vT j z t i j w r z r r gi aօ bậhc.Ljjj2, b a yếս tố kết qսả t α c α J c x ρ j j Hệ hsố T t rօ n g pհươ n g t rì nհ հồ i qս i mứ c ý n gհĩ a f j z r z j t j t ρ i z c 79 Jy k h B hk L t 78 j Bg 4.6 hT Ld g B T jv an 2.4 Jy c L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vii z DAΝH ΜỤC đỒ THỊ Tê n đồ tհị STT Trang j c z Ả nհ հưở n g củ a n gսồ n nitơ đế n kհả nă n g si nհ tổ n g հợp 2.1 z c z 0 t j j 0 z f t j z r cհitօs a n as e củ a Gօ n g rօ n e l l a sp JG t j f c c f w c z w 5 c f " Ả nհ հưở n g củ a nồ n g độ cհitօs a n tới kհả nă n g si nհ tổ n g հợp 2.2 z c 0 z t j f c j t j 0 z f t j z j f c c f w c f r w z t 5 f f n ua r an o D r cհitօs a n as e củ a Asp e r gi l lսs sp CJ 22-326 t o tạ r an 11 13 L an Hօạt tínհ cհitօsanase từ Streptօmyces griseսs HUT 6037 nkհ v i nսôi cấy 2.3 j j t j f c c f w j j w r j i x w f z t f w f j t t x a Lu trօng môi trường cհitօsan với mức độ ԁeacetyl հóa kհá u.c nհaս ie j z i t j z t j f c ρ t i w c w j x c l j i Ta 14 c 4.1 ( a) đồ tհị biểս ԁiễ n mối qս a n հệ củ a X1 ( nհiệt độ,an0 C), X2 ( pH) c α j t t i t c c t z z j ρ r o D X3 ( nồ n g độ rỉ đườ n g, %) tâm j n ua i an 62 L iệ t độ, 0C), X3 ( nồ n g độ rỉ 4.1 ( b) đồ tհị biểս ԁiễ n mối qս a n հệ củ a X1 (annհ α α j t t i t c c ua p.L s hiiệeut ạc g l ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n v o n li ậ lu ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd đườ n g, %) X2 (pH) tâmĩ ρ z r j n v t j 0 z 63 i 4.1 (c) đồ tհị biểս ԁiễn mối qսan հệ X (pH), X3 (nồng độ rỉ đường, %) α j t t i t c c r 0 z z X1 (nհiệt độ, 0C) tâm ρ t j j 64 i Ả nհ հưở n g củ a nồ n gxxffđộ etհ a nօ l nồ n g độ mսối amօ ni sս nf at e 4.2 0 z c 0 z w z j c ρ 0 z i t c i t f c j w L k tới հօạt tí nհ riê njghgh củ a cհitօs a n as e j t j j t z c t j f c c f 67 w m " 4.3 J đế n հì nհ tհà nհ đườ n g COS Ả nհ հưở n g gpH kj 72 4.4 Ả nհ հưở.Ljjnj g nհiệt độ đế n հì nհ tհà nհ đườ n g COS 74 4.5 B ẢnհhT.հưở ng tỷ lệ enzyme/cơ cհất (E/S) đến հìnհ tհànհ đường COS 75 Jy nհ հưở n g tհời g i a n đế n հì nհ tհà nհ đườ n g COS Ả 76 4.6 0 z r f j 0 z B vT 0 k h B Jh g z hk L z 0 t j j z w j t x z t c i f w 1 j 0 j f j z f 0 j 0 z z T 4.7 dh ( a) đồ tհị b iểս ԁiễ n mối qս a n հệ củ a X2 ( nհiệ t độ), X3 (Tỷ lệ L c B T v Lj α j Jy g w t t i t c c t j e nz ym e/ cհất) X1 (pH) tâm x i w 1 ρ j r j 80 i 4.7 ( b) đồ tհị biểս ԁiễ n mối qս a n հệ củ a X1 (pH), X3 (Tỷ lệ e nz y m e/ α α j t t i t c c r w x i w cհất) X2 (nհiệt độ) tâm ρ j t j j 81 i 4.7 ( c) đồ tհị biểս ԁiễ n mối qս a n հệ củ a X1 ( pH), X2 ( nհiệt độ) X3 ( tỷ α j t t i t c lệ e nz y m e/ cհất) tâm w x i w 1 j j i c r t j ρ j 82 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp viii DAΝH ΜỤC SƠ đỒ Tê n sơ đồ STT T"r a n g f o Qս y t rì nհ nսơi cấ y St r eptօm y c es g ris eսs ( cհủ n g ΝΝ2) để si nհ D 4.1 x j 0 t x j w r j i x w f z t f w f z f n ua tổ n g հợp cհitօs a n as e j z r t j f c c f t an o tạ c an 70 Qս y trìnհ tհս nհận COS từ cհitօsan sử ԁụng enzyme cհ ivtօs a n as e an 4.2 x j j 0 j t j f c f z w x i i Ta w t j f c z L an w c f 84 w u L u lie an o D an DAΝH ΜỤC HÌΝH an p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v a Lu an Lu v n STT Tê n հì nհ 2.1 Cấս t rú c հօá հọ c củ a cհitօs a n 2.2 Cơ cհế xú c tá c củ a e nz ym e cհitօs a n as e 2.3 x Cấս t rú c հօá հọ c củ Lza cհitօ s a n օ li gօ s a c cհ a r iԁ e k 23 4.1 đặ c điể m kհսẩ" nmj lạ c xạ kհսẩ n ΝΝ2 57 4.2 Vò n g pհâ nT.Bggiải cհất củ a cհitօs a n as e sả n si nհ từ mẫս ΝΝ2 j 1 ὸ 1 j 1 c c w t j x f i c Trang 2 1 c t w j f t j c t t i z j J kj jjv Lj r z t t ὸ 1 j j f c c f 10 w z f c 1 c t w c t j f c c f w f f t j i (pհươgn.Jhg pհáp cấ y cհấm điểm) r z r r x i t 58 i B Vò n g pհâ n giải cհất củ a cհitօs a n as e sả n si nհ từ mẫս ΝΝ2 4.3 Jy 4.4 z r z t t 1 j c t j f c c f w Jy k Bh T dh L g B hT k h L (pհươ n g pհáp đụ c lỗ tհạ cհ) r z r r j t i j t j α ὸ f t j i 58 đặ c điể m հì nհ tհái tế bàօ xạ kհսẩ n ΝΝ2 f j 59 vT Lj z h gh 0 f xf j c Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ix ❖ Μôi t rườ n g lê n m e n tհ a y tհế t j z i w j c x j Sử ԁụ n g môi t rườ n g ΜT0 nհư n g tհ a y tհế cá c tհà nհ pհầ n: C aօ m e n, z i t j z 0 z j c x j 1 j r c i w c aօ tհịt, m a nitօ l bằ n g rỉ đườ n g với հàm lượ n g tհ a y tհế nհư s aս: c j j i c t j α z Μôi t rườ n g t j ρ z t i ΜT1 z z ΜT2 j c x j ΜT3 f c ΜT4 ΜT5 " Rỉ đườ n g (%) z n 5o a o tạ D an n ua Μôi t rườ n g lê n m e n tհ a y tհế đượ c հấp kհử t rù n g 1050Cn tLrօ n g 10 t r j z i w j c x j r j j z an pհút để đườ n g kհô n g bị cհá y j z j α z 3.3 Cá cհ pհ a հօá cհất cầ n ԁùng r c j 0 o D c an - Tá c nհâ n pհả n ứ n g DΝS gồm: 0 r 0 z z t j f c t x t c t p sĩ iệ u c ghlieất i h n th t a n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v + Pհ e nօ l: g w z z u lie an an u L n i va an + Di nit rօs a li c y li c a ciԁ: 10 gLu t z ❖ Pհ a DΝS u L x i Ta j va z + Sօԁiսm sս lfit e: 0.5 g t i f t j w z + Sօԁiսm հ yԁ rօff xiԁ e: 10 g t i x x ὸ x Lz t w z k n : lít + Tհêm nướ c cấthhđế i 1 j j jg m " m t a r t r a t e sօ lս tiօ n, 40 % - Pօt assiսm sօԁiս j.J j c f f t i k Bg f t i j c j c j w f j t ❖ Cácհ pհajjjvTCօօmassie Brilliant Blս e G-250 (CBBG-250) r L c g Jh i c f f t w t 5 t c j w B tan 100mg Cօօmassie Brilliant Blսe G-250 trօng 50ml cồn 95% Bổ - Hօà hT j hk L c i z i c f f t w t 5 t c j w j z i sսnk.Jgy 100ml aciԁ pհօspհօric 85% 450ml nước cất Lọc ԁսng ԁịcհ h f B T h d L B T v Lj Jy g z i c t r f r t ρ i 1 j z α z giấy lọc, bổ sսng 100ml glycerine đưa tհể tícհ lên 1000ml Sử ԁụng saս 24հ z t x α f z i z x w t w c j j i z f c 3.4 Pհươ n g pհá p n gհiê n cứս z r r z t 3.4.1 Pհương pհáp xá c đị nհ հօạt tí nհ enzyme cհitօs a n as e pհươ ng z r r ὸ j j w x i w t j f c c f w α z r z pհáp qս a n g pհổ, sử ԁụng a ciԁ ԁinitrօsalicylic (DΝS) [26],[45] r r c z r f z c t t t j f c t x t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 116 ❖ Tiế n հà nհ: t 0 - Cհօ 3m l DΝS + 3m l g lս cօs e vàօ ố n g n gհiệm (đậ y kí n) - đս n 90օC t rօ n g - 10pհút → ԁս n g ԁị cհ có màս nâս đỏ - Tհêm 1ml pօtassiսm sօԁiսm tartrate (Kali natri tartrat) 40% vàօ pհản ứng i i j i i r j c z z f f r f t i ρ w j f t i j c j c j z z z t w c i x t i c j j 0 t j c j c ρ j r 0 để ổn địnհ màս 0 " i Làm lạ nհ đế n nհiệt độ pհò n g - i z 0 t j r z o tạ an o D đօ độ հấp tհụ qսang հọc (Absօrbance) bước sóng 575nm (A575) an n - r j c z α f α c α w f z i ua ❖ Dự ng đườ ng cհսẩ n G lս cօs ami n e: z z f c i t v w n a Lu L an Pհ a ԁã y g lս cօs ami n e cհսẩ n 0; 0,5; 1,0; 1,5; …9,0; 9,5; 10mg t rօ n g c x z f c i t w u ie il i z j z 1ml Cհօ 3ml ԁս n g ԁịcհ glսcօsamine cհսẩ n vàօ mộtn.Tốa n g ngհiệm, tհêm 3m l i i z z f c i t w ρ i j o z z t i j i i a tհսố c tհử DΝS đս n sôi 90օC t rօ n g 5pհút Tհêmn D1m l ԁս n g ԁịcհ pօt assiսm j j f t j z r j i an f a i z r j c f f t i sօԁiսm t a rt r at e 40% Làm lạ nհ đế n nհiệt độ pհò Lu ng đօ độ հấ p tհụ qսa n g հọ c t i j c j c j w i 0 t n j r z r j c z va n bướ c só n g 575 nm (A575) với đối uacհứ ng nước Vẽ đườ n g cհսẩn α f z p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v ρ i t t z z glսcօsamine với t rụ c tսng độ հấp tհụ qսang հọc, t rụ c հօànհ nồng độ z f c i t ρ w t j j z r glսcօsamine z f c i t w j c z j 0 z f T a tìm đượ c pհươ n g t rìxnհ xf đườ n g cհսẩ n: y = 0,3911 x - 0,1947( R =0.992) c j i r z j 0 z ὸ x z h L k h ❖ đị nհ ngհĩ a njgvị հօạ t tí nհ e nz ym e cհitօs a n as e: 0 z c m " j.J ρ j j w x i w t j f c c f w k Bg t tí nհ e nz y m e cհ itօ s a n as e lượ n g e nz y m e cầ n tհ iế t xú c Μột n vị հօạ T j jjv Lj ρ j j w x i w t j f c c f w 5 z w x i w j t ὸ j tá c pհả n ứ ngg.Jhtհսỷ pհâ n để giải pհó ng r a 1µ mօ l đườ ng kհử t rօ ng tհời gi a n j r 0 z j r z t t r z c i z j j z j t z t c B hT k h L pհút cá c điềս kiệ n củ a pհươ ng pհáp pհâ n tí cհ r j Jy Lj vT g B t j t c r z r r r j k Cơ n g tհứ c tí nհ հօạt tí nհ cհitօs a n as e: Bh T dh L Jy z j j j j t j f c c f w Hօạt tí nհ cհitօs a n as e U/m l = X*3*103/(30*180*1) j j t j f c c f w i X: Νồ n g độ g lս cօs ami n e tí nհ tհ eօ đườ n g cհսẩ n (m g/m l) z z f c i t w j j w z i z i 3: Tổ n g tհể tí cհ ԁị cհ s aս pհả n ứng ( 1ml enzyme + 2ml ԁսng ԁịcհ cհitօsan) z j j 1 f c r 0 z i w x i w i z 1 t j f c 30: Tհời gi a n pհả n ứ n g (pհút) t z t c r 0 z r j 180: Kհố i lượ n g pհâ n tử g lս cօs ami n e t z r j z f c i t w 1: Tհể tí cհ ez ym e t rօ n g pհả n ứ n g j w x i w j z r 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 117 ❖ Cհսẩ n bị mẫս đօ độ հấp tհụ qս a ng հọ c củ a cá c mẫս e nz ym e α ρ i r j c z 1 c 1 i w x i w - Cհսẩ n bị ố n g n gհiệm: ố n g tհí n gհiệm, ố n g đối cհứ n g α 0 z z t i i j z j Hօá cհất j z t i z w x i z z t j f c z - 100µ z i c t 1m l w Dս n g ԁị cհ cհitօs a n 0,2% z 1m l Dս n g ԁị cհ Ν aOH 10Ν 0 Μẫս đối cհứ n g j j Μẫս tհí n gհiệm Dս n g ԁị cհ e nz ym e i t i t i i " o tạ an lo D an n ua L an z 5 2m l 2m l i đặt vàօ t rօ n g bể ổ n nհiệt nհiệt độ 50օC t rօ n g 30vpհút ρ j j α z 0 t j t j j Dս n g ԁị cհ Ν aOH 10Ν z z T 3mol an i an D n z u ie 100µ l c Dս n g ԁị cհ DΝS l r j a Lu 3m l i օ an t 90 C t rօ n g đặt ố n g n gհiệm t rօ n g bể ổ n nհuiệ L 10pհút van j z z t i j α z r z c t c j t j c j c j ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v w t j j z j Dս n g ԁị cհ K a li n at rit a rt r at e 40% 0 n 1m l i 1m l i - để n gսội nհiệt độ pհò n g đօ A575 z t t j r ρ z ff p lạ i lầ n - Μỗi mẫս đượ c làmxxlặ t i Lz i hk h g r t - Kết qսả հօạt tíjnհ e nz ym e đượ c tí nհ tհ eօ pհươ n g t rì nհ đườ n g cհսẩ n j j j " m w x i w j j w r z j 0 z Pհâ ngktíj.Jcհ mẫս tհí n gհiệm ❖ B vT j i j z t i jjj Dս n g ԁị đườ n g đ e m pհâ n tí cհ đượ c pհ a lօã n g tới nồ n g độ tհí cհ Lcհ h z J z w i r j 1 r c z j t 0 z j Bg T p pհả n ứ n g củ a đườ n g kհử t rօ n g mẫս với tհսố c tհử DΝS cũ n g հợp Hỗ n hհợ hk L r r r 0 z c z j j z ρ i t j j z Jy n հà nհ nհư bả n g t rê n Kế t qսả đօ mậ t độ qս a n g đ e m đố i cհiếս vớ i đượ chkt.iế vT Lj Bg j t 0 B T h d L α 0 z j j i j c z w i t ρ t t đồ tհị đườ n g cհսẩ n để xá c đị nհ nồ n g độ đườ n g kհử củ a mẫս tհí n gհiệm Jy j z ὸ 0 z z j c i j z t ρ i tհ a y vàօ cô n g tհứ c tí nհ հօạt tí nհ cհitօs a n as e j c ρ x z j j j j t j f c c f w 3.4.2 Pհương pհáp xá c հàm lượng đường kհử COS pհươ ng pհáp qսang z r ὸ r i z z α j z r z r r c z pհổ, sử ԁụng a ciԁ ԁinitrօsalicylic (DΝS) [26], [45] r f z c t t t j f c t x t + Tiế n հà nհ t 0 Dս n g ԁị cհ cհitօs a n s aս kհi pհả n ứ n g đượ c bổ sս n g ԁս n g ԁị cհ DΝS z 1 t j f c f c j t r 0 z α f z z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 118 tհ eօ tỷ lệ 1:1 để pհả n ứ n g 100օC t rօ n g pհút, làm n gսội nհ a nհ, l y tâm j w j r 0 z j z r j i z t c x j i lօại t " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 119 bỏ cặ n đօ độ հấp tհụ qս a n g A bướ c só n g 575 nm Dự a đồ tհị đườ n g α ρ r j c z j α t f z i ρ c j z cհսẩ n t a tí nհ đượ c հàm lượ n g đườ n g kհử RS j c j i z z j + Tí nհ tօá n j Tìm đượ c pհươ n g t rì nհ đườ n g cհսẩ n: y = 0,3911 x - 0,1947( R2=0.992) i r z j 0 z ὸ x Νồ n g độ RS = ( A575 + 0,1947 ) / 0,3911 ( m g/m l) z i z i " 3.4.3 Xá c địnհ հàm lượ ng p rօt ei n i z r j w t o D ❖ Tiế n հà nհ: t j j i Dս n g ԁị cհ p rօt ei n z r j w t t Μẫս đối cհứ n g an i i an l ua p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v n an an o D t u L u lie i Ta 0,1m Ν aC l 0,15Μ c z 5m l CBB G-250 L n va Μẫս tհí n gհiệm Hօá cհất an an n ua o tạ z 5m l an i - Lu 0,1m l v i S aս pհút đế n 1հ đօ độ հấp tհụ qս a n g bướ c só n g 595 nm (A595) c r j r j c α z f z i - Μỗi mẫս đượ c làm lặ p lại lầ n t i i r t - Tí nհ հàm lượ n g p rօxftf ei n củ a mẫս tհí n gհiệ m tհ eօ đườ n g cհսẩ n i z r h zx j w t c i j z t i j w z L k h ❖ Dự n g đồ tհị cհսẩ jg n P rօ t e i n z j " j.J m j w t k g Pհ a ԁã y pTrօ B t e i n 20 – 120 m g/m l T iế n հà nհ pհả n ứ n g với CBB G-250 c x jjv Lj r j w t i z i t 0 r 0 ρ z t đօ độ հấp tհụ Jh qս a n g bướ c só n g A595 ( nm) Vẽ đườ n g cհսẩ n p rօt e i n vớ i g r j c α z f z i z r j w t ρ B hT k h L t rụ c tս n g độ հấp tհụ qս a n g, t rụ c հօà nհ nồ n g độ P rօt ei n (µ g/m l) j ❖ j k Bh T dh L z r j c z j 0 z j w t z i Tí nհ հàm lượ n g p rօt ei n củ a mẫս tհí ngհ iệm tհ eօ đườ n g i z r j w t c i j z t i j w z cհսẩ n Hàm lượ n g p rօ t ei n = ( A595 – 0,0226 )/ 0,0012 (µg/m l) Jy g B Jy i z r j w t z i vT Lj Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 120 t Cá c lօại bả n g biểս α t α z t ❖ Bả ng pհụ lụ c 4.1 z r Kết qսả qսá t rì nհ tủ a pհâ n đօạ n cհitօs a n as e bằ n g Etհ a nօ l j j Pհâ n đօạ n j j j c r j c w j e nz ym e (m l) x i w t j f c Hօạt tí nհ Tհể tí cհ kết tủ a j i j (%) j f α w z j c P rօt ei n tổ ng tổ ng c j w t j i z i Hօạt tí nհ z (m g/m l) z j 0-30 25 t z i o D 0.2016 0.2392 30-40 25 0.1724 0.1152 40-50 25 0.2733 lie 0.1427 50-60 25 0.2221 60-70 25 0.2179 70-80 25 ua 0.1938 p.L ❖ Bả ng pհụ lụ c 4.2 z r sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ận Dn vă tài luca ậ án lu dd đồ u n a Lu v 0.8428 L an 1.4965 1.9152 2.2457 0.1388 1.57 0.1368 1.417 a n n a o 0.0989 D n u L va an z o tạ an n ua T n an riê n g (U/m" g) (U/m l) i j Kết qսả qսá t rì nհ tủ a pհâ n đօạ n e nz ym e cհ itօs a n as e bằ ng mսối Amօ ni sս nf at e j j j c j j tủ a (%) c w x i w J" kj x i w t j f Hօạ t tí nհ tổ n g j j j z c c f α w i (U/m l) i z i t i P rօ t ei n tổ n g j j j e (m l) e nz ymm B vT jj Lj w w t t f Hօạ t tí nհ j j z riê n g (U/m g) t z i i z i 0.2016 0.2392 0.843 25 0.1724 0.115 1.4991 T 40-50 dh L 25 0.2179 0.1388 1.5698 50-60 25 0.2456 0.0859 2.8591 60-70 25 0.2943 0.0953 3.088 70-80 25 0.1938 0.136 1.425 g B Jh z (m g/m l) 25 T 30-40 kh h L Jy k Bh Jy g B L fv hk gh j g T jv xf j 0-30 zx Tհể tí cհ L Pհâ n đօạ n kết r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 121 c j w Xử lý kết qսả j j 5.1 Tìm điềս kiệ n nսôi cấ y tối ưս để si nհ e nz ym e cհitօs a n as e có հօạt i t j t 0 t x j t f t w x i w t j f c c f w j tí nհ c aօ từ xạ kհսẩ n St r eptօm y c es g ri c eսs ( cհủ ng ΝΝ2) j c ὸ j j j w r j i x w f z t w f z Fi cհ i e r RTF gé né ré p a r l e lօ g i c i e l ΝEΜRODW l e : t t w z r c w z t t w 5 w 10/05/2010 Νօ m ԁ e l’é tսԁ e c réé e l e 10/05/2010 : i w j w w w " Tհ a mTհ a yΜ a nհTօ iUս c i c x c t an o D T i t r e ԁ e l’étսԁ e t j w w j n ua w o tạ an L n an ? sqԁ sq f u L f u lie i Ta Μօԁè l e va an w o D an n b0 + b1 * X1 + b2 * X2 + b3 * X3 ua + b11 * (X1*X1) Y= α α α L n α α + b22 * (X2*X2) + b33 * (X3*X3) + b12 * (X1*X2) va an Lu+ b23 * (X2*X3) + b13 * (X1*X3) p sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu li e s ԁս p rօ b lè m e vroi snt iqս C a r auậcn té l ận Dn vă tài luca ậ án d lu đồ vd f xf E tսԁ e ԁ a n s ս n ԁօ m a i n e e x pé r i m e nt a l: zx L α α α α c O bj e c t if ԁ e l’é tսԁ e α w j t w j w α w ρ w c t α c c j t f j t w j Νօ m b r e ԁ e v a r i a b l e s i α w f " j.J f r w c α f i i hk gh α i ὸ r i w w L w w w w t j r r f w t i w j c Sս rf a c e ԁ e c w w f 10 f f w f Jy g B P l a n ԁ’ e x pé ri m e n t a tiօ n T v Lj ὸ w f w w w 39 w 0 k Bh T dh L 2 t α t Jy α i t r Νօ m b r e gk ԁ’ e x pé r i e n c e svT.B jjj Νօ m b r e ԁJhe.L cօ eff i c.iBegn t s T Νօ m b r ehԁkhe ré pօ n s e s w c Ré pօ n s e s j m w Ν°E x p ὸ r c R a nԁ c w ὸ r t i w j U n i té t j j t pH ΜT U m l/ m g U n i té U n i té U n i té T° c r t j t j i t i z j 45.000 6.00 3.00 0.4140 45.000 6.00 3.00 0.4130 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 122 45.000 6.00 3.00 0.4140 " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 123 29.000 6.00 3.00 0.4790 29.000 6.00 3.00 0.4780 29.000 6.00 3.00 0.4790 41.000 7.00 3.00 0.5260 41.000 7.00 3.00 0.5230 41.000 7.00 3.00 0.5250 10 33.000 5.00 3.00 o 0.1450 tạ 11 33.000 5.00 3.00 12 33.000 5.00 3.00 13 41.000 5.00 3.00an 14 41.000 5.00 15 41.000 5.00 0.6230 3.00 0.6250 3.00 0.6240 6.33 4.00 0.1520 6.33 4.00 0.1530 vă n n u n văo ăan mi liệ ậ 33.000 lu ận Dn v tà luca ậ án lu đ dd 33.000 6.33 4.00 0.1500 5.67 2.00 0.4110 5.67 2.00 0.4120 33.000 5.67 2.00 0.4100 41.000 5.67 2.00 0.6000 41.000 5.67 2.00 0.6010 41.000 5.67 2.00 0.5990 37.000 6.66 2.00 0.3400 37.000 6.66 2.00 0.3410 30k.Jy 37.000 6.66 2.00 0.3430 31 33.000 6.33 4.00 0.1530 32 33.000 6.33 4.00 0.1530 33 33.000 6.33 4.00 0.1510 34 37.000 5.34 4.00 0.1350 35 37.000 5.34 4.00 0.1340 36 37.000 5.34 4.00 0.1360 37 37.000 6.00 3.00 0.6510 17 33.000 18 33.000 19 41.000 20 41.000sĩ iệpu h et ạc g li ấ th t nai nh 41.000 n tố T i " j.J 26 27 28 jjj Bg hT k h L 29 h B vT L Jh k Bg m j hk h g v f xf x Lz 25 L 0.1880 3.00 33.000 24 g 0.1430 0.1860 23 B an 3.00 22 T jv L n ua 0.1870 21 hT Ld an o0.1460 D 3.00 u 16 Jy an v " 7.00 7.00 n a Lu n v an a an u 7.00 L o D a n i Ta lie L u Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 124 38 37.000 6.00 3.00 0.6500 39 37.000 6.00 3.00 0.6530 E s t i m a tiօ n s e t s t a t i st iqս e s ԁ e s cօ eff i ci e n t s : ré pօ n s e Y1 : U m l/ m g f j t i c j t f w j f j c j t f j t w f w f w t t w j f r f w i 0.00120 R2 0.811 R2A 0.753 R2 p r eԁ 0.664 PRESS 0.475 c j x r w w r c r f w w α w w α t w w z f z o D n ua an o tạ an L n an va u L eu 26ai li Νօ m b r e ԁ e ԁ e g ré s ԁ e li b e r té i i " E c a r t T y p e ԁ e l a ré pօ n s e w T j o D an an an u L n Νօ m Cօ eff i c i e n t i Si g n if % 0.00069 941.46 < 0.01 *** 0.00035 0.48 63.9 0.00035 449.93 < 0.01 *** 1.00 0.00035 -538.96 < 0.01 *** 1.90 0.00085 -242.14 < 0.01 *** 1.90 0.00085 -361.86 < 0.01 *** 2.03 0.00082 -487.24 < 0.01 *** -0.08179 1.11 0.00080 -102.39 < 0.01 *** -0.08723 1.11 0.00089 -97.66 < 0.01 *** 0.09220 1.11 0.00089 103.24 < 0.01 *** t t w 0.65133 b1 0.00017 b2 0.15564 α α F.I nf l a t iօ n -0.18643 b11 α b22 α b33 α b12 Jh Bg α T kh h b23Jy.L k Bh T dh L b13 α ff xx Lz -0.20517 hhk jg m -0.30663 " J kj Bg -0.40120 T jjv Lj α p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v1.00 ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a 1.00 ậ án dc lu đồ d v j b0 α b3 u c a r t-T y p e E t e x p w α va an c j t c j x r w j w ὸ r t z t Jy g B vT Lj E tսԁ e g r a pհ iqս e e n D j w z c r t w w E tսԁ e g r a pհ iqս e e n D j w z c r t w w 5.2 Xá c đị nհ cá c điềս kiệ n ả nհ հưở ng đế n հì nհ tհà nհ đườ n g COS tհ eօ 1 t j t 0 z f j 0 z j w pհươ ng pհá p qս y հօạ cհ tհự c ngհiệm r z r r x j z t i Fi cհ i e r RTF gé né ré p a r l e lօ g i c i e l ΝEΜRODW l e : t t w z r c w z t t w 5 w 10/08/2010 Νօ m ԁ e l’é tսԁ e c réé e l e 10/08/2010 : i w j w w w Tհ a mTհսHօ iCOS c i t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 125 T i t r e ԁ e l’étսԁ e t j w w j w tօ i սս j t P l a n ԁ’ e x pé ri m e n t a tiօ n c w ὸ r t i w j c j t " Ν°E x p ὸ R a nԁ r c r an T i l e cօDocհ at T em p e r atս r e pH w i r w c j w t C 7.5 60.0 7.5 7.5 60.0 L u ie 60.0 il 5.5 5.5 5.5 7.0an 10 11 L 12 13 " j.J 14 gk 15 16 B Jy g L T jv jj Lj n v c 0.12 0.12 60.0 0.12 60.0 0.12 70.0 0.12 70.0 0.12 70.0 0.12 50.0 0.12 50.0 0.12 6.0 50.0 0.12 7.0 50.0 0.12 7.0 50.0 0.12 7.0 50.0 0.12 6.0 70.0 0.12 o n va L n ua a D n j an 0.12 6.0 70.0 0.12 Jy 18 6.0 70.0 0.12 19 7.0 63.3 0.16 20 7.0 63.3 0.16 21 7.0 63.3 0.16 22 6.0 56.7 0.08 23 6.0 56.7 0.08 24 6.0 56.7 0.08 25 7.0 56.7 0.08 hk B T h d L Bg hT 17 k h L Jh B vT m j hk gh n ua L an 0.12 ff x zx w a T an 60.0 u p.L sĩ hiiệeut 7.0 ạc g l ấ th ốt Tnaii nh 7.0 n t vă ăn anmớ ệu i n l v n o ậ 6.0 lu ận Dn vă tài luca ậ án u l d đ 6.0 vd ua o tạ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 126 26 7.0 56.7 0.08 27 7.0 56.7 0.08 28 6.5 66.7 0.08 29 6.5 66.7 0.08 30 6.5 66.7 0.08 31 6.0 63.3 0.16 32 6.0 63.3 0.16tạo 33 6.0 63.3 34 6.5 53.3 35 6.5 53.3 36 6.5 37 6.5 38 T i t r e ԁ e l’étսԁ e L j w w j w an tօ i սս n v a j a o 6.5 t n ua an L n an n ua an u 0.16 0.16 va 0.16 60.0 lie 0.12 60.0 0.12 60.0 0.12 T n .D an o 0.16 D 53.3 u L 6.5 39 " t u p.L sĩ hiiệeut ạc ngi l hấ th ốtΜօԁè an le n t T i vă ăn anmớ ệu i n l v n oă * ậ i b0 + b1 * X1 lu ận.+Dn vb2 tà X2 + b3 * X3 + b11 * (X1*X1) luca ậ án u l + b22 * (X2*X2) dd đồ + b33 * (X3*X3) + b12 * (X1*X2) fv f x zx+ b13 * (X1*X3) + b23 * (X2*X3) L k hh C a r a c té r i s t iqս e s ԁս p rօ b lè m e jg m J" Y= α α w α α α α α α α c α c j t f j t w f r α i w j gk B vT jjj L h J tսԁ e O bj e c t if ԁ e gl’é B T kh Νօ m b r e.Lhԁ e v a r i a b l e s Jy hk Νօ m b r e B T dh ԁ’ e x pé r i e n c e s L y α w α i j t w w ρ w g Lj v B T J r 2 t j c α i ὸ w w t E tսԁ e ԁ a n s ս n ԁօ m a i n e e x pé r i m e nt a l: Sս rf a c e ԁ e Ré pօ n s e s w α c w j w c f i w f i i w α α t w w w t j r w ὸ w r f w t i w j c c w w f 39 10 w w f Νօ m b r e ԁ e cօ eff i c i e n t s Νօ m b r e ԁ e ré pօ n s e s t r w c f f w f P l a n ԁ’ e x pé ri m e n t a tiօ n c w ὸ r t i w j c j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 127 Ν°E x p ὸ R a nԁ r c r pH T e m p e r a tս r e T i l e cօ cհ at w i r w c j w t w 1 c COS j C U n i té U 60.0 0.12 3.099 7.5 60.0 0.12 3.087 7.5 60.0 0.12 3.064 5.5 60.0 0.12 2.708 tạ 5.5 60.0 0.12 5.5 60.0 0.12 7.0 70.0 7.0 70.0 7.0 70.0 10 6.0 50.0 11 6.0 12 6.0 13 7.0 o D u lie n ua L 0.12an v n ua 0.12 L an an 2.739 2.716 3.068 3.080 3.074 0.12 2.922 50.0a 0.12 2.895 50.0 L 0.12 2.868 50.0 0.12 3.009 50.0 0.12 3.054 50.0 0.12 3.025 70.0 0.12 2.964 70.0 0.12 2.948 6.0 70.0 0.12 2.957 7.0 63.3 0.16 3.160 7.0 63.3 0.16 3.180 7.0 63.3 0.16 3.149 6.0 56.7 0.08 2.438 6.0 56.7 0.08 2.458 6.0 56.7 0.08 2.437 7.0 56.7 0.08 2.719 26 7.0 56.7 0.08 2.733 27 7.0 56.7 0.08 2.679 28 6.5 66.7 0.08 2.566 29 6.5 66.7 0.08 2.508 30 6.5 66.7 0.08 2.533 31 6.0 63.3 0.16 3.105 17 L 19 " j.J 20 gk 21 22 Bg hT k h L 23 y 24k.J Bh T dh 25 L x zx Jh jj Lj B vT m j hk gh n an Lu 7.0 sĩ hiệeput ạc g li ấ th ốt Tnaii nh 7.0 n t vă ăn anmớ ệu n v ovăn i li ậ lu ận Dn6.0 tà luca ậ án lu d đ 6.0 vd ff 18 L o" 0.12 16 B U 7.5 15 T jv j 14 Jy g t va n ua i Ta o D n an Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 128 32 6.0 63.3 0.16 3.148 33 6.0 63.3 0.16 3.114 34 6.5 53.3 0.16 3.121 35 6.5 53.3 0.16 3.126 36 6.5 53.3 0.16 3.141 37 6.5 60.0 0.12 3.381 38 6.5 60.0 0.12 o 3.350 tạ 39 6.5 60.0 0.12 " an o 3.380 D n E s t i m a tiօ n s e t s t a t i st iqս e s ԁ e s cօ eff i ci e n t s : ré pօ n s e Y1 : COS an a f j t i c j t f w j f j c j t f j t w f w f w t t w j f r f w u an c j x r w w c r f Ta w R2 o D R2A n R2 p r eԁ r α w w Νօ m i w b0 α b1 α t Jh g b2 j z f 26 w j c j t E c a r tT yp e 0.0112 t e x p Si g n if % 301.47 < 0.01 *** 0.0056 28.70 < 0.01 *** c x r j j w ὸ r t z t w 0.241 ** 0.3520 1.00 0.0056 62.97 < 0.01 *** -0.4681 1.90 0.0137 -34.19 < 0.01 *** -0.3528 1.90 0.0137 -25.76 < 0.01 *** b33 -0.5739 2.03 0.0133 -43.13 < 0.01 *** b12 -0.0096 1.11 0.0129 -0.75 < 0.01 *** b13 -0.1346 1.11 0.0144 -9.33 < 0.01 *** b23 0.0796 1.11 0.0144 5.52 < 0.01 *** α α L w 0.038 3.37 kh Lh b11 Jy hk B T.b22 dh L g w w 0.986 0.0056 b3 B t α 0.989 1.00 B T α T jv t n va an an 0.992 0.0189 α Jy ua L Νօ m b r e ԁ e ԁ e g ré s ԁc seĩ hiiệeput gl ấ li b e r té th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v ff xx z L Cօ effi c i e n thhk F.I nf l a t iօ n jg m " 3.3702 j.J k Bg T 0.1604 1.00 v j jj L i a Lu n w PRESS u L u ie 0.0194 il E c a r t T y p e ԁ e l a ré pօ n s e L n va α α α α E tսԁ e g r a pհ iqս e e n D j w z c r t w w E tսԁ e g r a pհ iqս e e n D j w z c r t w w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 129 " o D n ua an o tạ an L n an i Ta va u L u lie o D an an an u L n an va u " j.J hk gh f xf x Lz p.L sĩ hiiệeut c gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ận Dn vă tài lu a ậ án dc lu đồ d v j m gk g B hT Ld g B T jv Jy jj Lj Jy k h B T kh h L Jh B vT L Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 130