(Luận văn) nghiên cứu ảnh hưởng của chất khử trùng, môi trường và một số hợp chất hữu cơ tự nhiên đến khả năng tái sinh, nhân nhanh cây gừng núi ðá

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ THỊ LANH Tên đề tài: lu an n va p ie gh tn to NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KHỬ TRÙNG, MÔI TRƯỜNG VÀ MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ TỰ NHIÊN ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH, NHÂN NHANH CÂY GỪNG NÚI ÐÁ (Zingiber purpureum Roscoe) w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC u nf va an lu Hệ đào tạo : Chính quy ll oi m Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 - 2014 z at nh Khoa z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LÊ THỊ LANH Tên đề tài: lu NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KHỬ TRÙNG, MÔI TRƯỜNG VÀ MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ TỰ NHIÊN ĐẾN KHẢ NĂNG TÁI SINH, NHÂN NHANH CÂY GỪNG NÚI ÐÁ (Zingiber purpureum Roscoe) an n va ie gh tn to p KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC oa nl w Hệ đào tạo d : Chính quy an lu Chuyên ngành : 42 - CNSH : CNSH - CNTP oi m Khóa học ll u nf Khoa va Lớp : Công nghệ Sinh học : 2010 – 2014 z at nh Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên, năm 2014 n va ac th si LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Ðá (Zingiber purpureum Roscoe)” Phịng thí nghiệm ni cấy mơ Tế bào Thực vật, Khoa CNSH-CNTP, Trường ĐH Nông Lâm Thái Nguyên Hiện nay, em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Đại học Được kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa lu an thầy cô giáo Khoa tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua va Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình tận tình n bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài to tn Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ, tạo ie gh điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu p Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài w em hoàn thiện d oa nl Em xin chân thành cảm ơn ! an lu Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 ll u nf va Sinh viên thực oi m z at nh Lê Thị Lanh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT an n va p ie gh tn to B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine Cồn : C2H5OH CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng HSN : Hệ số nhân IAA : Indol axetic acid : 6-Furfurylaminopurine : Acid deoxyribonucleic w lu ADN oa nl Kinetin : Least Significant Difference Test d LSD : Murashige and Skoog’s : α - Naphlene axetic acid ll u nf va NAA : Môi trường an MS lu MT oi m : Tỷ lệ mẫu tái sinh TN : Thí nghiệm WPM : Woody Plant Medium z at nh TLMTS z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC BẢNG lu an n va p ie gh tn to Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày nuôi cấy 19 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl20,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày nuôi cấy) 20 Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) 23 Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 25 Bảng 4.5: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 29 Bảng 4.6: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 32 Bảng 4.7: Kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 34 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si DANH MỤC HÌNH Hình 4.1: Biểu đồ thể kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày ni cấy) .20 Hình 4.2 Biểu đồ thể kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau ngày ni cấy) 21 Hình 4.3: Biểu đồ thể kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum lu an Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) 24 va Hình 4.4: Biểu đồ thể kêt TN nghiên cứu ảnh hưởng nước dừađến khả n nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần to tn nuôi cấy) 26 p ie gh Hình 4.5: Biểu đồ thể kêt TN nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) 28 w oa nl Hình 4.6: Biểu đồ thể kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum d an lu Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) .32 va Hình 4.7: Biểu đồ thể kết TN nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch u nf chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber ll purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) .35 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si MỤC LỤC lu an n va p ie gh tn to PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học .2 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Gừng Núi Đá 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái .3 2.1.3 Đặc điểm hoa .4 2.1.4 Đặc điểm củ .4 2.1.5 Đặc điểm phân bố 2.1.6 Sinh thái, trồng trọt 2.1.7 Thành phần hóa học 2.1.8 Tác dụng dược lý .5 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi mô tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Một số chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.1 Auxin 2.3.2 Cytokinin 2.4 Tình hình nghiên cứu Gừng Núi Đá Việt Nam giới .9 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .11 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 11 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 11 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 11 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 11 3.3 Hóa chất thiết bị 11 3.3.1 Hóa chất 11 3.3.2 Thiết bị .11 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to 3.4 Nội dung nghiên cứu 12 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 12 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 13 3.5 Phương pháp đánh giá xử lí số liệu 17 3.5.1 Các tiêu theo dõi 17 3.5.2 Phương pháp xử lí số liệu 18 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 19 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 19 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) .19 4.1.2.Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1% đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn 20 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 22 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu tự nhiên đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 25 4.3.1.Kết nghiên cứu ảnh hưởng nước dừa đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 25 4.3.2.Kết nghiên cứu ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 28 4.3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 31 4.3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 34 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 5.1 Kết luận 37 5.2 Kiến nghị 37 PHẦN 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO .38 6.1 Tài liệu tham khảo tiếng Việt 38 6.2 Tài liệu tham khảo tiếng Anh 39 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Họ gừng bao gồm khoảng 47 chi 1.000 loài, phân bố vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, chủ yếu nam đông nam châu Á Ở Việt Nam, biết gần 20 chi gần 100 loài [3], [13] Từ đời Minh Trung Quốc, nhà y học tiếng Lý Thời Châu viết “Bản thảo Cương mục” sau: “gừng đắng mà không hôi xua tà, đuổi ác, ăn sống, ăn chín, ngâm giấm, làm tương, ngâm muối, xào với mật, đường Cũng làm rau, làm kẹo, làm thuốc có lợi” Nước gừng tính ơn có cơng dụng long đờm, chữa ho Vỏ gừng tính mát có cơng dụng hịa tỳ vị, tiêu viêm, sưng Gừng khơ tính nhiệt, dùng ấm có cơng dụng giải hàn, trừ lu an tỳ vị hư hàn Lá gừng tính ơn có cơng dụng hỗ trợ tiêu hóa, hoạt huyết, tiêu nhỏ, có va thể chữa ăn nhiều thịt khơng tiêu, làm tiêu vết bầm tím ngã, [9] Ngày nay, n với phát triển khoa học kỹ thuật, gừng có tác dụng đặc biệt phát tn to nghiên cứu Cụ thể như: hoạt tính kháng virus, chống oxi hóa kháng ie gh khuẩn [20]; tăng cường nhận thức tiềm cho phụ nữ trung niên [24] Tuy nhiên p nguồn gen họ gừng có nguy mát nhanh khai thác mức w Theo Quyết định số 80/2005/QĐ- BNN Bộ Nông nghiệp Phát triển nông oa nl thôn từ năm 2005 Gừng Núi Đá xếp vào nhóm giống thực phẩm quý cần bảo tồn [12] Vì vậy, Gừng Núi Đá cần có định hướng d an lu bảo tồn đắn để phục vụ xã hội tương lai va Ở Việt Nam, có số nghiên cứu lẻ tẻ phân loại thực vật bảo u nf tồn gia đình, cịn nghiên cứu sâu chọn tạo nhân giống lưu giữ bảo ll quản gừng in vitro chưa có nghiên cứu thực Vì chúng m oi tơi tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường z at nh số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe)” Kết nghiên cứu góp phần hồn thiện quy z trình nhân giống lồi gừng nói chung Gừng Núi Đá nói riêng để bảo tồn tạo @ l 1.2 Mục đích nghiên cứu gm số lượng giống lớn, bệnh, đồng phục vụ cho sản xuất m co Nghiên cứu ảnh hưởng chất khử trùng, môi trường số hợp chất hữu tự nhiên đến khả tái sinh, nhân nhanh Gừng Núi Đá (Zingiber an Lu purpureum Roscoe.) n va ac th si 1.3 Yêu cầu nghiên cứu Xác định chất khử trùng, nồng độ chất khử trùng thời gian khử trùng cho hiệu tạo mẫu Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) vô trùng cao Xác định ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) Xác định ảnh hưởng số hợp chất hữa (nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt) đến khả sinh trưởng phát triển Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học lu an Kết nghiên cứu góp phần xây dựng quy trình kỹ thuật nhân va giống Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) phương pháp nuôi cấy n in vitro tn to 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Góp phần nghiên cứu quy trình nhân nhanh in vitro Gừng Núi Đá p ie gh Bảo tồn loại dược liệu quý (Zingiber purpureum Roscoe.) tạo số lượng lớn phục vụ sản xuất, nâng cao thu w d oa nl nhập cho người dân ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 36 xanh nhạt) Khi tăng giảm nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt CT1, CT2, CT4 hệ số nhân chồi thay đổi khác thấp CT3 Cụ thể: CT1, CT2, CT4 hệ số nhân chồi 2,30 (lần); 2,43 (lần), 1,57 (lần) Kết luận: Dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt bổ sung vào MT nuôi cấy với tỷ lệ 10 g/l 50 g/l cho hiệu nhân chồi Gừng Núi Đá cao nhất, hệ số nhân chồi đạt 2,83 (lần) lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 37 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng, khả nhân chồi Gừng Núi Đá mơi trường có bổ sung số hợp chất hữu tự nhiên nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt đưa số kết luận sau: Mẫu Gừng Núi Đá khử trùng hóa chất HgCl2 0,1% thời gian phút cho hiệu cao nhất, tỷ lệ mẫu đạt 82,2% Mơi trường thích hợp cho tái sinh chồi Gừng Núi Đá môi trường MS + lu an Đường 30g/l + Agar 5g/l; pH: 5,6-5,8; tỷ lệ mẫu tái sinh đạt 83,33% va Môi trường MS + 4,4 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA + Đường 30g/l + Agar n 5g/l + nước dừa, pH = 5,6-5,8 cho khả nhân chồi cao Trong đó, bổ sung tn to nước dừa với nồng độ 50 ml/l môi trường thu kết tốt (hệ số nhân chồi ie gh cao đạt 3,57 lần; chất lượng chồi tốt: chồi mập, xanh đậm) Môi trường MS bổ p sung dịch chiết khoai tây, cà rốt khơng thích hợp cho nhân chồi Gừng Núi Đá 5.2 Kiến nghị w oa nl - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ khác nhau, thời gian khác chất khử trùng khác đến hiệu tạo vật liệu nấm, vi khuẩn d an lu - Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy bổ sung kết hợp u nf Gừng Núi Đá va nước dừa, dịch chiết khoai tây dịch chiết cà rốt đến khả nhân chồi ll - Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu tự nhiên khác dịch m oi chiết nấm men, dịch chiết chuối đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá z at nh - Nghiên cứu môi trường rễ giá thể thích hợp cho Gừng Núi Đá z m co l gm @ an Lu n va ac th si 38 PHẦN TÀI LIỆU THAM KHẢO lu an n va p ie gh tn to 6.1 Tài liệu tham khảo tiếng Việt Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam tập 1, Nxb Khoa học kỹ thuật Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997), Cơng nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Nơng Nghiệp, Hà Nội Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nông Nghiệp Hà Nội Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng tập 2, Nxb Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Võ Văn Chi (2007), Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam, Nxb Giáo dục Trịnh Đình Chính, Hồng Triệu Hùng, Nguyễn Thị Hoàng Anh, Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học Gừng dại (Zingiber cassummunar Roxb) tỉnh Kom Tum, Tạp chí dược liệu, tập 12, số 3+4/2007, trang 89-91 Nguyễn Việt Cường, Hồ Thanh Tâm, Nguyễn Bá Nam, Hà Thị Mỹ Ngân, Lê Kim Cương, Nguyễn Phúc Huy, Dương Tấn Nhựt (2013), “Nghiên cứu ảnh hưởng số hợp chất hữu bạc nitrat (AgNO3) lên sinh trưởng phát triển sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) ni cấy in vitro, Hội nghị khoa học tồn quốc 2013 Trịnh Đình Đạt (2009), Cơng nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, Nxb giáo dục Ngọc Minh, Sỹ Cảo (2009), Hành, tỏi, gừng 700 thuốc trị bệnh, Nxb Thanh Hóa 10 Đặng Văn Hồi, Phan Văn Hồ Nam, Võ Thị Bạch Huệ (2011), “So sánh thành phần tinh dầu gừng dại gừng trâu thuộc chi Zingiber họ Gừng (Zingiberaceae)”, Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh, 4(1): 16-21 11 Đặng Ngọc Phúc, Nguyễn Thanh Tùng, Dương Thị Thùy Châu, Trương Thị Bích Phượng (2011), “Nhân giống in vitro sa nhân tím (Amomum longiligulare T.L.Wu)”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 9(4A): 689-698 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 39 lu an n va p ie gh tn to 12 Quyết định số 80/2005/QĐ-BNN, ngày 05/12/2005 Bộ trưởng Nông nghiệp Phát triển Nông thơn 13 Hồng Thị Sản (2009), Phân loại thực vật, Nxb Giáo dục 14 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục 6.2 Tài liệu tham khảo tiếng Anh 15 Abbas M.S., Taha H.S., Aly U.I., El-Shabrawi H.M and Gaber E.I (2011), “In vitro propagation of ginger (Zingiber officinale Rosco)”, Journal of Genetic Engineering and Biotechnology, 9(2), 165-172 16 Baque A, Shin YK, Elshmari T, Lee EJ, Paek KY (2001), “Effect of light quality, sucrose and coconut water concentration on the micropagation of Calanthe hybrids (‘Bukduseong’ x ‘Hyesung’ and ‘Chunkwang’ x ‘Hyesung’)”, AJSC, 5(10), 1247-1254 17 Bordoloi A.K., Sperkova J and Leclercq P.A (1999), “Essential Oils of Zingiber cassumunar Roxb From Northeast India:” Journal of Essential Oil Research, 11(4), 441-445 18 Chaiwongsa R., Ongchai S., Boonsing P., Kongtawelert P., Panthong A and Reutrakul V (2013), “Active Compound of Zingiber Cassumunar Roxb Down-Regulates the Expression of Genes Involved in Joint Erosion in a Human Synovial Fibroblast Cell Line” African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines, 10(1) pp:40-48 19 Chirangi P and Sharma G L (2005), “In vitro propagation and microrhizome induction in Zingiber cassumunar (Roxb.) : an antioxidant-rich medicinal plant”, Internation journal of food, agriculture and environment, 3(1), 139142 20 Jung San Chang, Kuo Chih Wang, Chia Feng Yeh, Den En Shieh, Lien Chai Chiang (2013), “Fresh ginger (Zingiber officinale) has anti-viral activity against human respiratory syncytial virus in human respiratory tract cell lines” 21 Muhammad Shahinozzaman, Muhammad Omar Faruq, Mustafa Abul Kalam Azad and Muhammad Nurul Amin (2013), “Studies on in vitro propagation of an important medicinal plant-Curcuma zedoaria Roscoe using rhizome explants”, Persian Gulf Crop Protection, 2(4), p 1-6 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si 40 lu an n va p ie gh tn to 22 Murdad R, Latip MA, Aziz ZA, Ripin R (2010), “Effects of carbon source and potato homogenate on in vitro growth and development of Sabah’s Endangered orchid: Phalaenopsis gigantea”, AsPac J Mol Biol Biotechnol, 18 (1), 199-202 23 Molnar Z, Virag E, Ordog V (2011), “Natural subtances in tissue culture media of higher plants”, Acta Biol Szeged, 55 (1), 123-127 24 Naritsara Saenghong, Jintanaporn Wattanathorn, Supaporn Muchimapura, Terdthai Tongun, Nawanant Piyavhatkul, Chuleratana Banchonglikitkul, Tanwarat Kajsongkram (2012), “Zingiber officinale Improves Cognitive Function of the Middle-Aged Healthy Women” 25 Faridah Q Z., Abdelmageed A H A., Julia A A., Nor Hafizah R (2011), “Efficient in vitro regeneration of Zingiber zerumbet Smith (a valuable medicinal plant) plantlets from rhizome bud explants”, African Journal of Biotechnology, 10(46), p 9303-9308 26 Rout J R., Palai S K., Samantaray S and Das P (2001), “Effect of growth regulator and culture conditions on shoot multiplication and rhizome formation in ginger (Zingiber officinale Rosc.) in vitro”, In vitro Cell Dev Biol.-Plant, 37, p 814-819 27 Tg Siti Amirah Tg Kamazeri, Othman Abd Samah, Muhammad Taher, Deny Susanti, Haitham Qaralleh (2012), “Antimicrobial activity and essential oils of Curcuma aeruginosa,Curcuma mangga, and Zingiber cassumunar from Malaysia”, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, 5(3), 202-209 28 Thorpo TA, Stasolla C, Yeung E-C, de Klerk GJ, Roberts A, George EF (2008), “The components of tissue culture media II: Organic additions, osmotic and pH effects, and support systems” George EF, Hall MA and de Klerk GJ, eds., Plant propagation by tissue culture, 3rd edition Springer-Verlag, Dordrecht, 115-173 29 Toshi Masuda and Akiko Jitoe (1994), “Antioxidative and Antiinflammatory Compounds from Tropical Gingers: Isolation, Structure Determination, and Activities of Cassumunins A, B, and C, New Complex Curcuminoids from Zingiber cassumunar”, 42(9), p 1850-1856 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC Phụ lục : Kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn (sau ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE 11 22/ 5/** 2:59 PAGE anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach VARIATE V003 MSKN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER SQUARES LN ============================================================================= lu an CT$ 10173.8 3391.26 * RESIDUAL 148.297 18.5372 182.94 0.000 va - n * TOTAL (CORRECTED) 11 10322.1 938.371 tn to TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11 22/ 5/** 2:59 gh PAGE ie p anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach MEANS FOR EFFECT CT$ w - 8DF 60.0000 55.5533 77.7767 2.48577 ll 5%LSD u nf 3) 0.000000 va SE(N= an MSKN lu d NOS oa nl CT$ 8.10585 m oi FILE 11 22/ 5/** z at nh ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE 2:59 PAGE anh huong cua mot so chat khu trung nghien cuu den hieu qua tao mau sach z F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - (N= STANDARD 12) 12 RESID SS 48.333 30.633 BASED ON | 4.3055 | % | | | m co MSKN | l BASED ON TOTAL SS C OF V |CT$ SD/MEAN | NO OBS DEVIATION gm GRAND MEAN @ VARIATE 8.9 0.0000 an Lu n va ac th si Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn (sau ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE MSKN FILE 12 5/ 6/** 8:42 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k VARIATE V003 MSKN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 3466.40 1155.47 * RESIDUAL 118.549 14.8186 77.97 0.000 - lu * TOTAL (CORRECTED) 11 3584.95 325.904 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 12 5/ 6/** 8:42 n anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k tn to PAGE gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie CT$ NOS w oa nl d 48.8900 75.5533 82.2233 42.2233 2.22251 an 3) 8DF va 5%LSD lu SE(N= MSKN 7.24737 u nf FILE 12 ll ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE 5/ 6/** 8:42 m PAGE oi anh huong cua thoi gian khu trung bang HgCl2 den kha nang tao mau sach nam, vi k z at nh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 62.222 18.053 | 3.8495 % | | | | 6.2 0.0000 m co 12 | l MSKN RESID SS BASED ON gm BASED ON TOTAL SS C OF V |CT$ @ 12) NO OBS DEVIATION z VARIATE an Lu n va ac th si Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5, WPM đến khả tái sinh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau 20 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMTS FILE TN3 22/ 5/** 0:47 PAGE anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da VARIATE V003 TLMTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES F RATIO PROB ER SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2022.22 1011.11 * RESIDUAL 200.000 33.3334 30.33 0.001 - lu * TOTAL (CORRECTED) 2222.22 277.778 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 22/ 5/** 0:47 n anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da tn to PAGE gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie CT$ NOS w SE(N= 3) 83.3333 63.3333 46.6667 3.33333 lu 6DF 11.5305 an 5%LSD d oa nl TLMTS va FILE TN3 u nf ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE 22/ 5/** 0:47 ll PAGE m anh huong cua cac moi truong MS, B5, WPM den kha nang tai sinh choi gung nui da oi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 9) BASED ON 64.444 16.667 BASED ON % | 5.7735 | | | | | 9.0 0.0010 m co l gm TLMTS RESID SS C OF V |CT$ @ TOTAL SS DEVIATION z NO OBS z at nh VARIATE an Lu n va ac th si Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng dịch chiết nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE ND 25/ 5/** 7: PAGE anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 7.29600 * RESIDUAL 1.82400 195.43 0.000 10 933338E-01 933338E-02 - lu * TOTAL (CORRECTED) 14 7.38933 527809 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE ND 25/ 5/** 7: n anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da tn to PAGE gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie CT$ NOS 2.36667 3.56667 2.76667 2.23333 1.43333 w lu oa nl d 5%LSD 10DF 0.557775E-01 0.175757 u nf 3) va SE(N= an HSN ll - m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE ND 25/ 5/** 7: oi PAGE z at nh anh huong cua nuoc dua den kha nang nhan choi Gung Nui Da z F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD (N= SD/MEAN | OBS BASED ON TOTAL SS 15 2.4733 0.72651 BASED ON | | % | 0.96609E-01 | | 3.9 0.0000 an Lu HSN RESID SS | m co NO C OF V |CT$ l GRAND MEAN 15) DEVIATION gm @ VARIATE n va ac th si Bảng 4.5:Kết ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KT 25/ 5/** 15:21 PAGE anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SQUARES SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 1.89667 632222 94.83 0.000 * RESIDUAL 533336E-01 666670E-02 - lu * TOTAL (CORRECTED) 11 1.95000 177273 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KT 25/ 5/** 15:21 n anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui tn to PAGE gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie CT$ NOS w oa nl d HSN 2.36667 2.60000 2.10000 1.53333 an lu 3) 8DF 0.153721 u nf 5%LSD 0.471406E-01 va SE(N= ll - m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KT 25/ 5/** 15:21 oi PAGE z at nh anh huong cua dich chiet khoai tay den kha nang nhan choi gung nui z F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD (N= SD/MEAN | 12) HSN 12 RESID SS 2.1500 0.42104 | % | 0.81650E-01 | | | | m co TOTAL SS BASED ON C OF V |CT$ l BASED ON DEVIATION gm GRAND MEAN NO OBS @ VARIATE 3.8 0.0000 an Lu n va ac th si Bảng 4.6:Kết ảnh hưởng dịch chiết cà rốt đến khả nhân nhanh chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE CR 25/ 5/** 6:26 PAGE anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 1.60250 534167 106.83 0.000 * RESIDUAL 400003E-01 500004E-02 - lu * TOTAL (CORRECTED) 11 1.64250 149318 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CR 25/ 5/** 6:26 n anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui tn to PAGE Da gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie CT$ w NOS oa nl d HSN 2.30000 2.33333 2.63333 1.63333 an lu 3) 8DF 0.133126 u nf 5%LSD 0.408250E-01 va SE(N= ll - m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CR 25/ 5/** 6:26 oi PAGE z at nh anh huong cua dich chiet ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da z @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN 12) 12 RESID SS 2.2250 0.38642 BASED ON | | % | 0.70711E-01 | | 3.2 0.0000 an Lu HSN | m co BASED ON TOTAL SS C OF V |CT$ SD/MEAN | NO OBS DEVIATION l (N= STANDARD gm VARIATE n va ac th si Bảng 4.7: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân chồi Gừng Núi Đá (Zingiber purpureum Roscoe.) (sau tuần nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE KTCR 25/ 5/** 6:50 PAGE anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT$ 2.51667 838889 167.78 0.000 * RESIDUAL 400002E-01 500003E-02 lu an - va * TOTAL (CORRECTED) 11 2.55667 232424 n FILE KTCR 25/ 5/** 6:50 tn to TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS PAGE gh anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da ie MEANS FOR EFFECT CT$ p NOS 2.30000 2.43333 2.83333 1.56667 oa an d 5%LSD 8DF 0.408249E-01 u nf 3) va SE(N= HSN lu nl w CT$ 0.133126 ll - m ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KTCR 25/ 5/** 6:50 oi z at nh PAGE anh huong cua dich chiet khoai ta va ca rot den kha nang nhan choi Gung Nui Da z @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD (N= SD/MEAN | OBS BASED ON TOTAL SS 12 2.2833 0.48210 | BASED ON | % | 0.70711E-01 | | an Lu HSN RESID SS | m co NO C OF V |CT$ l GRAND MEAN 12) DEVIATION gm VARIATE 3.1 0.0000 n va ac th si Phụ lục 2: Môi trường Bảng 1.1: Môi trường MS Component I NH4NO3 KNO3 82,5 95 II MgSO4 7H2O MgSO4 4H2O ZnSO4 7H2O CuSO4 5H2O 37,0 2,23 1,058 0,0025 III CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O 44,0 0,083 0,0025 lu Bottle Stock Solution (g/l) an n va p ie gh tn to IV 2,784 3,724 va mg/100ml d FeSO4 7H2O Na2EDTA 2H2O an lu u nf ll 1.650,0 1.900,0 10 370,0 22,3 10,6 0,025 10 440,0 0,83 0,025 10 170,0 6,2 0,25 10 27,85 37,25 0,5 2,0 0,1 0,5 0,5 2,0 0,1 0,5 100,0 z 30.000,0 @ Sucrose 5.000,0 5,6-5,8 m co l gm Agar PH oi Inositol m Vitamin 100 100 100 100 z at nh Nicotinic acid Glycine ThiamineHCl PyridoxineHCl Final concentratic (mg/ l) 20 17,0 0,62 0,025 KH2PO4 H3BO3 Na2MoO4.2H2O oa nl w V Amount to take preparation (ml) an Lu n va ac th si Bảng 1.2: Môi trường B5 Amount to Stock Bottle Component Final take Solution preparation (g/l) (ml) concentratic (mg/ l) lu an 250 20 2500,0 (NH4)2SO4 13,4 10 134,0 MgSO4.7H2O 15,0 NaH2PO4.H2O 15 10 150,0 MnSO4.H2O 1,0 10 10,0 H3BO3 0,3 3,0 ZnSO4.7H2O 0,2 2,0 KI 0,075 10 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,025 10 0,25 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 0,0025 0,025 n va KNO3 p ie gh tn to d oa nl w an lu CoCl2.6H2O FeSO4.7H2O 2,785 10 27,85 va 3,725 37,25 CaCl2.2H2O 15,0 150,0 ll u nf Na2EDTA oi m Inositol 160 Nicotinic acid z at nh Thiamine HCL 100 Pyridoxine HCL 100 mg/100ml 1,0 10 10,0 1,0 m co l gm Agar 5,6 - 5,8 5000,0 an Lu PH @ Sucrose 100 z Vitamins n va ac th si Bảng 1.3: Mơi trường WPM Nồng độ Nồng độ Muối khống Muối khoáng (mg/l) (mg/l) lu 400 H3BO3 6,2 Ca(NO3)2.4H2O 556 ZnSO4.7H2O 8,6 CaCl2.2H2O 96 Na2EDTA.2 H2O 37,2 MgSO4.7H2O 370 CuSO4.5H2O 0,25 K2SO4 990 FeSO4.7H2O 27,8 KH2PO4 170 MgSO4.4H2O 22,3 Na2MoO4.2H2O 0,25 an NH4NO3 n va p ie gh tn to w Các chất hữu oa nl Myo-inositol d Pyridoxine HCL Nicotinic acid 0,5 0,5 Thiamine HCL 1,0 2,0 Agar 5,0 u nf Sucrose va Glycine an lu 100 20 ll m 5,6 - 5,8 oi pH z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si