Thực nghiệm mang thuốc chống ung thư cisplatin trên hệ chất mang heparin pluronic

TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA CUỘC THI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NĂM HỌC 2017-2018 THỰC NGHIỆM MANG THUỐC CHỐNG UNG THƯ CISPLATIN TRÊN HỆ CHẤT MANG HEPARIN PLURONIC Thuộc nhóm ngành khoa học: Khoa học Tự nhiên Tháng 04/2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA CUỘC THI SINH VIÊN NGHIÊN CỨU KHOA HỌC NĂM HỌC 2017-2018 THỰC NGHIỆM MANG THUỐC CHỐNG UNG THƯ CISPLATIN TRÊN HỆ CHẤT MANG HEPARIN PLURONIC S T T Họ tên SV Giới tính Dân tộc Trần Minh Thưởng Nam Kinh Mai Hoàng Thịnh Nam Kinh Lớp, Khoa D14HHHC Khoa học Tự nhiên D14HHHC Khoa học Tự nhiên SV năm thứ/ Số năm đào tạo Ngành học Ghi 4/4 Hóa học Trưởng nhóm 4/4 Hóa học Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Bích Trâm UBND TỈNH BÌNH DƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc THƠNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN: Ảnh 4x6 Họ tên: TRẦN MINH THƯỞNG Sinh ngày: 22 tháng 01 năm 1996 Nơi sinh: Bình Dương Lớp: D14HHHC Khóa: 2014-2018 Khoa: Khoa Học Tự Nhiên Điện thoại: 0888168083 Email: tranminhthuong22011996@gmail.com II QUÁ TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích sinh viên từ năm thứ đến năm học): * Năm thứ 1: Ngành học: Hóa Học Khoa: Khoa Học Tự Nhiên Kết xếp loại học tập: TB * Năm thứ 2: Ngành học: Hóa Học Khoa: Khoa Học Tự Nhiên Kết xếp loại học tập: TB *Năm thứ 3: Ngành học: Hóa Học Khoa: Khoa Học Tự Nhiên Kết xếp loại học tập: Khá *Năm thứ 4: Ngành học: Hóa Học Khoa: Khoa Học Tự Nhiên Kết xếp loại học tập: Khá Xác nhận lãnh đạo khoa (ký, họ tên) Tháng 04 năm 2018 Sinh viên thực đề tài (ký, họ tên) UBND TỈNH BÌNH DƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC THỦ DẦU MỘT CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: THỰC NGHIỆM MANG THUỐC CHỐNG UNG THƯ CISPLATIN TRÊN HỆ CHẤT MANG HEPARIN - PLURONIC - Sinh viên/ nhóm sinh viên thực hiện: MSSV Lớp Khoa Năm thứ/ Số năm đào tạo Trần Minh Thưởng 1424401120119 D14HHHC Khoa học Tự nhiên 4/4 Mai Hoàng Thịnh 1424401120129 D14HHHC Khoa học Tự nhiên 4/4 STT Họ tên - Người hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Bích Trâm Mục tiêu đề tài: Nghiên cứu tổng hợp hệ nanogel nhạy nhiệt heparin-pluronic P123 Đánh giá chứng minh khả nang hóa thuốc cisplatin hydrate Tính sáng tạo: Nghiên cứu khả mang nhả thuốc cisplatin hệ chất mang nanogel heparin-pluronic p123 vào tế bào ung thư Sử dụng phương pháp phân tích xác định cấu trúc, hình thái kích thước hạt nanogel như: - Đánh giá cấu trúc nanogel ghép phổ 1H-NMR - Xác định loại dao động đặc trưng liên kết sản phẩm tạo thành qua phương pháp đo FT-IR - Đánh giá cấu trúc hình thái kích thước nanogel kính hiển vi truyền qua TEM Kết nghiên cứu: Các hạt nanogel Hep-P123 có dạng hình cầu với phân bố kích thước trung bình 94.4 nm theo phương pháp đo DLS Kết tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat cho thấy: kích thước hạt trung bình 85.2 nm theo DLS, hạt có dạng hình cầu phân bố kích thước nanogel 45±5nm theo TEM Hệ nanogel Hep-P123 có hiệu nang hóa lượng lớn cisplatin hydrat ( hiệu suất 30.3%) Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Kết nghiên cứu dùng để định hướng cho nghiên cứu tiếp tục như: khảo sát tốc độ giải phóng thuốc cisplatin hệ nanogel Hep-P123 in vitro môi trường pH khác (pH =7.4 pH= 5.5) Tiếp tục kiểm tra độc tính nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin dạng hydrat dịng tế bào ung thư khác Công bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài Tháng 04 năm 2018 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài: - Nghiên cứu tổng hợp hệ nanogel nhạy nhiệt heparin-pluronic P123 - Đánh giá chứng minh khả nang hóa thuốc cisplatin hydrate - Các hạt nanogel Hep-P123 có dạng hình cầu với phân bố kích thước trung bình 94.4 nm theo phương pháp đo DLS Kết tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat cho thấy: kích thước hạt trung bình 85.2 nm theo DLS, hạt có dạng hình cầu phân bố kích thước nanogel 45±5nm theo TEM dễ dàng vào tế bào ung thư Hệ nanogel Hep-P123 có hiệu nang hóa lượng lớn cisplatin hydrat ( hiệu suất 30.3%) Tháng 04 năm 2018 Xác nhận lãnh đạo khoa Người hướng dẫn (ký, họ tên) (ký, họ tên) LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu làm việc với cố gắng nỗ lực thân cộng với giúp đỡ tất người Chúng xin chân thành biết ơn sâu sắc đến: Cơ Nguyễn Thị Bích Trâm tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu hỗ trợ để giúp thời gian làm nghiên cứu Thầy PGS.TS Trần Ngọc Quyển – Phó Viện trưởng Viện Khoa Học Vật Liệu Ứng Dụng – Viện Khoa Học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ mặt để hoàn thành nghiên cứu khoa học Chị Nguyễn Ngọc Thể, Anh Nguyễn Xn Ánh ln nhiệt tình hướng dẫn, bảo tận tình chúng tơi suốt thời gian làm nghiên cứu Chúng xin gửi lời cảm ơn đến Thầy Cơ mơn hóa học khoa Khoa Học Tự Nhiên trường Đại học Thủ Dầu Một anh chị Viện Khoa Học Vật Liệu Ứng Dụng – Viện Khoa Học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ chúng tơi q trình nghiên cứu để hồn thành tốt đề tài nghiên cứu Xin chân thành cám ơn! Bình Dương, tháng năm 2018 Trần Minh Thưởng Mai Hoàng Thịnh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .i DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng, phạm vi nghiên cứu, cách tiếp cận Phương pháp nghiên cứu Phần TỔNG QUAN Tổng quan công nghệ nano 1.1 Chất mang nano 1.2 Tổng quan bệnh ung thư 1.2.1 Ung thư 1.2.2 Cơ chế sinh ung thư 1.2.2.1 Cơ chế gen 1.2.2.2 Cơ chế tế bào 1.3 Cơ sở khoa học để nghiên cứu chất mang nanogel 1.3.1 Hiệu ứng thẩm thấu 1.3.2 Hiệu ứng EPR 1.4 Các polymer sinh học thuốc chống ung thư cisplatin 10 1.4.1 Pluronic 11 1.4.2 Heparin 12 1.5 Tổng quan tình hình nghiên cứu nước nước chất mang thuốc sở nanogel 13 1.5.1 Tình hình nghiên cứu nước 13 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 14 1.6 Ứng dụng nano Y Dược 15 1.6.1 Tăng hiệu dẫn thuốc vào thể 15 1.6.2 Một số hướng nghiên cứu ứng dụng khác chất mang nano y sinh tiếp tục phát triển mạnh 15 Phần 2: THỰC NGHIỆM 16 Hóa chất, thiết bị dụng cụ 16 1.1 Hóa chất 16 1.2 Dụng cụ 16 1.3 Thiết bị 17 Tiến hành thí nghiệm 21 2.1 Tổng hợp nanogel heparin ghép pluronic P123 22 2.1.1 Tổng hợp NPC-P123-NPC 22 2.1.2 Tổng hợp NPC-P123-OH 23 2.1.3 Tổng hợp heparin gắn DAB tác chất ghép cặp EDC 24 2.1.4 Tổng hợp copolymer Hep-P123 25 2.2 Tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin 26 2.2.1 Giai đoạn 1: Chuẩn bị cisplatin hydrat AgNO3 26 2.2.2 Giai đoạn 27 Phần 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 Kết tổng hợp copolymer Hep-P123 28 1.1 Tổng hợp NPC-P123-NPC 28 1.1.1 Kết phổ 1H-NMR NPC-P123-NPC 29 1.1.2 Kết phổ FT-IR NPC-P123-NPC 30 1.2 Kết tổng hợp NPC-P123-OH 31 1.2.1 Kết phổ 1H-NMR NPC-P123-OH 32 1.2.2 Kết phổ FT-IR NPC-P123-OH 34 1.3 Kết tổng hợp Hep-DAB 35 1.3.1 1.4 Kết phổ FT-IR Hep-DAB 36 Kết tổng hợp Hep-P123 37 1.4.1 Kết phổ 1H-NMR Hep-P123 39 1.4.2 Kết phổ FT-IR heparin-P123 41 1.4.3 Kết DLS, TEM heparin-P123 43 Kết tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin 43 2.1 Kết phổ FT-IR nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat 44 2.2 Kết nang hóa cisplatin hydrat Hep-P123 theo phương pháp ICP 46 2.3 Kết DLS, TEM nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat 47 Phần 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 Kết luận 48 Kiến nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 51 1.4.1 Kết phổ 1H-NMR Hep-P123 Hình 33: Phổ 1H-NMR Hep-P123 Sản phẩm Hep-P123, phổ cộng hưởng từ hạt nhân hình 33 xuất tín hiệu đặc trưng sau: Mũi vị trí a (1.092ppm) chứng tỏ có mặt proton Ha(-CH3) dây PPO [13] Mũi vị trí b (3.316ppm) chứng tỏ có mặt proton Hb(-CH-) dây PPO [13] Mũi vị trí c (3.502ppm) chứng tỏ có mặt proton Hc(-CH2-) dây PPO [13] Mũi vị trí d (3.67ppm) chứng tỏ có mặt proton Hd(-CH2-) dây PEO [13] 39 Mũi vị trí e (1.741ppm) chứng tỏ có mặt proton He(-CH2-) dây DAB aminopropanol [38] Mũi vị trí g (3.033ppm) chứng tỏ có mặt proton Hg(-CH2-amid) vị trí đầu vị trí cuối mạch phân tử pluronic P123 [24] Mũi vị trí f (1.992ppm) proton Hf(CH3CO) gốc CH3CONH- gốc glucosamine phân tử heparin [7],[9],[35],[8] Mũi vùng k vị trí từ 3.223ppm đến 5.329ppm vùng proton H phân tử heparin [7],[9],[35],[33] Từ phổ 1H-NMR cho thấy gắn thành công NPC-P123-OH vào Hep-DAB 40 1.4.2 Kết phổ FT-IR heparin-P123 Hình 34: Phổ FT-IR Pluronic P123, NPC-P123-NPC, NPC-P123-OH Heparinpluronic P123 41 Dựa vào phổ FTIR hình 34 thấy: Bảng 5: Kết đo phổ FT-IR Pluronic P123, NPC-P123-NPC, NPC-P123-OH Heparin-pluronic P123 Vị trí mũi Bước sóng(cm-1) Kết 3456,4; 3423,5; 3451,31; 3444,43 Là dao động giãn O-H pluronic P123, NPCP123-OH heparin [33],[32] (2971,37-2874,96); (2971,82-2871,72); (2971,33-2879,71); (2971,51-2886,59) Là dao động giãn C-H nhóm -CH2-, -CH3 pluronic P123, NPC-P123-NPC, NPC-P123OH heparin-P123 [37],[4] 1769,49; 1769,18 Là dao động giãn C=O ester NPC-P123NPC NPC-P123-OH [37] không thấy rõ sản phẩm heparin-pluronic P123 1526,43; 1523,96 Là dao động nhóm nitro –NO2 NPC-P123NPC NPC-P123-OH [36] không thấy rõ sản phẩm heparin-pluronic P123 1108,41; 1109,04; 1106,96; 1107,89 Là dao động giãn đối xứng C-O-C pluronic P123, NPC-P123-NPC, NPC-P123-OH heparin-P123 [22] 1634,28 Là dao động giãn C=O amide thay gốc NPC (p-nitrophenyl chloroformate) NPCP123-OH liên kết amid với nhóm carboxylate phân tử heparin [37] A Qua phổ FT-IR chứng minh hợp chất heparin-P123 có xuất đồng thời pluronic P123 heparin, chứng tỏ tổng hợp thành công sản phẩm heparinP123 42 1.4.3 Kết DLS, TEM heparin-P123 Hình 35: TEM kích thước hạt Hep-P123 Bảng 7: Kết đường kính hạt (nm) theo phương pháp đo DLS theo TEM Nanogel DLS (nm) TEM (nm) Hep-P123 94.4 62.2 ± 19.4 Qua kết đo DLS TEM bảng hình cho thấy: Các hạt nanogel Hep-P123 có dạng hình cầu với phân bố kích thước trung bình 94.4 nm theo phương pháp đo DLS Kết tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin 43 2.1 Kết phổ FT-IR nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat Hình 36: Phổ FT-IR heparin, Hep-P123 Hep-P123-CisOH Bảng 7: Kết đo phổ FT-IR heparin, Hep-P123 Hep-P123-CisOH Vị trí mũi Bước sóng (cm-1) 3453,13; 3444,43; 3428,9; 3423,15 (2971,51-2886,59); (2971,68-2883,16); (2971,53-2875,53) 1632,05; 1634,28; 1635,1 Kết Là dao động giãn O-H sản phẩm [33],[32] Là dao động giãn C-H nhóm -CH2-, -CH3 sản phẩm [37],[4],[5] Là dao động giãn C=O nhóm carboxylate sản phẩm [33] 44 1237,75; 1239,37; 1250,22; 1253,58 1107,89; 1107,31; 1108,15 Là dao động giãn đối xứng S=O nhóm sulfate sản phẩm [4] Là dao động giãn đối xứng C-O-C sản phẩm [15,17] Là dao động nhóm sulfonate-glucosamine sản phẩm [4] 816,76; 819,47 A 3295,73 Là dao động giãn N-H phân tử cisplatin [37] 1711,79 Là dao động giãn C=O ester [37],[41] 1632,05 Là dao động giãn C=O nhóm carboxylate phân tử heparin 1297,89; 1253,58 Là dao động giãn đối xứng S=O tạo phức cisplatin hydrate với nhóm sulfate heparin B C D 846,03 Là dao động C-O-S tạo phức cisplatin hydrate với nhóm sulfonate gốc glucosamine heparin, dịch chuyển từ mũi 816,76cm-1 818,47cm-1 [4] Qua phổ FT-IR chứng minh hợp chất Hep-P123- CisOH có xuất đồng thời Hep-P123 chứng tỏ tổng hợp thành công sản phẩm Hep-P123-CisOH 45 2.2 Kết nang hóa cisplatin hydrat Hep-P123 theo phương pháp ICP Bảng 8: Kết nang hóa thuốc cisplatin hydrat Hep-P123 Cisplatin hydrat Tên mẫu Hep-P123 %Pt(3) %cisplatin[39] (w/w) (w/w) 19.70 30.3 Kết đo hàm lượng Platinum có mẫu nanogel Hep-P123 theo phương páp ICP Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm TP.Hồ Chí Minh, số Nguyễn Văn Thủ, Quận 1, TP.HCM Kết đo hàm lượng cisplatin tính theo cơng thức: Từ kết bảng cho thấy nanogel Hep-P123 nang hóa lượng lớn cisplatin hydrat Nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat sở tạo phức với nhóm sulfate cacboxylate sườn heparin, nanogel Hep-P123 có chứa khối PPO kỵ nước nên tạo tương tác kỵ nước nang hóa thêm lượng cisplatin hydrat định 46 Hình 37: Sơ đồ phản ứng tạo thành Hep-P123-CiOH 2.3 Kết DLS, TEM nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat Hình 38: TEM DLS Hep-P123-CisOH Từ hình 38, kết tổng hợp nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin hydrat cho thấy: kích thước hạt trung bình 85.2 nm theo DLS, hạt có dạng hình cầu phân bố kích thước nanogel 45±5nm theo TEM 47 Phần 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Đã tổng hợp thành công NPC-P123-NPC, NPC-P123-OH Tổng hợp Hep-P123 Hệ nanogel Hep-P123 có hiệu nang hóa lượng lớn cisplatin hydrat ( hiệu suất 30.3%) Kiến nghị Do thời gian thực đề tài có hạn nên hệ nang hóa thuốc nhiều vấn đề cần tiến hành làm thêm, nhóm nghiên cứu có kiến nghị cho nghiên cứu sau: Khảo sát tốc độ giải phóng thuốc cisplatin hệ nanogel Hep-P123 in vitro môi trường pH khác (pH =7.4 pH= 5.5) Tiếp tục kiểm tra độc tính nanogel Hep-P123 nang hóa cisplatin dạng hydrat dịng tế bào ung thư khác 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Cao Văn Dư, Nguyễn Thị Phương Phong, Nguyễn Thị Kim Phượng (2013), “Nghiên cứu tổng hợp điều chỉnh kích thước hạt nano đồng hệ glycerin/PVP”, Tạp chí Hóa học T.51 (2C), 745-749 [2] Frank,.et al (2010), Nanoparticle Technologies for center therapy, Handbook of Experimental Pharmacology 171, p 34-86 [3] Ngoc Quyen Tran and Yoon Ki Joun (2012), Heparin cọnjugated pluronic nanogels as Multi- Drug Nanocarriers for combination chemotherapy, moleculer pharmaceutics, p 685-686 [4] Alexander V.Kabanov and P Lemieux (2008), Pluronic block copolymers, Adraced Drug Delivery Reviews54, p 223-233 [5] Phan Thị Cẩm Tú (2014), Kết dính mô sở polymer/ hydrogel, Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam, tr 11-12 [6] Nguyễn Hữu Đình, Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử, NXB Giáo Dục [7] Ngoc Quyen Tran and et al (2013), Enzyme –mediated in situ preparation of biocompartible hydrogel composites from chitosan derivative and biphasic calcium phosphate nanoparticles for bone regeneration, Molecular Science and Technology, p 443-449 [8] M Greco JP and et al (2009), Combination therapy, Advanced Drug Delivery Reviews 61, p 1203-1204 [9] Nguyễn Cửu Khoa (2014), Dendrimer ứng dụng y học, Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam, tr 65-67 [10] Trần Ngọc Quyển (2013), Hệ chất mang nano dendrimer-cisplatin có hoạt tính cao tiêu diệt tế bào ung thư phổi, Tạp chí J Nanosci, Nanotech, tr.43-45 [11] H Nguyen, N.H Nguyen, N.Q Tran, and C.K Nguyen (2015), Improved method for preparing cisplatin-dendrimer nanocomplex and its behavior against NCI-H460 lung cancer cell Journal of nanoscience and nanotechnology 15(6): p 4106-4110 49 [12] N.Q Tran, C.K Nguyen, and T.P Nguyen (2013) , Dendrimer-based nanocarriers demonstrating a high efficiency for loading and releasing anticancer drugs against cancer cells in vitro and in vivo Advances in Natural Sciences: Nanoscience and Nanotechnology 4(4): p 045013 [13] N.-A.N Tong, T.P Nguyen, N Cuu Khoa, and N.Q Tran (2016) , Aquated cisplatin and heparin-pluronic nanocomplexes exhibiting sustainable release of active platinum compound and NCI-H460 lung cancer cell antiproliferation Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition 27(8): p 709-720 [14] T.T.C Nguyen, C.K Nguyen, T.H Nguyen, and N.Q Tran (2016) , Highly lipophilic pluronics-conjugated polyamidoamine dendrimer nanocarriers as potential delivery system for hydrophobic drugs Materials Science and Engineering: C [15] Zhenqing Zhang and et al (2009), Analysis of Pharmaceutical Heparins and Potential Contaminants Using 1H-NMR and PAGE, Journal of pharmaceutical sciences, 2009, p 4021-4022 [16] Lê Xuân Trường (2013), Hóa sinh lâm sàng, nhà xuất y học [17] Jong Hoon Choi and et al (2011), Self-Assembled Nanogel of PluronicConjugated Heparin as a Versatile Drug Nanocarrier, Macromolecular Research, 19[3], p.180-188 [18] Yong-Il Chung and et al (2010), The effect of surface functionalization of PLGA nanoparticles by heparin- or chitosan-conjugated Pluronic on tumor targeting, Journal of Controlled Release 143, p.374–382 [19] Jong Hoon Choi and et al (2010), Intracellular delivery and anti-cancer effect of self-assembled heparin-Pluronic nanogels with RNase A, Journal of Controlled Release 147, p.420–427 [20].Soon Hong Yuk and et al (2011), Enhancement of the Targeting Capabilities of the Paclitaxel-Loaded Pluronic Nanoparticles with a Glycol Chitosan/Heparin Composite, Molecular pharmaceutics, 9[3], p.230-236 50 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: Kết 1H-NMR NPC-P123-NPC 51 PHỤ LỤC 2: Kết 1H-NMR NPC-P123-OH PHỤ LỤC 3: Kết 1H-NMR Hep-P123 52 PHỤ LỤC 4: Kết DLS *Hep-P123 53