(Luận văn) nghiên cứu nhân giống cây hương thảo (rosmarinus officinalis l ) bằng phương pháp nuôi cấy mô

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC PHẠM THÙY DUNG lu an n va NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY HƯƠNG THẢO gh tn to (Rosmarinus officinalis L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP p ie NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z m co l gm @ an Lu n va Thái Nguyên, tháng 12 - 2016 ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC PHẠM THÙY DUNG lu an NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY HƯƠNG THẢO n va (Rosmarinus officinalis L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP p ie gh tn to NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT w oa nl Chuyên ngành: Công nghệ sinh học d Mã số: 60.42.02.01 nf va an lu z at nh oi lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC ỨNG DỤNG z Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Mậu m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, tháng 12 - 2016 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn GS.TS Chu Hoàng Mậu Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố Tác giả lu an n va p ie gh tn to Phạm Thùy Dung d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ chị Trần Thị Hồng - Kỹ thuật viên Phịng thí nghiệm Cơng nghệ tế bào thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên lu Trong thời gian thực luận văn thạc sĩ Trung tâm Thực nghiệm an n va thực hành chuyển giao khoa học công nghệ - Đại học Tân Trào, tn to nhận giúp đỡ Ban lãnh đạo Trung tâm, kỹ thuật viên phịng gh Ni cấy mơ giúp đỡ tạo điều kiện để thực thí nghiệm p ie luận văn thạc sĩ w Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Ban chủ nhiệm khoa, thầy oa nl cô giáo, cán khoa Khoa học sống - Trường Đại học Khoa học - Đại học d Thái Ngun giúp đỡ tơi q trình học tập hoàn thành khoa học nf va an lu lm ul Tác giả z at nh oi z m co l gm @ Phạm Thùy Dung an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VÀ CỤM TỪ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU lu Đặt vấn đề an n va Mục tiêu nghiên cứu tn to Nội dung nghiên cứu gh Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài p ie Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU w 1.1 Cây Hương thảo oa nl 1.1.1 Đặc điểm phân loại sinh học Hương thảo d 1.1.2 Thành phần hóa học có hoạt tính dược học Hương thảo lu an 1.1.3 Đặc điểm sinh thái, trồng trọt Hương thảo nf va 1.1.4 Tình hình sử dụng Hương thảo Việt Nam lm ul 1.2 Ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống in z at nh oi vitro 1.2.1 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.2.2 Điều kiện môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật z gm @ 1.2.3 Các công đoạn nuôi mô tế bào 10 l 1.3 Nghiên cứu nhân giống in vitro dược liệu Hương thảo 11 m co 1.3.1 Tình hình nhân giống dược liệu phương pháp nuôi cấy mô tế an Lu bào thực vật nước 12 n va ac th si iv 1.3.2 Nghiên cứu nhân giống in vitro Hương thảo phương pháp nuôi cấy mô thực vật 14 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Vật liệu, hoá chất, thiết bị, địa điểm nghiên cứu 15 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu 15 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 15 2.1.3 Điạ điể m và thời gian nghiên cứu 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 16 lu 2.2.1 Phương pháp khử trùng mẫu 16 an 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro 16 va n 2.2.3 Đưa môi trường tự nhiên 19 gh tn to 2.2.4 Điều kiện thí nghiệm 20 ie 2.2.5 Phương pháp xử lí tính tốn số liệu 21 p Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 nl w 3.1 Kết khử trùng hạt tạo mẫu 22 d oa 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng riêng rẽ chất kích thích sinh an lu trưởng đến hiệu phát sinh chồi sinh trưởng chồi Hương thảo nf va ống nghiệm 24 lm ul 3.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến phát sinh chồi z at nh oi sinh trưởng chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Hương thảo 24 3.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến phát sinh sinh trưởng chồi từ nách mầm Hương thảo 27 z 3.2.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến phát @ l gm sinh sinh trưởng chồi tái sinh từ mắt chồi bên Hương thảo 29 co 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ m chồi Hương thảo in vitro 32 an Lu n va ac th si v 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng in vitro vườn ươm 34 3.5 Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo 36 3.5.1 Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo từ đoạn thân mang mắt chồi bên 38 3.5.2 Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo từ nách mầm 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 40 Kết luận 40 lu Đề nghị 40 an TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 va n PHỤ LỤC p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vi DANH MỤC CÁC TỪ VÀ CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an BA: 6-Benzyladenine BAP: 6-Benzylaminopurine Cs: Cộng CT: Công thức DNA: Deoxyribonucleic acid ĐC: Đối chứng IAA: Indole-3-acetic acid IBA: Indole-3-butyric acid va n Kinetin: 6-furfurylaminopurine p ie gh tn to Murashige Skoog, 1962 NAA: Naphthalene acetic acid 2,4-D: 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid PLBs: Protocorm like bodies (thể tiền củ) SH: Schenk Hildebrandt, 1972 d oa nl w MS: nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Kết khử trùng hạt Hương thảo khí clo sau 20 ngày 22 Bảng 3.2 Ảnh hưởng BAP đến sinh trưởng chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Hương thảo 25 Bảng 3.3 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh sinh trưởng chồi từ nách mầm Hương thảo .28 Bảng 3.4 Ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến phát sinh sinh trưởng chồi tái sinh từ mắt chồi bên Hương thảo 30 lu an Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chồi Hương n va thảo sau tuần 32 tn to Bảng 3.6 Ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống, sinh trưởng phát triển p ie gh in vitro vườn ươm sau 60 ngày 34 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây Hương thảo tự nhiên Hình 2.1 Hạt Hương thảo (Rosmarinus officinalis L.) có nguồn gốc từ Nga 15 Hình 3.1 Kết khử trùng hạt Hương thảo khí clo 23 Hình 3.2 Ảnh hưởng thời gian khử trùng khí clo đến khả nảy mầm hạt Hương thảo 24 Hình 3.3: Ảnh hưởng BAP đến sinh trưởng chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Hương thảo sau tuần 26 lu an Hình 3.4 Ảnh hưởng BAP 1,5 mg/l đến phát sinh sinh trưởng chồi từ n va nách mầm Hương thảo 29 tn to Hình 3.5 Ảnh hưởng hàm lượng BAP kết hợp với IBA đến phát sinh sinh gh trưởng chồi tái sinh từ mắt chồi bên Hương thảo sau tuần 31 p ie Hình 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chồi w Hương thảo 33 oa nl Hình 3.7 Cây Hương thảo in vitro trồng giá thể khác sau 60 ngày36 d Hình 3.8: Sơ đồ Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo từ đoạn thân từ lu nf va an nách mầm 37 Hình 3.9 Hình ảnh quy trình nhân giống in vitro Hương Thảo 39 lm ul từ đoạn thân mang mắt chồi bên 39 z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si 38 3.5.1 Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo từ đoạn thân mang mắt chồi bên Từ kế t nghiên cứu tạo đa chồ i từ đoa ̣n thân mang mắt chồi bên Hương Thảo thu từ hạt nảy mầ m 20 ngày tuổ i, ta ̣o hoàn chỉnh và có thể đề xuấ t quy trình nhân giố ng in vitro Hương thảo từ đoa ̣n thân mang mắt chồi bên (Hình 3.9) sau: (1) Khử trùng ̣t khí clo giờ; (2) Ha ̣t nảy mầ m môi trường MS bản có bổ sung saccarose 30 g/l, agar lu 6,0 g/l sau 20 ngày tuổ i Sau 40 ngày tuổi thu đoạn thân mang mắt chồi bên an va (3) Ta ̣o đa chồ i từ đoa ̣n thân mang mắt chồi bên môi trường MS có bổ n sung saccarose 30 g/l, agar 6,0 g/l, BAP 1,5mg/l, IBA 0,7 mg/l gh tn to (4) Môi trường thích hợp cho tạo rễ chồi Hương thảo ống ie nghiệm là: MS + saccarose 30 g/l + agar 6,0 g/l + NAA 0,3 mg/l p (5) Giá thể phù hợp giai đoạn luyện Hương thảo in vitro vườn ươm nl w đất thịt trung bình + trấu hun theo tỉ lệ 2:1 d oa 3.5.2 Quy trình nhân giống in vitro Hương thảo từ nách mầm an lu (1) Khử trùng ̣t khí clo giờ; nf va (2) Ha ̣t nảy mầ m mơi trường MS bản có bổ sung saccarose 30 g/l, lm ul agar 6,0 g/l thu mầm ngày tuổ i; g/l, agar 6,0 g/l, BAP 1,5mg/l z at nh oi (3) Ta ̣o đa chồ i từ nách mầm môi trường MS có bổ sung saccarose 30 (4) Mơi trường thích hợp cho tạo rễ chồi Hương thảo ống z nghiệm là: MS + saccarose 30g/l + agar 6,0 g/l + NAA 0,3 mg/l @ m co đất thịt trung bình + trấu hun theo tỉ lệ 2:1 l gm (5) Giá thể phù hợp giai đoạn luyện Hương thảo in vitro vườn ươm an Lu n va ac th si 39 B D E C lu A an n va G p ie gh tn to Hình 3.9 Hình ảnh quy trình nhân giống in vitro Hương Thảo w từ đoạn thân mang mắt chồi bên oa nl A: Hạt Hương thảo sau khử trùng ̣t khí clo giờ; d B: Hạt hương thảo nảy mầm môi trường MS bản có bổ sung saccarose 30 lu nf va an g/l, agar 6,0 g/l sau 20 ngày tuổ i; C: Cây Hương thảo in vitro mang mắt chồi bên sau 40 ngày tuổi; lm ul D: Tái sinh đa chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên môi trường MS có bổ sung z at nh oi saccarose 30 g/l + agar 6,0 g/l +BAP 1,5 mg/l + IBA 0,7 mg/l; E: Tạo rễ chồi Hương thảo ống nghiệm là: MS + saccarose 30g/l + agar 6,0 g/l + NAA 0,3 mg/l; z G: Cây Hương thảo in vitro giá thể vườn ươm m co l gm @ an Lu n va ac th si 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Công thức khử trùng phù hợp hạt Hương thảo khử trùng khí clo cho tỉ lệ hạt nảy mầm cao đạt 66,00%, chồi mầm mập, có màu xanh bình thường 1.2 Mơi trường thích hợp cho phát sinh sinh trưởng chồi từ nách mầm Hương thảo ống nghiệm là: MS + saccarose 30 g/l lu + agar 6,0 g/l + BAP 1,5mg/l, cho hệ số nhân chồi đạt 2,68 lần, sinh trưởng an va chồi đảm bảo, chất lượng chồi tốt n Mơi trường thích hợp cho sinh trưởng chồi từ đoạn thân mang mắt gh tn to chồi bên Hương thảo ống nghiệm là: MS + saccarose 30 p ie g/l + agar 6,0 g/l + BAP 1,5 mg/l + IBA 0,7 mg/l, chiều cao chồi 2,28 cm chất lượng chồi tốt nl w 1.3 Môi trường thích hợp cho tạo rễ chồi Hương thảo ống nghiệm d oa là: MS + saccarose 30 g/l + agar 6,0 g/l + NAA 0,3 mg/l, cho tỉ lệ chồi an lu rễ đạt 82,22% số rễ trung bình đạt 2,83 rễ/chồi, chất lượng rễ tốt nf va 1.4 Giá thể phù hợp giai đoạn luyện Hương thảo in vitro vườn ươm lm ul đất thịt trung bình + trấu hun theo tỉ lệ 2:1, tỉ lệ sống đạt 81,11%, z at nh oi mập, khỏe, chiều cao đạt 8,68 cm 1.5 Đề xuất quy trình nhân giống Hương thảo in vitro từ đoạn thân mang mắt chồi bên từ nách mầm z @ Đề nghị l gm Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng số chất kích thích sinh co trưởng khác đến khả nhân nhanh chồi Hương thảo để hồn thiện m quy trình nhân giống thích hợp Hương thảo nhằm đưa vào an Lu ứng dụng thực tiễn n va ac th si 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bùi Đình Lãm, Nguyễn Thị Tình, Nguyễn Văn Duy, Nguyễn Văn Bảo, Lã Văn Hiền, Ngơ Xn Bình (2015), “Nghiên cứu khả nhân giống Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb) phương pháp in vitro”, Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông, tr 249-256 Dương Tấn Nhựt (2011), Công nghệ sinh học thực vật: Nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp lu Hoàng Thị Kim Hồng (2010), “Nghiên cứu khả tái sinh chồi cụm an chồi nuôi cấy in vitro Hà thủ ô đỏ (Polygonum multiflorum va n thunb)”, Tạp chí Khoa học, Đại học Huế, (64), tr 23-32 gh tn to Lê Trần Bình (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống p ie trồng, NXB Nông nghiệp w Mai Trường, Trần Thị Ngọc Hà, Trần Trọng Tuấn, Phan Tường Lộc, Đỗ oa nl Đăng Giáp, Bùi Đình Thạch, Nguyễn Thị Ngọc Hân, Phạm Đức Trí, Lê d Tấn Đức, Nguyễn Đức Minh Hùng, Nguyễn Văn Kết, Nguyễn Hữu Hổ lu an (2014), “Tạo nhân phôi soma sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha nf va et Grushv.) mơi trường lỏng”, Tạp chí Khoa học phát lm ul triển,12(7), tr 1085-1095 z at nh oi Ngô Xn Bình, (2010), Ni cấy mơ tế bào thực vật sở lý luận ứng dụng, NXB Khoa học kĩ thuật z Ngơ Xn Bình, Bùi Quốc Hồn, Nguyễn Thị Th Hà (2003), Giáo gm @ trình Công nghệ sinh học đại cương, NXB Nông nghiệp Hà Nội l Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lí thống kê kết nghiên an Lu nghiệp, Hà Nội m co cứu thực nghiệm nông lâm ngư nghiệp máy vi tính, NXB Nơng n va ac th si 42 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh (2005), Công nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Đại học Sư phạm 10 Nguyễn Thị Kim Thanh, Dương Huyền Trang (2008), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vơ tính Lơ hội phương pháp ni cấy in vitro”, Tạp chí khoa học phát triển, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 6(6), tr 514 521 11 Ong Xuân Phong (2016), “Nghiên cứu nhân giống Xạ đen (Celastrus hindrii Benth) kỹ thuật nuôi cấy in vitro”, Tạp chí Khoa học, Đại lu học Sư phạm Hà Nội 2, (41), tr 34-38 an 12 Trần Hoàng Quyên (2010), Nghiên cứu công nghệ sản xuất chế phẩm va n dịch chiết tía tơ giàu axit rosmarinic để ứng dụng sản xuất đồ gh tn to uống chức năng, Đề tài nghiên cứu cấp Bộ, Viện Công nghệ thực phẩm ie 13 Trần Thị Hồng Thúy, Đỗ Thị Gấm, Nguyễn Khắc Hưng, Phạm Bích p Ngọc, Chu Hồng Hà (2015), “Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan nl w Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) thông qua cảm ứng tạo d oa protocorm like bodies”, Tạp chí Sinh học, 37(1), tr 76-83 an lu 14 Trương Thị Bích Phượng, Nguyễn Thùy Dương, Nguyễn Đức Tuấn, Ngơ nf va Thị Minh Thư (2015), “Nghiên cứu nhân giống In vitro Đảng sâm z at nh oi Nội 2, (37), tr 38-51 lm ul (Codonopsis Javanica Blume)” , Tạp chí Khoa học, Đại học Sư phạm Hà 15 Trương Thị Bích Phượng, Nguyễn Thị Huệ, Nguyễn Đức Tuấn, Trần Nam Thắng (2015), “Nghiên cứu tái sinh chồi in vitro Xáo tam phân z (Paramignya Trimera)”, Tạp chí Khoa học, Đại học Sư phạm Hà Nội 2, l gm @ (36), tr 31- 40 co 16 Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư (2010), “ Nghiên cứu nhân giống in m vitro Ba kích (Morinda officinalis How), Tạp chí Khoa học cơng an Lu nghệ, Đại học Đà Nẵng, 40(5), tr 191-196 n va ac th si 43 17 Vũ Văn Vụ- Nguyễn Mộng Hùng- Lê Hồng Điệp, 2006- Công nghệ sinh học (tập 2) NXB Giáo dục Tiếng Anh 18 Christine M., John A., Herbal Medicine: Biomolecular and Clinical Aspects 2nd edition 19 Yesil-Celiktas O., Nartop P., Gurel A., Bedir E., Vardar-Sukan F (2007), Determination of phenolic content and antioxidant activity of extracts obtained from Rosmarinus officinalis' calli, pp 1536–1542 lu 20 Yin R., Li T., Tian J., Xi P., Liu RH (2016),Ursolic acid, a potential an n va anticancer compound for breast cancer therapy Yating L (2012), Callus Induction and Plant Regeneration from gh tn to 21 Yumei D., Renxiang W., Zhengnan L., Cheng Q., Baogang L., Rulan D., p ie Rosemary Leaves, pp 21-26 w Trang Web oa nl 22 http://caythuoc.vn/duoc-tinh-co-loi-cua-loai-cay-huong-thao.html d 23 http://khoe360.tienphong.vn/gia-dinh-suc-khoe/cay-huong-thao-nhieu- lu nf va an loi-ich-vang-voi-suc-khoe-776181.tpo 24 http://www.medicalnewstoday.com/releases/253299.php lm ul 25 http://nongnghiep.lamnghenong.com.vn/2013/10/cay-huong-thao- z at nh oi rosemary-cay-gia-vi-uoi.html 26 https://vi.wikipedia.org/wiki/Hương_thảo 27 http://www.sansvc.vn/tin-tuc/60/ky-thuat-trong-va-cham-soc-cay-huong- z gm @ thao-thanh-cong-.html l 28 https://www.sciencedaily.com/releases/2012/11/121127154205.htm m co 29 http://trongraulamvuon.com/cach-trong-rau/vi-thuoc-tu-cay-huong-thao/ an Lu n va ac th si 44 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thành phần mơi trường MS (Murashige Skoog,1962) Thành phần khống đa lượng Nồng độ (mg/l) lu an n va NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2.2H2O 440 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 to Nồng độ (mg/l) gh tn Thành phần khoáng vi lượng 23,3 p ie MnSO4.H2O 8,6 H3BO3 6,2 oa nl w ZnSO4.7H2O 0,83 Na2MoO4.2H2O 0,25 KI d an lu 0,025 lm ul CoCl2.6H2O Na2EDTA Vitamin 0,1 gm 0,5 0,5 co l Pyridoxine HCl Nồng độ (mg/l) @ Nicotinic Axit 27,8 z Thiamin HCl 37,3 z at nh oi FeSO47H2O 2,0 m Glyxine 0,025 nf va CuSO4.5H2O an Lu n va ac th si 45 Phụ lục Kết xử lí số liệu Nghiên cứu khử trùng hạt Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count 1/ ĐC Sum Average Variance lu an 0 CT 82 27,33333 9,3333 CT 3 96 32 CT 198 66 CT 103 34,33333 8,3333 n va tn to ANOVA gh PSS p ie Source of Variation Between Groups MS F 6621,6 1655,4 45,3333333 10 4,533333 6666,93333 14 8908,94444 17 365,16 value F crit 9E-11 3,47805 Total d oa nl w Within Groups df nf va an lu Total Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên thời gian xử lý khí lm ul Clo ảnh hưởng đến kết khử trùng hạt Hương thảo z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si 46 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến sinh trưởng chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Hương thảo 2.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT CT 3 3,77 5,93 1,25667 1,97667 0,006533 0,295633 CT 3 7,34 2,44667 0,011633 CT 8,83 2,94333 0,022633 CT 6,9 2,3 0,01 lu ANOVA an Source of Variation SS df n va 4,6859067 0,6928667 10 Total 5,3787733 14 gh tn to Between Groups Within Groups MS F P-value 1,17148 0,06929 16,90768 F crit 0,00019 3,47805 p ie Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên số chồi/mẫu khác do khác nồng độ BAP khác oa nl w 2.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Anova: Single Factor d SUMMARY Count Sum CT CT 0,91333 0,000633 3,09 1,03 0,0004 4,06 1,35333 0,057733 4,38 1,46 0,0268 ANOVA Source of Variation 3,84 df 1,28 0,0049 MS F P-value 8,635225 0,0027823 0,62496 0,15624 Within Groups 0,1809333 10 0,01809 Total 0,8058933 14 z Between Groups SS z at nh oi CT Variance 2,74 lm ul CT Average nf va an 1/ĐC lu Groups F crit 3,47805 co l gm @ m Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên chiều cao chồi khác an Lu khác nồng độ BAP khác n va ac th si 47 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến phát sinh sinh trưởng chồi từ nách mầm Hương thảo 3.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1(ĐC) 3,84 1,28 0,0252 CT 5,26 1,753333 0,027633 CT CT 3 7,03 8,03 2,343333 2,676667 0,040133 0,053433 CT 6,66 2,22 0,0039 lu an ANOVA va Source of Variation SS n Between Groups MS F P-value F crit 29,65214 1,59E-05 3,47805 tn to 3,565373 0,891343 0,3006 10 0,03006 3,865973 14 Within Groups Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên số chồi/mẫu khác p ie gh Total df w khác nồng độ BAP khác oa nl 3.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Count Sum 3,58 1,193333 0,040033 4,48 4,95 1,493333 1,65 0,002033 0,0399 6,04 2,013333 0,028433 CT ANOVA Source of 4,78 df 1,593333 0,010033 MS F P-value F crit 0,262127 0,024087 10,88265 0,001153 3,47805 z SS z at nh oi CT Variation Variance 3 lm ul CT CT Average nf va ĐC an Groups lu SUMMARY d Anova: Single Factor Total 1,289373 14 co l 10 gm 1,048507 0,240867 @ Between Groups Within Groups m Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên chiều cao chồi khác an Lu khác nồng độ BAP khác n va ac th si 48 Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến phát sinh sinh trưởng chồi từ nách mầm Hương thảo 4.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 1(ĐC) CT 3 3,84 5,26 1,28 1,753333 0,0252 0,027633 CT 3 7,03 2,343333 0,040133 CT 8,03 2,676667 0,053433 CT 6,66 2,22 0,0039 lu an ANOVA va Source of n Variation SS gh tn to Between Groups Within Groups 3,565373 0,3006 10 3,865973 14 MS F P-value 0,891343 0,03006 29,65214 1,59E-05 F crit 3,47805 Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên số chồi/mẫu khác p ie Total df nl w khác nồng độ BAP khác d oa 4.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi 3 Sum Average Variance 3,58 4,48 1,193333 1,493333 0,040033 0,002033 4,95 1,65 0,0399 lm ul ĐC CT Count nf va Groups an SUMMARY lu Anova: Single Factor CT 6,04 2,013333 0,028433 CT 4,78 1,593333 0,010033 ANOVA SS df MS 1,048507 0,262127 Within Groups 0,240867 10 0,024087 Total 1,289373 14 P-value F crit 10,88265 0,001153 3,47805 co l Between Groups F gm @ Variation z Source of z at nh oi CT m Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên chiều cao chồi khác an Lu khác nồng độ BAP khác n va ac th si 49 Nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến phát sinh sinh trưởng chồi tái sinh từ mắt chồi bên Hương thảo 5.1 Phân tích tiêu số chồi/ mẫu Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY Count Sum Average Variance lu an n va 13,58 2,716 0,02178 BAP 1,5 mg/l 14,52 2,904 0,04608 BAP 1,5 mg/l 14,65 2,93 0,011 IBA 0,0 mg/l 8,1 2,7 0,0121 IBA 0,3 mg/l 8,42 2,80666667 0,02943333 IBA 0,5 mg/l 8,78 2,92666667 0,01823333 IBA 0,7 mg/l 9,21 3,07 0,0169 IBA mg/l 8,24 2,74666667 0,01523333 MS F P-value F crit p ie gh tn to BAP 1,5 mg/l ANOVA w Source of SS df oa nl Variation Rows 0,13636 0,268 0,06818 11,4974705 0,0044381 4,45897 0,067 11,2984823 0,00225014 3,837853 0,00593 Error 0,04744 Total 0,4518 nf va an lu d Columns lm ul 14 Qua kết phân tích cho thấy: z at nh oi F rows (BAP) > F crit (BAP) nên hàm lượng BAP có ảnh hưởng tới số chồi/ mẫu z F colum (IBA) > F crit (IBA) nên hàm lượng IBA ảnh hưởng tới số chồi/mẫu m co l gm @ an Lu n va ac th si 50 5.2 Phân tích tiêu chiều cao chồi Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY Count Sum Average Variance lu an 9,61 1,922 0,04492 BAP 1,5 mg/l 10,22 2,044 0,08558 BAP 1,5 mg/l 10,2 2,04 0,02035 IBA 0,0 mg/l 5,21 1,73666667 0,025633 IBA 0,3 mg/l 5,85 1,95 0,0133 IBA 0,5 mg/l 6,23 2,07666667 0,018633 6,84 2,28 0,0277 5,9 1,96666667 0,004633 MS F P-value F crit 0,02402 1,458409 0,288387 4,45897 7,159077 0,009382 3,837853 n va BAP 1,5 mg/l gh tn to p ie IBA 0,7 mg/l d oa ANOVA nl w IBA mg/l SS df an lu Source of Variation 0,04804 nf va Rows lm ul 0,47164 0,11791 Error 0,13176 0,01647 Total 0,65144 z at nh oi Columns 14 z Qua kết phân tích cho thấy: @ co l chiều cao chồi gm F rows (BAP) < F crit (BAP) nên hàm lượng BAP không ảnh hưởng tới an Lu chồi m F colum (IBA) > F crit (IBA) nên hàm lượng IBA có ảnh hưởng tới chiều cao n va ac th si 51 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chồi Hương thảo 6.1 Phân tích tiêu tỷ lệ chồi rễ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance lu an n va 0 CT CT CT 3 170 246,67 230 56,66667 82,22333 76,66667 11,12223 25,91853 11,12223 CT ANOVA Source of variation Between Groups Within Groups 166,66 55,55333 14,82963 SS 12706,84 125,9853 MS 3176,709 12,59853 F 252,1492 Total 12832,82 tn to CT df 10 P-value 5,43E-10 F crit 3,47805 14 ie gh Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên tỷ lệ chồi rễ khác p khác nồng độ NAA khác nl w 6.2 Phân tích tiêu số rễ trung bình d SUMMARY oa Anova: Single Factor Count Sum CT 0 3,96 1,32 0,0103 CT 8,5 2,833333 0,086233 6,83 2,276667 0,030533 5,23 1,743333 0,028633 ANOVA Source of Variation SS z at nh oi CT Variance lm ul CT Average nf va an CT lu Groups df MS F P-value F crit z 3,473943 0,3114 10 0,03114 14,20717333 14 111,5589 2,98E-08 3,47805 co l Total gm Within Groups 13,89577333 @ Between Groups m Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên số rễ trung bình khác an Lu khác nồng độ NAA khác n va ac th si 52 Ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống, sinh trưởng phát triển in vitro vườn ươm 7.1 Phân tích tiêu tỷ lệ sống Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 3 Sum 190 210 243,33 Average 63,33333 70 81,11 Variance 11,12223 11,0889 3,6963 CT 220 73,33333 11,12223 MS 163,8685 9,257417 F 17,70132 ANOVA lu an SS 491,6056 74,05933 Total 565,6649 df P-value 0,000684 F crit 4,066181 n va Source of Variation Between Groups Within Groups tn to 11 gh Qua kết phân tích cho thấy F > F crit nên giá thể ảnh hưởng đến p ie tỷ lệ sống Hương thảo w 7.2 Phân tích tiêu chiều cao d SUMMARY oa nl Anova: Single Factor Count 3 Sum 21,11 24,3 Average 7,036666667 8,1 Variance 0,002233 0,0012 26,03 8,676666667 0,012933 23,85 7,95 0,0009 nf va an lu Groups CT CT CT ANOVA Source of Variation SS 11 1,384386111 0,004316667 320,7072 P-value 1,13E08 F crit 4,066181 co l 4,1876917 F gm Total MS @ 4,1531583 0,0345333 df z Between Groups Within Groups z at nh oi lm ul CT m Qua kết phân tích cho thấy F> F crit nên giá thể có ảnh hưởng an Lu đến chiều cao Hương thảo n va ac th si