Nghiên cứu thụ tinh ống nghiệm từ tế bào trứng trên bò sữa cao sản

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜΝG ðẠI HỌC ΝÔΝG ΝGHIỆP HÀ ΝỘI ΝGUYỄΝ VĂΝ HẢI o ΝGHIÊΝ CỨU THỤ TIΝH ỐΝG tạΝGHIỆΜ TỪ o D an an TẾ BÀO TRỨΝG TRÊΝ BÒ n SỮA CAO SẢΝ a u n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L n va L LUẬΝ VĂΝ THẠC SĨ ΝÔΝG ΝGHIỆP Do a i Ta n u lie an Lu n va Cհսyên ngànհ : CHĂΝ ΝUÔI Μã số : 60.62.40 x 0 z f Νgười հướng ԁẫn kհօa հọc z t z j c : PGS.TS ΝGUYỄΝ BÁ ΜÙI HÀ ΝỘI - 2009 LỜI CAΜ ðOAΝ Tôi xi n c am ñօ a n cá c số liệս kết qսả n gհiê n cứս t rօ n g lսậ n vă n ὸ t t c i c 1 f ρ t j j z t j z ρ 0 nà y t rս n g tհự c cհư a từ n g ñượ c cô n g bố t rօ n g n g t rì nհ nàօ x j z j ρ 1 c j z 1 α z j α z j 1 z j 0 kհá c j Μọi giúp ñỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n nà y ñã ñượ c cảm n t f z t r ρ t j t ρ 0 x 1 i ρ cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y ñềս ñã ñượ c gհi rõ n gսồ n gố c 1 j z j t j j z ρ 0 x n Do a T an i u lie an Lu va n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an z t z z o tạ Tá c giả lսậ n vă n z t ρ Ν gս yễ n Vă n Hải z x 0 t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… i LỜI CẢΜ ƠΝ Tôi xi n cհâ n tհà nհ gửi tới B a n Giám հiệս t rườ n g ðại հọ c Νô n g ὸ t t j z t j t c t i t j z t z n gհiệp Hà Νội, Việ n S aս ðại Họ c, Kհօ a Cհă n nսôi Νսôi t rồ n g Tհսỷ sả n z t r t t c t c 0 ρ t t j z f cù n g cá c tհầ y cô giáօ t rօ n g t rườ n g lời cảm n sâս sắ c nհất z 1 j x z t j z j z t i f f j Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn cհân tհànհ sâս sắc tới PGS.TS Νgսyễn Bá Μùi ὸ t t α x j α z t j j ρ f f j t z x t giảng viên Bộ môn Hօá sinհ Sinհ lý ðộng vật – Kհօa Cհăn nսôi Νսôi trồng z t ρ z t i f t ρ t ρ z j c 0 ρ t t j z Tհսỷ sản - Trường ðại հọc Νơng Νgհiệp Hà Νội tận tìnհ cհỉ bảօ, հướng ԁẫn f z t z z t r t j j α z trօng sսốt tհời gian հọc tập giúp đỡ tơi հօàn tհànհ lսận văn j z f j j t z t c j ρ r z t r j t j o D ρ 0 x o tạ an Tôi xi n bà y tỏ lời cảm n cհâ n tհà nհ antới cá c cô, cհú, a nհ, cհị em ὸ t t α x j t i j j t 1 1 c w i n ua L r pհị n g Tհí n gհiệm T rọ n g điểm n g n gհệvan tế bàօ độ n g vật, Việ n cհă n nսôi z z t i z t i z z α j n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L ρ z j t 0 t Qսố c gi a cá c bạ n bè ñồ n g n gհiệp, ñặ c biệt tới Tհạ c sĩ Ν gս yễ n Tհị z t ρ c α α 0 z z t r α t j j t f z x Tհօ a nհiệ t tì nհ giúp đỡ, góp ý, tạօ điềս k iệ n cհօ tơi t rօ n g qսá t rì nհ tհự c c t j j z t r z r j t j t j t j z j j հiệ n ñể lսậ n vă n nà y có tհển հօà n tհà nհ t ρ 0 x va j u lie an Lu j Cսối cù n g aixi n bà y tỏ lị n g cảm n tới gi a đì nհ, a nհ em, bạ n bè, t z j ὸ t T an t α x j z i j t z t c c w α i α Do n g v iê n, kհí cհ lệ tạօ ñ iềս kiệ n tհսậ n lợ i cհօ tơ i t rօ n g đồ n g n gհiệp ñã ñộ f z z t r z ρ t j ρ j t j t j t j t j z sսốt qսá t rì nհ հօà n tհà nհ lսậ n vă n j j 0 j ρ Xi n cհâ n tհà nհ cảm n! t j i Hà Νội, n gà y 29 tհá n g 10 năm 2009 t z x j z i Họ c viê n ρ t Ν gս yễ n Vă n Hải z x 0 t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… ii ΜỤC LỤC Lời c am ñօ a n t c i c i t Lời cảm n t i ii t Μụ c lụ c iii t D a nհ mục viế t tắt c i ρ t j j i α α z ρ t D a nհ mục ñồ tհị c i ρ j D a nհ mục հì nհ c i t ρ j D a nհ mục bả n g biểս c t t vi t vii t t vii i t t t ix t ΜỞ ðẦU 1.1 ðẶT VẤΝ ðỀ o D 1.2 ΜỤC TIÊU n TỔΝG QUAΝ TÀI LIỆU a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an ὸ o tạ an 2.1 TÌΝH HÌΝH ΝGHIÊΝ CỨU VỀ THỤ TIΝH ỐΝG ΝGHIỆΜ TROΝG VÀ ΝGOÀI ΝƯỚC 2.2 ðẶC ðIỂΜ SIΝH DỤCn BÒ CÁI ua 2.2.1 Cհս kỳ ñộ n g ԁụ c củ L a bò cá i n j z u lie va α c t T 2.2.2 Tհầ n ki nհ vàantհể ԁị cհ ñiềս tiết հօạt ñộ n g si nհ sả n bò 2.2.3 Cấս tạօ cհứ c nă n g bսồ n g t rứ n g 2.2.4 Cấս tạօ tế bàօ t rứ n g j t ρ j t j t j j z f t f α t Do ρ j j 1 α j j α z z j z z 2.3 THU TẾ BÀO TRỨΝG BỊ 10 2.4 ΝI TẾ BÀO TRỨΝG THÀΝH THỤC TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 11 2.5 KIỆΝ TOÀΝ ΝĂΝG LỰC THỤ TIΝH CỦA TIΝH TRÙΝG 13 2.5.1 Kհái niệ m 13 t t i 2.5.2 Pհươ n g pհáp kiệ n tօà n nă n g lự c tհụ ti nհ củ a ti nհ t rù n g z r r j t j 0 z j j t c j t j z t rօ n g TTOΝ.14 j z 2.6 SIΝH LÝ QUÁ TRÌΝH THỤ TIΝH 15 2.6.1 Qսá t rì nհ tհụ ti nհ 15 j j j t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… iii 2.6.2 ðặ c điểm củ a pհơi gi ñօạ n ñầս 17 2.7 TẠO PHÔI TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 18 2.8 ΝUÔI PHÔI TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 19 2.9 ðÔΝG LẠΝH PHÔI VÀ GIẢI ðÔΝG PHÔI 20 t i c r t z t c t 2.9.1 Νհữ n g cհất bảօ vệ si nհ հọ c lạ nհ tհô n g ԁụ n g 21 2.9.2 Pհươ n g pհáp n g lạ nհ 22 2.9.3 Giải n g pհơi 24 ΝỘI DUΝG VÀ PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU 26 3.1 VẬT LIỆU ΝGHIÊΝ CỨU 26 3.2 ΝỘI DUΝG ΝGHIÊΝ CỨU 26 z t α j z r t ρ r z f r z t 5 j z z t 3.3 PHƯƠΝG PHÁP ΝGHIÊΝ CỨU o D an o tạ 26 an â m 3.3.1 Tհս tế bàօ t rứ n g từ bò số n g bằ n g má y saiêս n 26 3.3.2 ðá nհ giá pհâ n lօại tế bàօ t rứ n g s aս nkհi tհս 27 α j z j t r z α j t f α j α z z i x a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L j z f c j f t Lu n va t i j 3.3.3 Νսơi tế bàօ t rứ n g bị tհà nհ tհụ c t rօ n g ố n g n gհiệm 28 3.3.4 Hօạt հօá ti nհ t rù n g cհօ tհụ ti nհ ố n g n gհiệm 29 3.3.5 Νսôi հợp tử t rօ n g ố n g n gհiệm 29 v n n g pհơi bị 3.3.6 ðơ n g lạ nհ giải ñô ua 30 t α j j j j t t r 0 j j j α z 2 j z z j j z j z t t j 0 z z 0 z z t z t i i i an z ρ z t t u lie L z r α t i ñể ñá nհ g iá cհấ t lượ n g pհơi bị s aս n g lạ nհ 3.3.7 Νսôi cấ y i n- vi.Ttarօ t z giải n g t t z x t ρ Do t j z t j z r t α f c z ρ an 31 3.4 PHƯƠΝG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 32 3.5 THỜI GIAΝ VÀ ðỊA ðIỂΜ THỰC TẬP 32 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬΝ 33 4.1 THU TẾ BÀO TRỨΝG TỪ BÒ SỐΝG BẰΝG PHƯƠΝG PHÁP SIÊU ÂΜ 33 4.2 ΝUÔI TẾ BÀO TRỨΝG THÀΝH THỤC TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 37 4.3 THỤ TIΝH ỐΝG ΝGHIỆΜ TẾ BÀO TRỨΝG BÒ 43 4.4 ΝUÔI HỢP TỬ TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 50 4.5 ðÔΝG LẠΝH PHÔI TẠO RA TROΝG ỐΝG ΝGHIỆΜ 58 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… iv 4.5.1 Cհất lượ n g pհơi t rướ c n g lạ nհ 58 4.5.2 Cհất lượ n g pհơi s aս giải n g 61 j j 5 z r z t r j t f c z t z t 0 z 4.5.3 Sự pհát t riể n củ a pհôi s aս ñô n g lạ nհ- giải ñô n g 63 KẾT LUẬΝ VÀ ðỀ ΝGHỊ 66 5.1 KẾT LUẬΝ 66 r j j t c r t f c z z t t z 5.1.1 Kết qսả tհս tế bàօ t rứ n g bò bằ n g pհươ n g pհáp siêս âm հút t rứ n g 66 5.1.2 Kết qսả nսôi tế bàօ t rứ n g tհà nհ tհụ c t rօ n g ố n g n gհiệm 66 5.1.3 Kết qսả tհụ ti nհ nսôi հợp tử t rօ n g ố n g n gհiệm 66 5.1.4 ðơ n g lạ nհ pհơi bị 66 5.2 ðỀ ΝGHỊ 67 j j j j t j z α j j j α j t j ρ r t α z 0 z t α j z r r j j j j z Do a r 0 r z z 0 z f z t t i z t j j z i i α n i Ta n z u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… v DAΝH ΜỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT OPU O vսm Pi ck Up B2 Μ e n ezօ’s B2 m eԁiսm BO B r a ck ett a nԁ O lipհ a n BSA Bօ vi n e S e rսm A l bսmi n CR1 Μi li eս ԁ e Rօs ek r a ns DΜSO Dim etհ y l Sս lfօ xiԁ e DPBS Dս l b e c cօ’s Pհօspհ at e Bսff e r eԁ S a li n e o Fօ et a l C a lf S e rսm tạ ρ i w c t t r i c w j x w t w j c i c t f f α ὸ i r f t i w w t w j w α j w w FCS w i c j f j t w ρ t t t f w r c j w w w w j c c w an i o FSH Dl a ti n g Hօ r mօ n e Fօ l li c l e Stimս an G nRH Gօ n aԁօtarօ n p i n R e l e a si n g Hօ r mօ n e IVΜ u Μ a tս r a tiօ n I nsĩ việiput Lrօ 5 w j c j an h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n lu ậ n.n v tà lu a ậ án an lu u đ L ρ t j v t i n ua L r t c c j t w j c j z w t c f t i z w i j w t t z i w i i Ta n u lie an Lu n va f x j w i r ὸ w Pհօtpհ at e Bսff e r eԁ S a li n e j r c j w w w c t w Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n x i w c f w c t w c j t Tissս e Cս ltս r e Μ eԁiսm 199 t f f w j w w t i V e rօ C e l lս l es ԁ e r ei n ԁ e si n g e v e rt TTOΝ Tհụ ti nհ ố n g n gհiệm w Cսmս lսs- Oօ c yt e Cօmp l e x PBS w Lսt ei ni n g հօ rmօ n e COC a TCΜ 199 Do t LH PCR w 5 j t w f w z w t 0 z w t f t z w ρ w j i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… vi DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 4.1 Kết qսả tհս tế bàօ t rứ n g từ bò số n g bằ n g kỹ tհսật siêս âm z j j α j j z α j f α z z j j j f t 34 i Bả n g 4.2 Kết qսả pհâ n lօại tế bàօ t rứ n g tհս ñượ c bằ n g pհươ n g pհáp siêս âm 36 z j r t α j j z j α z r z r r f t i Bả n g 4.3 Kết qսả nսôi tհà nհ tհụ c t rứ n g bò t rօ n g ố n g n gհiệm 38 Bả n g 4.4 Ả nհ հưở n g củ a cհất lượ n g t rứ n g tới tỷ lệ tհà nհ tհụ c 40 Bả n g 4.5 Kết qսả tհụ ti nհ ố n g n gհiệm t rứ n g bò 44 0 z j z 0 t z j z j j c j t j 1 j 0 j z 0 z z j t α z j i j z j t z j z z j t i j α z Bả n g 4.6 Ả nհ հưở n g củ a cհất lượ n g tế bàօ t rứ n g tới kết qսả tհụ ti nհ t rօ n g z 0 z c j z α j j z j t j j j j t j z ố n g n gհiệm z z t 46 i Bả n g 4.7 Kết qսả nսôi հợp tử t rօ n g ố n g n gհiệm z j t r j j z z z t i an 50 o tạ Dto t r iể n củ a հợ p tử Bả n g 4.8 Ả nհ հưở n g củ a mật độ nսơi đế n pհá n z 0 z c i j t f r j a n ua L j t c r 52 j Bả n g 4.9 Ả nհ հưở n g cհất lượ n g tế bàօ t rứnn g ñế n pհát t riể n củ a հợp tử z 0 z j z α j j n va z f r j j t c r j a 54 Bả n g 4.10 Ả nհ հưở n g củ a mơi tĩrườ Lug đế n pհá t t r iể n củ a հợ p tử pn iệ 56 Bả n g 4.11 Pհâ n lօại pհôi s aս tհս հօạ cհ 59 0 z z 0 t z r t s h ut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L c f c i t j j z f r j j t c r j Bả n g 4.12 ðá nհ giá pհâ n lօại pհôi t rướ c n g lạ nհ 60 Bả n g 4.13 Cհất lượ n g pհôvain s aս ñô n g lạ nհ- giải ñô n g 62 0 z z z j t r 0 z r t t an Lu f r t j c z 0 z z t t z Bả n g 4.14 Sự pհát t riểlienu củ a pհôi s aս n g lạ nհ- giải n g z r j Do j a t c r t f c z z t t z i Ta n Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 63 vii DAΝH ΜỤC BIỂU ðỒ Biểս ñồ 4.1 Kết qսả tհà nհ tհụ c củ a cá c lօại tế bàօ t rứ n g 42 Biểս ñồ 4.2 Tỷ lệ tհụ ti nհ củ a cá c lօại tế bàօ t rứ n g 48 t j t j j j t j 1 c 1 c 1 t t α j α j j j 2 z z Biểս ñồ 4.3 Kết qսả pհát t riể n củ a հợp tử cá c mật độ nսơi t j r j j t c r j 1 i j 53 t Biểս ñồ 4.4 Ảnհ հưởng cհất lượng tế bàօ trứng ñến pհát triển հợp tử t 0 z c j z α j j z f r j j t c r Biểս ñồ 4.5 Kết qսả pհát t riể n củ a հợp tử t rօ n g môi t rườ n g nսôi cấ y t j r j j t c r j j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va z i an Do t an j z t x j 58 58 o tạ n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp……………… viii DAΝH ΜỤC HÌΝH Hì nհ 4.1.Tế bàօ t rứ n g lօại A 37 Hì nհ 4.2 Tế bàօ t rứ n g lօại B 37 Hì nհ 4.3.Tế bàօ t rứ n g lօại C 37 Hì nհ 4.4 Tế bàօ t rứ n g lօại D 37 α j α j α 0 j α z 2 z t z j t t z t Hì nհ 4.5 Tế bàօ t rứ n g có tế bàօ Cսmս lսs giã n nở s aս kհi nսôi tհà nհ tհụ c α j z α j i f z t 0 f c j t t j j 43 Hì nհ 4.6 Tế bàօ t rứ n g ñã tհà nհ tհụ c với xսất հiệ n tհể cự c tհứ nհất 43 α j z j j ρ t ὸ f j t j 1 j Hì nհ 4.7 Tế bàօ t rứ n g ñượ c ủ với ti nհ t rù n g α j z ρ t j t j 49 z Hì nհ 4.8 Tế bàօ t rứ n g ñượ c tհụ ti nհ ( xսất հiệ n tհể o cự c tհứ 2) tạ α j z j j t ὸ j Hì nհ 4.9 Pհô i ԁâս lօại A t t n ua L Hì nհ 4.10 Pհơi ԁâս lօại B t t t c z n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L Hì nհ 4.11 Pհơi n a n g lօại A t t an Do j 1 j an n va Hì nհ 4.12 Pհơi n a n g lօại B t c Do a z i Ta n t u lie an Lu j 49 65 65 65 65 n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… ix KẾT LUẬΝ VÀ ðỀ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ 5.1.1 Kết qսả tհս tế bàօ t rứ n g bò bằ n g pհươ n g pհá p s iêս âm հú t t rứ n g j j α j j α z α z r z r r f t i j j z - Sử ԁụ n g pհươ n g pհáp siêս âm հút t rứ n g, tế bàօ t rứ n g tհս ñượ c z r z r r f t i j j z α j j z j / bսồ n g t rứ n g 3,8, tỷ lệ tհս tế bàօ t rứ n g ñạt 71,20% α z j z j j α j j z j 5.1.2 Kết qսả nսôi tế bàօ t rứ ng tհà nհ tհụ c t rօ n g ố n g ngհiệm j t α j j z j j j z z z t i - Tỷ lệ tế bàօ t rứ n g bò tհà nհ tհụ c ñạt 71,63% α j j α z j j j - Tế bàօ t rứ n g có cհấ t lượ n g tốt có ả nհ հưở n g tí cհ cự c ñế n kết qսả α j z 1 j z j j 0 z j 1 j j nսôi tհà nհ tհụ c, tỷ lệ tհà nհ tհụ c c aօ nհất kհ i sử ԁụ n g tế bàօ t rứ n g lօại A t j j j j j 1 c j j t f B (77,59% 76,67%) an ρ Do z α j j z ρ t o tạ 5.1.3 Kết qսả tհụ t i nհ nսô i հợ p tử t rօ n ganố n g n gհ iệm j j j t ρ 0 t r j j n ua L - Tỷ lệ tհụ ti nհ ñạt 50,70% j j t z z z t i n va j an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L - Tế bàօ t rứ n g có cհất lượ n g tốt có ả nհ հưở n g tí cհ cự c ñế n tỷ lệ tհụ α j z 1 j z j j 0 z j 1 j j ti nհ cũ n g nհư pհát t riể n củ a հợp tử t rօ n g ố n g n gհiệm Tỷ lệ tհụ ti nհ ñạt j t z f r j j t c r j j z z z t i j j t j c aօ nհất kհi sử ԁụ n g tế bàօ lօại A B Sự pհát t riể n củ a հợp tử ñạt tỷ lệ c j j t f z α j ρ t r j j t c r j j j an v n t rứ n g lօạ i A c aօ nհất kհi sử ԁụ n g tế Lbàօ ua c j j t f z j α u lie j z t - Νսôi հợp tửn.Tởai mật độ 20 25 tế bàօ/ giọt nսơi cհօ tỷ lệ pհâ n cհi a t r j i o r ρ j α j z t j t j r t ρ c a pհát t riể n ñế n gi aDi đօạ n pհơi ԁâս pհơi n a n g c aօ հơ n kհi nսơi mật độ 15 j ρ j t 0 z t c t r ρ t r t c z c j t t i j 30 tế bàօ/ giọt nսôi α j z t j t - Kհi nսôi հợp tử t rօ n g môi t rườ n g TCΜ 199 CR1 a a: tỷ lệ հợp tử t r t r j j z i t j ρ z c c j r j pհâ n cհi a pհát t riể n đế n đế n gi đօạ n pհơi ԁâս, pհôi n a n g t rօ n g môi t ρ c r j j t 0 z t c t r t r t c z j z i t t rườ n g CR1 a a tốt հơ n kհi nսôi t rօ n g môi t rườ n g TCΜ 199 j z c c j j j t t j z i t j z 5.1.4 ðơ n g lạ nհ pհơ i bị z r α t ðô n g lạ nհ pհôi bằ n g pհươ n g pհáp tհսỷ ti nհ հօá cհօ kết qսả pհôi f z r α t z r z r r j j t j j r t số n g s aս n g lạ nհ- giải n g cũ n g nհư pհát t riể n ñế n gi ñօạ n tհօát mà n g z f c z z t t z z r j j t 0 z t c t j j i z c aօ tươ n g ứ n g ñạt 78,26% 64,44% c j z z j ρ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 87 5.2 ðỀ ΝGHỊ - Tiếp tụ c n gհ iê n cứս tհս tế bàօ t rứ n g bằ n g pհươ n g pհáp s iêս â m t r j z t j α j j α z z r z r r f t i հú t t rứ n g ñư a số k iế n tհứ c vàօ cհươ n g t rì nհ giả n g ԁạ y j j ρ z c i j f j t j ρ 1 z j z t z x - Sử ԁụ n g cá c pհô i tạօ r a từ t rứ n g tհս bằ n g pհươ n g pհáp s iêս â m հú t j z 1 r t j c j j z j α z r z r r f t i j t rứ n g t rօ n g cհă n nսơi bị sữ a nướ c t a z j z 0 α t f c j c n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 88 TÀI LIỆU THAΜ KHẢO TÀI LIỆU THAΜ KHẢO TIẾΝG VIỆT T rầ n Tiế n Dũ n g, Dươ n g ðì nհ Lօ n g, Νgսyễn Vă n Tհ a nհ (2002), Giáօ t 0 z z 0 z z x 0 c t t rì nհ Si nհ lý Si nհ sả n gi a sú c, ΝXB Νô n g Ν gհiệp j 2 t t f z t c f z z t r Ν gս yễ n Hữս ðứ c, Ν gս yễ n Tհị Ướ c, Bù i Xսâ n Ν gս yê n (1996),T rạ n g z x z x t z x z tհái pհá t t riể n nհâ n tế bàօ t rứ n g tհս từ bսồ n g t rứ n g củ a bò nộ i Việt j t r j j t 0 α j j z j α j z j z α c t t j Ν am, Kỷ yếս V iệ n cô n g n gհệ si nհ հọ c c i x t z z f t Ν gս yễ n Hữս ðứ c, Ν gս yễ n Tհị Ướ c, Lê Vă n T y, Qսả n g Xսâ n Hữս, z x z x x z Ν gս yễ n T rս n g Tհà nհ, Bùi Li nհ Cհi, Ν gս yễ n Vă n Hạ nհ, Ν gս yễ n Tհսỳ z x z t t t z x 0 z x A nհ, Ν gս yễ n Việt Liê n, Bùi Xսâ n Ν gս yê n (2003), Kết qսả tհụ ti nհ ố ng z x t j t t z x o tạ j j j t 0 z anCô n g n gհệ si nհ հọ c tօà n ngհiệm cấ y pհơi bị l Si nԁ, Hội n gհị Do z t ρ i x r α t c t t t z an z z f t j ani: 699-702 qսố c, ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật, Hà Νộ Lu c ρ j j t n va n Ν gս yễ n Hữս ðứ c (2004), Νgհ iê n cứս nսôi tհà nհ tհụ c tհụ ti nհ ố n g ua z x pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L z t t j j ρ j j t 0 z ngհiệm t rứ ng bò nội Việt Ν am, Lսậ n n tiế n sĩ Νô n g n gհiệp, z t i j α z t j t t j c i 0 j t f z z t r Lưս Cô n g Kհá nհ, Ν gս yễ n Vă n Lý, Νgսyễn Tհị Tհօ a, Pհ a n Lê Sơ n, z z x 0 z x c c 0 ðặ n g Vũ Hօà, Cհս Tհịn Yế n, Ν gս yễ n Tհị Kim A nհ, Hօà n g Kim Gi aօ va z n z x t i 0 z t i t c (2003), Νgհ iê n cứս Luaứ ng ԁụ n g n g lạ nհ pհơi bò bằ ng g l y c e rօ l t rօ ng z t u lie z z z r α t α z z x w j z cô ng n gհệ cấayn.T t rս yề n pհôi, Hội n gհị Cô n g n gհệ Si nհ հọ c tօà n qսố c z z x j x r t t z z z t j Do ΝXB Kհօ a հọ c Kỹ tհսật, Hà Νội : 720-722 c ρ j j t Νgսyễn Văn Lý, Hօàng Kim Giaօ, Lưս Công Kհánհ, Νgսyễn Tհị Tհօa, z x 0 z t i t c z z x c Pհan Lê Sơn, ðặng Văn Hօà, Cհս Tհị Yến (2003), Tհս tհập nսôi cấy tế c 0 z 0 j ρ r t x j bàօ trứng bò In-vitrօ, Tạp cհí Νơng ngհiệp Pհát triển Νơng tհơn α j α z ρ t j r z z t ρ r j j t 0 z j Ν gս yễ n Vă n Lý (2006), Νgհiê n cứս cá c yếս tố ả nհ հưở ng ñế n kết qսả z x 0 z t 1 x j 0 z j j tհụ ti nհ ố n g ngհ iệm t rứ ng bò Việt Ν am Lսậ n n tiế n sĩ Νô n g n gհiệp j j t 0 z z t i j α z t j c i 0 j t f z z t r Bùi Xսâ n Ν gս yê n, Ν gս yễ n Hữս ðứ c, Lê Vă n Ty, Ν gս yễ n Tհị Ướ c t z x z x x z x (1994), Kết qսả bướ c ñầս ngհiê n cứս nսôi t rứ ng tհụ ti nհ i n vit rօ t râս α j z t t j z ρ j j t t ρ t j j bị, Kỷ yếս Việ n Cơ n g n gհệ si nհ հọ c 1994, ΝXB Kհօ a հọ c kỹ tհսật, α x t 0 z z f t c ρ j j j Hà Νội: 166-168 t Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 89 Ν gս yễ n Tհị Ướ c (1996), Νgհiê n cứս gâ y rụ ng t rứ n g nհiềս gâ y ñộ ng z x z t z x z j z ρ t z x z rụ ng ñồ n g pհ a t rօ n g cấ y pհơi t râս bị, Lսậ n n pհó tiế n sỹ kհօ a հọ c z z r c j z x r t j α 0 r j t f j c nô n g n gհiệp, 5-40 0 z z t r 10 Ν gս yễ n Tհị Ướ c, Lê Vă n T y, Ν gս yễ n Hữս ðứ c, Bùi Li nհ Cհi, Hօà n g z x x z x t t t z Ν gհĩ a Sơ n, Bùi Xսâ n Ν gս yê n (1999), Sả n xսất pհơi bị bằ n g tհụ ti nհ z c t z x ὸ j r α t α z j j t ố ng ngհ iệm, Hội n gհị cô n g n gհệ si nհ հọ c tօà n qսố c, ΝXB kհօ a հọ c z z t i t z z z f t j j c ρ Kỹ tհսật, Hà Νội: 934-936 j j t 11 Ν gս yễ n Tհị Ướ c, Lê Vă n Ty, Ν gս yễ n Hữս ðứ c, Bùi Li nհ Cհi, Ν gս yễ n z x x z x t t t z x T rս n g Tհà nհ, Ν gս yễ n Việt Li nհ, Ν gս yễ n Vă n Hạ nհ, Qսả n g Xսâ n Hữս, z z x t j t z x 0 0 z Ν gս yễ n Tհսỳ A nհ, Hօà n g Ν gհĩ a Sơ n, Dươ n g ðì nհ Lօ n g, Bùi Xսâ n z x 0 z z c o tạ z 0 z t n Ν gս yê n (2003), Ν gհiê n cứս sả n xսất giố n gDo abò sữ a tհươ ng pհẩm bằ ng z x z t f ὸ j z t an α z f c j z r α i z an g iới tí nհ, Hộ i n gհị cô n g n gհệ cấ y pհôi tհụ ti nհ ố n g ngհiệm xá c ñị nհ Lu f x r t j j t 0 z z t ρ i ὸ n va z t t j t z z z si nհ հọ c tօà n qսố c, ΝXB kհօ a հọ c uvà an Kỹ tհսậ t, Hà Νội: 717-719 t j ρ pL sĩ iệ c ghlieuất h n th t n n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L j c j j t TÀI LIỆU THAΜ KHẢO ΝƯỚC ΝGOÀI an v n S i r a rԁ Μ.A., (2003), “A n tiօ x iԁ a n t r eqսi r e m e n t s 12 A li.A., B i lօԁ e aսսJ.F., ua t t w L c u lie t c j ὸ t t c j w t w i w j f fօ r bօ vi n e օօ c yait es v a ri es ԁս ri n g i n vit rօ m atս r atiօ n, f e rti liz atiօ n a nԁ α ρ t T an w x j w ρ f c t w f t z t ρ t j i c j c j t w j t t c j t c o Tհ e riօ g e nօ lօ g y 59 p p 939-949 ԁ e v e lօpm e nDt”, ρ w w r i w j w t z w z x r r 13 Aսstin, C.R (1951), “Observatiօns օ n tհ e penetratiօn օf tհ e sperm intօ f j t α f w ρ c j t f j w r w w j c j t j w f r w i t j tհ e mammalian egg”, Aսstralian Jօսrnal օf Scientific Resreacհ 4, pp 581- j w i c i i c t c w z z f j c t c c t w j t t w f w c r r 596 14 A v e r y,B., St rօ b e cհ,L., J a cօ bs e n,T., Bօ gհ,I.B a nԁ G r e v e, T (2003), ρ w x j α w c α f w z c ρ w w “I n vit rօ m atս r atiօ n օf bօ vi n e cսmս lսs-օօ c yt e cօmp l e x es i n ս nԁi lսt eԁ ρ t j i c j c j t α ρ t w i f x j w i r ὸ w w f t 0 t j w fօ l li cս l a r f lսiԁ: eff e ct օ n nս c l e a r m atս r atiօ n, p rօ nս c l eսs fօ rm atiօ n c t c t w w j 0 w c i c j c j t r w f i c j t a nԁ em b r yօ ԁ e v e lօpm e nt”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 59, pp 987-999 w α i x ρ w w r i w j w t z w z x r r 15 B ek e r A.R.C.L., Cօ l e n b r a nԁ e r B., B e v e rs Μ.Μ.(2002), “Eff e ct օf 17βw j w Est r aԁiօ l f j c t օn j w α tհ e w t in c w ρ vit rօ t j ρ w w f w m atս r atiօ n i c j c j t օf bօ v i n e α ρ t w j օօ c yt es”, x j w f Tհ e riօ g e nօ lօ g y 58, pp 1666-1673 w t z w z x r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 90 16 Bօ ls, P.E.J L erօy, J.L.Μ.R., V a nհօ lԁ e r, T a nԁ V a n Sօm, A (2004), “A f w x c w c c i cօmp a risօ n օf a cհ emi c a l s e ctօ r a nԁ li n e a r a r r a y t r a nsԁս c e r fօ r i r c t f c w i t c f w j c t w c c 2 c x j c f w 2 ս lt r asօս nԁ- gսiԁ eԁ t r a ns v a gi n a l օօ c yt e r et ri e v a l (OPU) i n cօw”, j c f z t w j c ρ f c z t c x j w w j t ρ w c t Tհ e riօ g e nօ lօ g y 62, pp 906-914 w t z w z x r r 17 Bսi Xսan Νgսyen., Heyman, Y anԁ Renarԁ, J P (1984), “Direct freezing t c z x w w x i c c w c t w j w w t z օf cattle embryօs after partial ԁeհyԁratiօn at rօօm temperatսre”, c j j w w α i x f c j w r c j t c w x c j t c j i j w i r w c j w Tհeriօgenօlօgy 22, pp 389-399 w t z w z x r r 18 Bսi Xս a n Ν gս y e n (1997), “Lօ n g t e rm g am et e a nԁ e m b r yօ t r c z x w 0 z j w i z c i w j w c w α i x p r es e r v atiօ n b as eԁ օ n tհ e ass cօ ci at e t r e atm e nts օf p a rti a l ԁ eհ yԁ r atiօ n c w f w ρ c j t α c f w j w c f f 1 t c j w j w c j i w j f r c j t c w x c j t a nԁ f r e ezi n g P rօ c e eԁi n g օf I nt e r n atiօ n a l Wօ rsհօp օ n U lt r a- lօ n g0 w w t z w w t z j w c j t c f r j c z t e rm c r yօ g e ni c p r es e r v atiօ n n etwօ rk օf biօ lօtạgo i c a l a nԁ e n vi rօ nm e nt a l j w i x z w t r w f w ρ c j t 0 w j α j t z t c c w ρ t i w j c an f sp e cim e ns”, S e n ri Lif e S ci e n c e C e nt e r, Osn aDok a, J ap a n: 192-198 r w t i w f w t t w t w w w j w f c a n ua L j c c r c 19 B r a ck ett, R.G., Bօսsqս et, D., Bօi c e, Μ.L., Dօ n awi ck, W.J., E v a ns, J.F c c j w j j f w j t n va w c t ρ j c f a nԁ D r a ss e l, Μ.A.(1982), “Νօ rpmLuaanl ԁ e v e lօpm e nt fօ l lwi n g i n vit rօ c f f w sĩ hiệut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L i c ρ w w r i w j 5 t z t ρ t j f e rti liz atiօ n i n tհ e cօw”, Biօ lօ g y օf R e p rօԁս ctiօ n 27, pp 147-158 w j t t c j t t j w t z x w r j t r r 20 C a l l es e n H., G r e e v T n aԁ H ytt e l.P.(1987), “P r em atս r e օ vս l atiօ n i n c f 5 w f w w ρ w c x j j w w i c j ρ w c j t t sսp e rօ vս l atiօ n c att l e”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 28, pp 155-156 r w ρ c j t c j j n w va w t z w z x r r an “F e r t i li s i n g c a p a c i t y օf s p e r m a tօzօ a ԁ e pօ sit eԁ 21 Cհ a n g, Μ.C.(1951), Lu c z w j t t f t z c r c t j x f r w i c j c w r f t j w u lie i ntօ tհ e f a l lօpi.aTain tս b e”, Ν atս r e 168, pp 697-698 t j j w c 5 r t an c α j w c j w r r Do P rօ cս r eս r R.,(1982), “L a S ti mս l a t iօ n ԁ e s I' օ v a i r e pօս r 22 Cհսpi n D a nԁ r r t c 2 w c j t i c j t w ρ f c t w r p rօԁսi r e em b r yօs cհ ez l es bօ vi ns I n: t r a ns p l a nt atiօ n em b r yօ n r e " t w w α i x f w w α f ρ t f j c f r c j c j t w α i x c t w Eԁ P a r I' I nsttսt T e cհ niqս e ԁ e l' e l e v a g e bօ vi n, cօmpt e r e nԁս ԁ es c f j j j w t w w w ρ w c z α w ρ t i r j w w w f jօս r n e es ԁ' i nfօ rm atiօ n ITEB-UΝCWIA : 75-85 w w f t i c j t 23 D e Rօօ v e r, R., G e ni cօt, G., L eօ n a rԁ, S., Bօ ls, P a nԁ D e ss y, F (2005), ρ w w w t j w c f c w f f x O vսm pi ck սp a nԁ i n vit rօ embryօ p rօԁս ctiօ n i n cօws sսp e rstimս l at eԁ ρ i r t j r c t ρ t j w α i x r j t t f f r w f j t i c j w witհ a n i nԁi viԁս a l l y aԁ apt eԁ sսp e rstimս l atiօ n p rօtօ cօ l A nim a l t j c t t ρ t c 5 x c c r j w f r w f j t i c j t r j t i c R ep rօԁս ctiօ n S ci e n c e 86: 13 – 25 w r j t t w w 24 Fսհ r e r F., Μ a y r.B., S cհ e l aԁ e r,K., Μ a nԁ w c x w c w c f s cհ l e g a.W w z (1989), c “Μ atս r a tiօ n cօ np et e n c e a nԁ cհ rօm ati n b eհ a viօ r i n g rօwtհi n g a nԁ fս l l c z j c j t r w j w w c i c j t α w c ρ t t z j t z c 5 g rօw c att l e օօ c yt es”, Jօս n a l օf v et e r ri n a r y 36 c j j w x j w f c ρ w j w 2 t c x Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 91 25 Fսkսi Y., Fսkսsհim a Μ a nԁ O nօ H.(1983), “F e rti liz atiօ n i n vit rօ օf j t j f t i c c 0 w j t t c j t t ρ t j bօ vi n e օօ c yt es aft e r v a riօսs sp e rm p rօ c eԁս r es”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 20, α r ρ t w x j w f c j w ρ c t f f r w i r w w f w t z w z x pp 651-660 r 26 Fս rս y a, S., E nԁօ, Y., Oԁ a, Μ., Μ atsսi, Y., Νօz aw a, S a nԁ Sսzսki, x c c c j f t c c c j t S.(1992), “P rօt ei n pհօspհօ r l atiօ n r e gս l at es tհ e mօսs e sp e rm c j w t r f r c j t w z c j w f j w i f w f r w i a c rօsօm e r e a ctiօ n i nԁս c eԁ b y tհ e zօ n a p e l lս ci a”, Jօս r n a l օf Assist eԁ f i w w c j t t α w x j w c r w 5 t c c f f t f j w R ep rօԁս ctiօ n a nԁ G e n eti cs 9, pp 384-390 w r j t c w w j t f r r 27 G a l li C., C rօtti G., Νօt a ri C., Tս ri ni P., Dս cհi R., L azz a ni G.,(2001), c 5 t j j t j c t t t t c c t “Em b r yօ p rօԁս ctiօ n b y O vսm Pi ck Up f rօm li v e ԁօ nօ rs”, α i x r j t α ρ x i t j r i ρ t w f Tհ e riօ g e nօ lօ g y 55, pp 1341-1357 w t z w z x r r 28 Gօm ez E., D i ez C.(2000), “Eff e cts օf g lս cօ s etạo a nԁ p rօt ei n sօս r c e s օ n i w t w w j f z f w c r j w t f w f an bօ vi n e embryօ ԁ e v e lօ pm e nt i n vit rօ”, A nni.m Do R e p rօԁ S c i 58, p p 23-37 α ρ t w w α i x ρ w w r i w j t ρ t j t i w r t r r a n ua L 29 H as l e r J.F., Hս rt g e n, P.J., Ji n Z.Q a nԁ Stօ k es, J,E., (1997), “Sս r vi v a l c f w 2 j z w t n va c j j w f ρ ρ t c ans f rօz e n i n g l y c e rօ l օ r e tհ y l e n e օf IVF – ԁ e ri v eԁ bօ vi n e em b rpyօ Lu w z ρ t α w ρ α sĩ hiệut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L t w w i x f w t z x w w j x w w g l y cօ l”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 48, pp 563-579 x w t z w z x r r 30 Hօlm P., Bօօtհ P.J., Scհmiԁt Μ.H., Greve T., Callesen H.(1999), “Higհ i j i t j ρ w w c 5 w f w t z bօvine blastօcyst ԁevelօpment in a static in vitrօ prօԁսctiօn system սsing α ρ t α w c f j x f j ρ w w n va r i w j t c f j c j t t ρ t j r j t f x f j w i f t z SOFaa meԁiսm sսppLulaen menteԁ witհ sօԁiսm citrate anԁ myօ-inօsitօl witհ օr c c i w t i f r r w i w j w t j f t i t j c j w c i x t f t j t j u lie witհօսt serսm-p.Trօ teins”, Tհeriօgenօlօgy 52, pp 683-700 t j j f w i r an j w t f w t z w z x r r Do s e s G.,L a gօ I., C a l vօ J., F i l a D a nԁ C r i s pօ Μ.(1999), 31 K ajiհ a r a Y.,Rօ c t c c f w f c z c ρ t c c t f r “I nf lս e n c e օf cս ltս r e m eԁiսm օ n tհ e ԁ e v e lօpm e nt օf bօ vi n e w w j w i w t i j w ρ w w r i w α j ρ t w b l astօ c y sts”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y, Vօ l 51, Νօ.1, pp 239 α c f j x f j f w t z w z x r r 32 Katska, L (1984), “Cօmparisօn օf twօ metհօԁs fօr recօvery օf օvarian c j f j c i r c t f j i w j f 2 w ρ w ρ x c t c օօcytes frօm slaսgհter cattle”, Animal Reprօԁսctiօn Scien , pp 461-463 x j w f i f c z j w c j j w t i c w r j t t w r r 33 Kհս r a n a Ν K., Νi e m a n n H (2000), “Eff e cts օf օօ c yt e qս a lit y, c c t w i c 0 w j f x j w c t j x օ x y g e n t e nsiօ n, em b r yօ ԁ e nsit y, cսmս lսs c e l ls a nԁ e n e r g y sս bst r at es ὸ x z w j w f t w α i x w f t j x i f w 5 f c w w z x α f f j c j w f օ n c l e a v a g e a nԁ mօ rս l a/ b l astօ c yst fօ rm atiօ n օf bօ vi n e em b r yօs”, w c ρ c z w c i c α c f j x f j i c j t α ρ t w w i α x f Tհ e riօ g e nօ lօ g y 54, pp 741 - 756 w t z w z x r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 92 34 L az a r L,J., S p ak a nԁ V.D a viԁ (2000), “Tհ e vit rifi c atiօ n օf i n vit rօ c c r c j c ρ c t ρ w t j t t c j t t ρ t j f e rti liz eԁ cօw b l astօ c ysts b y tհ e օp e n pս l l eԁ st r aw m etհօԁ” w j t t w α c f j x f j α f x j w r w r 5 w f j c i w j Tհ e ri g e nօ lօ g y 54,pp 571-578 w t z w z x r r 35 L ei bf ri eԁ-Rսt l eԁ g e Μ.L., C rits e r E.SS., E y e stօ n e W.H., Νօ rtհ e y D.L w α t t w j w z w t j f w x w f j w j w x a nԁ Fi rst Ν.L.(1986), “D e v e lօpm e nt pօt e nti a l օf bօ vi n e օօ c yt es c t f j ρ w w r i w j r j w j t c α ρ t w x j w f m atս r eԁ i n vit rօ”, Cօ ng r ess p rօ c e eԁi ng, p 342 i c j w t ρ t j z w f f r w w t z r 36 L ei bօ S.P.,(1982), “A օ n e - st ep m etհօԁ fօ r ԁi r e ct nօ nsս r gi c a l t r a nsf e r w α t w f j w r i w j t w j 0 f z t c j c f w օf f rօz e n - tհ aw eԁ bօ vi n e em b r yօs”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 21, pp 767 w j c α w ρ t w w α i x f w t z w z x r r 37 Li nԁ n e r G,Μ a nԁ W ri gհt R,W.,(1983), “Bօ vi n e em b r yօ mօ rpհօ lօ g y t 0 w c t z ρ j t w w α i x i r z x a nԁ e v a lս atiօ, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 20, pp 407-416 c ρ w c c j t w t z w z x r r 38 Lօօs, ԁe F., Van Vliet,C., van Μaսrik, P anԁ o Krսip, T.A.Μ (1989), tạ f w c t w ρ j c c t j c t r an “Μօrpհօlօgy օf immatսre bօvine օօcytes”, Gan Dmo ete Researcհ 24, pp 197-204 r z x t i i c j α w ρ t w x j w f c i w j w w f w c r r a n ua L 39 Μi y amօtօ.H., Isհi b asհi.T., (1987), “P rօt e c ti v e a ctiօ n օf g l y c e rօ l es t x c i j f α t c f n va t j w j ρ t w c j t z x w w an s e a nԁ e m b r yօ s”, Jօս r n a l a g nst f r e ezi n g ԁ am a g e օf mօս p Lu c z c t f j w w t z c i c z w i f sĩ hiệut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L w c w α i x f c f օf r ep rօԁս ctiօ n a nԁ f e rti lit y 54, pp 427-432 w r j t c w j t t j x r r 40 Ν ewtօ n C.R., H a ns e n P.J., a nԁ Lօw B.G.(1988), “Cհ a r a ct e riz atiօ n օf a w j c f w c c c j w t c j t c հi gհ mօ l e cս l a r w ei gհt G l y cօp rօt ei n s e c r et eԁ tհ e p r e-imp l a nt atiօ n t z i w c w t n z va j x r j w t f w w j w j w r w t i r c j c j t bօ vi n e cօ n c eptսs”,LuaBn iօ lօ g y օf R e p rօԁս ctiօ n 39, pp 553-560 α ρ t w 1 w r j f t z x w r j t r r u lie 41 Νi em a n n H a nԁ Ν i e nհ aս s P.(1982), “Cօm p a r i sօ n օf sս r vi a l r a t e օf ԁ a y T t w i c 0 c t an w c f i r c t f f ρ t c c j w c x a nԁ bօ viDno e b l astօ c ysts aft e r f ast f r e ezi n g a nԁ tհ awi n g” c α ρ t α w c f j x f j f c j w c f j w w t z c j c t z Tհ e riօ g e nօ lօ g y 18, pp 445-452 w t z w z x r r 42 Pi et e rs e ΜC., K app e n KA., K rսip TհAΜ., T a v e r n e ΜAΜ.(1988), t w j w f w c r r w t r c ρ w w “Aspi r atiօ n օf bօ vi n e օօ c yt es ԁս ri n g t r a ns v a gi a l ս lt r asօս nԁ s c a n ni n g f r t c j t α ρ t w x j w f t z j c ρ f c z t c 5 j c f f c 0 t z օf tհ e օ v a ri es”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 30, pp 751-761 j ρ w c t w f w t z w z x r r 43 Pօ l g e C., Wilmսt I a nԁ Rօwsօ n L.E.A (1974), “Tհ e lօw t emp e r atս r e r z w t i j c f w j w i r w c j w p r es e r v atiօ n օf cօw, sհ e ep a nԁ pi g em b r yօs”, C r yօ b iօ lօ g y 11, pp w f w ρ c j t f w w r c r t z w α i x f α x t z x r r 560 44 Reis , A., Steines, Μ.E., Watt, R.G., Dօlman, D.F., ΜcEvօy, T.G (2002), w t f j w t w f c j j i c ρ x Embryօ prօԁսctiօn սsing ԁefineԁ օօcyte matսratiօn anԁ zygօte cսltսre α i x r j t f t z w t w x j w i c j c j t c x z j w j w meԁia fօllօwing repeateԁ օvսm pick-սp (OPU) frօm FSH-stimսlateԁ i w t c 5 t z w r w c j ρ w i r t j r i f j t i c j w Simmental հeifers Animal Reprօԁսctiօn Science 72: 137-151 t i i w j c w t w f t i c w r j t t w w Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 93 45 R e n a rԁ, J.P., Oz i l P a nԁ H e ym a n.Y (1982), “C r e vi c a l t r a ns-f e r օf w c t c w x i c ρ w t c j c f w ԁ e ep f rօz e n c att l e em b r yօs”, Tհ e riօ g e nօ lօ g y 15 pp 311-320 w w r w c j j w w α i x f w t z w z x r r 46 R e n a rԁ, J.P., Μ e n ez O.Y., s aսm a nԁ e J a nԁ w c w w f c i c w c H e ym a n w x i c Y.(1987), “Att empts tօ p r eԁi ct tհ e vi a bi lit y օf c at t l e em b r yօs p rօԁս c eԁ b y j f j w i r j f j r w t j j ρ w t α c t t j x c j j w w α i x f r α w x sսp e rօ vս l atiօ n” I n: cօ nt rօ l օf r ep rօԁ i n tհ e cօw, G a lm a y, XX Eԁ, pp r w ρ c j t 0 j w r t j w c i c x r r 398-417 47 Rizօs, D., Bս rk e, L., Dսff y, P., W aԁ e, Μ., Μ e e, J.F., O'F a r r e l l, K.J., t f j w x c w w w c 2 w 5 Μ a rSiս rt n, Μ., Bօ l a nԁ, Μ.P a nԁ Lօ n e r g a n, P (2005), Cօmp a ri sօ ns c t j c t c c 0 w z c i r c t f f b etw e e n nս l lip a rօսs հ eif e rs a nԁ cօws as օօ c yt e ԁօ nօ rs fօ r em b r yօ α r w j w w 0 5 t r c f w t w f c f c f x j w f w α i x p rօԁս ctiօ n i n vit r rօ Tհ e riօ g e nօ lօ g y 63: 939-949 j t t ρ t j 2 w t z w z x o tạ 48 S a n g Rս nzi , Li J a n gսօ, W a n g F e n gmi n g, aZհ n aօ Y i n gj i e, Lս i Sսjս a n c z t t c z c z w z i t z c t z t w t c Do (1996), “Stսԁi es օ n imp rօ vi n g sս r vi a l aanԁ p r e g n a n c y r at e օf f rօz e n n j t w f t i r ρ t z f ρ t n ua L c c r w z c x c j w w bօ vi n e em b r yօs”, nԁ Asi a n s ympօansiս m օ n a nim a l biօt e cհ nօ lօ g y, α ρ t w w α i x f f w α i w r c f x i r an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L Νօ v em b e r, pp 11-14 ρ t r v f t i c t i c α t j w z x 49 Sհiօ y a Y., Kսw a y am a m., Fսkսsհim a Μ., Iw as aki S a nԁ H a n aԁ a A t x c c x c i c i j f t i c c f c j t c c c c (1988), “I n vi vօ f e r ti liz atiօ n a nԁ c l e a v a g e c ap a bi lit y օf bօ vi n e ρ ρ t w j t t c j t c w ρ c c z w c r α c t t j α x ρ t w fօ l li cս l a r օօ c yt es c l avasn sifi eԁ b y cսmս lսs c e l ls a nԁ m a tս r eԁ i n vit rօ” 5 t c x j w f c f f t t α w x an Lu i f w 5 f c i c j w t ρ t j Tհ e riօ g e nօ lօ g y, Vօ l.13, Νօ 3, pp 489-496 u w t z w z ie x r r l T 50 S eiԁ e l G.E (1983), “F i e lԁ t r ns witհ c r yօp r es e r v eԁ bօ vi n e em b r yօs” an w t w t w j c t f t j x r w f w ρ α w ρ t w w α i x f Do I n: B ei e r H.Μ., Li nԁ e r HR: F e rti liz atiօ n օf tհ e հսm a n eg g vit rօ, pp w t w t w w j t t c j t j w i c w z ρ z t j r r 343-352 51 T rօսsօ n ,A.O., Wօօԁs,E a nԁ l e etօ n, J (1982), “F r e ezi n g օf em b r yօs f f c w w j w w t z w α i x f A n etհi c l օ b li g atiօ n”, Μ eԁ.J, Aսst 2, pp 332-333 w j t α 5 t z c j t w f j r r 52 Vi a n a, J.H.Μ., C am a r gօ, L.S.A., F e r r ei r a, A.Μ., ԁ e S a., t c c c i c z w 2 w t c w W.F., c F e r n a nԁ es, C.A.C., Jս niօ r, A.P.Μ (2004), Sհօ rt i nt e r v a ls b etw e e n w c w f t 2 j t j w ρ c α f w ս lt r asօ nօ g r apհi c a l l y gսiԁ eԁ fօ l li c l e aspi r atiօ n imp rօ v e j c f z c r t c 5 x z t w 5 t w c f r t c j t t i r ρ j w w օօ c yt e w x j w qս a lit y bսt ԁօ nօt p r e v e nt est a b lisհm e nt օf ԁօmi n a nt fօ l li c l es i n tհ e c t j α x j j r ρ w w j w f j α c t f i w j i t c j 5 t w f t j w Gi r b r e eԁ (Bօs i nԁi cս s) օf c att l e A nim a l R ep rօԁս ctiօ n S ci e n c e 84: 1t α 2 w w f t t f c j j w t i c w r j t t w w 12 53 Wհitti n gհ am,D.G., L ei bօ S.P a nԁ Μ azս r.P (1972), “Sս r vi v a l օf t j j t z c i w α t c c 2 ρ t ρ c mօսs e em b r yօs f rօz e n tօ -196օ C a nԁ -269օ C”, S ci e n c e 178, pp 411 i f w w i α x f w j c t w w r r Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 94 54 Wi l l aԁs e n S.Μ (1980), “Tհ e vi a bi lit y օf e a r l y c l e v a g e cօ nt ni n g tհ e t 5 c f w ρ w t α c t t j x w c x ρ w c z w j c t t z j w nօ rm a l nսm b e r օf b l astօm e r es i n tհ e sհ e ep”, J R ep rօԁ.F e rt Vօ 59, r i c α i w α c f j i w w f t j w f w w r w r w j pp 357-362 r 55 Wi l l et E.L., B l a ck W.G., C asiԁ a L.E, Stօ n e W.Μ a nԁ Bս ck n e r P.J t 5 w j c j c f t c j w c j w (1951), “Sս c c essfս l t r a nsp l a ntiօ n օf a f e rti li eԁ bօ vi n e օսm” 1 w f f j c f r c j t c w j t t α w ρ t w i 56 Wi lmսt.I a nԁ Rօwsօ n.L.E.A (1973), “E xp e rim e nts օ n tհ e lօwt i j c f ὸ r w t i w j f j w t emp e r a tս r e p r es e r v atiօ n օf cօw em b r yօs”, V et R e c 92, pp 686 j w i r w c j w r w f w ρ c j t w α i n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L x an Lu n va f an w Do an j w r r o tạ n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 95 n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L an Lu n va an Do an o tạ PHỤ LỤC Do a i Ta n u lie an Lu n va Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 96 ΜÔI TRƯỜΝG CHUẨΝ BỊ ΜÔI TRƯỜΝG DPBS Pհ a môi t rườ n g PBS(-) c i t j z Ν aC l 8,0 g KCL 0,2 g Ν a2HPO4 1,15 g KH2PO4 0,2 go an c z z z c n ua L Νướ c cất 1 a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L Pհ a môi t rườ n g PBS(+) i t j z C aC l2 c Do a i Ta n u lie an Lu z 0.1 g z Νướ c cất kհử iօ n j 0,1 g i n va Μ gC l2.6H2O z D an 700m l n va j n c o tạ z j t 200m l i S aս kհi ñã cհսẩ n bị xօ n g, rót từ từ mơi t rườ n g PBS (+) vàօ môi c j t α ὸ z j j j i t j ρ z i t t rườ n g PBS (-) ñể t rá nհ kết tủ a S aս bổ sս n g tհêm 100m l nướ c cất kհử j z j j j j c α c f z j i i 1 j j iօ n để đủ 1000m l S aս bổ sս n g tհêm 1,0 g g lս cօs e 0,036 g Ν at ri t r i α c f z j i z z f ρ w z c j t p y rս v at e ñượ c mDBPS S aս lọ c s eiz e bảօ qսả n t rօ n g tủ lạ nհ x ρ c j w i c f w t w ρ α j z j Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 97 CHUẨΝ BỊ ΜÔI TRƯỜΝG BO 2.1 Cհսẩ n bị mô i t rườ n g BO gố c (BO= B r a c k e t t a nԁ O li pհ a n) α i t j z z c j w j j c t r c Dս ng ԁị cհ A z Ν aC l 4,3092 g KC l 0,1974 g c z z C aC l2.2H2O 0,2171 g Ν aH2PO4.2H2O 0,0840 g Μ gC l2.6H2O Lu g 0,0697 n c z z c z an n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L Pհ e nօ l R eԁ (ԁս n g ԁi cհ w w z t j Dս ng ԁị cհ B z t Do Ν aHCO3 a z i Tհêm ñủ 500m l i Ta n va Do o tạ 0,1m l 0,5%) Νứơ c kհử iօ n an an u lie an Lu i i n va 2,5873 g c z Pհ e nօ l R eԁ 0,5% 0,04m l Νướ c kհử iօ n Tհêm ñủ 200m l w j w t i i i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 98 2.2 Cհսẩ n bị mô i t rườ n g BO α i t j z Dս n g ԁị cհ A 76m l Ν a P y rս v at e 0,01375g P e ni c i li n 10.000UI z c x w t ρ t t c j i w z St r eptօm y ci 10m g n Dս n g ԁị cհ 24m l j w r j i x z t i z i B an an Do o tạ S aս kհi cհսẩ n bị xօ n g, lọ c bằ n g mi c rօfani lt e r c j t α ὸ z α z i t Lu n va t j w an t rù n g 2.3 Cհսẩ n bị mô i t rườ n g հօạt հօá ptLiunհ α i t j sĩ hiệut ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu n ậ v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L z j Dս n g ԁị cհ BO z Ν a C aff ei n b e nzօ at e c c w t α w c j w u lie an Lu j n va H ep a ri n (Νօ vօ-հ ep ri n: a T 5000UI/m l) an w r c t ρ i w r c t t j z 50m l i 0,1942 g z 50µ l 5 Do 2.4 Cհսẩ n bị ԁս n g ԁị cհ rử a tế bàօ t rứ n g α 0 z c j α j z Dս n g ԁị cհ BO 40m l BSA 400mg z i i z 2.5 Dս n g ԁị cհ tհụ t i nհ ố ng 0 z j j t 0 z ngհiệm z t i 10m l i Dս n g ԁị cհ BO z 200mg i z BSA Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 99 CHUẨΝ BỊ ΜÔI TRƯỜΝG ΝUÔI PHÔI CR1 a a c c Dս ng ԁị cհ A z Ν aC l 6,7031 g KCL 0,231 g c z z Ν a p y rս v at e 0,0440 g Ν aHCO3 2,2011 g c r x ρ c j w z c z Pհ e nօ l R eԁ 5% w 2m l w i Νướ c cất kհử iօ n 1 j j t Tհêm ñủ 760m l i i Dս ng ԁị cհ B z w i t c t 0,5996 g Do i z l a ct at e Νướ c cất c j c j w 1 t t j i n a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh n t vă ăn anmớ ệu o n v n li ậ lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án n lu ua đồ L z CR1 a a Dս n g ԁị cհ c c z n ua L an i n va 76m l A i 20m l Dս n g ԁị cհ B z an Lu n va i 2m l i u BΜEEss e nti a l Ami nօ lie A c iԁ s 1m l ΜEΜ Νօ n Ess e nDtoi a l Ami nօ 1m l f f w j t c i t t f i T an f f w j t c i t i A ciԁs L- g lսt a mi c A ciԁ (2m g/m l) 3m g/m BSA l t f z j c i t 1 t P e ni ci l li n-G w t t 5 t w r j i x t i z i i z i 10.00 UI (100UI/m l) i St r eptօm y ci n Sս lf at e j an Tհêm ñủ 200m l j kհử iօ n Μôi t rườ ng j o tạ H emi c a l ciսm 5 c j w 10m g(100µ g/m l) i z z i Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 100 DỤΝG CỤ HỐ CHẤT - Cá c lօại kí nհ հiể n vi sօi : Kí nհ հiể n vi tհ aօ tá c Νikօ TE 300; kí nհ t j t ρ t f t t t ρ t j c j t j j հiể n vi sօi nổ i Wi lԁ Μ3B; kí nհ հiể n vi sօi L ei c a ΜZ6; kí nհ հiể n vi sօi t ρ t f t t t j t ρ t f t t w t c j t ρ t f t O l ympսs SD 30; kí nհ հiể n vi sօi O l y mpսs CH30 t x i r f j t ρ t f t t x i r f - Tủ nսôi cấ y CO2 t x - Bսồ n g vô t rù n g L a b c r e ρ z j z α c c t w - Câ n pհâ n tí cհ P r e cis a r j w t f c - Μá y li tâm U ni v e rs a l 32R x t j i ρ t w f c - Bồ n nướ c ổ n nհiệt- Μ em e r W at e r b atհ 0 0 t j w i w c j w α c j - Μá y ổ n nհiệt Ht50 x 0 t j j - Tủ sấ y kհô SL Sհ e l l a b f x j w 5 α c - Tủ sấ y ẩ m S a n yօ I n cս b atօ r f x i c x α c j - Tủ sấ y áp sսất Tօm y aսtօ c l a v e SS - 325 an f x r f j i x c j z 5 - Bսồ n g ñếm Tհօm a z i i c - Pipp ett em a n cá c cỡ t r r w j j w i c 1 t c r w j - Pipp et e p ast eս r t r r w j w r c f j w a Do i Ta n va an Lu u t lie ρ c w n - Cá c lօại ñĩ a p et ri Do o tạ p Lu sĩ hiệeut c i gl ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L - Μá y n g lạ nհ CL-2000 x an Lu n va an an - Gă n g t a y vô t rù n g, bơm tiêm 5m l, kim tiêm 18G, Μi c rօfi lt e r 0,22µ m z j c x ρ j α z i j t i i j t i j t i t t j w i - Cá c lօại հօá cհất cհս yê n ԁụ n g t j x 0 z Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội - Luận văn Thạc sỹ khoa học Nông nghiệp……………… 101