(Luận văn) nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm của vi khuẩn staphylococcus aureus trong thịt lợn tại một số chợ của thái nguyên và tuyên quang

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ HỒNG ANH Tên đề tài lu an NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM CỦA VI KHUẨN va STAPHYLOCOCCUS AUREUS TRONG THỊT LỢN n p ie gh tn to TẠI MỘT SỐ CHỢ CỦA THÁI NGUYÊN VÀ TUYÊN QUANG w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC va an lu nf Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Lớp Khóa học oi lm ul : Chính quy : Thú y : Chăn nuôi thú y : 42- Thú y : 2010 - 2015 z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐỖ HỒNG ANH Tên đề tài lu an NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TỶ LỆ NHIỄM CỦA VI KHUẨN va STAPHYLOCOCCUS AUREUS TRONG THỊT LỢN n p ie gh tn to TẠI MỘT SỐ CHỢ CỦA THÁI NGUYÊN VÀ TUYÊN QUANG w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC va an lu oi lm ul nf Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Thú y Khoa : Chăn nuôi thú y Lớp : 42- Thú y Khóa học : 2010 - 2015 Giảng viên hướng dẫn : ThS Đặng Thị Mai Lan z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực tập rèn luyện trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên thời gian thực tập tốt nghiệp Viện Khoa học Sự sống - Đại học Thái Nguyên Tôi nhận giúp đỡ quý báu thầy cô Ban giám hiệu Nhà trường Đại học Nông Lâm, Ban chủ nhiệm khoa Chăn nuôi thú y tồn thể thầy giáo khoa tận tình giảng lu an dạy, dìu dắt suốt thời gian thực tập rèn luyện trường va Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn quan tâm, giúp đỡ cô giáo n hướng dẫn: ThS Đặng Thị Mai Lan tận tình bảo, hướng dẫn để tơi hồn gh tn to thành khóa luận tốt nghiệp Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới cán Viện khoa ie học Sự sống - Đại học Thái Nguyên nói chung Bộ mơn Cơng nghệ Vi sinh p nói riêng tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình thực tập sở nl w Qua đây, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người thân d oa động viên, cổ vũ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu khoa học an lu Cuối xin chúc thầy giáo, cô giáo mạnh khỏe, hạnh va phúc đạt nhiều thành tích cơng tác có nhiều thành công ul nf nghiên cứu khoa học giảng dạy oi lm Tôi xin chân thành cảm ơn! z at nh Thái Nguyên, ngày tháng Sinh viên năm 2014 z l gm @ m co Đỗ Hồng Anh an Lu n va ac th si LỜI NĨI ĐẦU Thực tập tốt nghiệp chiếm vị trí quan trọng sinh viên trước trường Trong suốt trình học tập thực tập tốt nghiệp giai đoạn cuối toàn chương trình học Thực tập tốt nghiệp giúp cho sinh viên củng cố lại toàn hệ thống kiến thức, rèn luyện tay nghề, làm quen với công tác nghiên cứu khoa học để lu trường trở thành người cán kỹ thuật nắm vững chuyên môn, ứng dụng an va tiến khoa học kỹ thuật vào sản xuất, góp phần thúc đẩy phát triển n kinh tế đất nước gh tn to Đây dịp để sinh viên áp dụng kiến thức học ie sách vào thực tiễn sống sản xuất, gắn với phương châm “ p Học đôi với hành” Tạo hội cho sinh viên rèn luyện kỹ thái độ nl w nghề nghiệp d oa Xuất phát từ mục tiêu đó, phân cơng nhà trường, Ban chủ an lu nhiệm Khoa Chăn nuôi Thú y – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, va đồng ý cô giáo hướng dẫn ThS Đặng Thị Mai Lan tiếp nhận ul nf sở, Bộ môn Công nghệ Vi sinh – Viện Khoa học Sự sống thực oi lm đề tài: “Nghiên cứu xác định tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt lợn số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang” z at nh Do thời gian trình độ cịn hạn chế, bước đầu cịn bỡ ngỡ với cơng tác z nghiên cứu khoa học nên khóa luận khơng tránh khỏi thiếu sót, m co Tơi xin chân thành cảm ơn! l thiện gm @ mong góp ý Q thầy bạn để khóa luận hồn an Lu n va ac th si MỤC LỤC Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn .2 lu an Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU va n 2.1 Tình hình nhiễm thịt lợn vi khuẩn to tn 2.1.1 Thịt tươi dạng hư hỏng thịt .3 ie gh 2.1.2 Ô nhiễm thịt tươi vi khuẩn p 2.2 Ngộ độc thực phẩm nhiễm Staphylococcus aureus 10 nl w 2.2.1 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm 10 oa 2.2.2 Triệu chứng ngộ độc thực phẩm 11 d 2.2.3 Thực trạng ngộ độc thực phẩm Staphylococcus aureus nước lu va an giới 12 ul nf 2.3 Đặc điểm sinh học vi khuẩn S aureus gây ô nhiễm thịt 17 oi lm 2.3.1 Đặc điểm hình thái 17 2.3.2 Đặc tính ni cấy 18 z at nh 2.3.3 Đặc tính sinh hóa 19 z 2.3.4 Khả đề kháng 20 gm @ 2.3.5 Các yếu tố độc lực vi khuẩn Staphylococcus aureus 20 l 2.3.6 Khả kháng kháng sinh 25 m co 2.4.Các biện pháp khống chế ô nhiễm thịt ngộ độc thực phẩm vi khuẩn 27 an Lu 2.4.1 Các biện pháp phòng chống ngộ độc thực phẩm 27 2.4.2 Các biện pháp phòng chống ô nhiễm S.aureus thực phẩm 29 n va ac th si 2.5 Những nghiên cứu bệnh Staphylococcus aureus gây 31 2.5.1 Những nghiên cứu nước 31 2.5.2 Những nghiên cứu nước 33 Phần 3: NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 3.1 Đối tượng nguyên liệu phạm vi nghiên cứu 36 3.1.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 36 3.1.2 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 36 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 38 lu 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu 38 an va 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 38 n 3.3 Nội dung nghiên cứu 38 to tn 3.3.1 Xác định nguy gây nhiễm thực phẩm q trình giết mổ, vận p ie gh chuyển phân phối sản phẩm thịt lợn 38 oa nl w 3.3.2 Xác định tỷ lệ nhiễm số loại vi khuẩn thịt lợn tươi (Tổng số vi khuẩn hiếu khí, Staphylococcus aureus) bán số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang 38 3.3.3 Xác định số đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn d an lu S.aureus phân lập 38 va 3.3.4 Thử độc lực chủng vi khuẩn S aureus phân lập 38 oi lm ul nf 3.3.5 Xác định gen sản sinh độc tố đường ruột (Enterotoxin) vi khuẩn S.aureus ô nhiễm thịt lợn 38 3.3.6 Đề xuất biện pháp khống chế ngộ độc thực phẩm ô nhiễm VK 39 z at nh 3.4 Phương pháp nghiên cứu 39 3.4.1 Phương pháp lấy mẫu xét nghiệm 39 z 3.4.2 Quy trình kỹ thuật tiêu vi sinh vật có thịt lợn tươi 39 @ gm 3.4.3 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn S aureus thịt lợn tươi 40 m co l 3.4.4 Phương pháp nhuộm Gram xác định hình thái vi khuẩn 41 3.4.5 Xác định đặc tính sinh hóa chủng Staphylococcus aureus phân lập 41 3.4.6 Phương pháp xác định độc lực chủng vi khuẩn S.aureus 43 an Lu n va ac th si 3.4.7 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn S.aureus phân lập 43 3.4.8 Phương pháp xác định gen sản sinh độc tố đường ruột (Enterotoxin) vi khuẩn Staphylococcus aureus ô nhiễm thịt lợn 44 3.4.9 Phương pháp xử lý số liệu 46 Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 47 4.1 Kết điều tra hoạt động buôn, bán thịt lợn địa bàn số chợ lu Thái Nguyên Tuyên Quang 47 4.2 Phân lập, xác định tỷ lệ nhiễm số loại vi khuẩn thịt lợn tươi bán số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang 49 an n va 4.2.1 Xác định tiêu vi khuẩn nhiễm thịt lợn tươi bán số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang 49 p ie gh tn to 4.2.2 Xác định tiêu vi khuẩn S.aureus nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian 52 4.2.3 Xác định tiêu vi khuẩn S.aureus nhiễm thịt lợn tươi theo tháng54 4.2.4 Giám định đặc tính sinh vật, hoá học chủng vi khuẩn S.aureus phân lập 55 4.3 Xác định độc lực chủng S aureus phân lập 56 4.4 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hoá dược chủng vi khuẩn S aureus 57 d oa nl w va an lu oi lm ul nf 4.5 Kết xác định gen sản sinh độc tố đường ruột (Enterotoxin) vi khuẩn S.aureus ô nhiễm thịt lợn 58 z at nh 4.6 Đề xuất biện pháp nhằm khắc phục tình trạng ngộ độc thực phẩm S aureus nhiễm vào thịt 59 4.6.1 Giải pháp trước mắt 59 z 4.6.2 Giải pháp lâu dài 61 m co l gm @ Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 5.1 Kết luận 62 5.2 Đề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT an ATTP : An toàn thực phẩm BHI : Brain Heart Infusion CP : Capsular polysaccharide cs : Cộng CFU : Colony Forming Unit FAO : Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc hVISA : hetero Vancomycin Intermediate S.aureus KCN : Khu công nghiệp MR : Methyl red MRSA : Methicilline Resistance Staphylococcus aureus MSA : Manitol salt agar NĐTP : Ngộ độc thực phẩm SMX/TMP : Sulfamethoxazole/Trimethoprim SEB : Staphylococcal enterotoxin B n va : Acid Deoxyribo Nucleic w lu ADN p ie gh tn to d oa nl : Staphylococcal enterotoxin : Staphylococcus aureus va an S.aureus lu SE : Tiêu chuẩn Việt Nam THCS : Trung học sở TNHH : Trách nhiệm hữu hạn TSST : Toxic shock syndrome toxin UBND : Ủy ban nhân dân PCR : Polymerase Chain Reaction VP : Voges Prokauer VISA : Vancomycin Internediate S.aureus VRSA : Vancomycin Resistant S.aureus VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm VSV : Vi sinh vật WHO : Tổ chức Y tế giới oi lm ul nf TCVN z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Yêu cầu cảm quan thịt tươi Bảng 2.2 : Quy định đánh giá chất lượng thịt Bảng 2.3: Tiêu chuẩn vi sinh vật nước sống WHO Bảng 2.4: Sơ tình hình nhiễm độc tụ cầu vàng tồn quốc từ 2007 – 2012 13 Bảng 2.5: Tình hình ngộ độc thực phẩm Việt Nam từ năm 2008 đến lu an ngày 30 tháng năm 2013 14 n va Bảng 2.6: Những đặc tính S aureus, S epidermidis Micrococci Bảng 3.1: Tiêu chuẩn vi sinh vật thịt lợn tươi (TCVN 7046:2002) 39 gh tn to (Reginald W B cs, 2001) 19 p ie Bảng 4.1 Kết điều tra hoạt động giết mổ tiêu thụ thịt lợn số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang 47 nl w Bảng 4.2: Kết xác định tiêu tổng số VKHK nhiễm thịt tươi 49 d oa Bảng 4.3: Kết xác định vi khuẩn S.aureus nhiễm thịt lợn tươi 50 an lu Bảng 4.4: Kết xác định tiêu vi khuẩn S aureus thịt tươi va theo thời gian 52 oi lm ul nf Bảng 4.5: Kết xác định tiêu vi khuẩn S aureus nhiễm thịt tươi theo tháng 54 z at nh Bảng 4.6: Kết giám định số đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn S aureus phân lập 55 z Bảng 4.7: Kết xác định độc lực chủng S aureus phân lập @ gm 56 l Bảng 4.8:Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh hố dược vi m co khuẩn S.aureus phân lập 57 an Lu n va ac th si Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Thực phẩm nguồn cung cấp lượng, chất dinh dưỡng cần thiết để người sống phát triển Thế thực phẩm nguồn truyền lu bệnh nguy hiểm, không bảo đảm vệ sinh an toàn an Để có sản phẩm an tồn dây chuyền sản xuất thực phẩm va n bắt nguồn từ giống, thức ăn, nước uống, thực qui trình vệ sinh thú y gh tn to chăn nuôi đến đưa gia súc đến nơi giết mổ, điều kiện vệ sinh thú y sở giết mổ, quy trình thực giết mổ, trình bảo quản, vận ie p chuyển đến nơi chế biến tiêu thụ phải bảo quản nl w Tuy nhiên năm gần đây, ngộ độc thực phẩm xảy thường d oa xuyên với số lượng vụ ngộ độc thực phẩm lớn làm ảnh hưởng không an lu nhỏ tới sức khoẻ kinh tế người Nguyên nhân vụ ngộ độc va thực phẩm thức ăn khơng đảm bảo vệ sinh, nhiều tạp chất, chất hoá ul nf học, đặc biệt thức ăn nhiễm số loại vi khuẩn như: E.coli, Salmonella oi lm spp, Staphylococcus aureus, vi khuẩn Staphylococcus aureus nguyên nhân quan tâm đặc biệt, khả z at nh gây ngộ độc thực phẩm người chúng nguyên nhân phổ biến gây bệnh z cho người động vật @ gm Xuất phát từ thực tế xã hội tình hình ngộ độc thực phẩm xảy l nay, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu xác định tỷ lệ an Lu Thái Nguyên Tuyên Quang” m co nhiễm vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt lợn số chợ n va ac th si 59 Thành phần phản ứng PCR chu kì nhiệt trình bày mục 3.4.8 Khi có sản phẩm PCR, chúng tơi tiến hành kiểm tra sản phẩm PCR phương pháp điện di gel agarose 1% Kết thể hình Đối chứng âm, ln thực đồng thời tiến hành phản ứng mẫu có chứa đầy đủ thành phần phản ứng PCR, khác thay mẫu ADN lu nước cất Kết sau điện di không cho băng Điều chứng an tỏ q trình thao tác khơng bị nhiễm ADN lạ Mục đích mẫu va n đối chứng âm xem băng ADN thu có phải đoạn ADN quan tâm hay gh tn to ADN vật lạ nhiễm vào trình thao tác dụng cụ thí nghiệm, hóa chất bị nhiễm bẩn p ie Kết điện di hình 14 cho thấy tất sản phẩm PCR 03 chủng nl w vi khuẩn S aureus đặc hiệu, rõ nét khơng có vạch phụ kèm theo, có d oa kích thước khoảng 534 bp theo tính tốn lý thuyết Nhiều nghiên cứu an lu thực nhân đoạn gen SEB cho kết dương tính Do kết va tượng tự với công bố khác nước ul nf sản phẩm PCR 03 chủng vi khuẩn S.aureus sử dụng oi lm cho nghiên cứu 4.6 Đề xuất biện pháp nhằm khắc phục tình trạng ngộ độc thực z at nh phẩm Staphylococcus aureus nhiễm vào thịt l gm * Trong giết mổ @ 4.6.1.1 Giải pháp kỹ thuật z 4.6.1 Giải pháp trước mắt m co + Thợ giết thịt chủ nuôi phải thực tốt công đoạn vệ sinh từ an Lu dụng cụ, quy trình trước, sau giết mổ như: Tắm rửa lợn trước chọc tiết, cạo lông, mổ lợn nơi sẽ, làm lòng riêng biệt n va ac th si 60 + Không giết mổ lợn ốm bệnh mà chưa rõ nguyên nhân + Sử dụng nguồn nước cho việc giết mổ làm lòng * Trong vận chuyển, phân phối, tiêu thụ + Khi vận chuyển phải có túi nilon bọc kín thùng đựng chun dụng + Dụng cụ phải vệ sinh trước, sau bán thịt, chất liệu phải không han gỉ, bóng, khơng thấm nước để dễ cọ rửa lu + Phải có lưới che đậy ruồi, muỗi loại côn trùng khác thịt an + Không mổ thịt lợn cách ạt để thời gian tiêu thụ lợn va n thời gian ngắn to tn * Trong kiểm soát giết mổ ie gh + Cán kiểm dịch phải 100% đào tạo qua lớp kiểm dịch, kiểm p soát giết mổ, kiểm tra vệ sinh thú y động vật sản phẩm động vật, có sức nl w khỏe tâm huyết nghề nghiệp d oa + Xử lý nghiêm túc sản phẩm thịt không đủ tiêu chuẩn VSATTP lu * Trong trình chế biến, sử dụng va an + Chọn mua thịt an toàn, mua địa tin cậy, thịt phải có ul nf nguồn gốc rõ ràng kiểm dịch quy định Kiên không mua oi lm thịt phát dấu hiệu hư hỏng, không rõ nguồn gốc sống hay thịt tái z at nh + Chế biến thịt cách, thịt phải nấu chín kỹ, khơng ăn thịt z + Có đủ nước để chế biến, vệ sinh dụng cụ Nếu khơng có nước máy @ gm phải khử trùng nước Cloramin trước sử dụng l + Thịt sau chế biến phải ăn vịng giờ, khơng ăn thức ăn cũ m co hay nguội Sau giờ, muốn ăn phải đun kỹ lại, khơng để thịt qua chế biến an Lu ăn Thức ăn chín thức ăn sống phải để riêng biệt + Thịt qua chế biến chưa sử dụng cần bảo quản cẩn thận n va ac th si 61 4.6.1.2 Các giải pháp quản lý - Các cấp quyền, chuyên ngành thú y cấp trên, UBND thành phố, xã đạo Trạm thú y cán kiểm dịch phối hợp chặt chẽ với tổ kiểm tra liên ngành, Ban quản lý chợ thực nghiêm túc việc kiểm soát giết mổ, kiểm tra vệ sinh thú y quầy bán kinh doanh thịt, kiểm tra 100% số chợ tụ điểm buôn bán thịt toàn thành phố lu - Chuyên ngành thú y khơng ngừng nâng cao vai trị tham mưu, quản lý an thường xuyên nâng cao lực trình độ cho đội ngũ cán thú y làm công tác kiểm va n tra, kiểm dịch - Đối với người kinh doanh thịt lợn sản phẩm từ thịt lợn: Phải có ie gh tn to 4.6.1.3 Các giải pháp xã hội p cam kết với cấp quyền Trạm thú y thực quy định cần nl w thiết quầy hàng để giảm thiểu ô nhiễm vi sinh vật d oa - Đối với người tiêu thụ: Các quan chức cần khuyến cáo cho an lu nhân dân biết an tồn vệ sinh thực phẩm từ họ có cách nghĩ, cách làm va để hạn chế thấp vụ ngộ độc thực phẩm cho người truyền lây oi lm 4.6.2 Giải pháp lâu dài ul nf vi sinh vật sang động vật khác từ sử dụng thịt Tiến tới xây dựng lò mổ nhà nước tư nhân đảm bảo tiêu chuẩn vệ z at nh sinh thú y cụm trang trại chăn ni thành phố, kiên xóa z bỏ điểm giết mổ lan tràn @ gm Đẩy mạnh pháp chế thú y: Bắt buộc chủ lò mổ quầy bán thịt phải l thực nghiêm túc quy trình vệ sinh thú y giết mổ bày bán Có m co bảo đảm an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng an Lu n va ac th si 62 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu rút số kết luận sau: Hoạt động buôn, bán thịt lợn số chợ Thái Nguyên Tuyên Quang diễn chủ yếu từ 6h-20h Số lượng lợn giết thịt dao động từ 2- lu an con/ngày Với khối lượng thịt tiêu thụ trung bình từ 835,8 – 7275,3kg/ngày va Các quầy thịt có tỷ lệ quầy đạt tiêu chuẩn kiểm dịch 100% n Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn hiếu khí cao chợ Phan Thiết (100%) gh tn to Tiếp theo chợ Tam Cờ (95,45%), chợ Lương Sơn Sư Phạm (93,75%) Chợ Nông Lâm có tỷ lệ nhiễm thấp chiếm 88,89% p ie Mẫu thịt lợn bán hai chợ Sư Phạm Lương Sơn có tỷ lệ nhiễm S nl w aureus cao (93,75%) Chợ Nơng Lâm có tỷ lệ nhiễm S.aureus thấp oa chiếm 88,89% Chợ Phan Thiết chợ Tam Cờ có tỷ lệ mẫu thịt nhiễm vi khuẩn d S aureus từ 90,48 - 90,90%, tỷ lệ mẫu không đạt TCVN từ 42,86 - 54,55% lu an Sự chênh lệch tỷ lệ nhiễm S aureus lấy mẫu vào - 8h sáng nf va (88,24%) 16 – 17h chiều (94,91%) cao Số mẫu không đạt TCVN oi lm ul có chênh lệch lớn với 43,59% buổi sáng buổi chiều 48,15% Tháng (mùa Hè) có số mẫu nhiễm S.aureus cao chiếm tỷ lệ z at nh 100% với số mẫu không đạt TCVN 53,33% Tháng 10 (mùa Thu) có tỷ lệ nhiễm S.aureus thấp 83,33% với số mẫu không đạt TCVN 27,77% z Các chủng vi khuẩn S aureus phân lập thể đặc tính @ gm sinh vật, hóa học đặc trưng: bắt màu Gram dương, có phản ứng catalase, lên l men sucrose, glucose, lactose, saccarose, có khả sinh hơi, sản sinh m co coagulase, không sản sinh H2S khả di động Phần lớn an Lu chủng S aureus có khả dung huyết (83/85 chủng) n va ac th si 63 Các chủng vi khuẩn S aureus phân lập có độc lực mạnh, sau 72h kể từ công cường độc gây chết tới 100% chuột thí nghiệm Các chủng S aureus phân lập mẫn cảm mạnh với SMX/TMP, Cephalexin (tỷ lệ từ 58,33% - 83,33%), Norfloxacin, Clindamycin, Gentamicin, Kanamycin mẫn cảm trung bình với tỷ lệ 41,67% - 66,67% Tuy nhiên S aureus lại kháng Colistin mạnh tới 58,33% Oxacill 50,00% Kết tách ADN tổng số 03 chủng vi khuẩn S.aureus nghiên lu cứu rõ nét, khơng có vạch phụ kèm theo Kết điện di cho thấy tất an va sản phẩm PCR 03 chủng vi khuẩn S aureus có kích thước khoảng 534 bp n theo tính toán lý thuyết - Các cấp, ngành cần đẩy mạnh pháp lệnh thú y bắt buộc với ie gh tn to 5.2 Đề nghị p chủ mổ lợn, quầy bán thịt cán kiểm dịch thực nghiêm túc quy w trình vệ sinh thú y giết mổ bày bán oa nl - Thanh tra, kiểm tra VSATTP thường xuyên sở giết mổ, d sở chế biến thức ăn, sở sản xuất sữa, cửa hàng thịt, nơi bán sữa sản lu NĐTP cao nf va an phẩm sữa, thịt động vật, cửa hàng, nhà ăn tập thể có nguy lây nhiễm oi lm ul - Gia súc, gia cầm phải giết mổ tập trung để thuận tiện cho việc kiểm dịch trước sau giết mổ z at nh - Khu vực bán thịt phải tập trung, nơi bày bán thịt khu vực xung quanh nơi bán thịt phải vệ sinh thường xuyên kiểm dịch đầy đủ z - Tuyên truyền giáo dục nâng cao ý thức cho người dân nhận gm @ thứcnguồn thực phẩm tiêu dùng hàng ngày l - Cần tiếp tục nghiên cứu mức độ ô nhiễm vi sinh vật thịt với số m co lượng mẫu lớn hơn, thử độc lực vi khuẩn tiêm truyền động vật thí xác an Lu nghiệm, định type kháng huyết thanh… để có kết nghiên cứu n va ac th si 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu nước Nguyễn Hữu An, Trần Thị Tuyết Nga, Cao Hữu Nghĩa, Vũ Lê Ngọc Lan (2013) “Tỷ lệ kháng kháng sinh Staphylococcus aureus mẫu bệnh phẩm Viện Pasteur Tp.HCM”, Tạp chí y học dự phịng, Tập XXIII, số 10(146), số đặc biệt lu Ngô Văn Bắc (2007) Đánh giá ô nhiễm vi khuẩn thịt lợn sữa, lợn choai xuất khẩu, thịt gia súc tiêu thụ nội địa số sở giết an n va mổ Hải Phòng - Giải pháp khắc phục, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội ie gh tn to Đặng Xuân Bình, Dương Thuỳ Dung (2010), “Xác định số loại vi khuẩn nhiễm thịt lợn chợ thành phố Thái Nguyên”, Tạp p chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVII - Số 4, Tr 49-55 Chi cục Thú y tỉnh Thái Nguyên (2002): Nghiên cứu tình trạng nhiễm vi sinh w d oa nl vật sở giết mổ thành phố Thái Nguyên, Báo cáo khoa học Trần Xuân Đông (2002), Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ gia súc, va an lu số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thành phố Hạ Long thị xã tỉnh Quảng Ninh, Luận văn thạc sĩ nông oi lm ul nf nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Đậu Ngọc Hào (2010), “Vi khuẩn Staphylococcus aureus ngộ độc thực z at nh phẩm nguồn gốc động vật”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVII - Số 5, Tr 65-72 z Đậu Ngọc Hào (2011), “An toàn sản phẩm chăn nuôi từ sản xuất tới tiêu dung”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVIII - Số 1, Tr 84-88 @ l gm Bùi Thế Hiền, Tơ Thị Thu (2005),“Tình hình nhiễm thực phẩm vi sinh vật hai xã huyện Kiến Xương tỉnh Thái Bình năm 2001”, m co Trung tâm y tế dự phịng Thái Bình, Thơng tin khoa học, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm an Lu Đỗ Thị Hòa (2006), Phòng chống tụ cầu vàng, Khoa học phổ thông, Nxb Hà Nội n va ac th si 65 10 Nguyễn Lý Hương, Nguyễn Thị Phấn Bùi Thị Kim Dung (2005), “Khảo sát tình hình nhiễm vi sinh vật số mặt hàng thực phẩm ăn liền bán chợ Tp.Hồ Chí Minh năm 20022004”, Trung tâm y tế dự phịng Tp.Hồ Chí Minh, Thơng tin khoa học, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm 11 Nguyễn Thị Kê, Nguyễn Xuân Mai, Nguyễn Đỗ Phúc, Hoàng Hoài Phương, Bùi Thị Kiều Nương, Nguyễn Trần Chính, Cao Minh Nga, lu Cao Ngọc Nga (2006), “Khảo sát tính chất kháng kháng sinh an số chủng vi sinh vật lây qua đường tiêu hóa”, Y học Thành phố Hồ va n Chí Minh, Số đặc biệt chuyên đề Y tế cơng cộng Y học dự phịng, 12 Nguyễn Đỗ Phúc, Hoàng Hoài Phương Bùi Kiều Nương (2003), “Đánh gh tn to phụ tập 10 (số 4) p ie giá mức độ ô nhiễm vi sinh vật thức ăn đường phố thành phố Hồ Thông tin khoa học, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm nl w Chí Minh năm 2002”, Viện Vệ Sinh Y tế Công Cộng Tp HCM, d oa 13 Lê Văn Phụng (2009), Vi khuẩn Y học, Nxb Giáo dục Việt Nam an lu 14 Nguyễn Vĩnh Phước (1997), Vi sinh vật thú y tập 3, Nxb Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội va nf 15 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt oi lm ul tươi TCVN 5156:1990, Hà Nội 16 Phương pháp xác định tiêu vi sinh vật thịt lợn TCVN 7046:2002, z at nh Hà Nội 17 Nguyễn Thị Nguyệt Quế (2006), “Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ, z số tiêu vi sinh vật nhiễm thịt lợn nơi giết mổ bán @ Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội l gm chợ thuộc quận Long Biên (Hà Nội)”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, m co 18 Lê Minh Sơn (2003), Nghiên cứu số vi khuẩn gây ô nhiễm thịt lợn vùng hữu ngạn sông Hồng, Luận án tiến sĩ nông nghiệp, Viện Khoa an Lu học kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội n va ac th si 66 19 Đinh Quốc Sự (2005), Thực trạng hoạt động giết mổ gia súc tỉnh, số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thị xã Ninh Bình - tỉnh Ninh Bình, Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 20 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (1997), Vi sinh vật thú y, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 21 Nguyễn Văn Thiện (2008), Phương pháp nghiên cứu chăn nuôi, lu Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Quang Tuyên, Hà Văn Quyết (2005), “Kết phân lập số vi an n va khuẩn gây bệnh viêm vú bị sữa tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển nông thôn tháng 10-2005, Tr 66-69 ie gh tn to 23 Nguyễn Quang Tuyên, Lê Xuân Thăng (2009), “Kết xác định ô nhiễm số vi khuẩn thịt lợn khu vực thành phố Yên Bái”, Tạp chí p khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVI - Số 3, Tr 29-33 24 Phạm Hùng Vân, Phạm Thái Bình (2005), Tình hình đề kháng kháng sinh w d oa nl vi khuẩn Staphylococcus aureus - Kết nghiên cứu đa trung tâm thực 235 chủng vi khuẩn, Y Học Thực Hành ISSN 0866- an lu 7241, số 513, Tr 244-248 oi lm ul nf va II Tài liệu nước 25 Baba T., Bae T., Schneewind O., Takeuchi F., Hiramatsu K (2008), "Genome sequence of Staphylococcus aureus strain Newman and comparative analysis of staphylococcal genomes: polymorphism and evolution of two major pathogenicity islands", J Bacteriol, 190(1), 300-310 26.Bénédicte Fournie, Dana J.Philpott.(2005), "Recognition of Staphylococcus aureus by the Innate Immune System", Clinical Microbiology Reviews, pp.521-540 27 Fueyo, J.M, Martin, M.C, Gonzalez- Hevia M.A,and Mandoza, M C (2000), “Enterotoxin production and DNA fingerprinting in Staphylococcus aureus isolated from human and food samples Relations between genetic types and enterotoxins” , International Journal of Food Microbiology 67, pp 139-145 z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 67 28 Genigeorgis, A.A (1989), “Present state of knowledge on staphylococcal intoxication”, Int J Foof Microbiol.9, pp 327-360 29 Greenfield R A., Brown B R., Huntchins J B., Iandolo J J., Jackson R., Slater L N., Bronze M S (2002), “Microbiological, biological, and chemical weapons of warfare and terrorism”, The American Journal of the Medical Science, 323(6), 326 – 340(9) 30 Kenneth Todar (2005), Todar’s Online Textbook of Bacteriology lu University of Wisconsin-Madison Department of Bacteriology (Staphylococcus), Kenneth Todar University of Wisconsin-Madison an n va Department of Bacteriology 31 Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H (July 1997), “Nasal carriage of to ie gh tn Staphylococcus aureus: epidemiology, underlying mechanisms, and associated risks” Clin Microbiol Rev 10 (3): 505-20 PMID p 9227864 PMC: 172932 32 Mary K Sandel and John L McKillip (2002), “Virulence and recovery of w d oa nl Staphylococcus aureus to the food industry using improvement on traditional approaches” Food control 15, pp 5-10 va an lu 33 Norinaga Miwa, Asako Kawamura, Takashi Masuda and Masato Akiyama (2000), “An outbreak of food poisoning due to egg yolk reaction- oi lm ul nf negative Staphylococcus aureus”, International Journal of Food Microbiology 64, pp 361-366 z at nh 34 Normanno, G., Firinu, A., Virgilio, S Mula, G., Dambrosio, A., Poggiu, A., Decastelli, L., Mioni, R., scuota, S., Bolzoni, G., Di Giannatale, E., z Salinetti, A.P., La Salandra, G., bartoli, M., Zuccon, F., Pirino, T., Sias, S., Parisi, A., Quaglia N.C and Celano, G.V (2004), “Coagulase-positive @ l gm Staphylococci and Staphylococcus aureus in food products marketed in Italy” International Journal of Food Microbiology 98, pp 73-79 m co 35 Ono H K., Omoe K., Imanishi K., Iwakabe Y., Hu D L., Kato H (2008), "Identification and characterization of two novel staphylococcal an Lu enterotoxins, types S and T", Infect Immun, 76(11), pp 4999 – 5005 n va ac th si 68 36 Reginald W Bennett Gayle A Lancette (2001), Bacteriological Analytical Manual Online (Chapter12: Staphylococcus aureus) Center for Food Safety & Applied Nutrition, U.S.Food and Drug Administration 37 Rosec, J.P and Gigaud, O (2002), “Staphylococcal enterotoxin genes of classical and new types detected by PCR in France”, Int J Food Microbiol 35, pp 61-70 lu 38 Steven R G., Derrick E F., Gordon L A (2005), "Insights on Evolution of Virulence and Resistance from the Complete Genome Analysis of an n va an Early Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Strain and a Biofilm-Producing Methicillin-Resistant Staphylococcus epidermidis p ie gh tn to Strain", J Bacteriol, 187(7), 2426–2438 PMCID: PMC1065214 39 Viktoria Atanmassova, Alexandra Meindh and Christian Ring (2001), w "Prevalence of Staphycoccus aureus and Staphylococci enterotoxin in raw pork and uncooked smoked ham- a comparison of classical culturing d oa nl detection and RFLP- PCR", International Journal of Food Microbiology 68, pp 105-113 an lu va III Tài liệu Internet oi lm ul nf 40 Bộ Y tế - Cục an toàn thực phẩm, Số vụ ngộ độc thực phẩm tháng đầu năm 2013, http://vfa.gov.vn/content/article/so - lieu - ngo – doc – thuc z at nh – pham – – thang – dau – nam – 2013 – 521.vfa 41.http://vietq.vn/10-vu-ngo-doc-%C4%83n-uong-nghiem-trong-nam-2013- z d26359.html 42 http://www.impehcm.org.vn/index.php?mod=tintuc&did=2&nid=187 @ l gm 43 http://www.24h.com.vn/suc-khoe-doi-song/vu-ngo-doc-banh-my-o-phu-yendam-bong-co-doc-to-c62a557796.html m co 44 http://www.baocantho.com.vn/?catid=76&id=12298&mod=detnews 45.http://giaoduc.net.vn/Suc-khoe/6-thang-dau-nam-2636-nguoi-bi-ngo- an Lu doc-thuc-pham-28-nguoi-chet-post148410.gd 46 http://emedicine.medscape.com/article/830715-overview n va ac th si 69 47 http://timtailieu.vn/tai-lieu/su-hu-hong-thuc-pham-va-ngo-doc-thuc-phamdo-vi-sinh-vat-32782/ 48.http://vietbao.vn/Doi-song-Gia-dinh/Meo-vat-Chon-thit tuoi/40069034/239/ 49.http://vi.wikipedia.org 50.http://luanvan.co/luan-van/vi-sinh-vat-trong-thit-va-cac-san-pham-tu-thit2074/ lu 51.http://luanvan.co/luan-van/khao-sat-ti-le-nhiem-staphylococcus-aureus-vaescherichia-coli-trong-thuc-pham-tai-khu-vuc-cho-thi-nghe-2420/ an n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HOẠ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w an lu oi lm ul nf va Hình Hoạt động bn bán thịt lợn chợ z at nh z m co l gm @ an Lu Hình Thịt lợn vận chuyển phương tiện thô sơ, không che đậy cẩn thận n va ac th si lu an Hình Nội phủ tạng động vật đặt nơi ô nhiễm n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ VSATTP an Lu Hình Thịt lợn bày bán nhà, vỉa hè, không đảm bảo n va ac th si lu an Hình Khuẩn lạc vi khuẩn hiếu khí mơi trường PCA Hình Khuẩn lạc vi khuẩn S.aureus môi trường Chapman Stone n va p ie gh tn to d oa nl w lu Hình Phản ứng coagulase (đông tụ huyết tương) vi khuẩn S.aureus oi lm ul nf va an Hình Hình thái tính chất bắt màu gram dương vi khuẩn S.aureus z at nh z m co l gm @ an Lu Hình.9 Phản ứng Catalase vi khuẩn S.aureus Hình 10 Phản ứng lên men đường TSI vi khuẩn S.aureus n va ac th si lu an Hình 11 Bệnh tích chuột chết sau cơng cường độc Hình 12 Kết thử kháng sinh đồ vi khuẩn S.aureus n va gh tn to p ie Giếng số 1: ADN tổng số chủng TN1 w Giếng số 2: ADN tổng số chủng TN23 d oa nl Giếng số 4: ADN tổng số chủng TN24 an lu oi lm ul nf va Hình 13 Điện di kiểm tra sản phẩm tách ADN tổng số M: Marker 1kb, Fermentas, Mỹ z at nh (-): Đối chứng âm Giếng số 2: Sản phẩm PCR chủng vi khuẩn TN1 z gm @ Giếng số 3: Sản phẩm PCR chủng vi khuẩn TN23 Giếng số 4: Sản phẩm PCR chủng vi khuẩn TN24 m co l an Lu Hình 14 Kết điện di kiểm tra sau PCR nhân gen SEB mẫu TN1, TN23, TN24 n va ac th si