Phân lập và hoạt tính kháng viêm một số triterpene từ lá cây dành dành láng gardenia philastrei

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Phân lập hoạt tính kháng viêm số triterpene từ Dành dành láng (Gardenia philastrei) PHẠM HẢI YẾN yen.ph202872m@sis.hust.edu.vn Ngành Kỹ thuật Hóa học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Vũ Đình Hồng Viện: Kỹ thuật Hóa học HÀ NỘI, 10/2022 Chữ ký GVHD CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Phạm Hải Yến Đề tài luận văn: Phân lập hoạt tính kháng viêm số triterpene từ Dành dành láng (Gardenia philastrei) Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số SV: 20202872M Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày 04/10/2022 với nội dung sau: - Loại bỏ phương pháp phổ MS, IR, UV mục Phương pháp nghiên cứu - Ký hiệu lại hợp chất luận văn: GP1, GP2, GP3 thay cho ký hiệu F2Y2.2A, F2Y2.2B, DDF4.36 - Sửa lại tài liệu tham khảo, trích dẫn phù hợp - Thay “ức chế sản xuất” “ức chế sản sinh” (mục 4.2 luận văn) - Bổ sung biện luận phổ DEPT cho hợp chất GP3 - Bổ sung phần hướng phát triển tương lai sửa lại kết luận Ngày 20 tháng 10 năm 2022 Giáo viên hướng dẫn Tác giả luận văn PGS TS Vũ Đình Hồng CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG PGS TS Trần Khắc Vũ Phạm Hải Yến Lời cảm ơn Để hoàn thành tốt luận văn thạc sĩ này, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến PGS.TS Vũ Đình Hồng, thầy giao đề tài, tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt trình làm Luận văn Thạc sĩ Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy Bộ mơn Cơng nghệ Hóa dược Bảo vệ thực vật thầy cô Trường Đại học Bách khoa Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ em trình học tập trường Cuối cùng, em xin cảm ơn NCS Phạm Quang Dương anh, chị em phòng thí nghiệm Trung tâm Phát triển Cơng nghệ Hóa học Nông nghiệp – Trung tâm Phát triển Công nghệ cao - Viện Hàn Lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam bảo, dìu dắt em thời gian nghiên cứu hoàn thành Luận văn Thạc sĩ Tóm tắt nội dung luận văn Đề tài “Phân lập hoạt tính kháng viêm số triterpene từ Dành dành láng (Gardenia philastrei)” tiến hành thu hái mẫu Dành dành láng tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu, Việt Nam Mẫu đem giám định xử lý, sau nghiên cứu theo phương pháp chiết thực vật, phương pháp sắc ký để phân lập hợp chất hữu Cấu trúc hóa học hợp chất xác định nhờ phương pháp phổ đại Sau đó, tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất hữu phân lập Kết nghiên cứu phân lập cycloartane từ Dành dành Các hợp chất đem thử nghiệm hoạt tính kháng viêm Kết cho thấy hợp chất có khả ức chế sản xuất nitric oxide LPS gây đại thực bào RAW 264.7 Kết nghiên cứu đạt mục tiêu đặt ra, đồng thời mang tính thực tiễn có tính áp dụng cho nghiên cứu sau HỌC VIÊN Ký ghi rõ họ tên Phạm Hải Yến MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật họ Rubiaceae chi Gardenia 1.1.1 Họ Rubiaceae 1.1.2 Chi Gardenia 1.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Gardenia 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học 11 1.3 Giới thiệu thành phần cycloartane chi Gardenia 16 1.3.1 Giới thiệu chung 16 1.3.2 Các nhóm cycloartane 17 1.3.3 Hoạt tính sinh học ứng dụng cycloartane 17 1.4 Giới thiệu Dành dành láng (Gardenia philastrei) 19 1.4.1 Đặc điểm thực vật 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu 20 1.5 Giới thiệu kháng viêm 21 1.5.1 Sơ lược viêm 21 1.5.2 Các yếu tố tham gia trình viêm 21 1.5.3 Các thuốc kháng viêm 22 1.5.4 Sản phẩm từ tự nhiên có hoạt tính kháng viêm 23 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Phương pháp chiết hợp chất từ nguyên liệu thực vật 24 2.2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 25 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc 30 2.2.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng viêm 32 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 36 3.1 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 36 3.1.1 Thiết bị 36 3.1.2 Dụng cụ 36 3.1.3 Hóa chất 37 3.2 Xử lý mẫu tạo dịch chiết tổng 37 3.2.1 Xử lý mẫu thực vật 37 3.2.2 Quy trình tạo dịch chiết 37 3.3 Phân tích cặn chiết ethyl acetate sắc ký lớp mỏng (TLC) 38 3.4 Phân lập hợp chất từ cặn chiết ethyl acetate 39 3.5 Hằng số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập 40 3.5.1 Hợp chất GP1 40 3.5.2 Hợp chất GP2 41 3.5.3 Hợp chất GP3 41 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 43 4.1 4.2 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 43 4.1.1 Hợp chất GP1: Coronalolide methyl ester 43 4.1.2 Hợp chất GP2: Sootepin D 46 4.1.3 Hợp chất GP3: Sootepin G 50 Kết thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ G.philastrei 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN 60 PHỤ LỤC 70 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Loài Ixora stricta Roxb thuộc họ Rubiaceae .4 Hình 1.2 Đặc điểm hình thái G jasminoides Hình 1.9 Cycloartane phân lập từ loài G.sessiliflora 17 Hình 1.10 Seco-cycloartane phân lập từ lồi G.sessiliflora .17 Hình 1.3 Một số flavonoid phân lập từ chi Gardenia Hình 1.4 Một số iridoid phân lập từ chi Gardenia Hình 1.5 Một số terpenoid steroid phân lập từ chi Gardenia Hình 1.6 Crocin phân lập từ chi Gardenia 10 Hình 1.7 Một số thành phần hóa học khác thuộc chi Gardenia 11 Hình 1.8 Cấu trúc hóa học cycloartenol 17 Hình 1.11 Một số cycloartane có hoạt tính kháng viêm phân lập từ G.sootepensis 18 Hình 1.12 Seco-cycloartane triterpene phân lập từ lồi G.aubryi 19 Hình 1.13 Một số hình ảnh Dành dành láng 20 Hình 2.1 Mẫu tiêu hoa G.philastrei 24 Hình 4.2 Phổ H-NMR hợp chất GP1 43 13 Hình 4.3 Phổ C-NMR hợp chất GP1 44 Hình 4.1 Cấu trúc hóa học hợp chất GP1 (Coronalolide methyl ester) .46 Hình 4.5 Phổ H-NMR hợp chất GP2 47 Hình 4.6 Phổ H-NMR dãn rộng hợp chất GP2 47 13 Hình 4.7 Phổ C-NMR hợp chất GP2 48 Hình 4.4 Cấu trúc hóa học hợp chất GP2 (Sootepin D) .50 Hình 4.9 Phổ H-NMR hợp chất GP3 51 Hình 4.10 Phổ H-NMR dãn rộng hợp chất GP3 51 13 Hình 4.11 Phổ C-NMR hợp chất GP3 51 Hình 4.12 Phổ DEPT hợp chất GP3 (1) 52 Hình 4.13 Phổ DEPT hợp chất GP3 (2) 52 Hình 4.14 Phổ COSY hợp chất GP3 (1) 53 Hình 4.15 Phổ COSY hợp chất GP3 (2) 53 Hình 4.16 Phổ COSY hợp chất GP3 (3) 54 Hình 4.17 Phổ HMBC hợp chất GP3 (1) 54 Hình 4.18 Phổ HMBC hợp chất GP3 (2) 55 Hình 4.19 Phổ HSQC hợp chất GP3 56 Hình 4.8 Cấu trúc hóa học hợp chất GP3 (Sootepin G) .58 Hình 4.20 Đường chuẩn NaNO2 (µM) 59 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Hệ dung môi khảo sát sắc ký lớp mỏng 38 Bảng 4.1 Bảng so sánh liệu phổ hợp chất GP1 coronalolide methyl ester.44 Bảng 4.2 Bảng so sánh liệu phổ hợp chất GP2 sootepin D .48 Bảng 4.3 Bảng so sánh liệu phổ hợp chất GP3 sootepin G .56 Bảng 4.4 % Kết đánh giá hoạt tính ức chế sản sinh NO tế bào RAW 264.7 hợp chất GP1, GP2, GP3 58 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1 Sơ đồ điều chế cặn chiết Dành dành láng (G.philastrei) 38 Sơ đồ 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ cặn chiết ethyl acetate 40 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT 1H-NMR Proton Magnetic Resonance spectroscopy 13C-NMR Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy DEPT Distoritionless Enhancement by Polirisation Tranfer ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry COSY Correlation Spectroscopy HMBC Hetherronuclear Multiple Bond Coherenceb spectroscopy HSQC Hetherronuclear Single Quantum Coherences spectroscopy IR Infrared Spectroscopy (Phổ hồng ngoại) MS Mass Spectrometry (Phổ khối lượng) s singlet d doublet t triplet q quartet dd double doublet m multiplet ppm part per million J số tương tác spin-spin SKLM Sắc ký lớp mỏng δ Độ dịch chuyển hóa học TLC Thin Layer Chromatography CC Column Chromatography EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol DMSO Dimethylsulfoxide FBS Fetal bovine serum DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium MTT - (4,5 – dimethylthiazol- 2- yl)- 2,5- diphenyl tetrazolium bromid LBS Lipopolysaccharides L-NMMA NG-Methyl-L-arginine acetate HEPES - (2 - hydroxyethyl)- 1- piperazineethanesulfonic acid