1 Đặt vấn đề Miễn dịch học lĩnh vực ngày phát triển có nhiều ứng dụng réng r·i y, sinh häc Mét c¸c híng nghiên cứu quan trọng miễn dịch tìm hiểu yếu tố mạng lới điều hoà, kiểm soát hoạt động hệ thống Trong trình hoạt ®éng cđa hƯ thèng miƠn dÞch, cã sù tham gia nhiều chất đóng vai trò truyền đạt thông tin tế bào Các chất có tác dụng kích thích hay kìm hÃm trởng thành hoạt động chức tế bào miễn dịch Những chất đợc gọi chất kích thích miễn dịch làm tăng cờng đáp ứng miễn dịch ngợc lại có tác dụng gây suy giảm đáp ứng miễn dịch đợc gọi chất ức chế miễn dịch [3] [8] [9] Trên lâm sàng tình trạng bệnh lý liên quan đến suy giảm miễn dịch, đặc biệt suy giảm miễn dịch thứ phát phổ biến nhiễm trùng cấp, mạn tính, nhiễm độc hoá chất, sau trị liệu ung th tia xạ, AIDS Điều trị bệnh lý việc điều trị nguyên nhân cần dùng thêm biện pháp kích thích miễn dịch thích hợp Các chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc khác nhau, quan trọng phải kể đến chất kích thích miễn dịch nội sinh (đây sản phẩm chế tiết tế bào miễn dÞch) nh: interleukin (IL) 1, 2, 35, interferon (IFN) gọi chung cytokin [53] Các chất kích thÝch miƠn dÞch cã ngn gèc tõ vi khn, virus, ký sinh trïng, nÊm nh BCG, bronchovaxom, lentinan [3], [9], [29], [62], [90] C¸c chÊt kÝch thÝch miễn dịch có nguồn gốc hoá học đợc tổng hợp bán tổng hợp đà đợc sử dụng nh levamisol, imuthiol Hiệu mang lại việc sử dụng chất kích thích miễn dịch khả quan, nhiên nhiều tồn nh chi phí cho đợt điều trị cao sử dụng thuốc kích thích miễn dịch có nguồn gốc nội sinh, không phù hợp với điều kiện kinh tế phần lớn ngời bệnh Trong thuốc có nguồn gốc hoá học lại có độc tính cao, ảnh hởng xấu tới chức gan, thận Vì vậy, việc tìm kiếm đa vào sử dụng chất kích thích miễn dịch có nguồn gốc từ thực vật, đặc biệt dợc liệu có sẵn nớc vấn đề cấp thiết đợc đặt Cây nhàu (Morinda citrifolia L Rubiaceae), dợc liệu đợc nhân dân sử dụng lâu đời với mục đích nâng cao sức đề kháng thể [5], [28] Đặc biệt gần nhiều nhà khoa học giới đà nghiên cứu sâu nhàu trồng Hawaii đa nhiều kết nghiên cứu khả quan tác dụng chống ung th, chống oxyhóa kích thích miễn dịch [46], [75], [81], [97].[98], [99], [100], [101], [102], [116], [175], [218] Trong nghiên cứu trớc đà chứng minh cao nhàu có tác dụng kích thích miễn dịch thông qua tác dụng kích thích hồi phục số miễn dịch súc vật thực nghiệm bị suy giảm miễn dịch chiếu tia gamma tiêm cyclophosphamid [2] Vì vậy, tiến hành đề tài nhằm đánh giá tác dụng chống oxyhóa đánh giá sâu tác dụng kích thích miễn dịch thực nghiệm cao nhàu Việt Nam Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu chuột nhắt trắng Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá cao nhàu thỏ bị chiếu xạ mô hình gây tổn thơng gan carbon tetraclorid paracetamol chuột nhắt trắng Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 suy giảm miễn dịch lâm sàng 1.1.1 Khái niệm suy giảm miễn dịch Suy giảm miễn dịch trạng thái hoạt động hệ miễn dịch không đủ mạnh để chống lại kháng nguyên nhằm bảo vệ thể Hậu suy giảm miễn dịch dễ mắc bệnh nhiễm khuẩn, tái nhiễm nhiều lần loại tác nhân gây bệnh, mắc bệnh mạn tính Suy giảm miễn dịch đợc chia làm nhóm: bẩm sinh mắc phải Suy giảm miễn dịch bẩm sinh hậu nhiều khiếm khuyết trình phát triển bào thai Suy giảm miễn dịch bẩm sinh thờng khó điều trị, biểu lâm sàng nặng nề tỷ lệ tử vong cao [63], [64], [77] Suy giảm miễn dịch mắc phải không bắt nguồn từ khiếm khuyết di truyền mà thờng yếu tố từ môi trờng sống gây Điều trị suy giảm miễn dịch mắc phải bên cạnh việc điều trị nguyên nhân thờng dùng thêm thuốc hỗ trợ điều biến miễn dịch, c¸c chÊt chèng oxy ho¸[16], [68], [150], [170], [176], [189], [192], [203] 1.1.2 Suy giảm miễn dịch mắc phải: Đây loại bệnh lý thờng gặp nớc phát triển phát triển [92] Dựa vào nguyên nhân gây tình trạng suy giảm miễn dịch ngêi ta chia mét sè nhãm chÝnh sau: - Suy giảm miễn dịch suy dinh dỡng - Suy giảm miễn dịch nhiễm vi sinh vật: nhiễm vi khuẩn, nấm, kí sinh trùng, virus Đặc biệt suy giảm miễn dịch nhiễm HIV/AIDS - Suy giảm miễn dịch bệnh lý: bệnh mạn tính kéo dài, đặc biệt bệnh ung th - Suy giảm miễn dịch phóng xạ - Suy giảm miễn dịch thuốc hóa chất - Suy giảm miễn dịch khác nh: tuổi già, chấn thơng [173] * Suy giảm miễn dịch nhiễm HIV/AIDS Nhiễm HIV/AIDS bệnh thời kỷ toàn giới Bệnh AIDS retrovirus HIV-1 hay HIV-2 g©y HIV cã lực cao với phân tử CD4 đồng thụ thể (Co - receptor) nh CXCR4 có tế bào có thẩm quyền miễn dịch chủ yếu tế bào TCD4+ đại thực bào Thời kỳ ủ bệnh thờng triệu chứng Diễn biến lâm sàng trình nhiễm HIV phản ánh tơng tác phức tạp tác động virus chức tế bào có thẩm quyền miễn dịch đáp ứng miễn dich vật chủ Suy giảm miễn dịch mắc phải nhiễm HIV/AIDS tình trạng nhiễm khuẩn kéo dài, trờng diễn dai dẳng, diễn biến chậm nhng hậu nặng nề dẫn đến thể bị suy giảm miễn dịch đặc biệt suy giảm miễn dịch qua trung gian tế bào Virus công vào tế bào TCD4, chemokin (CCR-5, CXCR-4) tế bµo nµy cã thơ thĨ víi virus Ngêi nhiƠm HIV bị lympho TCD4 Do thiếu hụt TCD4 dẫn đến tổn thơng miễn dịch kèm theo TCD4 có vai trò to lớn đáp ứng miễn dịch dịch thể qua trung gian tế bào [8], [9], [77], [169] * Suy giảm miễn dịch ung th Ung th lµ mét bƯnh ngµy cµng phỉ biến gia tăng toàn giới Về mặt tế bào học tế bào ung th bắt nguồn từ tế bào bình thờng thể nhng nguyên nhân tế bào bị đột biến phát triển vô hạn định làm thể kiểm soát đợc Về mặt gen học, đột biến trình phân bào tợng bình thờng, chúng bị loại trừ theo chế miễn dịch Nh bị mắc ung hệ miễn dịch thể đà bị suy giảm thân bệnh ung th làm hệ miễn dịch bị suy yếu hơn, đặc biệt suy giảm miễn dịch qua trung gian tế bào tế bào lympho T đảm nhận [3], [9], [79] Điều trị miễn dịch có nhiều hớng nhng thời kỳ thử nghiệm Các kháng thể đơn dòng đặc hiệu thuộc loại khác loài nên biến chứng gây mẫn cảm dị loài nghiêm trọng tác dụng diệt tế bào ung th Nhiều trờng hợp sử dụng cytokin kết cha rõ nhng phản ứng toàn thân mạnh mẽ nhiều phải bỏ thuốc INF- đà đợc dùng popilloma, leukose, IL-2 adenocarcinoma melanoma đà tạo đợc thời kỳ thoái lui kéo dài bệnh Rosenberg lần dùng IL-2 ex-vivo nghĩa ủ tế bào lympho bệnh nhân với cytokin thể để tạo LAK, sau tiêm trả lại cho bệnh nhân ung th thu nhỏ l¹i [3], [8], [9], [73], [205] Trong u lympho mét phơng pháp điều trị có nhiều hứa hẹn tự ghép tế bào tuỷ xơng tế bào máu cuống rốn Chọn lúc bệnh thoái lui tự nhiên, lấy tuỷ xơng cất đông lạnh sâu, sau dùng tia xạ với liều gây chết tế bào (các tế bào ung th ngoại vi bị tiêu diệt hết), truyền lại lợng tế bào gốc dự trữ cho bệnh nhân Hoặc dùng tế bào máu cuống rốn truyền cho bệnh nhân Các tế bào giúp thể hồi phục hoàn toàn chúng đợc sử lý trớc để có tế bào gốc đợc truyền vào Một hớng đợc ý tác dụng vào vị trí mà trình phát triển tế bào bị phong bế nhằm phục hồi lại trình biệt hóa tế bào Đó dùng chất chống oxyhóa chỗ toàn thân, dùng thực phẩm chức nh chất chống oxyhoá [29], [61],[63],[78], [196] 1.2 Các tác nhân gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm: Các tác nhân gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm đợc chia thành nhiều nhóm khác nhau: Thuốc hóa chất, yếu tố vật lý: phóng xạ, xạ ion, gây ung th thực nghiệm, gây nhiễm vi sinh vật: vi khuẩn, nấm, virus 1.2.1.Thuốc hóa chất: Hoá chất thờng đợc sử dụng cyclophosphamid (CY), cyclosporinA, dexamethason, azathioprin Mỗi chất có hiệu lực chế gây suy giảm miễn dịch riêng * Nhóm kháng purin: Ba chÊt thêng dïng nhÊt lµ 6-mercaptopurin, azathioprin vµ thioguanin Azathioprin (Imuran) lµ dÉn xt nitro-imidazol cđa mercaptopurin lµ chÊt hay đợc sử dụng - Tác dụng chế: Tác dụng ức chế miễn dịch: nồng độ thấp 10 -2 mg/l, azathioprin ức chế sinh sản lympho T, gây độc tế bào ức chế tế bào tạo kháng thể Với nồng độ thấp 1mg/l, azathioprin ức chế phản ứng tạo hoa hồng tự nhiên chuột cống Trên ngời, với liều ức chế miễn dịch thông thờng không làm giảm bạch cầu, tác dụng xuất liều cao gây độc Azathioprin tác dụng lên miễn dịch đặc hiệu không đặc hiệu, kéo dài thời gian tồn mảnh ghép Tác dụng lên sản xuất kháng thể có đặc điểm: dùng đồng thời 48 sau dùng kháng nguyên có tác dụng, dùng trớc tác dụng Tác dụng lên sản xuất IgG IgM, tác dụng lên đáp ứng miễn dịch nguyên phát thứ phát Phối hợp azathioprin với kháng nguyên liều cao tạo tình trạng dung nạp miễn dịch đặc hiệu Trên chuột nhắt trắng dïng liỊu 20-35 mg vµ cht cèng liỊu 15-20 mg/kg thể trọng để gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm [6], [88], [205] * Nhóm mù tạc nitơ (nitrogen mustard) Hai thuốc thờng dùng cyclophosphamid (CY) clorambuci -Cơ chế tác dụng ức chế miễn dịch: Liều cao CY: 100300mg/kg thể trọng chuột cống trắng thấy giảm tế bào lympho, teo hạch lympho, teo vùng vỏ tuyến ức, teo lách Các tổn thơng phục hồi nhanh, sau ngừng thuốc vài ngày thấy tăng sinh quan lympho đáp ứng miễn dịch trở lại bình thờng sau - tuần Cyclophosphamid tác dụng mạnh lympho B lympho T Điều cã thĨ lµ thêi gian sèng cđa lympho B ngắn lympho T Trên đáp ứng miễn dịch dịch thể: cyclophosphamid tác dụng chủ yếu lên IgG tác dụng yếu với IgM, tác dụng lên phản ứng miễn dịch nguyên phát mạnh thứ phát Làm ph¶n øng mÉn c¶m chËm Cyclophosphamid thêng dïng liỊu 100 - 200 mg/kg chuột nhắt, liều 150mg/kg chuột cống để gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm [6], [20], [32] * Methotrexat: ức chế miễn dịch tế bào miễn dịch dịch thể, thông qua ức chế nhân lên giảm chức tế bào lympho B T Tuy nhiên thuốc đợc dùng trªn thùc nghiƯm [3], [6] * Cyclosporin A: Cycloporin cã cấu trúc pepid vòng đợc chiết xuất từ nấm Tolypoclodium inflatum gams Thuèc øc chÕ chän läc víi lympho T Với nồng độ điều trị, cyclosporin không gây ức chế tủy xơng Liều điều trị thuốc ức chế sản sinh ức chế giải phóng lymphokin, đặc biệt interleukin làm cho lympho T không trở thành tế bào lympho T nhận cảm đợc Liều cao, thuèc øc chÕ interleukin 2-receptor [3], [11], [73], [205] Hình 1.1: Cơ chế tác dụng suy giảm miƠn dÞch cđa cycloporin A (Tõ Integrated Pharmacology 3t, 2006, pp 273) * Corticoid: víi liỊu 2-10mg, ë cht cèng corticoid hủy tế bào lympho, đặc biệt huỷ tế bào tuyến ức Tác dụng làm giảm tế bào lympho sớm xuất hiện, đồng thời làm giảm khả tập trung tế bào lympho, tế bào đơn nhân bạch cầu đa nhân vị trí viêm Corticoid ức chế phản ứng mẫn chậm, ức chế di tản đại thực bào, làm giảm lympho độc với tế bào, kéo dài thời gian tồn mảnh ghép da Hiệp đồng với azathioprin ghép quan, làm giảm khả lu giữ kháng nguyên bề mặt đại thực bào, làm giảm tính thực bào thông qua giảm giải phóng interleukin Corticoid làm giảm sản xuất IL-2, IFN , làm tăng dị hóa IgG Liều lợng: chuột nhắt dùng liều 20-40 mg/kg thể trọng để gây suy giảm miƠn dÞch thùc nghiƯm [6], [9], [205] C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 199 Wang M.Y., Kikuzaki H., Jin Y (2000), “Novel glycosides from noni (Morinda citrifolia), J Nat Prod, 63(8), pp 1182-1183 200 Wang M.Y., Su C (2001), “Cancer preventive effect of Morinda citrifolia (Noni)”, Annals of the NewYork Academy of sciences, 952, pp 161 - 168 201 Wang M.Y., West B.J., Jensen C.J (2002), “Morinda citrifolia (Noni): a literature review and recent advances in Noni research”, Acta Pharmacol Sin, Dec, 23(12), pp.1127-1141 202 Wang MY, Peng L, Lutfiyya MN, Henley E, Weidenbacher-Hoper V, Anderson G (2009), Morinda citrifolia (noni) reduces cancer risk in current smokers by decreasing aromatic DNA adducts, Nutr Cancer, (5):634-9 203 Warner D, Sheng H, Batinić-Haberle I (2004), "Oxidants, antioxidants and the ischemic brain", J Exp Biol 207 (Pt 18): 3221-31 204 and Weber L.W., Boll M., Stampfl A (2003), Hepatotoxicity mechanism action of haloalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological model Crit Rev Toxicol 33 (2): 105-36 205 William E (1999), Fundamental immunology, 4th edition”, Lippincott - Raven Philadelphia, New York 206 William P (2003), “Grannulocyte and granulocyte macrophage colony stimulating factors”, The Lancet, (342), pp 153 - 157 207 Wilson J, Gelb A (2002), "Free radicals, antioxidants, and neurologic injury: possible relationship to cerebral protection by anesthetics", J Neurosurg Anesthesiol 14 (1): 66-79 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 208 Windle R., Wood R., Bell P (1979), “The effect of levamisol on postoperative immunosuppression”, The Lancet, 66, pp 507-509 209 Wintergerst E, Maggini S, Hornig D (2006), "Immuneenhancing role of vitamin C and zinc and effect on clinical conditions", Ann Nutr Metab 50 (2): 85-94 210 Wolf G (2005), "The discovery of the antioxidant function of vitamin E: the contribution of Henry A Mattill", J Nutr 135 (3): 363-6 211 Wong DK.(2004), Are immune responses pivotal to cancer patient's long term survival? Two clinical casestudy reports on the effects of Morinda citrifolia (Noni), Hawaii Med J, 63(6):182-4 212 Wood Z, Schrurder E, Robin Harris J, Poole L (2003), "Structure, mechanism and regulation of peroxiredoxins", Trends Biochem Sci 28 (1): 32-40 213 Wood-Kaczmar A, Gandhi "Understanding the molecular S, Wood causes of N (2006), Parkinson's disease", Trends Mol Med 12 (11): 521-8 214 Youngken H W (1957), "Study of the root of Morinda citrifolia Linne Rubiaceae", Journal of the American pharmaceutical association, 215 Younos C., Rolland A (1990), “Analgesic and behavioural effects of Morinda citrifolia”, Planta Medicin, Oct, 56(5), pp 430 - 434 216 Yuce B, Gulberg V, Diebold J, Gerbes AL.(2006), Hepatitis induced by Noni juice from Morinda citrifolia: a rare cause of hepatotoxicity or the tip of the iceberg?, Digestio,73(2-3):167-70 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 217 Zelko I, Mariani T, Folz R (2002), "Superoxide dismutase multigene family: a comparison of the CuZn-SOD (SOD1), Mn-SOD (SOD2), and EC-SOD (SOD3) gene structures, evolution, and expression", Free Radic Biol Med 33 (3): 337-49 218 Zhang X, Li J, Wong DK, Wagner TE, Wei Y.(2009), Fermented Noni Exudate-treated dendritic cells directly stimulate B lymphocyte proliferation and differentiation, Oncol Rep, 21(5):1147-52 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Mục lục Đặt vấn đề .1 Ch¬ng 1: Tỉng quan tài liệu 1.1 Suy giảm miễn dịch lâm sàng 1.1.1 Khái niệm suy giảm miễn dịch 1.1.2 Suy giảm miễn dịch mắc phải: 1.2 Các tác nhân gây suy giảm miễn dịch thùc nghiƯm: 1.2.1 Thc hc hãa chÊt: .5 1.2.2 Tác nhân phóng xạ gây suy giảm miễn dịch thực nghiệm: .11 1.2.3 Các phơng pháp khác 12 1.3 .Một số xét nghiệm thờng đợc sử dụng để đánh giá khả đáp ứng miễn dịch: 13 1.3.1 Nghiên cứu đánh giá giải phóng cytokin 13 1.3.2 Nghiên cứu chất đối kháng với yếu tố hoại tử khối u 14 1.3.3 Nghiên cứu đánh giá tăng sinh tế bào lympho với mitogen 14 1.3.4 Nghiên cứu đánh giá chuyển dạng tế bµo lympho T 15 1.3.5 Nghiên cứu khả tạo quầng dung huyết trªn in vitro .16 1.3.6 Đánh giá khả tạo hoa hồng mẫn cảmvới kháng nguyên .16 1.3.7 Phản ứng bì với kháng nguyên OA 16 1.3.8 Xác định số lợng dới nhóm lympho bào T 16 1.3.9 Định lợng cytokine: IL-2, TNF, INF .17 1.3.10 Một số phơng pháp nghiên cứu khác: .17 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 1.4 Các thuốc kích thích miễn dịch đợc sử dụng lâm sàng 17 1.4.1 Cơ chế tác dụng chất KTMD .17 1.4.2 Tế bào đích chất KTMD .18 1.4.3 Mét sè chÊt hc biƯn pháp kích thích miễn dịch sử dụng lâm sàng 20 1.5 Gèc tù vµ hƯ thèng chèng oxyhãa .29 1.5.1 Gèc tù 29 1.5.2 Nguån gèc xuÊt hiÖn gèc tù .29 1.5.3 HÖ thèng chèng oxy hãa 32 Tổng quan nhàu 40 1.6.1 Đặc điểm nhận dạng: 40 1.6.2 Tình hình nghiên cứu giới 40 1.4.3 Tình hình nghiên cứu nớc 41 Chơng 2: Đối tợng phơng pháp nghiên cứu 43 2.1 Chất liệu nghiên cứu 43 2.1.1.Thuèc nghiªn cøu 43 2.1.2 Dơng cơ, ho¸ chất nghiên cứu 44 2.2 Đối tợng nghiªn cøu 45 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 45 2.3.1 Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu tế bào lympho chuột nhắt trắng 45 2.3.2 Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá cao nhàu thỏ bị chiếu tia xạ 54 2.2.3.Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá mô hình gây tổn thơng gan CCl4 paracetamol ë chuét nh¾t tr¾ng .55 2.4 Xư lý sè liƯu 58 Chơng 3: Kết nghiên cứu 59 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Nghiên cứu tác dụng kích thích miễn dịch in vitro in vivo cao nhàu tế bào lympho chuột nhắt 59 3.1.1 Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch CY 59 3.1.2 Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch tia xạ: 64 3.1.3 M« hình suy giảm miễn dịch CY chuột nhắt đánh giá chuyển dạng lympho bào, số lợng dới nhóm lympho bào T lách máu ngoại vi: 70 3.1.4 Trên mô hình gây suy giảm miễn dịch cyclophosphamid tia gamma 73 3.2 Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá cao nhàu thỏ bị gây suy giảm miễn dịch chiếu tia xạ 78 3.2.1 Tác dụng cao nhàu lên số huyết học nồng độ glucose .78 3.2.2 Tác dụng cao nhàu lên hoạt độ enzym chống oxyhoá 83 3.2.3 Tác dụng cao nhàu lên tình trạng chống oxyhoá toàn phần 85 3.2.4 Tác dụng cao nhàu lên MDA huyết tơng 86 3.3 Nghiên cứu tác dụng chống oxyhoá mô hình gây tổn thơng gan CCl4 paracetamol chuột nhắt thực nghiệm 87 3.3.1 ¶nh hởng CQN lên mức độ peroxy hóa lipid màng tế bào gan gây CCl paracetamol 89 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.3.2 ¶nh hëng cđa cao qu¶ nhàu lên hình ảnh giải phẫu vi thể 92 Chơng 4: Bàn luận 96 4.1 Bµn luËn tác dụng miễn dịch cao nhàu 96 4.1.1 Về hai mô hình gây tổn thơng hệ miƠn dÞch 96 4.1.2 ảnh hởng cao nhàu mô hình suy giảm miễn dịch hoá chất 96 4.1.3 Trên mô hình gây tổn thơng miễn dịch tia xạ: 96 4.1.4 Bàn luận tác dụng kích thích miễn dịch thông qua chuyển dạng lympho bào, số lợng dới nhóm lympho bào T .96 4.1.5 Bµn ln vỊ số lợng TCD3 BCD19, tiết cytokin IL2, TNF hai mô hình gây suy giảm miễn dịch CY tia xạ 96 4.2 Bàn luận tác dụng chống oxyhóa thỏ bị chiếu xạ: 96 4.3 Bàn luận nghiên cứu chống oxyhóa mô hình gây tổn thơng gan 96 KÕt luËn 96 Tµi liƯu tham kh¶o Phơ lơc Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Danh mơc b¶ng B¶ng 1.1 .HƯ thèng b¶o vƯ in vivo chống lại tổn hại oxy hoá 39 B¶ng 3.1 ảnh hởng cao nhàu đến công thức bạch cÇu .61 Bảng 3.2 ảnh hởng cao nhàu đến tỷ lệ tế bào lympho lách tạo hoa hồng mẫn cảm với hồng cầu cừu 62 B¶ng 3.3 ¶nh hëng cao nhàu đến tỷ lệ tế bào lympho lách tạo quầng dung huyết .63 Bảng 3.4 ảnh hởng cao nhàu lên trọng lợng tuyến ức tơng đối 65 Bảng 3.5 ảnh hởng cao nhàu lên công thức bạch cầu máu ngoại vi thời điểm sau tổng liều xạ ngày 66 B¶ng 3.6 ảnh hởng cao nhàu lên công thức bạch cầu máu ngoại vi thời điểm sau tổng liều xạ ngày 67 B¶ng 3.7 ¶nh hëng cao nhàu lên công thức bạch cầu máu ngoại vi thời điểm sau tổng liều xạ ngày 67 Bảng 3.8 ảnh hởng cao nhàu lên tỷ lệ tế bào tạo hoa hồng mẫn cảm với hồng cầu cừu mô hình chiếu xạ 68 B¶ng 3.9 ¶nh hởng cao nhàu lên tỷ lệ tế bào tạo quầng dung huyết 69 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an B¶ng 3.10 ¶nh hởng cao nhàu lên chuyển dạng lympho bào máu ngoại vi .71 B¶ng 3.11: ảnh hởng cao nhàu lên số lợng dới nhóm lympho bào TCD4 máu ngoại vi 71 Bảng 3.12: ảnh hởng cao nhàu lên số lợng dới nhóm lympho bào TCD8 máu ngoại vi 72 Bảng 3.13: ảnh hởng cao nhàu lên số lợng dới nhóm lympho bào TCD4 lách 72 Bảng 3.14: .ảnh hởng cao nhàu lên số lợng dới nhóm lympho bào TCD8 lách 73 Bảng 3.15 .ảnh hởng cao nhàu lên số lợng tế bào lympho TCD3 lách 73 B¶ng 3.16 ¶nh hëng cđa cao nhàu lên số lợng tế bào lympho BCD19 lách .74 Bảng 3.17 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ cytokin: IL2 tế bào lympho nuôi cấy .74 Bảng 3.18 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ cytokin: TNF tế bào lympho nuôi cấy 75 Bảng 3.19 ảnh hởng cao nhàu lên số lợng tế bào lympho TCD3 lách 75 B¶ng 3.20 ¶nh hëng cao nhàu lên số lợng tế bào lympho BCD19 lách .76 Bảng 3.21 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ cytokin: IL2 tế bào lympho nuôi cấy .76 Bảng 3.22 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ cytokin: TNF tế bào lympho nu«i cÊy 77 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an B¶ng 3.23 ¶nh hởng cao nhàu lên số lợng hồng cầu thỏ bị chiếu xạ 78 Bảng 3.24 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ hemoglobin thỏ bị chiếu xạ .79 B¶ng 3.25: ¶nh hëng cđa cao qu¶ nhàu lên số lợng bạch cầu thỏ bị chiếu xạ 80 Bảng 3.26 ảnh hởng cao nhàu lên số lợng tiểu cầu thỏ bị chiếu xạ .81 Bảng 3.27 ảnh hởng cao nhàu lên nồng độ glucose huyết thỏ bị chiếu xạ 82 Bảng 3.28 ảnh hởng cao nhàu lên hoạt độ enzym SOD hồng cầu thỏ bị chiếu xạ 83 Bảng 3.29 ảnh hởng cao nhàu lên hoạt độ enzym GPx hồng cầu thỏ bị chiếu xạ 83 Bảng 3.30 ảnh hởng cao nhàu lên hoạt độ enzym GR hồng cầu thỏ bị chiếu xạ 84 Bảng 3.31 ảnh hởng cao nhàu lên TAS huyết tơng thỏ bị chiếu xạ 85 Bảng 3.32 ảnh hởng cao nhàu lên hàm lợng MDA huyết tơng thỏ bị chiếu xạ .86 Bảng 3.33 Hoạt độ AST huyết chuột nhắt bị gây ®éc b»ng CCl4 87 Bảng 3.34 Hoạt độ ALT huyết chuột nhắt bị gây độc CCl4 87 Bảng 3.35 .Hoạt độ AST huyết chuột nhắt bị gây độc paracetamol 88 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an B¶ng 3.36 Hoạt độ ALT huyết chuột nhắt bị gây ®éc b»ng paracetamol 88 Bảng 3.37 Kết xét nghiệm mô bệnh học gan môn hình gây độc gan CCl4 paracetamol 91 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Danh mơc biĨu ®å Biểu đồ 3.1 .ảnh hởng cao nhàu lên trọng lợng lách tuyến ức tơng đối 59 Biểu đồ 3.2 .ảnh hởng cao nhàu đến số lợng bạch cầu máu ngoại vi .60 Biểu đồ 3.3 ảnh hởng cao nhàu đến phản ứng bì với với kháng nguyên OA 63 Biểu đồ 3.4 ảnh hởng cao nhàu lên trọng lợng lách tơng đối 64 Biểu đồ 3.5 ảnh hởng cao nhàu lên số lợng bạch cầu 65 BiÓu đồ 3.6 ảnh hởng cao nhàu đến phản ứng bì với kháng nguyên OA mô hình chiếu tia xạ 69 Biểu đồ 3.7 Hàm lợng MDA dịch đồng thể gan chuột nhắt mô hình gây ®éc b»ng CCl4 89 BiĨu ®å 3.8 Hµm lợng MDA dịch đồng thể gan chuột nhắt mô hình gây độc paracetamol 90 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an danh mục sơ đồ Sơ đồ 1: Quy trình nghiên cứu mô hình gây suy giảm miễn dịch CY .46 Sơ đồ 2: Quy trình nghiên cứu dùng thuốc cách .47 Sơ đồ 3: Quy trình nghiên cứu dùng thuốc cách .48 Sơ đồ 4: Quy trình nghiên cứu dùng thuốc cách .49 Sơ đồ 5: Quy trình nghiên cứu tác dụng chống oxy hoá CQN thỏ bị chiếu xạ thực nghiệm 55 Sơ đồ 6: Quy trình nghiên cứu tác dụng chống oxy hoá mô hình gây tổn thơng gan CCl4 56 Sơ đồ 7: Quy trình nghiên cứu tác dụng chống oxy hoá mô hình gây tổn thơng gan paracetamol .57 Sơ đồ 8: Vị trí chế gây độc gan CCl paracetamol 96 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Danh mục hình ảnh Hình 1.1: Cơ chế tác dụng suy giảm miễn dịch cycloporin A Hình1.2 Cơ chế tác dụng suy giảm miễn dịch corticoid Hình1.3 Đáp ứng miễn dịch với sản phẩm chiết tõ KST 27 Hình: 1.4 Cơ chế tác dụng Thioredoxin .35 ảnh1.1: Cành, lá, hoa nhàu .40 ảnh 3.1 Gan - L« (chøng sinh häc) 92 ảnh 3.2 Gan - Lô (tiêm CCl4 đơn thuần) 92 ảnh 3.3 Gan - Lô (tiêm CCl4 + silymarin) 93 ảnh 3.4 Gan - Lô (tiêm CCl4 + nhàu) .93 ảnh 3.5 Gan - Lô (uống paracetamol đơn thuần) 94 ảnh 3.6 Gan - Lô (uèng paracetamol + silymarin) 94 ¶nh 3.7 Gan - Lô (uống paracetamol + nhàu) 95 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn