Luận án Tiến sĩ Đặc điểm lâm sàng, nội soi, mô bệnh học và đột biến gen KRAS ở mức độ RNA của bệnh nhân polyp đại trực tràng kích thước trên 10 mm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y === *** === TRẦN THANH HÀ ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, NỘI SOI, MÔ BỆNH HỌC VÀ ĐỘT BIẾN GEN KRAS Ở MỨC ĐỘ RNA CỦA BỆNH NHÂN POLYP ĐẠI TRỰC TRÀNG KÍCH THƯỚC TRÊN 10 MM LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hà Nội BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y === *** === TRẦN THANH HÀ ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, NỘI SOI, MÔ BỆNH HỌC VÀ ĐỘT BIẾN GEN KRAS Ở MỨC ĐỘ RNA CỦA BỆNH NHÂN POLYP ĐẠI TRỰC TRÀNG KÍCH THƯỚC TRÊN 10 MM Chuyên ngành : Nội khoa Mã số : 9720107 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC CÁN BỘ HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN QUANG DUẬT GS.TS NGUYỄN LĨNH TOÀN Hà Nội LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Những kết số liệu luận án trung thực, xác, chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khoa học khác Nghiên cứu sinh Trần Thanh Hà LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phòng Đào tạo Sau Đại học, Phịng kế hoạch tổng hợp, Bộ mơn - Khoa Nội tiêu hóa - Bệnh viện Quân y 103 - Học viện Quân y; Đảng ủy, Ban giám đốc, Phòng kế hoạch tổng hợp, Khoa Thăm dò chức năng, Trung tâm Tiêu hóa Gan mật Bệnh viện Bạch Mai Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương; Bạn bè đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi tận tình thời gian học tập nghiên cứu Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Quang Duật GS.TS Nguyễn Lĩnh Toàn người thầy tận tình, hết lịng học trị, trực tiếp hướng dẫn, bảo, cung cấp cho kiến thức phương pháp luận quý báu suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn tập thể Trung tâm Giải phẫu bệnh - Tế bào học Bệnh viện Bạch Mai; Bộ môn - Khoa giải phẫu bệnh lý - Bệnh viện Qn y 103; Phịng Cơng nghệ Gen Di truyền tế bào - Viện nghiên cứu Y Dược học quân - Học viện Quân y tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy, Cơ Bộ mơn Nội tiêu hóa Học viện Qn y Hội đồng chấm luận án cấp đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho luận án tơi hồn thiện Tơi xin bày tỏ cảm ơn tới bệnh nhân thân yêu tin tưởng đồng ý tham gia, hỗ trợ hợp tác giúp tơi hồn thành nghiên cứu Cuối tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình – Bố Mẹ vợ tôi, người thân bạn bè, dành cho yêu thương vô bờ hỗ trợ tối suốt trình thực đề tài Tác giả Trần Thanh Hà MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm dịch tễ học, phân loại polyp dựa hình ảnh nội soi, mơ bệnh học chẩn đốn polyp đại trực tràng 1.1.1 Dịch tễ học 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Chẩn đoán 13 1.2 Gen KRAS, đột biến gen KRAS phương pháp xác định đột biến gen KRAS người .19 1.2.1 Gen KRAS 19 1.2.2 Đột biến gen KRAS chế sinh ung thư 23 1.2.3 Các phương pháp sinh học phân tử xác định đột biến gen KRAS 25 1.3 Đột biến gen KRAS bệnh nhân polyp đại trực tràng .37 1.3.1 Vai trò đột biến gen KRAS tiền trình biến đổi từ polyp sang ung thư đại trực tràng 37 1.3.2 Tình hình nghiên cứu đột biến gen KRAS bệnh nhân polyp đại trực tràng giới Việt Nam .39 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .43 2.1 Đối tượng nghiên cứu 43 2.1.1 Nhóm bệnh nhân polyp đại trực tràng 43 2.1.2 Nhóm bệnh nhân ung thư đại trực tràng .44 2.2 Phương pháp nghiên cứu .44 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .44 2.2.2 Cỡ mẫu phương pháp chọn mẫu .44 2.2.3 Địa điểm nghiên cứu 44 2.2.4 Thời gian nghiên cứu 45 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 45 2.3.1 Nhóm bệnh nhân polyp đại trực tràng kích thước > 10mm 45 2.3.2 Nhóm bệnh nhân ung thư ĐTT 48 2.3.3 Xét nghiệm mô bệnh học 48 2.3.4 Xét nghiệm đột biến gen KRAS mức độ RNA 49 2.4 Các tiêu nghiên cứu tiêu chuẩn chẩn đoán kèm 61 2.4.1 Chỉ tiêu lâm sàng 61 2.4.2 Chỉ tiêu polyp hình ảnh nội soi 62 2.4.3 Chỉ tiêu polyp mô bệnh học 63 2.4.4 Đánh giá kết xét nghiệm đột biến gen KRAS mức độ RNA 64 2.6 Đạo đức nghiên cứu 65 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .67 3.1 Đặc điểm số triệu chứng lâm sàng nhóm nghiên cứu .67 3.1.1 Đặc điểm tuổi 67 3.1.2 Đặc điểm giới 68 3.1.3 Đặc điểm tiền sử gia đình 68 3.1.4 Đặc điểm triệu chứng lâm sàng 69 3.2 Đặc điểm hình ảnh nội soi mô bệnh học polyp đại trực tràng kích thước > 10mm 70 3.2.1 Đặc điểm hình ảnh nội soi 71 3.2.2 Đặc điểm mô bệnh học 75 3.2.3 Mối liên quan mơ bệnh học với lâm sàng hình ảnh nội soi 79 3.3 Đột biến gen KRAS mức độ RNA bệnh nhân polyp đại trực tràng kích thước > 10mm 85 3.3.1 Tỷ lệ đột biến gen KRAS bệnh nhân polyp đại trực tràng 85 3.3.2 Mối liên quan đột biến gen KRAS với số hình ảnh nội soi bệnh nhân polyp đại trực tràng .88 3.3.3 Mối liên quan đột biến gen KRAS với mơ bệnh học polyp đại trực tràng kích thước > 10mm 90 3.3.4 Mối liên quan đột biến gen KRAS với nguy ung thư đại trực tràng .92 Chương BÀN LUẬN 97 4.1 Đặc điểm lâm sàng đối tượng nghiên cứu 97 4.1.1 Đặc điểm tuổi 97 4.1.2 Đặc điểm giới tính .99 4.1.3 Đặc điểm tiền sử bệnh .100 4.1.4 Triệu chứng lâm sàng 101 4.2 Đặc điểm hình ảnh nội soi, mơ bệnh học polyp đại trực tràng kích thước > 10mm 103 4.2.1 Đặc điểm hình ảnh nội soi 103 4.2.2 Đặc điểm mô bệnh học 109 4.2.3 Mối liên quan mô bệnh học với đặc điểm lâm sàng nội soi polyp đại trực tràng ≥ 10mm 114 4.3 Đột biến gen KRAS bệnh nhân polyp đại trực tràng kích thước >10mm 117 4.3.1 Tỷ lệ đột biến gen KRAS mối liên quan với tuổi giới tính .119 4.3.2 Mối liên quan đột biến gen KRAS mức độ RNA với số đặc điểm hình ảnh nội soi mô bệnh học bệnh nhân polyp đại trực tràng .124 4.3.3 Mối liên quan đột biến gen KRAS mức độ RNA với nguy ung thư đại trực tràng 129 KẾT LUẬN 132 KIẾN NGHỊ .134 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TT Phần viết tắt ARMS 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 TT 20 21 22 23 Phần viết đầy đủ Amplification Refractory Mutation System BN CEA CA19.9 CS DNA ddNTP ĐTT ExBP-RT (Hệ thống khuyếch đại đột biến) Bệnh nhân Carcinoembryonic antigen Cancer Antigen 19-9 Cộng Deoxyribonucleic acide dideoxynucleotid Đại trực tràng Extendable blocking probe in reverse transcription EGFR (Phiên mã ngược với mẫu dị khóa kéo dài) Epidermal growth factor receptor FOBT (Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì) Feacal Occult Blood Test FIT (Xét nghiệm tìm máu ẩn phân) Feacal Immunochemical Test KRAS LST (Xét nghiệm hóa miễn dịch phân) Kirsten rat sarcoma virus Laterally spreading tumor MAPK MBH OR RE RNA Phần viết tắt PCR (U lan rộng sang bên) Mitogen-activated protein kinase Mô bệnh học Ood ratio (Tỷ suất chênh) Restriction enzyme (Enzym cắt giới hạn) Ribonucleic acide Phần viết đầy đủ Polymerase Chain Reaction RFLP (Phản ứng chuỗi Polymarase) Restriction fragment length polymorphism STB WHO (Đa hình độ dài đoạn cắt giới hạn) Số tiêu World Health Organization (Tổ chức y tế giới) DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Các yếu tố nguy u tuyến, polyp cưa ung thư đại trực tràng .5 2.1 Danh mục mồi sử dụng .50 2.2 Danh mục hóa chất sử dụng 51 2.3 Danh mục máy móc thiết bị sử dụng 52 2.4 Thành phần phản ứng bước phiên mã ngược làm giàu gen đích 56 2.5 Nồng độ mồi phiên mã ngược (mồi đặc hiệu đột biến mẫu dị khóa) hỗn hợp mồi RT1 RT2 5X 57 2.6 Chu trình nhiệt phiên mã ngược làm giàu gen đích .58 2.7 Thành phần phản ứng qPCR khuếch đại cDNA KRAS tổng số 59 2.8 Thành phần phản ứng qPCR khuếch đại cDNA đột biến KRAS gen quản gia GAPDH 59 2.9 Chu trình nhiệt phản ứng qPCR phân tích đột biến 60 2.10 Giá trị cut-off quy trình phát đột biến gen KRAS mức độ RNA .61 3.1 Đặc điểm tuổi nhóm bệnh nhân nghiên cứu 67 3.2 Đặc điểm giới nhóm bệnh nhân nghiên cứu 68 3.3 Đặc điểm tiền sử gia đình nhóm nghiên cứu 68 3.4 Đặc điểm số triệu chứng lâm sàng nhóm bệnh nhân nghiên cứu 69 3.5 Thời gian xuất triệu chứng 70 3.6 Đặc điểm vị trí polyp 71 3.7 Đặc điểm hình dạng bề mặt polyp 72 Bảng Tên bảng Trang 3.8 Đặc điểm kích thước polyp .73 3.9 Đặc điểm MBH polyp .75 3.10 Đặc điểm vi thể MBH polyp .75 3.11 Tỷ lệ mức độ loạn sản polyp 76 3.12 Mối liên quan tuổi với số hình ảnh nội soi polyp 79 3.13 Mối liên quan tuổi với số đặc điểm mô bệnh học polyp 80 3.14 Mối liên quan giới với số đặc điểm nội soi polyp .81 3.15 Mối liên quan giới với số đặc điểm mô bệnh học polyp 81 3.16 Mối liên quan vị trí polyp với số đặc điểm mô bệnh học polyp 82 3.17 Mối liên quan hình dạng polyp với số đặc điểm mô bệnh học polyp 83 3.18 Mối liên quan kích thước polyp với số đặc điểm mô bệnh học polyp 84 3.19 Mối liên quan mức độ loạn sản polyp u tuyến với hình ảnh vi thể polyp 85 3.20 Tỉ lệ đột biến gen KRAS mức độ RNA bệnh nhân polyp ĐTT kích thước > 10mm 85 3.21 Tỷ lệ đột biến gen KRAS theo giới tính .87 3.22 Tỷ lệ đột biến gen KRAS theo tuổi 87 3.23 Đột biến gen KRAS theo vị trí polyp 88 3.24 Đột biến gen KRAS theo hình dạng polyp 89 3.25 Đột biến gen KRAS theo kích thước polyp .89 3.26 Đột biến gen KRAS theo phân loại mô bệnh học polyp 90