Thẩm định quy trình định lượng hoạt chất viên nén paracetamol 500 mg bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử uv vis

  BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT Y- DƯỢC ĐÀ NẴNG KHOA DƯỢC BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM THUỐC BÀI TIỂU LUẬN THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 mg BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ PHÂN TỬ UV-VIS Giảng viên hướng dẫn : Ths Ds Huỳnh Thị Anh Thư  Lớp : ĐH Dược 07A Sinh viên thực : Nhóm – Tổ Đà Nẵng, tháng năm 2023   BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT Y- DƯỢC ĐÀ NẴNG KHOA DƯỢC BỘ MÔN KIỂM NGHIỆM THUỐC BÀI TIỂU LUẬN THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT VIÊN NÉN PARACETAMOL 500mg BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP PHỤ PHÂN TỬ UV- VIS Giảng viên hướng dẫn : Ths Ds Huỳnh Thị Anh Thư  Danh sách nhóm 1- Tổ – ĐH Dược 07A Lê Phước Khánh Hoài Nguyễn Hữu Gia Huy Nguyễn Thị Hà Giang Vũ Ngọc Bảo Kim Đà Nẵng, tháng năm 2023   BÁO CÁO THỰC TẬP KIỂM NGHIỆM DƯỢC PHẨM II THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG HOẠT CHẤT VIÊN NÉN PARACETAMOL 500 mg BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG Công thức viên nén Paracetamol 500 mg Thành phần Khối lượng (mg) 500,00 79,00 65,50 5,00 3,00 0,50 Paracetamol Lactose Tinh bột sắn Dextrin Talc Magnesi stearat I Lý thuyết Định lượng Paracetamol viên nén Paracetamol 500 mg phương pháp đo quang Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng khoảng 0,075 g paracetamol vào  bình định mức 100 ml, thêm 25 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT) và 50 ml nước, lắc 15 phút, thêm nước đến định mức Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô,  bỏ 20 ml dịch lọc đầu Lấy xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 50 ml Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc Đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng 257 nm, dùng cốc dày cm Mẫu trắng dung dịch natri hydroxyd 0,01 M (TT) Tính hàm lượng paracetamol, C8H9 NO2  theo A(1%, cm) Lấy 715 giá trị A(1%, cm) bước sóng 257 nm Yêu cầu: Hàm lượng paracetamol, C 8H9 NO2 từ 95,0 đến 105,0% so với hàm lượng ghi nhãn Các tiêu yêu cầu STT Chỉ tiêu Tính đặc hiệu Yêu cầu - Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV mẫu chuẩn Paracetamol (có cực đại hấp thụ khoảng 257± 2nm) - Độ hấp thụ mẫu placebo ≤ 2% so với mẫu có hoạt chất   Độ thích hợp hệ thống Độ tuyến tính Độ Khoảng xác định Tỷ lệ thu hồi khoảng 98% - 102% Khoảng xác định nằm khoảng tuyến tính đạt độ Độ xác (Độ lặp lại) - % Hàm lượng mẫu thử đạt chuyên luận - RSD ≤ 2% Cách tiến hành STT Chỉ tiêu Tính đặc hiệu Độ thích hợp hệ thống Độ tuyến tính - Cực đại hấp thụ khoảng 257± 2nm - RSD giá trị mật độ quang ≤ 2% Hệ số tương quan r ≥ 0,995 Độ Khoảng xác định Độ xác (Độ lặp lại) Thực mẫu - Mẫu trắng - Mẫu placebo - Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5µg/ml - Mẫu thử/ Mẫu tự tạo (chuẩn + placebo) - Mẫu chuẩn Paracetamol 7,5µg/ml (100%) - Mẫu chuẩn/ Mẫu tự tạo Paracetamol nồng độ tương ứng 70%, 90%, 100%, 120%, 130% - Mẫu tự tạo 80%, 100%, 120% (mỗi nồng độ mẫu) - Mẫu thử nồng độ 100% II Chuẩn bị, pha mẫu Pha mẫu trắng NaOH 0,01M - Cân xác 1,000g NaOH cho vào cốc có mỏ, thêm vào khoảng 60 ml nước cất, khuấy cho tan chuyển hết dung dịch vào bình định mức dung tích 250 ml - Tráng cốc nước cất lần đổ hết dịch tráng cốc vào bình định mức Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều, ta dung dịch NaOH 0,1 M - Lấy xác ml từ dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước cất vừa đủ đến vạch, lắc đều, ta thu dung dịch NaOH 0,01 M  làm mẫu trắng Pha mẫu chuẩn   Pha dãy chuẩn mức nồng độ 70% (C1), 90% (C2), 100% (C3), 120% (C4), 130% (C5) - Cân xác 0,0750g bột Paracetamol chuẩn cho vào bình định mức 100 ml, thêm 25 ml dung dịch NaOH 0,1 M 50 ml nước, lắc 15 phút Bổ sung nước vừa đủ đến định mức - Lắc dung dịch trên, lọc qua giấy lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu - Lấy xác ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc thu dung dịch (1) - Lấy xác ml dung dịch (1) cho vào bình định mức 50 ml, cho thêm ml dung dịch NaOH 0,1 M, thêm nước vừa đủ định mức Thu dung dịch tương ứng với nồng độ paracetamol 7,5 μg/ml (nồng độ 100%) mẫu chuẩn C3 - Pha dung dịch Paracetamol chuẩn 70% Hút xác 3,5ml dung dịch cho vào bình định mức 50ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc - Pha dung dịch Paracetamol chuẩn 90% Hút xác 4,5ml dung dịch cho vào bình định mức 50ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc - Pha dung dịch Paracetamol chuẩn 120% Hút xác 6,0 ml dung dịch cho vào bình định mức 50ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc - Pha dung dịch Paracetamol chuẩn 130% Hút xác 6,5 ml dung dịch cho vào bình định mức 50ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc Vậy ta pha dãy chuẩn mức nồng độ 70% (C1), 90% (C2), 100% (C3), 120% (C4), 130% (C5) Pha mẫu placebo - Cân tá dược (gấp 20 lần so với công thức) Tá dược Khối lượng công thức Khối lượng cần cân Lactose 79,00 mg 1,58 g Tinh bột sắn 65,50 mg 1,31 g Dextrin 5,00 mg 0,10 g Talc 3,00 mg 0,06g Magnesi stearat 0,50 mg 0,01g - Trộn tá dược cân cối chày theo nguyên tắc trộn bột kép   - Tính lượng tá dược cần để pha mẫu placebo: 500 mg Paracetamol ứng với 153 mg tá dược 75mg Paracetamol tương ứng với 22,95 mg tá dược - Lượng tá dược để pha vào bình định mức 100 ml 0,02295 g Cân xác 0.023 g tá dược (placebo) vào bình định mức 100 ml, thêm 25 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT) và 50 ml nước, lắc 15 phút, thêm nước đến định mức Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Lấy xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 50 ml Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc Lấy xác ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M  (TT), thêm nước đến định mức, lắc Pha mẫu tự tạo -  Mẫu tự tạo = mẫu chuẩn + placebo - Cân lần : lần gồm ( mẫu chuẩn + placebo) + Mẫu chuẩn : Cân xác lượng khoảng 0,075g paracetamol chuẩn + Placebo : Cứ 500mg paracetamol – 153mg tá dược (placebo)   => Cứ 0,075g paracetamol – 0,02295g tá dược (placebo) - Trộn paracetamol chuẩn bột tá dược lần cân 1, cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 25 ml dung dịch NaOH 0,1 M 50 ml H2O vào bình, lắc kỹ 15 phút cho tan hết, sau thêm nước đến định mức Lắc đều, lọc dung dịch qua giấy lọc khô, bỏ 20 ml dịch lọc đầu, thu dịch lọc (A) - Lấy xác 5ml dịch lọc (A) cho vào bình định mức 50 ml, thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc đều, thu dung dịch (B) - Lấy xác 5ml dung dịch (B) cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dd NaOH 0,1 M thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc  có MTT 100% ->  Tương tự với lần tiếp theo  có MTT 100% - Pha MTT 80%: Hút 4ml dung dịch B* cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dd NaOH 0,1 M thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc  có MTT 80% ->  Làm với lần tiếp theo  có MTT 80% - Pha MTT 120%: Hút 6ml dung dịch B* cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dd NaOH 0,1 M thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc  có MTT 120% ->  Làm với lần tiếp theo  có MTT 120% - Khối lượng cân thực tế bột placebo bột paracetamol chuẩn cho mẫu thử: Mẫu Khối lượng paracetamol chuẩn (g) Khối lượng tá dược (g)   0,0735 0,0230 0,0740 0,0228 0,0743 0,0229 Pha mẫu thử: - Khối lượng 20 viên cân được: m = 11,9134 (g) - Khối lượng trung bình 20 viên:   ̅ ≈ 0.5957g - Tính lượng bột viên tương ứng với khoảng 0,075g paracetamol: 500mg Paracetamol ứng với 0.5957g bột thuốc 75mg Paracetamol tương ứng với 0.08935g bột thuốc - Cân xác khoảng 0,089g bột thuốc cho vào bình định mức 100ml, thêm 25 ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT) 50 ml nước, lắc 15 phút, thêm nước đến vạch định mức Lắc đều, lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20 ml dịch lọc đầu - Lấy xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 50 ml Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc - Lấy xác ml dung dịch cho vào bình định mức 50 ml, thêm ml dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT), thêm nước đến định mức, lắc - Tiến hành cân mthử (lượng bột thuốc ) pha thêm lần nữa, ta dung dịch thử có nồng độ 100% - Khối lượng mẫu thử cân thực tế: m1 m2 m3 m4 m5 m6 0.0894 g 0.0893 g 0.0894 g 0.0895 g 0.0895 g 0.0896 g III Quy trình tiến hành thẩm định q trình phân tích Tính đặc hiệu - Tiến hành quét phổ mẫu: mẫu placebo, mẫu chuẩn, mẫu thử (ở bước sóng từ 200 – 400 nm) - Đo độ hấp thụ mẫu placebo, mẫu tự tạo bước sóng 257nm, mẫu trắng dung dịch NaOH 0,01M  Kết :  Quét phổ UV bước sóng từ 200nm – 400 nm, ta :   Mẫu  placebo Mẫu chuẩn   Mẫu tự tạo (100%) Mẫu thử Nhận xét : - Phổ UV mẫu thử tương tự phổ UV mẫu chuẩn Paracetamol (có cực đại hấp thụ khoảng 257 nm) - Mẫu placebo khơng có cực đại hấp thụ 257 ± nm  Độ hấp thụ    Mẫu placebo Mẫu tự tạo 100% 10   Độ hấp thu A mẫu chuẩn Paracetamol (100%) Kết đo độ hấp thụ A mẫu chuẩn Paracetamol (100%) bước sóng 257nm A1 A2 A3 A4 A5 A6 0,496690 0,496636 0,496672 0,479867 0,479855 0,479830 Độ hấp thụ trung bình : tb = 0,488258 Độ lệch chuẩn tương đối:   9.210161 x 10-3   1.88633 % RSD < 2% 12   *Nhận xét:  - Dựa vào kết quét phổ, ta thấy mẫu chuẩn Paracetamol (100%) có cực đại hấp thụ 257,0 nm, nằm khoảng 257,0 nm - RSD giá trị mật độ quang < 2% *Kết luận: Quy trình định lượng Paracetamol phương pháp đo quang đạt độ thích hợp hệ thống theo ICH Độ tuyến tính - Đem đo mật độ quang A mẫu chuẩn nồng độ 70%, 90%, 100%, 120%, 130% bước sóng 257nm – nồng độ đo lần - Từ A1, A2, A3, A4, A5 ta xây dựng phương trình đường tuyến tính có dạng : y = ax + b => Kết luận tính tuyến tính *Kết quả: Giá trị mật độ quang A mẫu chuẩn nồng độ 70%, 90%, 100%, 120%, 130% bước sóng 257nm 13   14    ( Khối lượng paracetamol chuẩn cân thực tế : 0,0750 g ) Mẫu chuẩn 70% 90% 100% 120% 130% A 0.333617 0.333391 0.333202 0.427531 0.427593 0.427524 0.473690 0.473683 0.473677 0.577633 0.577623 0.577609 0.616753 0.616671 0.616709 Atb 0.333403 0.427549 0.473683 Nồng độ thực (µg/ml) 5.25 6.75 7.5 0.577622 0.616711 9.75 15   Phương trình hồi quy tuyến tính *Nhận xét : Hệ số tương quan r = 0.9995 > 0.995 *Kết luận: Quy trình định lượng paracetamol phương pháp đo quang đạt độ tuyến tính theo ICH Độ - Đo quang mức nồng độ 80%, 90% 120%, nồng độ tiến hành đo lần (tổng cộng đo quang mẫu ) - Tính tỷ lệ thu hồi :  Tỷ lệ thu hồi =x 100% Trong đó, Nồng độ tìm lại: tính từ kết phân tích (A)   Nồng độ thực: tính từ lượng cân paracetamol thức tế ban đầu Khối lượng cân thực tế bột placebo bột paracetamol chuẩn cho mẫu thử: Mẫu Khối lượng paracetamol chuẩn (g) 0,0735 0,0740 0,0743 Khối lượng tá dược (g) 0,0230 0,0228 0,0229 Kết quả: Đo giá trị mật độ quang mức nồng độ 100%, 80 %, 120% mẫu tự tạo 1, ,3 16   17   18   Bảng giá trị mật độ quang nồng độ thu mức nồng độ 80%, 100% 120% Mật độ quang Mẫu nồng độ thực 80% Lần Lần Lần Mẫu 0,418360 0,418390 0,418453 0,418401 Mẫu 0,416193 0,415813 0,415380 0,415795 Mẫu 0,418428 0,418102 0,418027 0,418186 Giá trị A trung bình 19   Mật độ quang Mẫu nồng độ thực 100% Lần Lần Lần Mẫu 0.559614 0.559603 0.559593 0,559603 Mẫu 0,561141 0,561365 0,561321 0,561276 Mẫu 0,556478 0,556281 0,556561 0,556440 Mật độ quang Giá trị A trung bình Mẫu nồng độ thực 120% Lần Lần Lần Mẫu 0,632622 0,632700 0,632815 0,632712 Mẫu 0,628656 0,628547 0,628639 0,628614 Mẫu 0,629769 0,629809 0,629702 0,629760 Giá trị A trung bình *Chú thích: Cách tính hàm lượng thu (%) Có AC = l A(1%,1 cm) CC Suy ra: = l  A(1%,1 cm) = 715 (với l=1 cm) CC = (1 g/100 ml) = x 104 (µg/ml) x100% Cơng thức chung: Tỷ lệ thu hồi (%) = x 100% Mẫu tự tạo 1:  [ ] Tỷ lệ thu hồi = (x 104)/(73,5 x a)  x 100% 20   Với a = 0,08 pha nồng đồ 80% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,1 pha nồng đồ 100% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,12 pha nồng độ 120% ( hút ml dd B pha vào 50ml) Mẫu tự tạo 2:  Tỷ [ ] lệ thu hồi = (x 104)/(74 x a)  x 100% Với a = 0,08 pha nồng đồ 80% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,1 pha nồng đồ 100% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,12 pha nồng độ 120% ( hút ml dd B pha vào 50ml) Mẫu tự tạo 3:  Tỷ [ ] lệ thu hồi = (x 104)/(74,3 x a)  x 100% Với a = 0,08 pha nồng đồ 80% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,1 pha nồng đồ 100% ( hút ml dd B pha vào 50ml) a = 0,12 pha nồng độ 120% ( hút ml dd B pha vào 50ml) Từ số liệu nêu trên, ta tính kết nồng độ thu tỷ lệ thu hồi sau: Nồng độ Mẫu 80% 100% 120% 3 Giá trị C đo (µg/ml) Tỷ lệ thu hồi (%) 5,851762238 5,815314685 5,848755245 7,826615385 7,850013986 7,782377622 8,849118881 8,791804196 8,807832168 99,519 98,232 98,398 106,485 106,081 104,743 100,330 99,007 98,787 * Kết quả  T l thu hồi ở mẫu tự tạo: 98,232% -106,485% *Nhận xét: Các mẫu tự tạo cho tỉ lệ thu hồi nằm khoảng 98% - 102%, *Kết luận:  Quy trình định lượng paracetamol phương pháp đo quang đạt về độ theo ICH 21   Khoảng xác định Từ kết cho thấy quy trình định lượng paracetamol phương  pháp đo quang đạt độ tuyến tính đạt độ nên quy trình đạt về khoảng xác định từ 80 – 120% Độ xác - Tiến hành đo quang dung dịch (100%) bước sóng 257 nm với mẫu - Khối lượng 20 viên cân được: m = 11,9134 (g) - Khối lượng trung bình 20 viên:   ̅= 0.5957 (g) Trong   ̅= 0,5957  có chứa 0,5 g Paracetamol Lượng bột tương ứng với 0,075 g Paracetamol cần lấy là: m bột lý thuyết = ≈ 0,0893 () - Khối lượng mẫu thử cân thực tế: m1 m2 m3 m4 m5 m6 0.0894 g 0.0893 g 0.0894 g 0.0895 g 0.0895 g 0.0896 g A = E1%, 1cm.l.C => C = = (g/100ml) Cthực = (g/100ml) = x ( )= x 104 ( ) Ta có: Cân 0,0893 g bột viên tương ứng với dd có nồng độ 7,5 (   Cân m g bột viên tương ứng với dd có nồng độ ( ) ) C lý thuyết = ( ) Hàm lượng paracetamol mẫu thử  = x 100%   =(x 104) : () x 100% 22   * Kết quả   Đo quang dung dịch C (100%) bước sóng 257 nm với mẫu 23   24   Mẫu thử A Ā Hàm lượng(%) 0.511436 Mẫu 0.511563 0.511525 95.2826 0.510247 95.1509 0.524469 97.6937 0.529328 98.4886 0.529961 98.6064 0.548484 101.9389 0.511575 0.510237 0.510206 Mẫu 0.510298 0.523911 0.524686 Mẫu 0.524809 0.529273 0.529383 Mẫu 0.529328 0.530086 0.529871 Mẫu Mẫu 0.529926 0.548395 0.548520 0.548538 97.8602 25   SD   RSD = 2.5139 (n=6 mẫu, với hàm lượng trung bình) 2.5689% *Nhận xét: - Các mẫu có hàm lượng paracetamol nằm khoảng cho phép ghi chuyên luận (từ 95,0% đến 105,0%) - Độ lệch chuẩn tương đối RSD giá trị mật độ quang mẫu lớn 2% *Kết luận: Quy trình định lượng paracetamol phương pháp đo quang khơng đạt về độ xác theo ICH KẾT LUẬN CHUNG: PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢ NG HOẠT CHẤT VIÊN NÉN PARACETAMOL 500MG BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐO QUANG KHÔNG ĐẠT YÊU CẦU VỀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH THEO ICH 26