Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học ở cây thóc lép desmodium gangeticum l dc

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) CAO SƠN TÙNG Ngành Kỹ thuật hóa học Giáo viên hướng dẫn : TS Nguyễn Tuấn Anh : PGS.TS Lê Minh Hà Viện : Kỹ thuật hóa học HÀ NỘI, 2022 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Cao Sơn Tùng Đề tài luận văn: Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) Chuyên ngành: Kỹ thuật Hóa học Mã số SV: CB190120 Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày tháng năm 2022 với nội dung sau: - Sửa lỗi in ấn tên loài in nghiêng, lỗi tả, lỗi dịch thuật - Sửa số câu văn khoa học dạng chủ động dạng bị động phù hợp với văn phong khoa học, lược bỏ viết ngắn gọn số phần không cần thiết chương (các phương pháp chiết, sắc ký xác định cấu trúc) - Chỉnh sửa bổ sung thêm tài liệu tham khảo - Chỉnh sửa lại sơ đồ (trang 32): chỉnh sửa lại tiêu đề, xem lại việc chiết phân bố với MEOH dịch chiết nước - Chỉnh sửa lại sơ đồ 3(trang 34) sửa hệ dung môi tách cột cặn MEOH ethyl acetate:ethyl acetate thành ethyl acetate:methanol Ngày tháng năm Giáo viên hướng dẫn Tác giả luận văn CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) Giáo viên hướng dẫn LỜI CẢM ƠN Luận văn tốt nghiệp hoàn thành Bộ mơn Cơng nghệ Hố dược Bảo vệ thực vật, Viện Kỹ thuật Hoá học, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội phịng Hóa dược - Viện Hoá học hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn Lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam Với kính trọng lịng biết ơn sâu sắc nhất, em xin chân thành gửi lời cảm ơn tới: - TS Nguyễn Tuấn Anh, Bộ mơn Cơng nghệ hố Dược Bảo vệ thực vật, Viện Kỹ thuật Hoá học, trường Đại học Bách Khoa Hà Nội giao đề tài tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ truyền cho em kinh nghiệm quý báu để em hồn thành tốt đề tài - PGS TS Lê Minh Hà, Phịng Hóa dược, Viện Hố học hợp chất thiên nhiênViện Hàn Lâm Khoa học & Cơng nghệ Việt Nam Người tận tình hướng dẫn, cho em kinh nghiệm làm thực nghiệm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực đồ án tốt nghiệp - ThS Ngọ Thị Phương, Phịng Hóa dược, Viện Hóa học hợp chất thiên nhiênViện Hàn Lâm Khoa học & Công nghệ Việt Nam Người với em suốt thời gian làm thực nghiệm, bảo, hướng dẫn tận tình, giúp đỡ cho em kỹ làm thực tế Em xin chân thành cảm ơn tới thầy, Bộ mơn Cơng nghệ hố Dược Bảo vệ thực vật giúp đỡ em q trình học tập q trình hồn thành luận văn tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn chú, anh chị phịng Hóa dược-Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên, tập thể lãnh đạo Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt q trình làm thực nghiệm Viện Tóm tắt luận văn thạc sĩ Đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) Tác giả luận văn: Cao Sơn Tùng-Khóa: 2019B Người hướng dẫn chính: TS Nguyễn Tuấn Anh Người hướng dẫn phụ: PGS TS Lê Minh Hà Nội dung tóm tắt : a) Lý chọn đề tài Cây Thóc lép vị thuốc nam mọc hoang dã khắp nơi, thuộc chi Thóc lép, nằm họ Đậu Điều bất ngờ lồi hoang dại lại có cơng dụng điều trị bệnh hay Cây thóc lép mọc hoang hóa tỉnh miền núi nước ta, khắp vùng đồi núi từ Bắc trí Nam Các thí nghiệm invivo/invitro chất chiết xuất từ thực vật thuộc chi có sở hữu phạm vi dược lý to lớn cải thiện chức tim mạch, điều hịa, lưu thơng máu, chống viêm, gây độc tế bào, chống nhiễm trùng, trị đái tháo đường, chống ung thư, kháng khuẩn cải thiện hoạt động nootropic Việc nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép góp phần phát đặc tính dược lý hữu ích có Thóc lép, thúc đẩy mạnh mẽ phát triển ngành dược nước nhà b) Mục tiêu, đối tượng nghiên cứu Luận văn: Bằng phương pháp hóa học phân tích cấu trúc thích hợp phân tách hợp chất có giá trị mặt dược lý cao có thành phần Thóc lép c) Nội dung chính: Các nội dung Luận văn bao gồm:  Tổng quan tài liệu (trong nước) họ Fabaceae chi Desmodium, thành phần hóa học hoạt tính sinh học họ chi  Chiết tách cặn chiết khảo sát hoạt tính sinh học cặn chiết tổng Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.)  Phân lập xác định cấu trúc vài hợp chất từ cặn chiết có hoạt tính Thóc lép c) Phương pháp nghiên cứu: Đã sử dụng phương pháp chiết thực vật để tách chất cần phân tích khỏi mẫu vật rắn dung mơi thích hợp Các dịch chiết sau cô quay chân không nhiệt độ phù hợp tiếp tục đưa lên sắc ký cột để phân tách, phân li, phân tích chất dựa vào phân bố khác chúng pha động pha tĩnh Sau phân tách sắc ký cột hợp chất tách đem để kết tinh lại thu hợp chất Đã sử dụng phương pháp phân tích hóa lý đại, bao gồm: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR, phổ chiều HMBC HMQC để xác định cấu trúc hợp chất hữu d) Kết luận: - Đã tổng quan số tài liệu (trong nước) họ Fabaceae chi Desmodium, thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài họ - Đã tiến hành thử tác dụng chống viêm cấp tính, mạn tính độ độc cấp cặn chiết tổng ethanol Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) cho kết khả quan - Từ cặn chiết ethyl acetate Thóc lép phân tách hợp chất Bằng phương pháp phân tích hóa lý đại xác định cấu trúc hợp chất Luteolin Luteolin tetramethyl ether - Từ cặn chiết nước Thóc lép phân tách hợp chất Bằng phương pháp phân tích hóa lý đại xác định cấu trúc hợp chất Protocatechuic acid; (6S,9R)-Roseoside Rutin HỌC VIÊN Ký ghi rõ họ tên Cao Sơn Tùng MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN : TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật họ Fabaceae 1.2 Giới thiệu chung chi Thóc lép (Desmodium) 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học chi Thóc lép (Desmodium) 1.4 Giới thiệu Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) 13 1.4.1 Đặc điểm thực vật 13 1.4.2 Thành phần hóa học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.)………………………………………………………….…………………… 14 1.4.3 Hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) số thuốc dân gian hay sử dụng 16 PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.2 Phương pháp chiết thực vật 21 2.3 Phương pháp sắc ký 22 2.3.1 Đặc điểm chung phương pháp sắc ký 22 2.3.2 Cơ sở phương pháp sắc ký 22 2.3.3 Phân loại phương pháp sắc ký 23 2.3.4 Sắc ký cột 23 2.3.5 Sắc ký lớp mỏng 25 2.4 Phương pháp kết tinh lại 26 2.5 Các phương pháp xác định cấu trúc hợp chất hữu 27 PHẦN : THỰC NGHIỆM 29 3.1 Thu hái xử lý mẫu 29 3.2 Dung môi thiết bị hóa chất 29 3.2.1 Thiết bị 29 3.2.2 Hóa chất 29 3.3 Quy trình chiết xuất phân lập 30 3.4 Đánh giá hoạt tính chống viêm cao chiết phân lập từ Thóc lép 34 Hình 4.3.17 Phổ 13C-NMR hợp chất DG-12 67 Bảng 4.3.5 Bảng so sánh kiện phổ 1H, 13C-NMR hợp chất DG-12 với Rutin C H, ppm (J, Hz) (500MHz, MeOD) 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 1’’’ 2’’’ 3’’’ 4’’’ 5’’’ 6’’’ Rutin [9] DG-12 6,23 (1H, d, 2,0) 6,42 (1H, d, 2,0) 7,69 (1H, d, 2,5) 6,90 (1H, d, 8,5) 7,65 (1H, dd, 8,5, 2,0) 5,13 (1H, d, 7,5) 3,52 3,42 3,30 3,35 3,83 3,57 4,54 (1H, s) 3,65 3,55 3,32 3,46 1,14 (1H, d, 6,0) C, ppm (125MHz, MeOD) 158,51 135,63 179,42 162,97 99,96 166,01 94,88 159,34 105,64 123,14 117,71 145,83 149,80 116,07 123,56 104,71 75,73 78,19 71,41 77,22 68,56 102,42 72,10 72,26 73,95 69,71 17,87 68 H, ppm (J, Hz) (500MHz, MeOD) 6,23 (1H, d, 2,0) 6,42 (1H, d, 2,0) 7,69 (1H, d, 2,0) 6,90 (1H, d, 8,5) 7,65 (1H, dd, 8,5, 2,0) 5,13 (1H, d, 7,0) 3,51 3,42 3,30 3,34 3,83 3,57 4,54 (1H, d, 1,0) 3,65 3,55 3,32 3,47 1,13 (1H, d, 6,0) C, ppm (125MHz, MeOD) 158,53 135,63 179,44 162,99 99,95 166,01 94,87 159,35 105,65 123,15 117,70 145,85 149,81 116,07 123,56 104,71 75,74 78,20 71,41 77,24 68,56 102,42 72,11 72,26 73,94 69,71 17,87 Nhìn vào so sánh kiện phổ thu DG-12 với kiện phổ hợp chất Rutin tài liệu tham khảo [9] thấy hồn tồn trùng khớp Do đó, hợp chất DG-12 xác định Rutin (quercetin-3-O-rutinoside) Hình 4.3.18 Cấu trúc hóa học DG-12 (Rutin) Hoạt tính sinh học Rutin Rutin nghiên cứu có tác dụng dược lý như: kháng khuẩn, chống viêm, hỗ trợ điều trị ung thư, chống tiểu đường [87] 69 KẾT LUẬN Sau thời gian thực luận văn tốt nghiệp với đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.)”, em hoàn thành mục tiêu, nhiệm vụ luận văn đặt thu số kết quả, cụ thể sau: Đã tổng quan số tài liệu (trong nước) họ Fabaceae chi Desmodium, thành phần hóa học hoạt tính sinh học lồi họ Đã tiến hành thử tác dụng chống viêm cấp tính, mạn tính độ độc cấp cặn chiết tổng ethanol Thóc lép (Desmodium gangeticum (L.) DC.) cho kết khả quan Từ cặn chiết ethyl acetate Thóc lép phân tách hợp chất Bằng phương pháp phân tích hóa lý đại xác định cấu trúc hợp chất Luteolin Luteolin tetramethyl ether Từ cặn chiết nước Thóc lép phân tách hợp chất Bằng phương pháp phân tích hóa lý đại xác định cấu trúc hợp chất Protocatechuic acid; (6S,9R)-Roseoside Rutin 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 2006, trang 144-145 [2] Câu chuyện Thóc lép, Báo Vietnamnet, 02/09/2010 [3] Nguyễn Đức Huệ, Các phương pháp phân tích hữu cơ, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội, 2005 [4] Hoàng Minh Châu, Từ Văn Mặc, Từ Vọng Nghi; Cơ sở hóa học phân tích, NXB Khoa học kỹ thuật Hà Nội, 2007 [5] GS.TSKH Nguyễn Bin, Các trình, thiết bị cơng nghệ hóa chất thực phẩm, tập NXB Khoa học kỹ thuật, 2008 [6] Nguyễn Hữu Phú, Hóa lý Hóa keo, NBX Khoa học kỹ thuật, 284-289, 2006 [7] Dương Văn Tuệ, Nguyên Hữu Khuê, Văn Đình Độ, Nguyễn Thị Minh Nguyệt; Thí nghiệm hóa hữu cơ, Đại học Bách Khoa Hà Nội, 1993 [8] “Hướng dẫn thử nghiệm tiền lâm sàng lâm sàng thuốc đông y, thuốc từ dược liệu” Bộ y tế ban hành theo định số 141/QĐ-K2ĐT ngày 27 tháng 10 năm 2015 [9] Nguyễn Thị Bích Hằng cộng sự, Rutin, scutellariosid II leonuisid A phân lập từ vọng cách (Premma corymbosa Rottl.ex Willd), Tạp chí Dược học, số 4, 2008 [10] Judd WS, Campbell CS Kellogg EA, Stevens PF, Donoghue MJ (2002), Hệ thống thực vật: phương pháp phát sinh gen, Sinauer Axxoc, 287-292 [11] Magallón S A., Sanderson M J (2001) “Absolute diversification rates in angiosperm clades” , 1762–1780 [12] Burkart, 1987, từ điển bách khoa Argentina de Agricultura y Jardinería ,trang 467-538 [13] Lewis G., B Schrire, B MacKinder, M Lock (chủ biên) 2005 Legumes of the world Vườn thực vật Hoàng gia Kew, Vương quốc Anh 71 [14] Pires Lima LC, de Queiroz LP, de Azevedo Tozzi AMG, Lewis GP (2014) "A Taxonomic Revision of Desmodium (Leguminosae, Papilionoideae) in Brazil" 169 [15] Xueqin Ma, Chengjian Zheng, Changling Hua, Khalid Rahmand, Luping Qin ; The genus Desmodium (Fabaceae)-traditional uses in Chinese medicine, phytochemistry and pharmacology ; Journal of Ethnopharmacology 138 (2011) 314–332 [16] Li, C., Zhang, Q., Huang, Z., Chen, Q., Yao, R., 2010 Chemical constituents of Desmodium sambuense ZhongGuo Zhong Yao Za Zhi 35, 2420–2423 [17] Zhao, M., Duan, J.-A., Che, C.-T., 2007 Isoflavanones and their O-glycosides from Desmodium styracifolium Phytochemistry 68, 1471–1479 [18] Editorial Committee of Jiangsu New Medical College, 1977 Dictionary of Chinese Medicinal Materials Shanghai Science and Technology Press, Shanghai, pp 2512, 4106, 4294 [19] Hamilton, M.L., Caulfield, J.C., Pickett, J.A., Hooper, A.M., 2009 CGlucosylflavonoid biosynthesis from 2-hydroxynaringenin by Desmodium uncinatum (Jacq.) (Fabaceae) Tetrahedron Letters 50, 5656–5659 [20] Hooper, A.M., Hassanali, A., Chamberlain, K., Khan, Z., Pickett, J.A., 2009 New genetic opportunities from legume intercrops for controlling Striga spp parasitic weeds Pest Management Science 65, 546–552 [21] Mishra, P.K., Singh, N., Ahmad, G., Dube, A., Maurya, R., 2005 Glycolipids and other constituents from Desmodium gangeticum with antileishmanial and immunomodulatory activities Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15, 4543–4546 [22] Delle Monache, G., Botta, B., Vinciguerra, V., de Mello, J., de Andrade Chiappeta, A., 1996 Antimicrobial isoflavanones from Desmodium canum Phytochemistry 41, 537–544 72 [23] Botta, B., Gacs-Baitz, E., Vinciguerra, V., Delle Monache, G., 2003 Three isoflavanones with cannabinoid-like moieties from Desmodium canum Phytochemistry 64, 599–602 [24] Tsanuo, M.K., Hassanali, A., Hooper, A.M., Khan, Z., Kaberia, F., Pickett, J.A., Wadhams, L.J., 2003 Isoflavanones from the allelopathic aqueous root exudate of Desmodium uncinatum Phytochemistry 64, 265–273 [25] Yang, J.S., Su, Y.L., Wang, Y.L., 1993 Studies on the chemical constituents of Desmodium styracifolium (Osbeck) Merr Yao Xue Xue Bao 28, 197– 201 [26] Ghosal, S., Mazumder, U.K., Mehta, R., 1972b Indole bases of Desmodium gyrans Phytochemistry 11, 1863–1864 [27] Fenglian, C., Shilling, W., Honghua, X., 2005 Analysis ofthe volatile oil from Desmodium styracifolium (Osbeck) Merr by gas chromatography–mass spectrometry Guangzhou University of Chinese Medicine 22, 302–303 [28] Li, X.L., Wang, H., Liu, G., Zhang, X.Q., Ye, W.C., Zhao, S.X., 2007 Study on chemical constituents from Desmodium styracifolium Zhong Yao Cai 30, 802– 805 [29] Zhuo, L., Yan, D., Ning, W., Nan, W., Jin-hui, W., Xian, L., 2005 Chemical studies on the constituents of Desmodium styracifolium (Osb.) Merr Journal of Shenyang Pharmaceutical University 6, 422–425 [30] Mao, S., Li, Z., Li, C., 2007b Studies on the chemical constituents of Demodium microphyllum Chinese Traditional and Herbal Drugs 38, 1157–1159 [31] Sinha, M.P., Tiwari, R.D., 1970 The structure of a galactomannan from the seeds of Desmodium pulchellum Phytochemistry 9, 1881–1883 [32] Editorial Committee of Fujian Institute of Chinese Medicine, 1994 Fujian Materia Medica Fujian Science and Technology Press, Fuzhou, pp (vol II) 519, 520, (vol I) 205, 312, 326, 327, 328, 332 73 [33] Editorial Committee of Hunan Institute of Traditional Chinese Medicine Hospital, 1962 Hunan Materia Medica Hunnan People’s Press, Changsha, pp (vol III) 36, 516, (vol I) 53 [34] Editorial Committee of Zhejiang Medicinal Flora, 1980 Zhejiang Medicinal Flora Zhejiang Science and Technology Press, Hangzhou, pp (vol I) 576, 577, 578, 580, 581, 582 [35] Editorial Committee of Guizhou Institute of ChineseMedicine, 1970.Medicinal herbs of Guizhou Guizhou People’s Press, Guiyang, pp (vol I) 91, 93, 823, (vol II) 836, 887 [36] Editorial Committee of Guizhou Institute of Chinese Medicine, 1965 Guizhou Folk Medicine Guizhou People’s Press, Guiyang, pp (vol I) 30, 31, 234, 391 [37] Editorial Committee of Zhonghua Bencao National Traditional Chinese Herb Administration, 1996 Zhonghua Bencao (Chinese Herbal Medicine) Shanghai Science and Technology Publishing House, Shanghai, pp 3120–3343 [38] Gan, W.S., 1967 Tanwang Medicinal Flora National Research Institute of Chinese Medicine, Taibei [39] Editorial Committee of Quan Guo Zhong Cao Yao, 1996 Quan Guo Zhong Cao Yao People’s Medical Publishing House, Beijing, pp 1028, 1109, 1253, 1547, 1882, 2770–2775 [40] Pushpesh Kumar Mishra, Nasib Singh, Ghufran Ahmad, Anuradha Dubeb and Rakesh Mauryaa ; Glycolipids and other constituents from Desmodium gangeticum with antileishmanial and immunomodulatory activities ; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 15 (2005) 4543–4546 [41] Avasthi, B.K., Tewari, J.D., 1955a Chemical investigation of Desmodium gangeticum II Chemical constitution of the lactone Journal of the American Pharmaceutical Association 44, 628–629 [42] Avasthi, B.K., Tewari, J.D., 1955b A preliminary phytochemical investigation of Desmodium gangeticum DC I Journal of the American 74 Pharmaceutical Association, American Pharmaceutical Association (Baltimore) 44, 625–627 [43] Avasthi, B.K., Tewari, J.D., 1955c Chemical studies on Desmodium gangeticum seeds Archiv der Pharmazi [44] Ghosal, S., Banerjee, P.K., 1969 Alkaloids of the roots of Desmodium gangeticum Australian Journal of Chemistry 22, 2029–2031 [45] Purushothaman, K.K., Chandrasekharan, S., Balakrishna, K., Connolly, J.D., 1975 Gangetinin and desmodin, two minor pterocarpanoids of Desmodium gangeticum Phytochemistry 14, 1129–1130 [46] Purushothaman, K.K., Kishore, V.M., Narayanaswamy, V., Connolly, J.D., 1971 The structure and stereochemistry of gangetin, a new pterocarpan from Desmodium gangeticum (Leguminosae) Journal of Chemical Society 13, 2420– 2422 [47] Ingham, J.L., Dewick, P.M., 1984 The structure of desmocarpin, a pterocarpan phytoalexin from Desmodium gangeticum Journal of Biosciences 39, 531–534 [48] Rastogi, S.C., Tiwari, G.D., Srivastava, K.C., Tewari, R.D., 1971 Phospholipids from the seeds of Desmodium gangeticum Planta Medica 20, 131– 132 [49] Mukat, B., Varshney, A., 1986 5-sterols from the Desmodium species Indian Drugs 23, 434–435 [50] Yadava, R.N, Reddy, K.S., 1998 A new 8-C-prenyl-5,7,5 -trimethoxy-3 ,4 methylenedioxy flavone of Desmodium gangeticum DC Journal of Institute of Chemists 70, 213–214 [51] Yadava, R.N., Tripathi, P., 1998 A novel flavone glycoside from the stems of Desmodium gangeticum Fitoterapia 69, 443–444 [52] Behari, M., Varshney, A., 1986 Sterols from Desmodium species Indian Drugs 23, 434–435 75 [53] Varaprasad,M.V., Balakrishna, K., Sukumar, E., Patra, A., 2009 Gangetial, a new pterocarpan from the roots of Desmodium gangeticum Journal of the Indian Chemical Society 86, 654–656 [54] Iwu, M.M., Jackson, J.E., Tally, J.D., Klayman, D.L., 1992 Evaluation of plant extracts for antileishmanial activity using a mechanism-based radiorespirometric microtechnique (RAM) Planta Medica 58, 436–441 [55] Singh, N., Mishra, P.K., Kapil, A., Arya, K.R., Maurya, R., Dube, A., 2005 Efficacy of Desmodium gangeticum extract and its fractions against experimental visceral leishmaniasis Journal of Ethnopharmacology 98, 83–88 [56] Govindarajan, R., Rastogi, S., Vijayakumar,M., Shirwaikar, A., Rawat, A.K.S.,Mehrotra, S., Pushpangadan, P., 2003 Studies on the antioxidant activities of Desmodium gangeticum Biological and Pharmaceutical Bulletin 26, 1424– 1427 [57] Govindarajan, R., Vijayakumar, M., Rao, Ch.V., Shirwaikar, A., Kumar, S., Rawat, A.K.S., Pushpangadan, P., 2007b Antiinflammatory and antioxidant activities of Desmodium gangeticum fractions in carrageenan-induced inflamed rats Phytotherapy Research 21, 975–979 [58] Govindarajan, R., Vijayakumar, M., Shirwaikar, A., Rawat, A.K.S., Mehrotra, S., Pushpangadan, P., 2006 Antioxidant activity of Desmodium gangeticum and its phenolics in arthritic rats Acta Pharmaceutica 56, 489–496 [59] Kurian, G.A., Rajamani, T., Ramanarayanan, P., Paddikkala, J., 2009a A comparative study on in vitro and in vivo antioxidant activities of aqueous extract of Desmodium gangeticum (Leguminosae) root International Journal of Green Pharmacy 3, 324–331 [60] Niranjan, A., Tewari, S.K., 2008 Phytochemical composition and antioxidant potential of Desmodium gangeticum (Linn.) DC Natural Product Radiance 7, 35– 39 76 [61] Rathi, A., Rao, Ch.V., Ravishankar, B., Deb, S., Mehrotra, S., 2004 Antiinflammatory and anti-nociceptive activity of the water decoction Desmodium gangeticum Journal of Ethnopharmacology 95, 259–263 [62] Ghosh, D., Anandakumar, A., 1983 Anti-inflammatory and analgesic activities of gangetin—a pterocarpanoid fromDesmodium gangeticum Indian Journal of Pharmacology 15, 391–402 [63] Kirtikar, K.R., Basu, B.D., 1987 Indian Medicinal Plants, vol I., 2nd ed International Book Distributors, Dehradun, India, pp 756–760 [64] Kurian, G.A., Philip, S., Varghese, T., 2005 Effect of aqueous extract of the Desmodium gangeticum DC root in the severity of myocardial infarction Journal of Ethnopharmacology 97, 457–461 [65] Kurian, G.A., Yagnesh, N., Kishan, R.S., Paddikkala, J., 2008 Methanol extract of Desmodium gangeticum roots preserves mitochondrial respiratory enzymes, protecting rat heart against oxidative stress induced by reperfusion injury Journal of Pharmacy and Pharmacology 60, 523–530 [66] Kurian, G.A., Selvamb, G.S., Saranyab, V., 2009b Oral administration of insulin mixed Desmodium gangeticum root aqueous extract reduces oxidative stress mediated by myocardial ischemia reperfusion in isolated rat hearts Journal of Pharmacy Research 2, 1013–1018 [67] Kurian, G.A., Shabi, M.M., Paddikkala, J., 2010a Cardiotonic and anti ischemic reperfusion injury effect of Desmodium gangeticum root methanol extract Turkish Journal of Biochemistry 35, 83–90 [68] Kurian, G.A., Srivats, R.S.S., Gomathi, R., Shabi, M.M., Paddikkala, J., 2010b Interpretation of inotropic effect exhibited by Desmodium Gangeticum chloroform root extract through GSMS and atomic Mass spectroscopy; Evaluation of its antiischemia reperfusion property in isolated rat heart Asian Journal of Biochemistry 5, 23–32 77 [69] Kurian, G.A., Suryanarayanan, S., Raman, A., Padikkala, J., 2010c Antioxidant effects of ethyl acetate extract of Desmodium gangeticum root on myocardial ischemia reperfusion injury in rat hearts Chinese Medicine 5, [70] Kurian, G.A., Paddikkala, J., 2009 Administration of aqueous extract of Desmodium gangeticum (L) root protects rat heart against ischemic reperfusion injury induced oxidative stress Indian Journal of Experimental Biology 47, 129– 135 [71] Kurian, G.A., Paddikkala, J., 2010 Oral delivery of insulin with Desmodium gangeticum root aqueous extract protects rat hearts against ischemia reperfusion injury in streptozotocin induced diabetic rats Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 3, 94–100 [72] Govindarajan, R., Asare-Anane, H., Persaud, S., Jones, P., Houghton, P.J., 2007a Effect of Desmodium gangeticum extract on blood glucose in rats and on insulin secretion in vitro Planta Medica 73, 427–432 [73] Dharmani, P., Mishra, P.K., Maurya, R., Chauhan, V.S., Palit, G., 2005 Desmodium gangeticum: a potent anti-ulcer agent Indian Journal of Experimental Biology 43, 517–521 [74] Joshi, H., Parle, M., 2006 Antiamnesic effects of Desmodium gangeticum in mice Yakugaku Zasshi 126, 795–804 [75] Prasad, M.V.V., Balakrishna, K., Carey, M.W., 2005 Hepatoprotective activity of roots of Desmodium gangeticum (Linn.) DC Asian Journal of Chemistry 17, 2847–2849 [76] Lie-Chwen Lin, Yu-Feng Pai, Tung-Hu Tsai, Isolation of Luteolin and Luteolin-7-O-glucoside from Dendranthema morifolium Ramat Tzvel and Their Pharmacokinetics in Rats, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2015, 63(35) [77] Isaac A Adedara, Denis B Rosemberg, Diogo O Souza, Ebenezer O Farombi, Michael Aschner, Joao B.T Rocha, Neuroprotection of luteolin against 78 methylmercury-induced toxicity in lobster cockroach Nauphoeta cinerea, Environmental Toxicology and Pharmacology, Vol 42, 2016, 243-251 [78] Cheng-Wei Liu, Hui-Wen Lin, Deng-Jye Yang, Shih-Yin Chen, Jung-Kai Tseng, Tien-Jye Chang, Yuan-Yen Chang, Luteolin inhibits viral-induced inflammatory response in RAW264.7 cells via suppression of STAT1/3 dependent NF-κB and activation of HO-1, Free Radical Biology and Medicine, Vol.95, 2016, 180-189 [79] Valdir A Facundo, Selene M Morais, Raimundo Braz Filho*, CONSTITUINTES FLORESTA QMICOS AMAZƠNICA – DE Ottonia ATRIBUIÇÃO corcovadensis MIQ DA DOSDESLOCAMENTOS QUÍMICOS DOS ÁTOMOS DE HIDROGÊNIO E CARBONO, Quim Nova, Vol 27, No 1, 79-83, 2004 [80] Yeo D, Rita Bouagnon, Bernard Nazaire Djyh, Chonta Tuo and Jean David N’guessan (2012) Acute and subacute toxic stuydy of aqueous leaf extract of combretum molle Tropical Journal of Pharmaceutical Research April, 11(2): 217-223 [81] Frédéri NK, Bléyéré Nahounou Mathieu, Kouakou Kouakou Léandrl, Abo Kouakou Jean Claude, Yapo Angoué Paul, Ehilé Ehouan Etienne (2013) Acute Toxicity in Mice and Effects of a Butanol Extract from the Leaves of Blighia Unijugata Bak (Sapindaceae) on Electrocardiogram of Rabbits Sch Acad J Pharm, 2(6):429-435 [82] Traore A, Sylvin Ouedraogo, Adama Kabore, Hamidou H Tamboura and I Pierre Guissou (2014) The acute toxicity in mice and the in vitro anthelminthic effects on Haemonchus contortus of extracts from three plants (Cassia ieberiana, Guiera senegalensis and Sapium grahamii) used in traditional medicine in Burkina Faso Annals of Biological Reasearch, (2) : 21-46 [83] Akhila JS, Deepa S, Alwar MC (2007) Acute toxicity studies and determination of median lethal dose Curr Sci, 93 : 917-920 79 [84] OECD (Organization for Economic Cooperation and Development) (2008) OECD guidelines for testing of chemicals Section 4, health effects: Test No 425: Acute oral toxicity: Up-and-down procedure [85] Chi-Ren Liao, Yueh-Hsiung Kuo, Yu-Ling Ho, Ching-Ying Wang, Chang Syun Yang, Cheng-Wen Lin, Yuan-Shiun Chang, Studies on Cytotoxic Constituents from the Leaves of Elaeagnus oldhamii Maxim in Non-Small Cell Lung Cancer A549 Cells, Molecules, 2014, 19, 9515-9534 [86] N.Z Mamadalievaa*, F Sharopovb, J-P Giraultc, M Winkb and R Lafontd, Phytochemical analysis and bioactivity of the aerial parts of Abutilon theophrasti (Malvaceae), a medicinal weed, Nat Prod Res 2014;28(20):1777-9 [87] Beatriz Gullón, Thelmo A.Lú-Chau, María Teresa Moreira, Juan M.Lema, Gemma Eibes Rutin: A review on extraction, identification and purification methods, biological activities and approaches to enhance its bioavailability, Trends in Food Science & Technology, Volume 67, September 2017, Pages 220-235 [88] Abdul Rahim, Md.Golam Mostofa, Md Golam Sadik, Md Aziz Abdur Rahman, Md.Ibrahim Khalild, Toshifumi Tsukahara, KyoKo Nakagawa-Goto, AHM Khurshid Alam, The anticancer activity of two glycosides from the leaves of Leea aequata L., Natural Product Research, February 2022 [89] Heena Khan, Amarjot Kaur Grewal, Manish kumar, Thakur Gurjeet Sing, Pharmacological Postconditioning by Protocatechuic Acid Attenuates Brain Injury in Ischemia–Reperfusion (I/R) Mice Model: Implications of Nuclear Factor Erythroid-2-Related Factor Pathway, Neuroscience Volume 491, 21 May 2022, Pages 23-31 [90] Wu-Joo Lee, Seong-Ho Lee, Protocatechuic acid protects hepatocytes against hydrogen peroxide-induced oxidative stress, Current Research in Food Science Volume 5, 2022, Pages 222-227 80 81