Đề cương chi tiết GVHD Vưu Ngọc Dung LỜI CẢM ƠN Đề tài tốt nghiệp này được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Khoa Công Nghệ Sinh Học – Môi trường, Trường Đại học Lạc Hồng dưới sự hướng dẫn của Ths Vưu Ng[.]
LỜI CẢM ƠN Đề tài tốt nghiệp thực Phịng thí nghiệm Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Môi trường, Trường Đại học Lạc Hồng hướng dẫn Ths Vưu Ngọc Dung Ths Mai Hương Trà, Khoa Công Nghệ Sinh Học – Môi trường Trường Đại học Lạc Hồng Để hoàn thành tốt báo cáo nghiên cứu nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ lớn nhiều cá nhân tập thể Chúng xin trân trọng cảm ơn khoa Công nghệ Sinh học Môi trường Trường Đại học Lạc Hồng cho phép thực đề tài Cảm ơn cô Vưu Ngọc Dung cô Mai Hương Trà, người trực tiếp hướng dẫn đề tài nghiên cứu chúng tơi đóng góp nhiều ý kiến tận tình hướng dẫn cho chúng tơi suốt q trình nghiên cứu, trình bày báo cáo Chúng xin chân thành cảm ơn thầy quản lý phịng thí nghiệm khoa Cơng nghệ Sinh học Môi trường - Trường Đại học Lạc Hồng tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ suốt trình nghiên cứu Cảm ơn bạn, anh chị nhóm sinh viên thực tập tốt nghiệp giúp đỡ chúng tơi hồn thành đề tài Và cuối xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè dành cảm thông chia sẻ, giúp đỡ động viên suốt q trình học tập nghiên cứu Chúng tơi xin chân thành cảm ơn! Biên Hòa, ngày 24 tháng 11 năm 2013 Sinh viên MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT LỜI MỞ ĐẦU PHẦN I: PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI 1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI 1.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.5 KẾT CẤU CỦA ĐỀ TÀI PHẦN II: NỘI DUNG CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY TẾ BÀO THỰC VẬT 1.1.1 Khái niệm nuôi cấy mô 1.1.2 Các kỹ thuật nhân giống in vitro 1.1.3 Các bước nhân giống in vitro 1.1.3.1 Tạo thể nhân giống in vitro 1.1.3.2 Nhân giống in vitro 1.1.3.3 Chuyển in vitro vườn ươm 1.1.3.4 Tái sinh hoàn chỉnh in vitro 1.1.4 Một số ưu điểm hạn chế kỹ thuật nhân giống in vitro 1.1.4.1 Ưu điểm 1.1.4.2 Hạn chế 1.1.5 Tầm quan trọng nuôi cấy mô 1.1.5.1 Về mặt lý luận sinh học 1.1.5.2 Về mặt thực tiễn sản xuất 1.2 MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY 1.2.1 Một số loại môi trường thường dùng nuôi cấy mô 1.2.2 Thành phần hóa học mơi trường ni cấy 10 1.2.2.1 Các chất khoáng 11 1.2.2.2 Các Vitamin 11 1.2.2.3 Các chất bổ sung vào môi trường nuôi cấy 11 1.2.2.4 Yếu tố làm đặc môi trường 12 1.2.2.5 Các chất điều hòa sinh trưởng 12 1.2.2.6 Các chất kháng sinh 13 1.2.3 Độ pH môi trường 14 1.3 TỔNG QUAN VỀ LAN GẤM 14 1.3.1 Tình hình sản xuất 14 1.3.2 Nhu cầu thị trường lan 15 1.3.3 Nguồn gốc kỹ thuật trồng lan 16 1.3.3.1 Vị trí phân loại 16 1.3.3.2 Nguồn gốc phân bố 16 1.3.3.3 Đặc điểm hình thái 17 1.3.3.4 Các yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến lan Gấm 17 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ NUÔI CẤY LAN GẤM 18 1.4.1 Trên giới 18 1.4.2 Ở Việt Nam 19 1.4.3 Kết luận 20 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 22 2.1.1 Mẫu mô 22 2.1.2 Dụng cụ - Thiết bị 22 2.1.2.1 Chuẩn bị phòng thí nghiệm 22 2.1.2.2 Chuẩn bị dụng cụ 22 2.1.2.3 Các thao tác phòng cấy 23 2.1.2.4 Điều kiện 24 2.2 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY 24 2.2.1 Môi trường Knudson C 24 2.2.2 Các chất điều hòa sinh trưởng 25 2.2.3 Dịch chiết khoai tây 25 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 25 2.3.2 Bố trí thí nghiệm 26 2.3.2.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp BAP, Kinetin, GA3 tới môi trường tái sinh chồi 26 2.3.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp BAP, NAA tới phát sinh hình thái hệ số nhân chồi 27 2.3.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp NAA, BAP tới phát sinh rễ 29 2.3.3 Xử lý số liệu: 30 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 KẾT QUẢ 31 3.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp BAP, Kinetin, GA3 tới môi trường tái sinh chồi 31 3.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp BAP, NAA tới phát sinh hình thái hệ số nhân chồi 35 3.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng tổ hợp NAA, BAP tới phát sinh rễ 39 3.2 THẢO LUẬN 46 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 4.1 KẾT LUẬN 49 4.2 KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1: Số chồi tái sinh qua giai đoạn Biểu đồ 3.2: Biểu diễn số chồi tái sinh phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy Biểu đồ 3.3: Ảnh hưởng môi trường đến nhân nhanh chồi phát triển chồi Biểu đồ 3.4: Biểu diễn số chồi nhân nhanh phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy Biểu đồ 3.5: Biểu diễn chiều cao chồi phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy Biểu đồ 3.6: Ảnh hưởng môi trưởng đến rễ phát triển rễ Biểu đồ 3.7: Biểu diễn số rễ phụ thuộc vào môi trường nuôi cấy Biểu đồ 3.8: Biểu diễn chiều dài rễ phụ thuộc môi trường nuôi cấy DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Thành phần mơi trường Knusond C Bảng 2.2: Bảng bố trí thí nghiệm phân bố nồng độ BAP Kinetin môi trường tái sinh chồi Bảng 2.3: Bảng bố trí thí nghiệm phân bố nồng độ BAP NAA môi trường nhân nhanh chồi Bảng 2.4: Bảng bố trí thí nghiệm phân bố nồng độ BAP NAA môi trường phát sinh rễ Bảng 3.1: Kếtquả ảnh hưởng mơi trưởng đến tái sinh chồi đến hình thái chồi Bảng 3.2: Kết ảnh hưởng môi trường lên nhân chồi Bảng 3.3: Kết ảnh hưởng mơi trường tới rễ DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata Hình 1.2: Các dạng sản phẩm lan Gấm thô lan Gấm chế biến Hình 1.3: Lan Gấm Hình 2.1: Sơ đồ Phịng ni cấy mơ, Khoa Cơng Nghệ Sinh Học – Mơi Trường Hình 2.2: Nồi hấp Autoclave Hình 2.3: Cân phân tích Hình 3.1: Số chồi hình thành mơi trường TS5 sau 2,4,6 tuần Hình 3.2: Số chồi hình thành mơi trường KC7 sau 2,4,6 tuần Hình 3.4: Sự phát triển rễ sau tuần Hình 3.5: Quy trình vi nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BAP: – Benzylamino – purine IBA: Indol Butyric Acid KT: Forchlorfenuron CĐHST: Chất điều hòa sinh trưởng CĐHSTTV: Chất điều hòa sinh trưởng thực vật GA3: Giberellin A3 NT: Nghiệm thức NAA: Naphthaleneacetic acid 2,4- D: 2,4 – diclorophnoxyacetic acid B1: Thiamin – HCl UV: Ultraviolet (tia cực tím) MT: Mơi trường LỜI MỞ ĐẦU Công nghệ nuôi cấy mô - tế bào thực vật công nghệ quan trọng Cơng nghệ Sinh học, tảng để nghiên cứu áp dụng công nghệ khác lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật du nhập vào nước ta từ năm 1960 miền Nam vào đầu năm 1970 miền Bắc Tuy nhiên từ cuối năm 1980 trở lại công nghệ mô - tế bào phát triển mạnh mẽ nhanh chóng, nhiều phịng thí nghiệm, nghiên cứu xây dựng triển khai hầu khắp tỉnh thành nước Lĩnh vực áp dụng rộng rãi công nghệ nuôi cấy mô - tế bào thực vật lĩnh vực nhân giống, bảo quản nguồn gen trồng Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật không ngừng phát triển đem lại hiệu thiết thực công tác chọn tạo nhân giống giống Những thành tựu góp phần to lớn vào việc thúc đẩy phát triển nơng nghiệp cơng nghệ cao mang tính cạnh tranh thị trường quốc tế Nhiều loài hoa quý phục tráng nhằm bảo tồn giống Như loài hoa khác, hoa lan phục hồi nhiều chủng loại Khơng bảo quản nguồn giống mà thân hoa lan mang lại nhiều lợi ích làm cảnh, chiết xuất dược liệu, làm thuốc, Trên thị trường nay, bên cạnh loài hoa truyền thống, hoa lan ngày ưa chuộng vẻ đại, sang trọng, ưu điểm lâu tàn, hương thơm đặc biệt, đa dạng mà khơng có loại hương liệu nhân tạo sánh Lan Gấm (Anoectochilus sp) ưu điểm trên, cịn có giá trị y học tiềm kinh tế lớn Việc nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Gấm triển khai cung cấp sở khoa học thực tiễn nhằm mục đích đáp ứng nhu cầu số lượng chất lượng giống loài lan cho thị trường nước nước PHẦN I: PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Sự phát triển y học cổ truyền đặc biệt Đông y Trung Quốc khiến cho lan Gấm Anoectochilus formosanus trở thành loài dược liệu quý, đặc biệt Anoectochilus formosanus Hayata lồi có giá trị dược liệu thương mại cao giới Để đáp ứng nhu cầu sử dụng, Trung Quốc đầu tư phát triển công nghiệp Anoectochilus Với nhu cầu nguyên liệu lớn, Trung Quốc tận thu nguồn lan Gấm từ nước khu vực mà chủ yếu Việt Nam Năm 2011, cánh rừng Tây Nguyên, người dân kéo săn tìm lan Gấm để bán cho thương lái Trung Quốc Chỉ thời gian ngắn loài lan có nguy biến khỏi Việt Nam quan chức không vào khôi phục lại nguồn giống Năm 2007, lan Gấm đưa vào Sách Đỏ Việt Nam, xếp hạng EN A1a, c, d Tài liệu nghiên cứu Đài Loan cho biết, lồi quý giá có tác dụng tăng cường sức khỏe, làm khí huyết lưu thơng, chữa trị vết thương rắn độc cắn Có tính kháng khuẩn, chữa bệnh viêm khí quản, viêm gan mãn tính Ngồi dùng chữa thần kinh suy nhược, ho khan, đau họng, cao huyết áp, suy thận, di tinh, đau lưng, phong thấp, tiêu đờm, giải độc, giải nhiệt Dùng (khô, tươi) nấu nước uống chữa đau ngực, đau bụng, tiểu đường, viêm thận, sốt cao, tăng huyết áp, liệt dương, rối loạn chức gan, lách bệnh ung thư…[1] Nhờ quý có tính dược liệu quý nên giá lan Gấm tươi bán thị trường giới từ 200 - 300 USD/kg (thân, rễ, lá, hoa) Cây khơ có giá từ 3.200 USD/kg, thu hái tự nhiên giá cao gấp lần Trung Quốc, Đài Loan, Nhật trồng xuất lan Gấm mang lại nguồn thu lớn Tiềm sản xuất xuất lan Gấm lớn đầu tư mức.[1] Ở Việt Nam việc khai thác mức mà loại lan gần cạn kiệt ngồi tự nhiên Chính để đáp ứng nhu cầu giống với số lượng lớn thị trường người ta áp dụng nhân giống nuôi cấy mô Nhận thức vấn đề góp phần đáp ứng nhu cầu thực tiễn chúng tơi thực đề tài “Vi nhân giống lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata” 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Nhân số lượng lớn lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata, khỏe phát triển tốt điều kiện in vitro 1.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Đối tượng nghiên cứu đề tài lan Gấm Anoectochilus formosanus Hayata Viện Sinh học Nhiệt đới thành phố Hồ Chí Minh cung cấp Phạm vi nghiên cứu đề tài xây dựng quy trình nhân giống lan Gấm từ mẫu in vitro (Cây in vitroTái sinh chồi Nhân chồi Ra rễ Cây ) Đề tài thực Phịng thí nghiệm ni cấy mơ trường Đại học Lạc Hồng Hình 1.1: Lan Gấm Anoectochilusformosanus Hayata 1.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Tổng quan tài liệu Thực nghiệm Bố trí thí nghiệm Ni cấy mơ thực vật Phân tích xử lý số liệu thống kê 1.5 KẾT CẤU CỦA ĐỀ TÀI Gồm chương mục nội dung sơ lược chương mục Chương I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chương II: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chương III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Chương IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ PHẦN II: NỘI DUNG CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT 1.1.1 Khái niệm nuôi cấy mô [2] Nuôi cấy mô, tế bào thực vật kỹ thuật đưa mô, phận tế bào thực vật vào hệ thống vơ trùng có kiểm sốt về: thành phần chất khống, điều hịa sinh trưởng, chất hữu cung cấp cho cây, ánh sáng, nhiệt độ, độ ẩm để mơ, phận sinh trưởng, phát triển theo mục đích người nuôi cấy Kỹ thuật dựa hai nguyên tắc sau: 1.1.1.1 Tính tồn tế bào Mỗi tế bào mang đầy đủ lượng thông tin di truyền thể có khả phát triển thành thể hoàn chỉnh gặp điều kiện thuận lợi Năm 1922 người nuôi đỉnh sinh trưởng tách từ đầu rễ hòa thảo 12 ngày Như vậy, lần tính tồn tế bào chứng minh thực nghiệm Sau 43 năm (năm 1965), nuôi tế bào riêng biệt thuốc tạo thuốc hoàn chỉnh ống nghiệm Kết chứng minh đầy đủ tính toàn tế bào 1.1.1.2 Khả biệt hóa phản biệt hóa tế bào Biệt hóa biến đổi tế bào phơi thể chức Các tế bào dùng ni cấy biệt hóa cấu trúc chức từ tế bào phôi Trong điều kiện thích hợp, làm cho tế bào quay trở lại trạng thái tế bào sinh chúng – tế bào phơi q trình gọi q trình phản biệt hóa Trong thể, loại tế bào có khả biệt hóa, phản biệt hóa triển vọng ni cấy thành cơng khác Những tế bào chuyên hóa chức khó xảy q trình phản biệt hóa, tế bào mạch dẫn hệ thống mạch dẫn thực vật, tế bào thần kinh động vật Người ta kết rằng: tế bào gần với trạng thái tế bào phơi khả ni cấy thành công cao nhiêu Total (Corr.) 58.5793 29 Bảng 4: Bảng trắc nghiệm LSD ảnh hưởng môi trường lên số chồi Multiple Range Tests for SO CHOI by MOI TRUONG -Method: 95.0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -KC0 1.66 X KC1 1.7 X KC2 2.99 KC3 3.5 X KC4 3.8 XX KC5 4.2 X KC6 4.7 KC9 5.33 X KC8 5.55 X KC7 5.55 X X X -Contrast Difference +/- Limits -KC0 - KC1 -0.04 0.442927 KC0 - KC2 *-1.33 0.442927 KC0 - KC3 *-1.84 0.442927 KC0 - KC4 *-2.14 0.442927 KC0 - KC5 *-2.54 0.442927 KC0 - KC6 *-3.04 0.442927 KC0 - KC7 *-3.89 0.442927 KC0 - KC8 *-3.89 0.442927 KC0 - KC9 *-3.67 0.442927 KC1 - KC2 *-1.29 0.442927 KC1 - KC3 *-1.8 0.442927 KC1 - KC4 *-2.1 0.442927 KC1 - KC5 *-2.5 0.442927 KC1 - KC6 *-3.0 0.442927 KC1 - KC7 *-3.85 0.442927 KC1 - KC8 *-3.85 0.442927 KC1 - KC9 *-3.63 0.442927 KC2 - KC3 *-0.51 0.442927 KC2 - KC4 *-0.81 0.442927 KC2 - KC5 *-1.21 0.442927 KC2 - KC6 *-1.71 0.442927 KC2 - KC7 *-2.56 0.442927 KC2 - KC8 *-2.56 0.442927 KC2 - KC9 *-2.34 0.442927 KC3 - KC4 -0.3 0.442927 KC3 - KC5 *-0.7 0.442927 KC3 - KC6 *-1.2 0.442927 KC3 - KC7 *-2.05 0.442927 KC3 - KC8 *-2.05 0.442927 KC3 - KC9 *-1.83 0.442927 KC4 - KC5 -0.4 0.442927 KC4 - KC6 *-0.9 0.442927 KC4 - KC7 *-1.75 0.442927 KC4 - KC8 *-1.75 0.442927 KC4 - KC9 *-1.53 0.442927 KC5 - KC6 *-0.5 0.442927 KC5 - KC7 *-1.35 0.442927 KC5 - KC8 *-1.35 0.442927 KC5 - KC9 *-1.13 0.442927 KC6 - KC7 *-0.85 0.442927 KC6 - KC8 *-0.85 0.442927 KC6 - KC9 *-0.63 0.442927 KC7 - KC8 0.0 0.442927 KC7 - KC9 0.22 0.442927 KC8 - KC9 0.22 0.442927 -* denotes a statistically significant difference Bảng 5: Bảng phân tích Anovar ảnh hưởng môi trường lên chiều cao chồi ANOVA Table for CHIEU CAO CHOI by MOI TRUONG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 24.0585 Within groups 1.5692 20 2.67316 34.07 0.0000 0.07846 Total (Corr.) 25.6277 29 Bảng 6: Bảng trắc nghiệm LSD ảnh hưởng môi trường lên chiều cao chồi Multiple Range Tests for CHIEU CAO CHOI by MOI TRUONG -Method: 95.0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -KC0 3.17 X KC1 3.22 X KC2 4.51 X KC3 4.61 X KC4 4.76 XX KC6 5.22 XX KC5 5.22 XX KC8 5.66 KC7 5.7 X KC9 5.72 X XX -Contrast Difference +/- Limits -KC0 - KC1 -0.05 0.477074 KC0 - KC2 *-1.34 0.477074 KC0 - KC3 *-1.44 0.477074 KC0 - KC4 *-1.59 0.477074 KC0 - KC5 *-2.05 0.477074 KC0 - KC6 *-2.05 0.477074 KC0 - KC7 *-2.53 0.477074 KC0 - KC8 *-2.49 0.477074 KC0 - KC9 *-2.55 0.477074 KC1 - KC2 *-1.29 0.477074 KC1 - KC3 *-1.39 0.477074 KC1 - KC4 *-1.54 0.477074 KC1 - KC5 *-2.0 0.477074 KC1 - KC6 *-2.0 0.477074 KC1 - KC7 *-2.48 0.477074 KC1 - KC8 *-2.44 0.477074 KC1 - KC9 *-2.5 0.477074 KC2 - KC3 -0.1 0.477074 KC2 - KC4 -0.25 0.477074 KC2 - KC5 *-0.71 0.477074 KC2 - KC6 *-0.71 0.477074 KC2 - KC7 *-1.19 0.477074 KC2 - KC8 *-1.15 0.477074 KC2 - KC9 *-1.21 0.477074 KC3 - KC4 -0.15 0.477074 KC3 - KC5 *-0.61 0.477074 KC3 - KC6 *-0.61 0.477074 KC3 - KC7 *-1.09 0.477074 KC3 - KC8 *-1.05 0.477074 KC3 - KC9 *-1.11 0.477074 KC4 - KC5 -0.46 0.477074 KC4 - KC6 -0.46 0.477074 KC4 - KC7 *-0.94 0.477074 KC4 - KC8 *-0.9 0.477074 KC4 - KC9 *-0.96 0.477074 KC5 - KC6 0.0 KC5 - KC7 *-0.48 0.477074 KC5 - KC8 -0.44 0.477074 KC5 - KC9 *-0.5 0.477074 KC6 - KC7 *-0.48 0.477074 KC6 - KC8 -0.44 0.477074 KC6 - KC9 *-0.5 0.477074 KC7 - KC8 0.04 0.477074 KC7 - KC9 -0.02 0.477074 KC8 - KC9 -0.06 0.477074 0.477074 -* denotes a statistically significant difference Bảng 7: Bảng phân tích Anovar ảnh hưởng môi trường lên số rễ ANOVA Table for SO RE by MOI TRUONG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 93.8415 Within groups 52.3002 10.4268 80 0.653752 15.95 0.0000 Total (Corr.) 146.142 89 Bảng 8: Bảng trắc nghiệm LSD ảnh hưởng môi trường lên số rễ Multiple Range Tests for SO RE by MOI TRUONG -Method: 95.0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -ĐC0 1.0 X KR1 1.11667 X KR4 1.28778 XX KR5 1.53333 XXX KR2 1.93333 XX KR9 2.08333 X KR3 2.86667 X KR8 3.48333 XX KR7 3.63333 X KR6 3.73333 X -Contrast Difference +/- Limits ĐC0 - KR1 -0.116667 0.758522 ĐC0 - KR2 *-0.933333 0.758522 ĐC0 - KR3 *-1.86667 0.758522 ĐC0 - KR4 -0.287778 0.758522 ĐC0 - KR5 -0.533333 0.758522 ĐC0 - KR6 *-2.73333 0.758522 ĐC0 - KR7 *-2.63333 0.758522 ĐC0 - KR8 *-2.48333 0.758522 ĐC0 - KR9 *-1.08333 0.758522 KR1 - KR2 *-0.816667 0.758522 KR1 - KR3 *-1.75 KR1 - KR4 -0.171111 0.758522 KR1 - KR5 -0.416667 0.758522 KR1 - KR6 *-2.61667 0.758522 KR1 - KR7 *-2.51667 0.758522 KR1 - KR8 *-2.36667 0.758522 KR1 - KR9 *-0.966667 0.758522 KR2 - KR3 *-0.933333 0.758522 KR2 - KR4 0.645556 KR2 - KR5 0.4 KR2 - KR6 *-1.8 0.758522 KR2 - KR7 *-1.7 0.758522 KR2 - KR8 *-1.55 0.758522 KR2 - KR9 -0.15 0.758522 KR3 - KR4 *1.57889 0.758522 KR3 - KR5 *1.33333 0.758522 KR3 - KR6 *-0.866667 0.758522 KR3 - KR7 *-0.766667 0.758522 KR3 - KR8 -0.616667 0.758522 0.758522 0.758522 0.758522 KR3 - KR9 *0.783333 0.758522 KR4 - KR5 -0.245556 0.758522 KR4 - KR6 *-2.44556 0.758522 KR4 - KR7 *-2.34556 0.758522 KR4 - KR8 *-2.19556 0.758522 KR4 - KR9 *-0.795556 0.758522 KR5 - KR6 *-2.2 0.758522 KR5 - KR7 *-2.1 0.758522 KR5 - KR8 *-1.95 0.758522 KR5 - KR9 -0.55 0.758522 KR6 - KR7 0.1 0.758522 KR6 - KR8 0.25 0.758522 KR6 - KR9 *1.65 0.758522 KR7 - KR8 0.15 0.758522 KR7 - KR9 *1.55 0.758522 KR8 - KR9 *1.4 0.758522 -* denotes a statistically significant difference Bảng 9: Bảng phân tích Anovar ảnh hưởng môi trường lên chiều dài rễ ANOVA Table for CHIEU DAI RE by MOI TRUONG Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 3.627 Within groups 0.66 20 0.403 12.21 0.0000 0.033 Total (Corr.) The StatAdvisor 4.287 29 Bảng 10: Bảng trắc nghiệm LSD ảnh hưởng môi trường lên chiều dài rễ Multiple Range Tests for CHIEU DAI RE by MOI TRUONG -Method: 95.0 percent LSD MOI TRUONG Count Mean Homogeneous Groups -KR1 1.5 X KR0 1.8 XX KR9 1.9 XX KR2 2.0 XXX KR3 2.0 XXX KR4 2.1 XXX KR5 2.2 XXX KR8 2.3 XX KR6 2.5 XX KR7 2.8 X -Contrast Difference +/- Limits -ĐC0 - KR1 0.3 0.309399 ĐC0 - KR2 -0.2 0.309399 ĐC0 - KR3 -0.2 0.309399 ĐC0 - KR4 -0.3 0.309399 ĐC0 - KR5 *-0.4 0.309399 ĐC0 - KR6 *-0.7 0.309399 ĐC0 - KR7 *-1.0 0.309399 ĐC0 - KR8 *-0.5 0.309399 ĐC0 - KR9 -0.1 0.309399 KR1 - KR2 *-0.5 0.309399 KR1 - KR3 *-0.5 0.309399 KR1 - KR4 *-0.6 0.309399 KR1 - KR5 *-0.7 0.309399 KR1 - KR6 *-1.0 0.309399 KR1 - KR7 *-1.3 0.309399 KR1 - KR8 *-0.8 0.309399 KR1 - KR9 *-0.4 0.309399 KR2 - KR3 0.0 0.309399 KR2 - KR4 -0.1 0.309399 KR2 - KR5 -0.2 0.309399 KR2 - KR6 *-0.5 0.309399 KR2 - KR7 *-0.8 0.309399 KR2 - KR8 -0.3 0.309399 KR2 - KR9 0.1 0.309399 KR3 - KR4 -0.1 0.309399 KR3 - KR5 -0.2 0.309399 KR3 - KR6 *-0.5 0.309399 KR3 - KR7 *-0.8 0.309399 KR3 - KR8 -0.3 0.309399 KR3 - KR9 0.1 0.309399 KR4 - KR5 -0.1 0.309399 KR4 - KR6 *-0.4 0.309399 KR4 - KR7 *-0.7 0.309399 KR4 - KR8 -0.2 0.309399 KR4 - KR9 0.2 0.309399 KR5 - KR6 -0.3 0.309399 KR5 - KR7 *-0.6 0.309399 KR5 - KR8 -0.1 0.309399 KR5 - KR9 0.3 0.309399 KR6 - KR7 -0.3 0.309399 KR6 - KR8 0.2 0.309399 KR6 - KR9 *0.6 0.309399 KR7 - KR8 *0.5 0.309399 KR7 - KR9 *0.9 0.309399 KR8 - KR9 *0.4 0.309399 -* denotes a statistically significant difference Bảng 11: Chỉ tiêu theo dõi thí nghiệm Mơi Số mẫu Số mẫu Số mẫu Tỉ lệ mẫu Tổng số chồi Số chồi trường cấy sống sót tái sinh tái sinh (%) tái sinh / mẫu TS0 54 44 34 63 48 1,41 TS1 54 44 36 66,7 104 2,89 TS2 54 45 38 70,34 129 3,4 TS3 54 46 40 74,1 165 4,13 TS4 54 48 45 83,3 211 4,68 TS5 54 53 50 92,6 264 5,27 TS6 54 50 41 75,9 208 5,07 TS7 54 49 40 74,1 197 4,94 TS8 54 47 38 70,4 177 4,66 TS9 54 46 37 68,5 160 4,33 Bảng 12: Số chồi tái sinh qua tuần nuôi cấy Môi trường Số chồi (chồi/ mẫucấy) Sau tuần Sau tuần Sau tuần TS0 1,0 ± 0,27 1,2 ± 0,16 1,42 ± 0,17 TS1 1,57 ± 0,16 2,32 ± 0,23 2,89 ± 0,2 TS2 1,66 ± 0,2 2,67 ± 0,15 3,4 ± 0,38 TS3 1,73 ± 0,2 3,7 ± 0,27 4,13 ± 0,3 TS4 1,9 ± 01 4,1 ± 0,36 4,68 ± 0,2 TS5 2,23 ± 0,15 3,95 ± 0,1 5,27 ± 0,25 TS6 2,18 ± 0,33 3,52 ± 0,17 5,07 ± 0,32 TS7 2,15 ± 0,25 3,46 ± 0,3 4,94 ± 0,23 TS8 2,05 ± 0,09 3,32 ± 0,25 4,66 ± 0,36 TS9 1,94 ± 0,18 3,25 ± 0,3 4,33 ± 0,29 Bảng 13: Chỉ tiêu theo dõi thí nghiệm Số Môi trường mẫu cấy Số mẫu Số mẫu sống sót tạo chồi Tỉ lệ mẫu Tổng số tạo chồi (%) Số chồi chồi tạo / mẫu thành Chiều cao chồi (cm) KC0 54 40 32 59,3 53 1,66 3,17 KC1 54 44 37 68,5 63 1,7 3,22 KC2 54 46 38 70,4 114 2,99 4,51 KC3 54 47 39 72 137 3,5 4,61 KC4 54 49 45 83 171 3,8 4,76 KC5 54 50 47 87 197 4,2 5,22 KC6 54 51 49 90,7 230 4,7 5,22 KC7 54 53 52 96,3 289 5,55 5,7 KC8 54 49 39 72 217 5,55 5,66 KC9 54 45 34 63 181 5,33 5,73 Bảng 14: Kết ảnh hưởng môi trường lên nhân chồi Môi trường Số chồi (chồi/ mẫu cấy) Chiều cao chồi cao đạt (cm) KC0 1,66 ± 0,28 3,17 ± 0,21 KC1 1,7 ± 0,17 3,22 ± 0,24 KC2 2,99 ± 0,02 4,51 ± 0,02 KC3 3,5 ± 0,28 4,61 ± 0,2 KC4 3,8 ± 0,17 4,76 ± 0,27 KC5 4,2 ± 0,2 5,22 ± 0,38 KC6 4,7 ± 0,35 5,22 ± 0,38 KC7 5,55 ± 0,4 5,7 ± 0,27 KC8 5,55 ± 0,25 5,66 ± 0,24 KC9 5,33 ± 0,29 7,72 ± 0,39 Bảng 15: Chỉ tiêu theo dõi thí nghiệm Mơi trường Số mẫu cấy Số mẫu sống sót Số Tỉ lệ Tổng số mẫu mẫu tạo rễ tạo tạo rễ rễ (%) thành Số rễ / mẫu Chiều dài rễ (cm) ĐC0 54 40 34 63 34 1,8 KR1 54 45 38 70,4 38 1,5 KR2 54 46 40 74,1 56 1,4 KR3 54 48 43 79,6 73 1,7 KR4 54 49 45 83 122 2,7 2,1 KR5 54 50 47 87 165 3,5 2,2 KR6 54 51 48 88,9 206 4,3 2,5 KR7 54 54 53 98 239 4,5 2,8 KR8 54 46 39 72 164 4,2 2,3 KR9 54 41 36 66,7 90 2,5 1,9 Bảng 16: Kết ảnh hưởng môi trường tới rễ Chiều dài rễ dài Môi trường Số rễ (rễ/ mẫu cấy) ĐC0 1,0 ± 1,8 ± 0,17 KR1 1,0 ± 0,5 1,5 ±0,18 KR2 1,4 ± 0,5 ± 0,18 KR3 1,7 ± 0,1 ± 0,1 KR4 2,7 ± 0,1323 2,1± 0,28 KR5 3,5 ± 2,2 ± 0,27 KR6 4,3 ± 0,1732 2,5 ± 0,1 KR7 4,5 ± 0,1732 2,8 ± 0,17 KR8 4,2 ± 0,1 2,3 ± 0,17 KR9 2,5 ± 0,1 1,9 ± 0,13 đạt (cm)