(Luận văn) khảo sát hiệu quả của probiotic đến các điều kiện môi trường và sức khỏe tôm trong ao nuôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phạm Thị Huyền Diệu lu an n va CÁC ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG VÀ SỨC p ie gh tn to KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA PROBIOTIC ĐẾN d oa nl w KHỎE TÔM TRONG AO NUÔI nf va an lu lm ul z at nh oi LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z m co l gm @ an Lu Thành phố Hồ Chí Minh – 2019 n va ac th si BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Phạm Thị Huyền Diệu lu an n va KHẢO SÁT HIỆU QUẢ CỦA PROBIOTIC ĐẾN gh tn to CÁC ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG VÀ SỨC p ie KHỎE TÔM TRONG AO NUÔI w d : 8420120 nf va an lu Mã số oa nl Chuyên ngành : Sinh thái học lm ul LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC z at nh oi NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: z TS PHẠM CỬ THIỆN m co l gm @ an Lu Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công bố luận văn trung thực phần đề tài khoa học công nghệ cấp quốc gia ThS Võ Hồng Phượng làm chủ nhiệm với đề tài “Nghiên cứu tạo chế phẩm vi sinh đối kháng Vibrio spp gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tôm sú tôm thẻ chân trắng” Những số liệu luận văn phép công bố với đồng ý chủ nhiệm đề tài Những thông tin thu thập để sử dụng làm tài liệu tham khảo ghi rõ danh mục tài liệu tham khảo lu an TP Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2019 va n TÁC GIẢ LUẬN VĂN ie gh tn to p Phạm Thị Huyền Diệu d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài luận văn nỗ lực tôi, xin chân thành cảm ơn TS Phạm Cử Thiện – người giúp đỡ hướng dẫn tơi q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến ThS Võ Hồng Phượng – Phó giám đốc Trung tâm quan trắc môi trường bệnh thủy sản Nam bộ, Viện nghiên cứu nuôi trồng thủy sản II, người tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, tạo điều kiện cho lời khuyên kinh nghiệm quý báu với nhiều kiến thức thời gian vừa qua để hoàn thành đề tài luận văn lu Qua đây, xin cảm ơn anh Nguyễn Công Thành – Trung tâm tập huấn an chuyển giao công nghệ nông nghiệp vùng đồng sông Cửu Long, tỉnh Sóc va n Trăng, anh Trần Minh Thiện, chị Nguyễn Thanh Trúc – Viện nghiên cứu nuôi Tôi xin chân thành cảm ơn q thầy Trường, Phịng Sau đại học, Khoa ie gh tn to trồng thủy sản II chia sẻ kinh nghiệm, khích lệ, hướng dẫn giúp đỡ p Sinh học, môn Sinh thái học tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài luận văn w oa nl Xin cảm ơn anh Thái Thanh Trung, bạn Trần Minh Trung, bạn sinh viên d Cao Vĩnh Nguyên, Nguyễn Thị Minh Hiền, Lê Thị Thùy Trang nhiệt tình giúp đỡ lu an thời gian thực đề tài nf va Sau cùng, xin cảm ơn gia đình, người thân u tơi năm 2019 TÁC GIẢ LUẬN VĂN z at nh oi lm ul TP Hồ Chí Minh, ngày tháng Phạm Thị Huyền Diệu z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU lu Chương TỔNG QUAN an 1.1 Tổng quan tôm thẻ tôm sú va n 1.1.1 Vị trí phân loại tn to 1.1.2 Một số kỹ thuật nuôi tôm ie gh 1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Vibrio gây tôm p 1.2.1 Bệnh Vibriosis 1.2.2 Bệnh hoại tử gan tụy cấp AHPND 10 w oa nl 1.3 Một số biện pháp hạn chế dịch bệnh gan tụy cấp tôm 16 d 1.4 Chế phẩm vi sinh (probiotic) 17 lu an 1.4.1 Khái niệm probiotic 17 nf va 1.4.2 Nghiên cứu ứng dụng probiotic 19 lm ul Chương 2.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 z at nh oi 2.1 Thời gian, địa điểm, vật liệu nghiên cứu 24 2.1.1 Thời gian nghiên cứu 24 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 24 z 2.1.3 Các thiết bị, vật liệu dùng thí nghiệm 24 @ gm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 co l 2.2.1 Phương pháp xác định liều gây chết trung bình (LD50) vi khuẩn m V parahaemolyticus tôm thử nghiệm 25 an Lu 2.2.2 Phương pháp thử nghiệm sử dụng probiotic hiệu 27 2.2.3 Phương pháp phân tích số liệu 33 n va ac th si Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Hiệu ức chế AHPND tôm sú tôm thẻ chế phẩm probiotic điều kiện phịng thí nghiệm 34 3.1.1 Đánh giá khả gây độc gây bệnh hoại tử gan tụy vi khuẩn V parahaemolyticus 34 3.1.2 Đánh giá hiệu sử dụng probiotic phương pháp cho ăn xử lý nước 37 3.1.3 Tần suất sử dụng hiệu probiotic phương pháp xử lý nước 44 3.2 Bước đầu ứng dụng chế phẩm probiotic mô hình ao ni tơm sú, tơm thẻ 48 lu an 3.2.1 Diễn biến mật độ Vibrio sp tổng số nước ao nuôi thử nghiệm 48 n va 3.2.2 Diễn biến mật độ Vibrio parahaemolyticus ao nuôi thử 3.2.3 Các tiêu môi trường 56 gh tn to nghiệm 51 p ie 3.2.4 Thông tin thu hoạch ao thử nghiệm 63 w KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 oa nl DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ 66 d TÀI LIỆU THAM KHẢO 67 nf va an lu PHỤ LỤC z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC VIẾT TẮT Kí hiệu Chú giải lu an n va Acute hepatopancreatic necrosis ANOVA Analysis of Variance B1 Bacillus licheniformis BTNMT Bộ Tài nguyên Môi trường CFU Colony Forming Unit CPVS Chế phẩm vi sinh DBSCL Đồng sông Cửu Long ĐC Đối chứng EHP Enterocytozoon Hepatopenaei EMS early mortality syndrome MBV Monodon Baculovirus gh tn to AHPND Nutrient broth NCNTTS Nghiên cứu nuôi trồng Thủy sản NN & PTNT Nông nghiệp Phát triển nông thôn NB p ie Bacillus subtilis z at nh oi Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Tổng cục thủy sản Tiêu chuẩn Việt Nam z TCVN Quảng canh cải tiến lm ul TCTS Quảng canh nf va TCBS an S5 Polymerase Chain Reaction lu QCCT d QC Nuôi trồng thủy sản oa PCR nl w NTTS Thí nghiệm VP Vibrio parahaemolytics WSSV White Spot Syndrome Virus X285 Streptomyces YHD Yellow Head Virus m co l gm @ TN an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm xác định LD50 V parahaemolyticus tôm 26 Bảng 2.2 Thí nghiệm sử dụng chế phẩm probiotic phương pháp cho ăn phương pháp xử lý nước 28 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm tần suất sử dụng probiotic 29 Bảng 2.4 Bố trí thử nghiệm hiệu sử dụng probiotic mơ hình ao ni tơm thẻ thương phẩm 31 Bảng 2.5 Bố trí thử nghiệm hiệu sử dụng probiotic mơ hình ao ni tơm lu sú thương phẩm 31 an Bảng 2.6 Phương pháp phân tích mơi trường 32 va n Bảng 3.1 Kết xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus tn to tôm thẻ 34 p ie gh Bảng 3.2 Kết xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus tôm sú 35 Bảng 3.3 Kết thu hoạch tôm 63 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Tơm thẻ Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) bệnh AHPND có gan tụy nhạt, teo nhỏ, trống ruột 12 Hình 1.2 Tơm sú Penaeus monodon (Fabricius, 1798) bệnh AHPND có khối gan tụy nhạt, teo nhỏ ruột khơng có thức ăn 12 Hình 2.1 Kết đối kháng khuếch tán đĩa chủng Bacillus B1, Bacillus S5 Streptomyces X285 với VP tuyển chọn 25 Hình 3.1 Tỷ lệ chết cộng dồn tơm thẻ thí nghiệm xác định liều LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus 34 lu Hình 3.2 Tỷ lệ chết cộng dồn tơm sú thí nghiệm xác định liều an LD50 vi khuẩn V parahaemolyticus 36 va n Hình 3.3 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm thẻ phương pháp cho ăn liên tn to tục 14 ngày trước gây cảm nhiểm V parahaemolyticus 38 p ie gh Hình 3.4 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm sú cho ăn probiotic liên tục 14 ngày trước gây cảm nhiễm V parahaemolyticus 39 Hình 3.5 Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm thẻ phương pháp xử lý nước w Tỷ lệ chết cộng dồn (%) tôm sú phương pháp xử lý nước d Hình 3.6 oa nl lần/tuần trước cơng V parahaemolyticus 41 lu Tỷ lệ chết cộng dồn tôm thẻ chân trắng sau 10 ngày gây cảm nf va Hình 3.7 an 2lần/tuần trước công V parahaemolyticus 43 Tỷ lệ chết cộng dồn tôm sú sau 10 ngày gây cảm nhiễm z at nh oi Hình 3.8 lm ul nhiễm V parahaemolyticus 45 V parahaemolyticus 47 Hình 3.9 Diễn biến Vibrio tổng số nước ao nuôi thử nghiệm z tôm thẻ 49 @ gm Hình 3.10 Diễn biến Vibrio tổng số nước ao nuôi thử nghiệm co l tôm sú 50 m Hình 3.11 Diễn biến Vibrio parahaemolyticus nước ao nuôi thử an Lu nghiệm tôm thẻ 52 n va ac th si Hình 3.12 Diễn biến Vibrio parahaemolyticus nước ao nuôi thử nghiệm tôm sú 53 Hình 3.13 Diễn biến tổng đạm amon ao nuôi thử nghiệm tôm thẻ 57 Hình 3.14 Diễn biến tổng đạm amon ao ni thử nghiệm tơm sú 58 Hình 3.15 Diễn biến nitrite ao nuôi thử nghiệm tơm thẻ 59 Hình 3.16 Diễn biến nitrite ao nuôi thử nghiệm tôm sú 60 Hình 3.17 Diễn biến COD ao nuôi thử nghiệm tôm thẻ 61 Hình 3.18 Diễn biến COD ao ni thử nghiệm tôm sú 62 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL 12 lu an va n Tuần 18 Tuần 19 Tuần 20 Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio Vibrio xanh vàng xanh vàng xanh p ie gh tn to Vibrio 3900 400 vàng 1000 2400 6100 4100 3500 1200 14000 5700 5500 800 oa nl w d Mật độ Vibrio parahaemolyticus T2 120 T13 T9 T 10 T11 400 110 10 0 0 100 60 50 0 40 20 540 10 20 100 7000 78000 T14 z at nh T 12 T8 8000 oi ĐC3 T7 540 m T6 ll TN4 T5 fu T4 an TN3 T3 nv a lu T1 T15 T16 T17 70 40 600 1600 10 10 20 20 40 T19 T20 0 0 0 m o l.c gm 50 @ 30 z 300 T 18 an Lu n va ac th si PL 13 Các tiêu môi trường tôm thẻ TAN Tuần Ao T1 TN1 0.091 0.112 0.02 0.095 0.171 TN2 0.035 0.034 0.04 0.315 0.955 1.538 ĐC1 0.036 0.032 0.032 0.428 0.061 1.589 0.838 ĐC2 0.057 0.167 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 0.93 0.552 0.289 0.664 1.391 T12 0.74 0.374 1.33 0.111 0.167 0.453 0.213 0.361 0.49 1.621 0.37 0.266 0.374 T8 T10 0.27 0.838 0.464 0.828 Nitrite Tuần lu an n va Ao T1 TN1 0.005 0.006 0.004 0.004 0.005 0.006 0.009 0.007 0.272 0.447 1.007 3.344 TN2 0.003 0.003 0.005 0.003 0.006 0.138 2.053 3.664 3.381 3.374 5.133 0.022 ĐC1 0.004 0.005 0.009 0.003 0.007 0.005 0.007 0.014 0.959 7.394 9.822 9.085 to ĐC2 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T9 T11 T12 ie gh tn 0.002 0.004 0.027 0.014 0.058 0.048 p COD Tuần T2 T3 T4 nl w T1 Ao T5 T6 T7 14.7 21.4 22.7 22.1 TN2 17.4 17.6 19.2 17.4 19.1 18.2 22.7 ĐC1 21.1 20.4 21.4 T9 T10 T11 T12 21 20.8 23.4 22.1 21.8 22.6 17.6 21.4 23 19.5 18.6 18.2 17.9 d 21 21.4 20.5 23.5 23.4 22.4 22.9 16 19.8 nf va an lu ĐC2 oa TN1 T8 9.3 10.6 13.8 15.8 17.8 17.5 lm ul Các tiêu môi trường tôm sú z at nh oi z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL 14 lu an TAN Tuần TN3 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 0.104 0.051 0.133 0.161 TN4 0.225 0.228 0.222 0.448 1.085 0.464 0.228 0.258 0.966 T10 gh 0.196 0.634 0.117 p ie ĐC3 T12 T13 T14 T15 T16 T17 T18 T19 0.14 1.456 1.144 1.307 0.271 0.826 0.638 1.288 0.68 0.098 0.41 0.398 0.091 0.065 0.191 0.455 0.218 0.071 0.141 T10 T12 0.04 0.027 0.702 0.848 0.684 0.948 oa nl w Ao T1 TN3 0.003 0.005 TN4 0.002 0.004 0.011 0.009 0.003 0.058 0.008 0.009 0.164 0.459 0.008 0.323 0.577 2.078 0.503 2.252 3.026 ĐC3 0.034 0.005 0.003 0.005 0.003 0.034 0.097 0.155 0.378 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 0.21 d 0.02 0.002 0.027 0.046 0.008 0.005 T11 0.22 T13 T14 T15 T16 T17 T18 ll fu an 18.5 9.8 ĐC3 10.3 8.5 12.6 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T16 T17 16 13.8 17.9 18.9 19.8 18.6 16.5 18.1 17.3 20.5 21.4 21.8 19.5 23.6 8.6 6.1 9.9 12.5 11.8 T18 T19 T20 25 25.2 16 9.6 10.6 18.6 13.3 13.6 18.6 20.3 12.8 12.9 16.3 16.3 19.7 z TN4 T4 z at nh 23 12.5 T3 oi m T2 T20 3.1 3.313 1.497 nv TN3 T1 T19 2.34 0.721 0.437 1.051 0.223 1.015 2.716 1.659 2.049 1.299 a lu COD Tuần Ao T20 Nitrite Tuần T11 0.27 0.828 0.283 0.019 0.646 1.434 0.767 0.307 tn to n va Ao m o l.c gm @ 8.6 12.8 13.8 12.8 12.5 12.5 13.6 an Lu n va ac th si PL 15 PHỤ LỤC MỐI QUAN HỆ TƯƠNG QUAN GIỮA MẬT ĐỘ VI KHUẨN VỚI MẬT ĐỘ QUANG CFU 800,000,000 700,000,000 y = 548,814,285.71x - 5,086,666.67 R² = 0.99 600,000,000 500,000,000 400,000,000 lu an 300,000,000 va n 200,000,000 gh tn to 100,000,000 p ie 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 1.4 d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL16 PHỤ LỤC XỬ LÝ SPSS Phương pháp cho ăn tôm thẻ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL17 Phương pháp cho ăn tôm sú lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL18 Phương pháp xử lý nước tôm thẻ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL19 Phương pháp xử lý nước tôm sú lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL20 Tần suất xử lý nước tôm thẻ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL21 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL22 Tần suất xử lý nước tôm sú lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL23 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PL24 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRONG LAB VÀ WETLAB Dụng cụ, vật liệu lab lu an n va p ie gh tn to d oa nl w Trải đĩa mẫu nf va an lu Phòng môi trường z at nh oi lm ul z m co l gm @ Thí nghiệm wetlab an Lu n va ac th si PL25 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH VỀ ỨNG DỤNG Ở AO NI SĨC TRĂNG lu Ao nuôi tôm thẻ xử lý vi sinh Ao nuôi tôm sú xử lý vi sinh an n va p ie gh tn to d oa nl w lu Hệ thống ương tôm sử dụng men vi sinh nf va an Bể ủ men vi sinh z at nh oi lm ul z l gm @ Xem vó tơm m co Xem vó tơm an Lu n va ac th si PL26 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH KHÁC lu an n va Tham dự hội nghị Khoa học trẻ toàn quốc p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si