Xác định điều kiện tách chiết các hợp chất flavonoid có hoạt tính kháng oxy hóa từ quả cau (areca catechu l)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  HÀ THỊ DIỄM QUỲNH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT CÁC HỢP CHẤT FLAVONOID CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA TỪ QUẢ CAU (ARECA CATECHU L.) Hà Nội – Năm 2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: XÁC ĐỊNH ĐIỀU KIỆN TÁCH CHIẾT CÁC HỢP CHẤT FLAVONOID CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA TỪ QUẢ CAU (ARECA CATECHU L.) Người thực : HÀ THỊ DIỄM QUỲNH Mã SV : 621001 Khóa : 62 Chuyên ngành : QUẢN LÝ CHẤT LƯỢNG VÀ AN TOÀN THỰC PHẨM Giáo viên hướng dẫn: TS VŨ THỊ HUYỀN Bộ mơn Hóa học- Khoa Mơi trường ThS TRẦN THỊ HỒI Bộ mơn Hóa sinh - Cơng nghệ sinh học thực phẩm Hà Nội – Năm 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết số liệu khóa luận trung thực Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc hồn thành khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 25 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Hà Thị Diễm Quỳnh i LỜI CẢM ƠN Để khóa luận hồn thành đạt kết tốt tơi nhận giúp đỡ, hỗ trợ, hướng dẫn động viên thầy cơ, gia đình bạn bè Trước tiên, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc đến Ban giám hiệu Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, khoa Công nghệ thực phẩm tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa luận Đặc biệt tơi xin gửi lời cảm ơn tới TS Vũ Thị Huyền ThS Trần Thị Hoài, người tạo điều kiện tốt nhất, quan tâm, hướng dẫn, theo dõi giúp đỡ tận tình tơi suốt thời gian thực hồn thành khóa luận Cảm ơn thầy thuộc mơn Hóa - khoa Mơi trường, mơn Hóa sinh - cơng nghệ sinh học tồn thể thầy cô khoa Công nghệ thực phẩm – Học viện nông nghiệp Việt Nam Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành đến tất thầy cô, anh chị, bạn bè tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng 09 năm 2021 Sinh viên Hà Thị Diễm Quỳnh ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH x TÓM TẮT KHÓA LUẬN xi PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Yêu cầu PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Giới thiệu cau 2.1.1 Nguồn gốc đặc điểm hình thái cau 2.1.2 Phân bố sinh thái cau giới Việt Nam 2.1.2.1 Trên giới 2.1.2.2 Tại Việt Nam 2.1.3 Thành phần hóa học 2.1.4 Hoạt tính sinh học 2.2 Hợp chất flavonoid .8 2.2.1 Khái niệm 2.2.2 Phân loại 2.2.3 Giá trị sinh học flavonoid .10 2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết hợp chất thứ cấp từ thực vật .12 2.3.1 Ảnh hưởng loại nồng độ dung môi 12 2.3.2 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 13 2.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ 13 2.3.4 Ảnh hưởng thời gian 13 2.3.5 Ảnh hưởng số lần chiết .13 PHẦN III VẬT LIỆU - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP 14 iii 3.1 Vật liệu .14 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu .14 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị hóa chất 14 3.2 Phạm vi nghiên cứu 14 3.2.1 Phạm vi không gian 14 3.2.2 Phạm vi thời gian 14 3.3 Nội dung nghiên cứu 14 3.3.1 Thẩm định phương pháp xác định flavonoid tổng số 14 3.3.2 Xác định yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết hợp chất flavonoid từ vỏ thịt cau 15 3.3.3 Khả kháng oxy hóa dịch chiết giàu flavonoid .15 3.4 Phương pháp nghiên cứu 15 3.4.1 Thẩm định phương pháp xác định flavonoid tổng số (Total Flavonoid Content- TFC) .15 3.4.2 Xác định yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết hợp chất flavonoid từ vỏ thịt cau 18 3.4.2.1 Ảnh hưởng loại dung môi .19 3.4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ dung môi 19 3.4.2.3 Ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 20 3.4.2.4 Ảnh hưởng nhiệt độ 21 3.4.2.5 Ảnh hưởng thời gian chiết 21 3.4.2.6 Ảnh hưởng số lần chiết 22 3.4.3 Khả kháng oxy hóa dịch chiết giàu hợp chất flavonoid 23 3.4.4 Phương pháp xử lý số liệu 24 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .25 4.1 Thẩm định phương pháp xác định hàm lượng flavonoid tổng số .25 4.1.1 Xác định bước sóng đo tính thích hợp hệ thống 25 4.1.2 Đường chuẩn quercetin .26 4.1.3 Xác định hàm lượng nước có mẫu cau 27 4.1.4 Giới hạn phát giới hạn định lượng 27 4.1.5 Khảo sát độ lặp lại .28 4.1.6 Khảo sát độ 29 iv 4.2 Xác định điều kiện ảnh hưởng đến trình chiết hợp chất flavonoid từ thịt vỏ cau 30 4.2.1 Ảnh hưởng loại dung môi .30 4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ dung môi 30 4.2.3 Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu/dung môi 31 4.2.4 Ảnh hưởng nhiệt độ .32 4.2.5 Ảnh hưởng thời gian chiết .33 4.2.6 Ảnh hưởng số lần chiết 34 4.3 Khả kháng oxy hóa dịch chiết giàu hợp chất flavonoid 35 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO .38 PHỤ LỤC 43 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết đầy đủ Ký hiệu chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ tiếng Anh Abs Absorbance Khả hấp thụ quang Assosiation of Official Hiệp hội nhà hóa Analytical Chemists phân tích thức AOAC COX DPPH H1N1 tiếng Việt Cyclo-oxygenase 2,2 – Diphenyl – – picryl hydrazyl Haemagglutinin Neuraminidase Vi rút cúm H1N1 LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quatitation Giới hạn định lượng QE Quercetin Equivalents Tương đương quercetin SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn TFC Total Flavonoid Content viii Hàm lượng flavonoid tổng số DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Sản lượng cau giới số quốc gia Bảng 2: Các hợp chất hóa học phân lập từ Cau Bảng 1: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng loại dung môi .19 Bảng 2: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nồng độ dung môi 20 Bảng 3: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi 20 Bảng 4: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 21 Bảng 5: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng thời gian .22 Bảng 6: Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng số lần chiết phù hợp 22 Bảng 1: Hàm lượng quercetin mẫu đo khảo sát giá trị LOD, LOQ 28 Bảng 2: Giá trị TFC thêm chất chuẩn không thêm chất chuẩn quercetin khảo sát độ 29 Bảng 3: Kết ảnh hưởng loại dung môi đến hàm lượng TFC mẫu cau 30 Bảng 4: Kết ảnh hưởng nồng độ dung môi methanol đến hàm lượng TFC mẫu cau 31 Bảng 5: Kết ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/dung môi đến hàm lượng TFC 32 Bảng 6: Kết ảnh hưởng nhiệt độ đến hàm lượng TFC 33 Bảng 7: Kết ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng TFC .34 Bảng 8: Kết ảnh hưởng số lần chiết đến hàm lượng TFC 34 ix DANH MỤC HÌNH Hình 1: Khung sở hợp chất flavonoid .8 Hình 2: Các nhóm flavonoid, nhóm nhỏ nguồn tự nhiên Hình 1: Flavonoid tạo phức màu vàng với AlCl3 15 Hình 1: Đồ thị biểu diễn mối quan hệ độ hấp thụ quang bước sóng .26 Hình 2: Đồ thị biểu diễn độ hấp thụ quang nồng độ quercetin 27 Hình 3: Đồ thị biểu diễn độ kìm hãm nồng độ ascorbic acid .36 x TÀI LIỆU THAM KHẢO  Tài liệu tiếng Việt Cao Minh Trí Lê Thanh Phước (2011) Nghiên cứu thành phần hóa học khơng phân cực (cao PE) rễ cau Khoa học công nghệ, 01, tr.29-32 Đỗ Huy Bích (2004) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, (I), tr.350-353 Đỗ Tất Lợi (1995) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Khoa học Kỹ thuật, tr 172-174 Dương Thị Phượng Liên, Phan Thị Bích Trâm Hà Thanh Tồn (2014) Ảnh hưởng q trình trích ly đến hàm lượng polyphenol khả chống oxy hóa từ đậu nành Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ, 1, tr.8-15 Hồ Thị Huyền Trân (2018) Nghiên cứu chiết tách xác định hoạt tính sinh học flavonoid từ an xoa (Helicteres Hirsuta Lour.) Quảng Nam Luận văn Thạc sĩ Đại học Bách Khoa, Đại học Đà Nẵng Lê Thị Ánh Nguyệt (2017) Khảo sát q trình trích ly thu nhận flavonoid từ củ cải trắng Luận văn tốt nghiệp Đại học Bà Rịa Vũng Tàu 7 Lưu Hồng Sơn, Phạm Thi Vinh, Đinh Thi Kim Hoa, Phạm Thi Phương, Nguyễn Văn Duy, Trần Văn Chí Tạ Thị Lượng (2017) Tối ưu hóa q trình tách chiết flavonoid từ chè dây Cao Bằng Tạp chí Khoa học & Công nghệ, 171(11), tr.15 – 19 Nguyễn Huy Bắc (2019) Phân tích, đánh giá thành phần dinh dưỡng khả kháng oxy hóa xoay (Dialium Cochinchinensis Pierre) Luận văn tốt nghiệp Học viện Nông nghiệp Việt Nam Nguyễn Thị Diệu Ny (2012) Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học rễ cau chìm Luận văn tốt nghiệp Đại học Đà Nẵng 10 Nguyễn Thị Hằng, Nguyễn Thị Thanh Tâm, Mai Hữu Phương (2016) Khả bắt gốc tự DPPH lực khử nam sâm bò Cần Giờ, Tp Hồ Chí Minh Tạp chí Khoa học ĐHSP TPHCM, 12(90), tr.112-122 38 11 Nguyễn Thị Tuyết, Trần Thị Duyên (2019) Nghiên cứu tách chiết chất màu anthocyanin từ hoa đậu biếc (Clitoria Ternatean) Tạp chí Cơng nghiệp Nơng thôn, 36, tr.81-92 12 Phan Thị Phương Thảo, Giang Trung Khoa, Vũ Hồng Sơn (2021) Ảnh hưởng số thơng số q trình trích ly đến khả kháng oxy hóa dầu hạt chè (Camellia sinensis O Kuntze) Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Cơng nghệ Việt Nam, 63(6), tr.63-67 13 Phan Tống Sơn, Phan Minh Giang (2016) Hóa học hợp chất thiên nhiên Tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật 14 Trần Cao Sơn, Phạm Xuân Đà, Lê Thị Hồng Hảo, Nguyễn Thành Trung (2010) Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật  Tài liệu tiếng Anh 15 Amudhan M S., Begum V H and Hebbar K B (2012) A review on phytochemical and pharmacological potential of Areca Catechu L seed International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 3(11), pp.41514157 16 AOAC (2016) Appendix F: Guidelines for Standard Method Performance Requirements 17 Azahar N F., Gani S S A and Mokhtar N F M (2017) Optimization of phenolics and flavonoids extraction conditions of Curcuma Zedoaria leaves using response surface methodology Chemistry Central Journal, 11(1), pp.1-10 18 Chan S W., Lee C Y., Yap C F., Aida W M W., Ho C W (2009) Optimisation of extraction conditions for phenolic compounds from limau purut (Citrus hystrix) peels Int Food Res J., 16, pp.203-213 19 Chang C C., Yang M H., Wen H M and Chern J C (2002) Estimation of Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods Journal of Food and Drug Analysis, 10(3), pp.178-182 20 Chavan Y V and Singhal R S (2013) Separation of polyphenols and arecoline from areca nut (Areca catechu L.) by solvent extraction, its antioxydant activity, 39 and identification of polyphenols Journal of the Science of Food and Agricultuture, 93(10), pp.2580-2589 21 Chew K K., Khoo M Z., Ng S Y., Thoo Y Y., Aida W.M W and Ho C W (2011) Effect of ethanol concentration, extraction time and extraction temperature on the recovery of phenolic compounds and antioxydant capacity of Orthosiphon stamineus extracts International Food Research Journal, 18(4), pp.1427-1435 22 Figueiredo A C., Barroso J G., Pedro L G and Scheffer J J C (2008) Factors affecting secondary metabolite production in plants: volatile components and essential oils Flavour and Fragrance Journal Wiley InterScience, 23, pp.213226 23 Ganugapati J., Mukkavalli S and Sahithi A (2011) Docking studies of green tea flavonoids as insulin mimetics International Journal of Computer Applications, 30, pp.48–52 24 Ghasemzadeh A., Jaafar H Z., Karimi E and Rahmat A (2014) Optimization of ultrasound-assisted extraction of flavonoid compounds and their pharmaceutical activity from curry leaf (Murraya koenigii L.) using response surface methodology BMC Complementary and Alternative Medicine, 14(1), pp.1-10 25 Hamsar M N., Ismail S., Mordi M N., Ramanathan S., Mansor S M (2011) Antioxidant activity and the effect of different parts of areca catechu extracts on Glutathione-S-Transferase activity in vitro Free Dadicals and Antioxidants, 1(1), pp.28-33 26 Heatubun C D., Dransfield J., Flynn T., Tjitrosoedirdjo S S., Mogea, J P., and Baker, W J (2012) A monograph of the betel nut palms (Areca: Arecaceae) of East Malesia Botanical Journal of the Lin-nean Society, 168, pp.147–173 27 Kim K., Vance T M and Chun O K (2016) Greater flavonoid intake is associated with improved CVD risk factors in US adults British Journal of Nutrition, 115, pp.1481–1488 40 28 Kossah K., Nsabimana C., Zhang H., Chen W (2010) Optimization of extraction of polyphenols from Syrian sumac (Rhus coriaria L.) and Chinese sumac (Rhus typhina L.) fruits Res J Phytochem., 4(3), pp.146-153 29 Kumar S and Pandey A K (2013) Chemistry and Biological Activities of Flavonoids: An Overview The Scientific World Journal, pp.1-16 30 Lu S and Chong F (2012) Combining molecular docking and molecular dynamics to predict the binding modes of flavonoid derivatives with the neuraminidase of the 2009 H1N1 influenza A virus International Journal of Molecular Sciences, 13, pp.4496–4507 31 Panche A N., Diwan A D and Chandra S R (2016) Flavonoids: an overview Journal of Nutritional Science, 5, pp.1- 15 32 Paulpriya K., Lincy M P., Tresina P S and Mohan V R (2015) In vitro antioxidant activity, total phenolic and total flavonoid contents of aerial part extracts of daphniphyllum neilgherrense (wt.) Rosenth J Bio Innov, 4(6), pp.257-268 33 Peng W., Liu Y J., Wu N., Sun T., He X Y., Gao Y X and Wu C J (2015) Areca catechu L (Arecaceae): A review of its traditional uses, botany, phytochemistry, pharmacology and toxycology Journal of Ethnopharmacology, 164, pp.340-356 34 Rice-Evans C (2001) Flavonoid Antioxydants Current Medicinal Chemistry, 8, pp.797-807 35 Salehi B., Konovalov D A., Fru P., Kapewangolo P., Peron G., Ksenija M S., Cardoso S M., Pereira O R., Nigam M., Nicola S., Pignata G., Rapposelli S., Sestito S., Kumar N V A., Cádiz-Gurrea M L., Segura-Carretero A., Mishra A P., Sharifi-Rad M., Cho W C., Taheri Y., Setzer W N and Sharifi-Rad J (2020) Areca catechu-From farm to food and biomedical applications Phytotherapy Research, 34(9), pp.2140-2158 36 Sharan R N., Mehrotra R., Choudhury Y and Asotra K (2012) Association of betel nut with carcinogenesis: Revisit with a clinical perspective PLoS One, 7(8), pp.1-21 41 37 Shen X L., Duan L L (2009) Advances in chemical constituents and pharmacology of areca J Yichun Coll, 31, pp.95-97 38 Skibola C F and Smith M T (2000) Potential health impacts of excessive flavonoid intake Free Radical Biology & Medicine, 29(3-4), pp.375-383 39 Staples G W and Bevacqua R F (2006) Areca catechu (betel nut palm) In Species Profiles for Pacific Island Agroforestry; Elevitch, C.R., Ed.; Permanent Agriculture Resources (PAR): Holualoa, HI, USA, pp.1–17 40 Wetwitayaklung P., Phaechamud T., Limmatvapirat C and Keokitichai S (2006) The study of antioxydant capacity in various parts of Areca Catechu L Naresuan University Journal 14(1), pp.1–14 41 Xiao Y., Yang Y., Yong J and Lu C (2019) Chemical Components and Biological Activities of Areca Catechu L., Biomedical Research and Reviews, 3, pp.1-4 42 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Kết xử lý ANOVA cho thí nghiệm Khảo sát dung mơi trích ly One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus DM Source DM Error Total DF S = 13.05 Level EtOH MeOH Water N 3 SS 175027 1022 176050 MS 87514 170 F 513.60 R-Sq = 99.42% Mean 206.01 503.86 210.10 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.23% StDev 7.36 20.50 6.07 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(-*) (*-) (-*-) -+ -+ -+ -+ -200 300 400 500 Pooled StDev = 13.05 Grouping Information Using Tukey Method DM MeOH Water EtOH N 3 Mean 503.86 210.10 206.01 Grouping A B B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of DM Individual confidence level = 97.80% DM = EtOH subtracted from: DM MeOH Water Lower 265.14 -28.62 Center 297.85 4.09 Upper 330.56 36.80 + -+ -+ -+ (-*-) (*-) + -+ -+ -+ -200 200 400 DM = MeOH subtracted from: DM Water Lower -326.47 Center -293.76 Upper -261.05 + -+ -+ -+ (*-) + -+ -+ -+ -200 200 400 43 Khảo sát nồng độ dung môi One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus NĐ DM Source NĐ DM Error Total DF 10 14 SS 297481 2200 299681 S = 14.83 Level MeOH 100% MeOH 60% MeOH 70% MeOH 80% MeOH 90% MS 74370 220 F 338.01 R-Sq = 99.27% N 3 3 Mean 503.86 331.59 372.39 463.38 734.40 P 0.000 R-Sq(adj) = 98.97% StDev 20.50 2.18 9.85 9.89 21.91 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*-) (-*) (-*-) (-*) (*-) + -+ -+ -+ 360 480 600 720 Pooled StDev = 14.83 Grouping Information Using Tukey Method NĐ DM MeOH 90% MeOH 100% MeOH 80% MeOH 70% MeOH 60% N 3 3 Mean 734.40 503.86 463.38 372.39 331.59 Grouping A B C D E Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NĐ DM Individual confidence level = 99.18% NĐ DM = MeOH 100% subtracted from: NĐ DM MeOH 60% MeOH 70% MeOH 80% MeOH 90% Lower -212.09 -171.29 -80.30 190.71 Center -172.27 -131.47 -40.48 230.53 Upper -132.45 -91.65 -0.65 270.36 + -+ -+ -+(*-) (-*) (*-) (*-) + -+ -+ -+-250 250 500 NĐ DM = MeOH 60% subtracted from: NĐ DM MeOH 70% MeOH 80% MeOH 90% Lower 0.98 91.97 362.98 Center 40.80 131.79 402.80 Upper 80.62 171.62 442.63 + -+ -+ -+(-*) (*-) (*-) + -+ -+ -+-250 250 500 NĐ DM = MeOH 70% subtracted from: NĐ DM Lower Center Upper + -+ -+ -+- 44 MeOH 80% MeOH 90% 51.17 322.18 90.99 362.00 130.81 401.83 (-*) (*-) + -+ -+ -+-250 250 500 NĐ DM = MeOH 80% subtracted from: NĐ DM MeOH 90% Lower 231.19 Center 271.01 Upper 310.83 + -+ -+ -+(-*) + -+ -+ -+-250 250 500 Khảo sát tỉ lệ nguyên liệu dung môi One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus NL/DM Source NL/DM Error Total DF 11 SS 1467 5821 7289 MS 489 728 F 0.67 S = 26.98 R-Sq = 20.13% Level NL/DM NL/DM NL/DM NL/DM N 3 3 1/15 1/20 1/25 1/30 Mean 710.39 734.40 736.88 718.20 P 0.593 R-Sq(adj) = 0.00% StDev 29.23 21.91 36.60 15.38 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 675 700 725 750 Pooled StDev = 26.98 Grouping Information Using Tukey Method NL/DM NL/DM NL/DM NL/DM NL/DM 1/25 1/20 1/30 1/15 N 3 3 Mean 736.88 734.40 718.20 710.39 Grouping A A A A Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NL/DM Individual confidence level = 98.74% NL/DM = NL/DM 1/15 subtracted from: NL/DM NL/DM 1/20 NL/DM 1/25 NL/DM 1/30 Lower -46.54 -44.06 -62.74 Center 24.01 26.49 7.81 Upper 94.56 97.05 78.37 + -+ -+ -+( -* -) ( -* -) ( * -) + -+ -+ -+-50 50 100 NL/DM = NL/DM 1/20 subtracted from: 45 NL/DM NL/DM 1/25 NL/DM 1/30 Lower -68.07 -86.74 Center 2.49 -16.19 Upper 73.04 54.36 + -+ -+ -+( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+-50 50 100 NL/DM = NL/DM 1/25 subtracted from: NL/DM NL/DM 1/30 Lower -89.23 Center -18.68 Upper 51.87 + -+ -+ -+( -* -) + -+ -+ -+-50 50 100 Khảo sát nhiệt độ One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus t (0C) Source t (0C) Error Total DF 10 14 S = 29.51 Level 30 C 40 C 50 C 60 C 70 C N 3 3 SS 24910 8711 33621 MS 6228 871 F 7.15 R-Sq = 74.09% Mean 779.66 840.66 850.78 900.78 876.26 StDev 23.03 42.79 13.20 32.81 27.27 P 0.005 R-Sq(adj) = 63.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( * -) ( * -) ( * -) ( * -) + -+ -+ -+ 750 800 850 900 Pooled StDev = 29.51 Grouping Information Using Tukey Method t (0C) 60 C 70 C 50 C 40 C 30 C N 3 3 Mean 900.78 876.26 850.78 840.66 779.66 Grouping A A A B A B B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of t (0C) Individual confidence level = 99.18% t (0C) = 30 C subtracted from: t (0C) 40 C 50 C 60 C 70 C Lower -18.23 -8.11 41.88 17.37 Center 61.01 71.12 121.12 96.61 Upper 140.24 150.36 200.36 175.84 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) 46 + -+ -+ -+ -100 100 200 t (0C) = 40 C subtracted from: t (0C) 50 C 60 C 70 C Lower -69.12 -19.12 -43.64 Center 10.12 60.11 35.60 Upper 89.35 139.35 114.84 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -100 100 200 t (0C) = 50 C subtracted from: t (0C) 60 C 70 C Lower -29.24 -53.75 Center 50.00 25.48 Upper 129.23 104.72 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -100 100 200 t (0C) = 60 C subtracted from: t (0C) 70 C Lower -103.75 Center -24.51 Upper 54.72 + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -100 100 200 Khảo sát thời gian One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus t (phút) Source t (phút) Error Total DF 10 14 S = 34.02 Level 120phut 150phut 30phut 60phut 90phut SS 41163 11576 52739 MS 10291 1158 R-Sq = 78.05% N 3 3 Mean 918.22 890.46 779.66 856.33 921.80 StDev 45.46 27.47 23.03 35.37 34.42 F 8.89 P 0.002 R-Sq(adj) = 69.27% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * ) ( * -) ( * ) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+-780 840 900 960 Pooled StDev = 34.02 Grouping Information Using Tukey Method t (phút) 90phut 120phut 150phut 60phut 30phut N 3 3 Mean 921.80 918.22 890.46 856.33 779.66 Grouping A A A A B B Means that not share a letter are significantly different 47 Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of t (phút) Individual confidence level = 99.18% t (phút) = 120phut subtracted from: t (phút) 150phut 30phut 60phut 90phut Lower -119.10 -229.90 -153.23 -87.76 Center -27.76 -138.56 -61.89 3.58 Upper 63.58 -47.22 29.45 94.92 -+ -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( -* ) ( * -) -+ -+ -+ -+ -120 120 240 t (phút) = 150phut subtracted from: t (phút) 30phut 60phut 90phut Lower -202.14 -125.47 -60.00 Center -110.80 -34.13 31.34 Upper -19.46 57.21 122.68 -+ -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -120 120 240 t (phút) = 30phut subtracted from: t (phút) 60phut 90phut Lower -14.67 50.80 Center 76.67 142.14 Upper 168.01 233.48 -+ -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -120 120 240 t (phút) = 60phut subtracted from: t (phút) 90phut Lower -25.88 Center 65.47 Upper 156.81 -+ -+ -+ -+ ( * -) -+ -+ -+ -+ -120 120 240 Khảo sát số lần chiết One-way ANOVA: TFC (ug/g) versus Số lần chiết Source Số lần chiết Error Total S = 34.60 Level lần lần lần lần N 3 3 DF 11 SS 12666 9578 22245 R-Sq = 56.94% MS 4222 1197 Mean 921.8 933.8 954.3 1006.7 StDev 34.4 6.5 23.8 54.7 F 3.53 P 0.068 R-Sq(adj) = 40.79% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * -) ( * ) ( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+ -900 950 1000 1050 Pooled StDev = 34.6 48 Grouping Information Using Tukey Method Số lần chiết lần lần lần lần N 3 3 Mean 1006.71 954.28 933.82 921.80 Grouping A A A A Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of Số lần chiết Individual confidence level = 98.74% Số lần chiết = lần subtracted from: Số lần chiết lần lần lần Lower -78.48 -58.02 -5.59 Center 12.02 32.48 84.91 Upper 102.52 122.98 175.41 + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * -) + -+ -+ -+ -100 100 200 Số lần chiết = lần subtracted from: Số lần chiết lần lần Lower -70.04 -17.61 Center 20.46 72.89 Upper 110.95 163.38 + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ -100 100 200 Số lần chiết = lần subtracted from: Số lần chiết lần Lower -38.07 Center 52.43 Upper 142.93 + -+ -+ -+ ( * ) + -+ -+ -+ -100 100 200 49 PHỤ LỤC Một số hình ảnh thí nghiệm Hình 1: Mẫu cau tươi Hình 2: Đường chuẩn quercetin Hình 3: Thí nghiệm chọn loại dung mơi Hình 4: Xác định giá trị LOD, LOQ Hình 5: Thí nghiệm khảo sát độ 50 6b: Mẫu đo độ hấp thụ quang 6a: Dịch chiết Hình 6: Thí nghiệm khảo sát nồng độ dung mơi 7b: Mẫu đo độ hấp thụ quang 7a: Dịch chiết Hình 7: Thí nghiệm khảo sát tỷ lệ ngun liêu/dung mơi 8b: Mẫu đo độ hấp thụ quang 8a: Dịch chiết Hình 8: Thí nghiệm khảo sát nhiệt độ 51 9b: Mẫu đo độ hấp thụ quang 9a: Dịch chiết Hình 9: Thí nghiệm khảo sát thời gian 10b: Mẫu đo độ hấp thụ quang 10a: Dịch chiết Hình 10: Thí nghiệm khảo sát số lần chiết Hình 11: Đường chuẩn ascorbic acid Hình 12: Dịch chiết giàu flavonoid 52