(Luận văn) đánh giá ảnh hưởng của điều kiện nuôi trồng tới khả năng tạo quả thể của nấm đông trùng hạ thảo cordyceps militaris

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN HƢỚNG lu an n va Tên đề tài: TẠO QUẢ THỂ CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris p ie gh tn to ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI TRỒNG TỚI KHẢ NĂNG d oa nl w KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC an lu Hệ đào tạo nf va : Chính quy Khoa Khóa học : CNSH - CNTP z at nh oi lm ul Chuyên ngành/ ngành: Công nghệ Sinh học : 2012 - 2016 z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên – năm 2016 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM lu an HÀ VĂN HƢỚNG n va tn to Tên đề tài: gh ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN NUÔI TRỒNG TỚI KHẢ NĂNG p ie TẠO QUẢ THỂ CỦA NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO Cordyceps militaris oa nl w d KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC nf va an lu lm ul Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành/ ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : K44 – CNSH : CNSH - CNTP : 2012 – 2016 z @ Khóa học z at nh oi Lớp l gm Giảng viên hƣớng dẫn: TS Dương Văn Cường ThS Bùi Tuấn Hà m co an Lu n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Được đồng ý Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm, thời gian thực tập em tiến hành thực đề tài “Đánh giá ảnh hƣởng điều kiện nuôi trồng tới khả tạo thể nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris” Kết thúc thời gian thực tập Phòng Sinh học Phân tử - Viện Khoa học Sự sống – Đại học Thái nguyên, đến em hoàn thành đề tài tốt nghiệp lu Để đạt kết ngày hôm nay, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới an n va Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban Chủ nhiệm Khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực tập Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo Dương Văn Cường, thầy p ie gh tn to Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm thầy cô giáo w giáo Bùi Tuấn Hà, kĩ sư Ma Thị Trang kĩ sư Vũ Hồi Nam tận tình oa nl bảo, giúp đỡ hướng dẫn em thời gian thực đề tài d Cuối cùng, em xin cám ơn gia đình tạo điều kiện vật chất tốt có lu an thể ln chỗ dựa tinh thần cho em trình thực tập; cảm ơn bạn nf va bè giúp đỡ em thời gian vừa qua lm ul Mặc dù thân cố gắng thời gian thực đề tài có z at nh oi hạn nên khóa luận khơng thể tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp chân thành từ thầy cô bạn để đề tài hoàn thiện z gm @ Em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên m co l Thái Nguyên, tháng năm 2016 an Lu Hà Văn Hƣớng n va ac th si ii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1: Thành phần hóa học chủ yếu hai lồi Đơng trùng hạ thảo quan trọng Bảng 3.1: Thiết bị, dụng cụ hóa chất 19 Bảng 3.2: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường khác đến khả sinh trưởng sợi nấm 23 Bảng 3.3: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường khác đến hình lu thành phát triển mầm thể, suất sinh học 23 an Bảng 3.4: Nghiên cứu ảnh hưởng bột nhộng tằm đến khả sinh va n trưởng sợi nấm 24 gh tn to Bảng 3.5: Nghiên cứu ảnh hưởng bột nhộng tằm đến hình thành ie phát triển mầm thể, suất sinh học 25 p Bảng 3.6: Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành phát triển nl w mầm thể, suất sinh học 26 d oa Bảng 4.1: Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường khác đến an lu khả sinh trưởng sợi nấm 28 nf va Bảng 4.2: Kết nghiên cứu ảnh hưởng mơi trường khác đến lm ul hình thành phát triển mầm thể, suất sinh 30 z at nh oi Bảng 4.3: Kết nghiên cứu ảnh hưởng bột nhộng tằm đến khả sinh trưởng sợi nấm 34 Bảng 4.4: Kết nghiên cứu ảnh hưởng bột nhộng tằm đến hình z thành phát triển mầm thể, suất sinh học 36 @ l gm Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành m co phát triển mầm thể, suất sinh học 40 an Lu n va ac th si iii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris Hình 3.1: Sơ đồ quy trình nuôi cấy nấm Đông trùng hạ thảo 21 Hình 4.1 Đặc điểm hình thái hệ sợi, mật độ hệ sợi công thức môi trường A, môi trường B, môi trường C sau 10 ngày cấy giống 29 Hình 4.2.: Đặc điểm hình thái, chiều dài thể nấm công thức môi trường khác 31 lu Hình 4.3: Nấm Cordyceps militaris nuôi trồng môi trường A, môi an trường B, Môi trường C 32 va n Hình 4.4: Đặc điểm hình thái hệ sợi, mật độ hệ sợi công thức với tỉ lệ to gh tn % nhộng tằm khác sau ngày cấy giống 35 p ie Hình 4.5 Đặc điểm hình thái, chiều dài thể nấm công thức tỉ lệ phần trăm bột nhộng tằm khác 37 nl w Hình 4.6 Ảnh hưởng tỉ lệ bột nhộng tằm đến hình thành phát triển d oa mầm thể, suất sinh họ 38 an lu Hình 4.7 : Đặc điểm hình thái, chiều dài thể nấm công thức nhiệt độ nf va khác 41 z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an n va : Biological Efficiency CS : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation Duncan : Duncan’s Multiple Range Test-DMRT Đ/c : Đối chứng ĐTHT : Đông trùng hạ thảo LSD : Least Singnificant Difference Test MTN : Môi trường NAA : α-Naphthalene acetic acid p ie gh tn to BE d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si v MỤC LỤC Trang Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài lu 1.3.1 Ý nghĩa lý thuyết an 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn va n Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU gh tn to 2.1 Cơ sở khoa học ie 2.1.1 Tên gọi Đông trùng hạ thảo p 2.1.2 Sơ lược lịch sử nghiên cứu phân loại Đông trùng hạ thảo nl w 2.1.3 So sánh loài ĐTHT Cordyceps sinensis Cordyceps militaris d oa 2.1.4 Thị trường giá 10 an lu 2.2 Nghiên cứu giá trị dược liệu nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps nf va militaris 11 lm ul 2.2.1 Giá trị dược liệu theo y học cổ truyền Đông Á 11 z at nh oi 2.2.2 Giá trị dược liệu theo y học đại 12 2.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Cordyceps militaris nước 14 z gm @ 2.2.1 Tình hình nghiên cứu ni trồng nấm Cordyceps militaris giới 14 l co 2.2.2 Tình hình nghiên cứu nuôi trồng nấm Cordyceps militaris m nước 16 an Lu n va ac th si vi Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 19 3.1.1 Đối tượng 19 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 19 3.1.3 Vật liệu nghiên cứu 19 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 20 3.2.1 Địa điểm tiến hành nghiên cứu 20 lu 3.2.2.Thời gian tiến hành nghiên cứu 20 an 3.3 Nội dung nghiên cứu 20 va n 3.4 Phương pháp nghiên cứu 20 tn to 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu 20 ie gh 3.4.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 21 p 3.4.2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường khác đến nl w khả sinh trưởng sợi nấm, hình thành phát triển mầm d oa thể, suất sinh học 22 an lu 3.4.2.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng bột nhộng tằm đến khả nf va sinh trưởng sợi nấm, hình thành phát triển mầm thể, lm ul suất sinh học 23 3.4.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành z at nh oi phát triển mầm thể, suất sinh học 25 3.4.3 Chỉ tiêu theo dõi 26 z 3.4.3 Phương pháp xử lý số liệu 27 @ gm Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 co l 4.1 Ảnh hưởng môi trường khác đến khả sinh trưởng m sợi nấm, hình thành phát triển mầm thể, suất sinh an Lu học 28 n va ac th si vii 4.1.1 Ảnh hưởng môi trường khác đến khả sinh trưởng sợi nấm 28 4.1.2 Ảnh hưởng mơi trường khác đến hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học 30 4.2 Ảnh hưởng bột nhộng tằm đến khả sinh trưởng sợi nấm, hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học 33 4.2.1 Ảnh hưởng bột nhộng tằm đến khả sinh trưởng sợi nấm 33 4.2.2: Ảnh hưởng bột nhộng tằm đến hình thành phát triển mầm lu thể, suất sinh học 36 an 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm thể, va n suất sinh học 39 gh tn to 4.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm ie thể, suất sinh học 39 p Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 nl w 5.1 Kết luận 43 d oa 5.2 Đề nghị 43 nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Đông trùng hạ thảo (ĐTHT) tên khoa học Cordyceps loài nấm ký sinh số lồi trùng Vào mùa Đơng nấm xâm nhiễm, ký sinh vào thể côn trùng Đến mùa Hè, hệ sợi nấm phát triển thành nấm nhú lên khỏi mặt đất gốc dính liền vào thân sâu Chính mà nấm có tên gọi Đơng trùng hạ thảo, có nghĩa mùa đông côn trùng, mùa hạ lu cỏ an Từ y học cổ truyền Trung Hoa y học đại nước va n phát triển Mỹ, châu Âu công nhận giá trị dược lý ĐTHT Loài nấm gh tn to Cordyceps militaris loài thuộc họ Cordyceps, ie thể nấm có hàm lượng hoạt chất có hoạt tính sinh học như: Cordycepin p (3'-deoxyadenosine) chất tương tự nucleoside có hoạt tính sinh học nl w bao gồm kháng khuẩn, kháng nấm, kháng u, hoạt động kháng virus [9],[ 38] d oa Kim et al (2006) chứng minh cordycepin có khả ức chế an lu dependently collagen, chất gây tượng kết tập tiểu cầu dẫn đến nf va tượng vỡ mảng xơ vữa động mạch vành [18] Adenosine cho có lm ul tác dụng điều hòa miễn dịch, bảo vệ tim mạch Mannitol Cordyceps z at nh oi militaris có chức hoạt tính sinh học, lợi tiểu, chống chứng ho máu [25] Superoxide dismutise để phòng ngừa điều trị xuất huyết não, viêm loét, loại bỏ tình trạng viêm, loạn nhịp tim, phù nề, nhiễm độc, bệnh z thấp khớp, thấp khớp, viêm khớp dạng thấp, tổn thương xạ, nhiễm độc @ l gm thuyên tắc Đơng trùng hạ thảo cịn có chứa nhiều loại vitamin (trong 100g co đơng trùng hạ thảo có 0,12 g vitamin B12; 29,19 mg vitamin A; 116,03 mg m vitamin C, ngồi cịn có vitamin B2 (riboflavin), vitamin E, vitamin K ) an Lu ngồi cịn có khoảng 25 - 30 % protein n va ac th si 39 Khi quan sát kết thí nghiệm nhận thấy chiều dài thể suất sinh học BE có biến thiên, tăng dần từ tỉ lệ bột nhộng tằm mức 0% đến 2% bắt đầu giảm tỉ lệ 3% bột nhộng tằm Kết giải thích sau: Mơi trường A chọn môi trường phù hợp nhất, giải thích phần kết nội dung hàm lượng nitơ cao làm chậm trình sinh trưởng hệ sợi q trình biệt hóa hình thành thể Hơn theo Gao cs (2000) cịn ngồi peptone bổ sung nitơ bột nhộng tằm yếu tố bổ sung nitơ [14] Vì kết hợp mơi lu trường A với tỉ lệ phần trăm bột nhộng tằm làm tăng hàm lượng nitơ Khi an bổ sung tới tỉ lệ 3% bột nhộng tằm tương đương 30 g/lít mơi trường hệ sợi va n bắt đầu phát triển chậm hơn, thời gian hình thành mầm thể lâu gh tn to dẫn tới suất sinh học thấp so với tỉ lệ bột nhộng tằm 2% ie 4.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm p thể, suất sinh học nl w 4.3.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm d oa thể, suất sinh học an lu Theo nhiều nghiên cứu nhiệt độ xác định yếu tố quan trọng nf va việc kích thích hình thành thể [16] Để xác định ảnh hưởng lm ul nhiệt độ khơng khí đến việc hình thành phát triển thể, thiết lập z at nh oi công thức nhiệt độ nuôi nấm khác 20oC, 20 – 25oC (12 chiếu sáng nhiệt độ đạt 25oC, 12 lại nhiệt độ đạt 20oC), 25oC 30oC [31] Nấm cấy môi trường hỗn hợp trải qua giai đoạn ươm sợi đưa vào z nhiệt độ nuôi khác nhau, độ ẩm 80%, cường độ chiếu sáng 500 lux, chiếu l gm @ sáng 12 giờ/ngày co Thời gian hình thành mầm thể, chiều dài thể, suất sinh m học BE, đặc điểm hình thái phát triển mầm thể công thức nhiệt an Lu độ trình bày bảng 4.5 n va ac th si 40 Bảng 4.5: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học Nhiệt độ CT o ( C) TG hình thành mầm Chiều dài thể ( ngày) (mm) Đặc điểm hình thái phát triển mầm thể BE (%) 20 16,30a 44,10c 8,14c Đỉnh nhọn, màu vàng cam, hướng quang mạnh 20 -25 15,4b 54,77a 10,85a Đỉnh nhọn, màu vàng cam, hướng quang mạnh 25 16,30a 46,97b 9,47b Đỉnh nhọn, màu vàng cam, hướng quang mạnh 30 16,5a 38,53d 7,1d Đỉnh nhọn, màu vàng cam, hướng quang mạnh 1,7 1,4 2,4 0,53 1,20 0,4 lu an n va gh tn to CV% ie p LSD05 oa nl w Bảng 4.5 cho thấy công thức nhiệt độ, hệ sợi nấm Cordyceps d militaris phát triển hình thành thể Quả thể nấm có đỉnh nhọn, an lu màu vàng cam, hướng quang mạnh nf va Tuy công thức nhiệt độ khác thể hình thành, lm ul thời gian hình thành mầm thể, chiều dài thể suất sinh z at nh oi học BE có khác Xét tiêu chí ta thấy: Đối với thời gian hình thành mầm thể, giá trị LSD05 = 0,53 cơng thức nhiệt độ 20oC, 25oC, 30oC có sai khác khơng có ý nghĩa z @ Cơng thức nhiệt độ 20 - 25oC (12 chiếu sáng nhiệt độ đạt 25oC, 12 l gm lại nhiệt độ đạt 20oC) sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Công co thức nhiệt độ 20 - 25oC cho thời gian hình thành mầm thể ngắn sớm nhất, m trung bình 15,44 ngày kể từ ngày cấy giống Các công thức nhiệt độ 20oC, an Lu 25oC có thời gian hình thành mầm thể trung bình 16,30 ngày, n va ac th si 41 cơng thức nhiệt độ 30oC có thời gian hình thành mầm thể trung bình ngày 16,5 ngày lu an n va ie gh tn to p Hình 4.7 : Đặc điểm hình thái, chiều dài thể nấm công thức nhiệt độ khác Đối với tiêu chí chiều dài thể, với giá trị LSD05 = 1,20 công oa nl w d thức thí nghiệm có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Cơng an lu thức nhiệt độ 20 - 25oC có chiều dài thể trung bình dài nhất, chiều dài nf va trung bình đạt 54,77 mm Cơng thức nhiệt độ 30oC có chiều dài thể trung lm ul bình ngắn nhất, chiều dài trung bình đạt 38,53 mm Hai cơng thức cịn lại mm cơng thức 25oC z at nh oi đạt chiều dài trung bình 44,10 mn cơng thức nhiệt 20oC 46,97 z Đối với suất sinh học BE, với giá trị LSD05 = 0,4 cơng thức thí nghiệm khác có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Công thức nhiệt độ 20 - 25oC cho suất sinh học BE trung bình cao đạt 10,85% Cơng thức nhiệt độ 30oC cho suất sinh học BE trung bình thấp đạt 7,1% Hai công thức nhiệt độ 20oC 25oC đạt suất BE trung bình 8,14% 9,47% m co l gm @ an Lu n va ac th si 42 a, CT 1: 20oC b, CT 2: 20 -25oC c, CT 3: 25oC d, CT 4: 30oC lu an Hình : Nấm Cordyceps militaris đƣợc nuôi trồng công thức nhiệt độ va n khác to tn Quan sát hình dạng thể nấm Cordyceps militaris sau khoảng 45 -50 ie gh ngày nuôi cấy điều kiện nhiệt độ khác nhau, nhận thấy công thức p nhiệt độ 20 - 25oC (12 chiếu sáng nhiệt độ đạt 25oC, 12 lại nhiệt nl w độ đạt 20oC) thể mập, dài Như nghiên cứu tơi tìm d oa nhiệt độ thích hợp cho hình thành phát triển mầm thể nf va độ đạt 20oC) an lu nhiệt độ 20 - 25oC (12 chiếu sáng nhiệt độ đạt 25oC, 12 lại nhiệt lm ul Kết nghiên cứu phù hợp với cơng trình nghiên cứu trước nghiên cứu trước Nghiên cứu Hung cs (2009) nhiệt z at nh oi độ thấp mức từ 15oC đến 20oC không thuận lợi cho việc nuôi trồng hầu hết chủng nấm Cordyceps militaris, nhiệt độ 30oC gây z tượng ức chế sinh tưởng, kết nghiên cứu chứng minh nhiệt độ từ 20 @ l gm đến 25oC nấm phát triển tốt, 25oC nhiệt độ thích hợp [16] Theo Tuli cs (2014) nhiệt độ tối ưu cho sản xuất Cordyceps tìm thấy 20 m co - 25ºC [31] an Lu n va ac th si 43 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu rút số kết luận sau: - Môi trường A (Glucose 40g/l, peptone 5g/l, MgSO4.7H2O 1,5g/l, K2HPO4 1,5g/l, NAA 1mg/l) môi trường phù hợp cho sinh trưởng sợi nấm, hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học Với thời gian hệ sợi phát triển kín chất ngắn trung bình 10,3 ngày, thời gian lu hình thành mầm thể ngắn trung bình 15,37 ngày, chiều dài thể đạt an trung bình 39,07mm, suất sinh học BE trung bình đạt 5,92% va n - Tỉ lệ 2% bột nhộng tằm phù hợp cho sinh trưởng sợi nấm, gh tn to hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học Với thời p ie gian hệ sợi phát triển kín chất ngắn trung bình 8,7 ngày, thời gian hình thành mầm thể ngắn trung bình 15,67 ngày, chiều dài thể nl w đạt trung bình 55,33mm, suất sinh học BE trung bình đạt 11,93% d oa - Nhiệt độ 20 - 25oC (12 chiếu sáng nhiệt độ đạt 25oC, 12 an lu lại nhiệt độ đạt 20oC) nhiệt độ thích hợp hình thành phát triển nf va mầm thể, suất sinh học Với thời gian hình thành mầm thể lm ul ngắn trung bình 15,44 ngày, chiều dài thể đạt trung bình 5.2 Đề nghị z at nh oi 54,44mm, suất sinh học BE trung bình đạt 10,85% z - Tiếp tục nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển nấm độ ẩm, pH môi trường, cường độ chiếu sáng để tối ưu hóa quy trình nuôi cấy nấm môi trường nhân tạo - Đánh giá chất lượng thể Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris nuôi trồng nhân tạo thông qua việc xác định hàm lượng thành phần sinh hóa, hoạt chất sinh học làm sở để ứng dụng giống nấm vào thực tiễn sản xuất m co l gm @ an Lu n va ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Trịnh Tam Kiệt (1996), Danh lục nấm lớn Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Đỗ Tất Lợi (1977), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, tr.1166-1172 Hoàng Khánh Toàn (2009), 70 mươi thuốc phòng chống bệnh tật, Quân đội nhân dân, Hà Nội, 286 lu Phạm Quang Thu (2009), "Điều tra phát nấm Nhộng trùng hạ thảo an Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn va n Động - Bắc Giang", Tạp trí nơng nghiệp phát triển nông thôn, tr 91-94 tn to Phạm Quang Thu (2009), "Phát nấm Nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni p ie gh (Berk.)Berk vườn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc", Tạp chí Nơng nghiệp & Phát triển nông thôn 6, tr 96-99 Phạm Quang Thu Nguyễn Mạnh Hà (2009), "Phát nấm Nhộng trùng hạ w oa nl thảo Cordyceps militaris (L.:FR.)LINK vườn quốc gia Hồng Liên tỉnh d Lào Cai", Tạp chí Nông nghiệp & Phát triển nông thôn lu an Phạm Thị Thuỳ (2010), Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria nf va Metarhizium để ứng dụng phòng trừ sâu hại trồng, rừng phát lm ul nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người, Báo z at nh oi cáo Hội thảo Quốc gia bệnh hại thực vật Việt Nam, Hà Nội Lê Văn Vẻ, Trần Thu Hà Nguyễn Thị Bích Thùy (2015), "Bước đầu nghiên cứu công nghệ nuôi trồng Nhộng trùng thảo ( Cordyceps militaris L.ex Fr.) z Việt Nam", Tạp chí Khoa học Và Phát triển 2015 13(3), tr 445-454 gm @ II Tiếng Anh co l Ahn YJ, Park SJ Lee SG (2000), "Cordycepin: selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp", m an Lu J Agric Food Chem 48(7), tr 2744-8 n va ac th si 10 Cui DJ (2014), "Biotechnological production and applications of Cordyceps militaris a valued traditional Chinese medicine", Critical Reviews in Biotechnology 35(4) 11 Dai JJ, Fan T Wu CH (2007), "Summarization of the study on the artificial cultivation of Cordyceps militaris Link", J Anhui Agric Sci 35, tr 5469– 5471 12 Das SK, Masuda M Sakurai A (2010), "Medicinal uses of themushroom Cordyceps militaris: current state and prospects", Fito-terapia 81, tr 961968 lu an 13 Dong Jian Cui (2014), "Biotechnological production and applications of n va Cordyceps militaris a valued traditional Chinese medicine", Critical 14 Gao XH, Wu W Qian GC (2000), "Study on influences of abiotic factors on gh tn to Reviews in Biotechnology 35(4), tr 1-10 p ie fruitbody differentiation of Cordyceps militaris", Acta Agric Shanghai 16(93 -98) nl w 15 Gu YX, Wang ZS Li SX (2007), "Effect of multiple factors on accumulation d oa of nucleosides and bases in Cordyceps militaris", Food Chem 102, tr an lu 1304-1309 nf va 16 Hung L T, Keawsompong S Hanh V T (2009), "Effect of Temperature on Cordycepin Production in Cordyceps militaris", Thai Journal of lm ul Agricultural Science 42(4), tr 219-255 tr.501-503 18 Kim HG, Shrestha B z at nh oi 17 Imazeki, Rokuya Yoshio Otani (1988), Fungi of Japan, Yam-kei, Japanese, Lim SY (2006), "Cordycepin inhibits z gm @ lipopolysaccharide-induced inflammation by the suppression of NF-kappaB through Akt and p38 inhibition in RAW 264.7 macrophage cells", Eur J co l Pharmacol 545, tr 192-9 m 19 Kim Jae-Sung, Yingai Jin John J Lemasters (2006), "Reactive oxygen an Lu species, but not Ca2+ overloading, trigger pHand mitochondrial n va ac th si permeability transition-dependent death of adult rat myocytes after ischemia-reperfusion ", Am J Physiol Heart Circ Physiol 290, tr 2024-2034 20 Klaunig J E Kamendulis L M (2004), "The role of oxidative stress in carcinogenesis", Annu Rev Pharmacol Toxicol 44, tr 239-267 21 Khan MA, Tania M Zhang DZ (2010), "Cordyceps mushroom: apotent anticancer nutraceutical", Open Nutraceuticals J 3, tr 179-183 22 Leatherdale D (1970), "The arthropod hosts of entomogenuos fungi in Britain", Entomaphaga 15(419-435) lu an 23 Lee H, Kim YJ Kim HW (2006), "Induction of apoptosis by Cordyceps n va militaris through activation of caspase-3 in leukemia HL60 cells", Biol 24 Li SP, Song ZH Dong TT (2004), "Distinction of water-soluble constituents gh tn to Pharm Bull 29(4), tr 670-674 p ie between natural and cultured Cordyceps by capillary electrophoresis", Phytomedicine 11(684-690) nl w 25 Li SP, Yang FQ Tsim KWK (2006), "Quality control of Cordyceps sinensis, an lu 84 d oa a valued traditional Chinese medicine", J Pharmaceut Biomed 41, tr 1571- nf va 26 Liao Y cộng (2015), "Cordycepin induces cell cycle arrest and apoptosis by inducing DNA damage and up-regulation of p53 in Leukemia lm ul cells", Cell Cycle 14(5), tr 761-671 z at nh oi 27 Russell R Paterson M (2008), "Cordyceps - a traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic bio-factory", Phytochemistry 69, tr 1469 1495 z gm @ 28 Sung G-H, Hywel-Jones NL Sung J-M (2007), "Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi", Studies in Mycology 57, tr co l 5-59 m 29 Sung Jae-Mo (2004), "Cordyceps diversity and its preservation in Korea", an Lu Inoculum - Supplement to My cologia, tr 1-3 n va ac th si 30 Ting-chi Wen cộng (2014), "Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and Cordycepin Production by Cordyceps militaris", Chiang Mai J 41, tr 858-872 31 Tuli H S, Anil K Sharma Sardul Singh (2014), "Optimization of fermentation conditions for cordycepin production using Cordyceps militaris 3936", Journal of Biological and Chemical Sciences 1(1), tr 35-47 32 WINKLER DANIEL (2008), "Yartsa Gunbu (Cordyceps sinensis) and the Fungal Commodification of Tibet’s Rural Economy", Economic Botany 62(3), tr 291–305 lu an 33 WONGSA P, TASANATAI K WATTS (2005), "Isolation and in vitro n va cultivation of the insect pathogenic fungus Cordyceps unilateralis", 34 Yoo HS, SHIN JW CHO JH (2004), "Effects of Cordyceps militaris extract gh tn to Mycological Research 109(8), tr 936-940 p ie on angiogenesis and tumor growth", Acta Pharmacol 25(5), tr 657-665 35 Yue DC, Yang YP Wang SF (1982), "Preliminary study on stroma formation nl w of Cordyceps militaris strain (Briefing)", J Chin Med Mater(05), tr d oa 36 Zhao ZZ, Yuen JPS Wu JL (2006), "A systematic study on confused species an lu of Chinese Materia Medica in the Hong Kong market", Ann Acad Med nf va Singap 35, tr 764-769 37 ZhaoKai, LiYongjian GaoSheng (2015), "Effect of Dongchongxiacao lm ul (Cordyceps) therapy on contrast-induced nephropathy in patients with type2 z at nh oi diabetes and renal insuf ficiency undergoing coronary angiography", J Tradit Chin Med 35(4), tr 422-427 z III Tài liệu INTERNET @ 38 Zhou XX, Meyer CU Schmidtke P (2002), "Effect of cordycepin on gm m co Pharmacol 453, tr 309-317 l interleukin-10 production of human peripheral blood mononuclear cells", Eur J an Lu n va ac th si 39 Nguyễn Lân Dũng, Dương Văn Hợp Phạm Thế Hải (2005), Thần dược Đông Trùng Hạ Thảo, Vietsciences, truy cập ngày 19/05/2016, trang web http://vietsciences.free.fr/timhieu/khoahoc/ykhoa/thanduoc-dongtrunghathao.htm 40 Cho Duck-Hyun, only joyun yijongil (2003), Induction pupa Cordyceps (Cordyceps militaris) in slugs (Allomyrina dichotoma Linnaeus) fruiting bodies, Plant Resources Society of Korea, truy cập ngày 18/05/2016, trang web http://www.happycampus.com/doc/9027837/ lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng khác đến khả sinh trƣởng sợi nấm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGAK FILE TN1 15/ 5/** 2:31 PAGE Ah mt nen den su sinh truong cua soi nam VARIATE V003 TGAK LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 7.57556 3.78778 131.12 0.000 * RESIDUAL 173333 288889E-01 * TOTAL (CORRECTED) 7.74889 968611 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1 15/ 5/** 2:31 PAGE Ah mt nen den su sinh truong cua soi nam an n va tn to MEANS FOR EFFECT CT CT gh NOS 3 p ie TGAK 10.3000 11.6333 12.5333 oa nl w SE(N= 3) 0.981306E-01 5%LSD 6DF 0.339449 - d ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1 15/ 5/** 2:31 PAGE Ah mt nen den su sinh truong cua soi nam nf va an lu F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.98418 0.16997 1.5 0.0001 z at nh oi TGAK GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 11.489 lm ul VARIATE | | | | z m co l gm @ an Lu n va ac th si Thí nghiệm 2: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng khác đến hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGHT FILE TN2 15/ 5/** 2:11 PAGE Ah mt nen den su ht va pt cua mam qua the, nssh VARIATE V003 TGHT SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 4.16222 2.08111 19.11 0.003 * RESIDUAL 653333 108889 * TOTAL (CORRECTED) 4.81555 601944 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE TN2 15/ 5/** 2:11 PAGE Ah mt nen den su ht va pt cua mam qua the, nssh VARIATE V004 CD lu an LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 299.429 149.714 176.60 0.000 * RESIDUAL 5.08665 847774 * TOTAL (CORRECTED) 304.516 38.0644 BALANCED ANOVA FOR VARIATE BE FILE TN2 15/ 5/** 2:11 PAGE Ah mt nen den su ht va pt cua mam qua the, nssh VARIATE V005 BE LN SOURCE OF VARIATION DF d oa nl w SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 12.9903 6.49514 791.03 0.000 * RESIDUAL 492661E-01 821102E-02 * TOTAL (CORRECTED) 13.0396 1.62994 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2 15/ 5/** 2:11 PAGE Ah mt nen den su ht va pt cua mam qua the, nssh MEANS FOR EFFECT CT - nf va an lu TGHT 15.3667 16.4667 17.0000 CD 39.0667 35.7000 25.5000 BE 5.92333 5.08000 3.06000 z at nh oi NOS 3 lm ul CT SE(N= 3) 0.190516 0.531593 0.523164E-01 5%LSD 6DF 0.659024 1.83887 0.180971 - z gm @ ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2 15/ 5/** 2:11 PAGE Ah mt nen den su ht va pt cua mam qua the, nssh STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.77585 0.32998 2.0 0.0030 6.1696 0.92075 2.8 0.0000 1.2767 0.90615E-01 1.9 0.0000 | | | | m an Lu TGHT CD BE GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 16.278 33.422 4.6878 co VARIATE l F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th si Thí nghiệm 3: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng bột nhộng tằm đến khả sinh trƣởng sợi nấm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGAK FILE TN3 15/ 5/** 1:50 PAGE NC ah cua bot nhong tam den kha nang sinh truong cua he soi VARIATE V003 TGAK LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6.34000 2.11333 12.81 0.002 * RESIDUAL 1.32000 165000 * TOTAL (CORRECTED) 11 7.66000 696364 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3 15/ 5/** 1:50 PAGE NC ah cua bot nhong tam den kha nang sinh truong cua he soi lu an MEANS FOR EFFECT CT - va CT n TGAK 10.6667 9.66667 8.70000 10.1667 gh tn to NOS 3 3 p ie SE(N= 3) 0.234521 5%LSD 8DF 0.764749 - oa nl w ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3 15/ 5/** 1:50 PAGE NC ah cua bot nhong tam den kha nang sinh truong cua he soi d F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 9.8000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.83448 0.40620 4.1 0.0023 TGAK nf va an lu VARIATE | | | | z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va ac th si Thí nghiệm 4: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng bột nhộng tằm đến hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGHT FILE TN4 15/ 5/** 2: PAGE Ah bot nhong tam den su ht va pt mam qua the,nssh VARIATE V003 TGHT SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1.01583 338611 4.19 0.047 * RESIDUAL 646666 808333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 1.66250 151136 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE TN4 15/ 5/** 2: PAGE Ah bot nhong tam den su ht va pt mam qua the,nssh VARIATE V004 CD lu an LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 584.367 194.789 625.00 0.000 * RESIDUAL 2.49329 311661 * TOTAL (CORRECTED) 11 586.860 53.3509 BALANCED ANOVA FOR VARIATE BE FILE TN4 15/ 5/** 2: PAGE Ah bot nhong tam den su ht va pt mam qua the,nssh VARIATE V005 BE LN SOURCE OF VARIATION DF d oa nl w SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 51.1958 17.0653 409.56 0.000 * RESIDUAL 333342 416677E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 51.5292 4.68447 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN4 15/ 5/** 2: PAGE Ah bot nhong tam den su ht va pt mam qua the,nssh MEANS FOR EFFECT CT CT NOS TGHT CD BE 16.1333 35.9000 6.20000 16.2333 42.7000 9.63333 3 15.6667 55.3333 11.9333 16.4667 45.2667 10.0000 nf va an lu z at nh oi lm ul SE(N= 3) 0.164148 0.322315 0.117853 5%LSD 8DF 0.535268 1.05104 0.384305 - z gm @ ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 15/ 5/** 2: PAGE Ah bot nhong tam den su ht va pt mam qua the,nssh STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.38876 0.28431 1.8 0.0468 7.3042 0.55827 1.2 0.0000 2.1644 0.20413 2.2 0.0000 | | | | m an Lu TGHT CD BE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 16.125 12 44.800 12 9.4417 co VARIATE l F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th si Thí nghiệm 5: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ đến hình thành phát triển mầm thể, suất sinh học lu an n va ie gh tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGHT FILE TN6 16/ 5/** 3:27 PAGE Ah cua nhiet den su ht va pt mam qua the, nssh VARIATE V003 TGHT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 2.15989 719964 9.08 0.006 * RESIDUAL 634200 792750E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.79409 254008 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CD FILE TN6 16/ 5/** 3:27 PAGE Ah cua nhiet den su ht va pt mam qua the, nssh VARIATE V004 CD LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 411.270 137.090 334.34 0.000 * RESIDUAL 3.28028 410035 * TOTAL (CORRECTED) 11 414.550 37.6864 BALANCED ANOVA FOR VARIATE BE FILE TN6 16/ 5/** 3:27 PAGE Ah cua nhiet den su ht va pt mam qua the, nssh VARIATE V005 BE SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 23.8222 7.94074 177.81 0.000 * RESIDUAL 357269 446586E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 24.1795 2.19814 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 16/ 5/** 3:27 PAGE Ah cua nhiet den su ht va pt mam qua the, nssh MEANS FOR EFFECT CT - p LN d oa nl w TGHT 16.3067 15.4433 16.3000 16.5667 CD 44.1067 54.7667 46.9667 38.5333 BE 8.14000 10.8500 9.46667 7.10000 z at nh oi lm ul NOS 3 3 nf va an lu CT SE(N= 3) 0.162558 0.369700 0.122009 5%LSD 8DF 0.530084 1.20555 0.397859 - z ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 16/ 5/** 3:27 PAGE Ah cua nhiet den su ht va pt mam qua the, nssh gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.50399 0.28156 1.7 0.0063 6.1389 0.64034 1.4 0.0000 1.4826 0.21133 2.4 0.0000 | | | | m co an Lu TGHT CD BE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 16.154 12 46.093 12 8.8892 l VARIATE n va ac th si