BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM NGUYỄN ANH THƢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO HƢỚNG TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY NGẤY HƢƠNG (RUBUS COCHINCHINENSIS TRATT., ROSACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH PHẠM NGUYỄN ANH THƢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO HƢỚNG TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY NGẤY HƢƠNG (RUBUS COCHINCHINENSIS TRATT., ROSACEAE) NGÀNH: DƢỢC LIỆU – DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS TRẦN THỊ VÂN ANH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Phạm Nguyễn Anh Thƣ i TÓM TẮT Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ dược học – Khóa 2019 – 2021 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO HƢỚNG TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ CHỐNG OXY HÓA CỦA CÂY NGẤY HƢƠNG (Rubus cochinchinensis Tratt., Rosaceae) Phạm Nguyễn Anh Thư Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Thị Vân Anh Đặt vấn đề Ngấy hương (Rubus cochinchinensis Tratt., Rosaceae) loài mọc hoang nhiều vùng miền núi nước ta, sử dụng vị thuốc dân gian trị viêm gan, vàng da, ăn Từ năm 1999 đến nay, có đề tài nghiên cứu thành phần hóa học chưa có nghiên cứu tác dụng dược lý Ngấy hương Đề tài thực nghiên cứu thành phần hóa thực vật Ngấy hương tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, tạo sở khoa học cho việc phát triển dược liệu Phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Ngấy hương, thu hái Huế (3/2020) Chiết xuất phương pháp ngấm kiệt, chiết phân bố lỏng – lỏng phương pháp sắc ký cột để phân lập Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ MS, NMR Khảo sát hoạt tính kháng viêm phương pháp ức chế sinh NO tế bào đại thực bào chuột RAW 264.7 kích thích lipopolysaccharid Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa thử nghiệm DPPH MDA Kết Phân tích sơ thành phần hóa học cho thấy Ngấy hương có nhóm hợp chất triterpenoid, saponin, tanin, flavonoid hợp chất khử Từ 4,0 kg bột cành Ngấy hương, chiết ngấm kiệt với cồn 50% thu lit dịch chiết đậm đặc Tiếp tục chiết phân bố lỏng – lỏng với dung môi có độ phân cực tăng dần thu 15,09 g cao dichloromethan, 78,24 g cao ethyl acetat, 31,40 g cao n-butanol 231,29 g cao nước Từ 60 g cao ethyl acetat thu hợp chất xác định cấu trúc: (1) apigenin (18,9 mg), (2) acid vanillic (18,6 mg), (3) acid protocatechuic (46,1 mg), (4) acid gallic (28,8 mg), (5) artoflavanocoumarin (12,4 mg), (6) niga-ichigosid F1 (43,25 mg), (7) suavissimosid R1 (327,7 mg), (8) kaempferol 3-O-rutinosid (9,8 mg) (9) 2α,3α,19α,23-tetrahydroxyurs-12-en-24,28-dioic acid 28-β-D-glucopyranosyl ester (61,3 mg) Thử nghiệm hoạt tính sinh học cao dichloromethan có tác dụng kháng viêm (IC50 = 31,17 ± 0,39 µg/ ml) Cao ethyl acetat n-butanol cho tác dụng chống oxy hóa tốt với IC50 22,23 ± 0,28 18,25 ± 0,03 µg/ ml Các chất 3-5 có tác dụng chống oxy hóa DPPH với IC50 60,34 ± 0,71; 19,22 ± 0,12 60,24 ± 0,67 µM Ngồi ra, hợp chất cịn có tác dụng chống oxy hóa MDA với IC50 348,46 ± 24,42 337,57 ± 13,77 µM Kết luận Từ phân đoạn ethyl acetat có hoạt tính oxi hóa Ngấy hương, đề tài phân lập hợp chất, có hợp chất lần đầu phân lập từ Ngấy hương Acid protocatechuic, acid gallic artoflavanocoumarin có tác dụng chống oxy hóa mơ hình DPPH MDA i ABSTRACT Thesis of Pharmacy Master’s degree – Academic year 2019 – 2021 BIOACTIVITY-GUIDED ISOLATION OF ANTI-INFLAMMATORY AND ANTIOXIDANT CONSTITUENTS OF RUBUS COCHINCHINENSIS TRATT Pham Nguyen Anh Thu Instructor: Assoc Prof Dr Tran Thi Van Anh Introdution “Ngấy hương” (Rubus cochinchinensis Tratt., Rosaceae), a medicinal plant that grows wild in the mountainous areas of northern and central Vietnam, is used for the treatment of indigestion, hepatitis, and jaundice From 1999 up to now, there has been only one research on chemical composition and no research on the pharmacological effects of R.cochinchinensis Therefore, this study was carried out the investigation of chemical constituent as well as the antiinflammatory and antioxidant activities of R.cochinchinesis Methods R cochinchinensis was collected at Thua Thien Hue province in March 2020 Phytochemical constituents of R.cochinchinensis were analyzed by modifying Ciuley method The aerial part of R.cochinchinesis were percolated with ethanol 50 %, then the raw extract was separated by liquid–liquid distribution The isolation of pure compounds were conducted by column chromatography, size-exclusion chromatography, and recrystallization in suitable solvents The structures of the isolated compounds were identified by MS, NMR spectroscopy methods Investigation of anti-inflammatory activity by evaluating the inhibitory activity against the LPS-induced production of NO in RAW 264.7 cells and antioxidant activity by DPPH and MDA assays Results R.cochinchinensis extract contains triterpenes, saponin, flavonoid, tannin, and polyuronic kg dried material plant was percolated with 50 % ethanol Then raw extract was partitioned with polarity ascending solvents to get dichloromethane extract 15 g, ethyl acetate extract 78 g, nbutanol extract 31 g, and aqueous extract 231 g From the 60 g ethyl acetate extract, compounds were isolated and identified as (1) vanillic acid (18.6 mg), (2) apigenin (18.9 mg), (3) protocatechuic acid (46.1 mg), (4) gallic acid (28.8 mg), (5) artoflavanocoumarin (12.4 mg), (6) niga-ichigosid F1 (43.25 mg) , (7) suavissimosid R1 (327.7 mg), (8) kaempferol 3O-rutinosid (9.8 mg) and (9) 2α,3α,19α,23-tetrahydroxyurs-12-en-24,28-dioic acid 28-β-Dglucopyranosyl ester (61.3 mg) Dichloromethane fraction showed the anti-inflammatory activity with IC50 value 31.17 ± 0.39 µg/ ml Ethyl acetate and n-butanol fractions showed significant antioxidant activity with IC50 value 22.23 ± 0,28 and 18.25 ± 0,03 µg/ ml respectively Among these isolated compound, - exhibited the highest antioxidant activity in DPPH radical scavenging assay with IC50 60.34 ± 0.71; 19.22 ± 0.12 and 60.24 ± 0.67 µM, respectively In MDA assay, compound and showed the highest antioxidant activities with IC50 348.46 ± 24.42 337.57 ± 13.77 µM Conclusion From the antioxidant fraction of Rubus cochinchinensis, ethyl acetate fraction, compounds were isolated, of which compounds were isolated for the first time Protocatechuic acid, gallic acid and artoflavanocoumarin showed antioxidant activities in DPPH and MDA assay MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG .vi DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ, HÌNH viii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Chi Rubus 1.2 Ngấy hương 20 1.3 Các phương pháp thử nghiệm tác dụng sinh học .23 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Đối tượng nghiên cứu .36 2.2 Phương pháp nghiên cứu 39 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN .48 3.1 Kiểm tra nguyên liệu 48 3.2 Khảo sát hoạt tính sinh học cao tồn phần 57 3.3 Chiết xuất, phân tách phân đoạn khảo sát hoạt tính sinh học 60 3.4 Phân lập chất từ cao Rubus-B 67 3.5 Xác định cấu trúc hoạt chất 92 3.6 Khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất tinh khiết từ cao ethyl acetat 111 3.7 Bàn luận 115 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 120 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN 123 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt ADN Desoxyribonucleic Acid Acid desoxyribonucleic BuOH Butanol COX Cyclooxygenase DCM Dichloromethane DMSO Dimethyl sulfoxide DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetate EtOH Ethanol Glc Glucose Hoạt tính chống oxy hóa HTCO Nồng độ ức chế 50 % IC50 Inhibitory concentration at 50 % iNOS Inducible nitric oxide synthases IR Infrared LPS Lipopolysaccharide MDA Malondialdehyde Me Methyl Gốc methyl MS Mass spectometry Phổ khối NMR NO Nuclear magnetic resonance spectroscopy Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Nitric oxide RNS Reactive Nitrogen Species Các gốc chứa nitơ hoạt tính ROS Reactive Oxygen Species Các gốc chứa oxy hoạt tính Sắc ký lớp mỏng SKLM TBA Thiobarbituric acid TCA Trichloroacetic acid Thuốc thử vanillin sulfuric TT VS UV Hồng ngoại Ultra violet i DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Danh sách loài Rubus Việt Nam .4 Bảng 1.2: Một số hợp chất khung ursan chi Rubus Bảng 1.3: Một số hợp chất khung ursan dạng dimer chi Rubus 10 Bảng 1.4: Các hợp chất tritrpen khung ursan Ngấy hương .22 Bảng 2.1: Hóa chất dùng thử nghiệm sinh học 37 Bảng 2.2: Trang thiết bị dùng chiết xuất, phân lập 37 Bảng 2.3: Trang thiết bị dùng thử nghiệm sinh học 38 Bảng 2.4: Pha mẫu đo DPPH giếng 96 42 Bảng 3.1: Kết tiêu thử tinh khiết Ngấy hương 56 Bảng 3.2: Kết định tính sơ thành phần hóa thực vật Ngấy hương 57 Bảng 3.3: Kết khảo sát tác dụng ức chế sinh NO cao chiết Ngấy hương 58 Bảng 3.4: Hoạt tính chống oxy hóa DPPH cao chiết Ngấy hương 59 Bảng 3.5: Giá trị IC50 hoạt tính chống oxy hóa DPPH cao chiết Ngấy hương 60 Bảng 3.6: Khối lượng cao phân đoạn từ dịch chiết cồn 50 % 61 Bảng 3.7: Kết khảo sát tác dụng kháng viêm cao phân đoạn Ngấy hương 62 Bảng 3.8: IC50 hoạt tính kháng viêm Rubus-A quercetin 64 Bảng 3.9: Giá trị IC50 HTCO DPPH cao phân đoạn Ngấy hương 64 Bảng 3.10: Hoạt tính chống oxy hóa cao phân đoạn thử nghiệm MDA 65 Bảng 3.11: IC50 cao phân đoạn thử nghiệm MDA .66 Bảng 3.12: Các phân đoạn phân tách từ cao Rubus-B 67 Bảng 3.13: Hoạt tính chống oxy hóa DPPH cao phân đoạn Rubus-B 69 Bảng 3.14: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.4 71 Bảng 3.15: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.4.1 73 Bảng 3.16: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.4.3 74 Bảng 3.17: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.8 75 Bảng 3.18: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.8.8 B.8.9 .77 Bảng 3.19: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.8.8.8 78 Bảng 3.20: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.12 .79 Bảng 3.21: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.12.4.2 80 Bảng 3.22: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.12.5 82 Bảng 3.23: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.20T 83 Bảng 3.24: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.21 .85 Bảng 3.25: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.21.8 87 Bảng 3.26: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.21.8.5.1 88 Bảng 3.27: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.21.8.5.1.5 89 Bảng 3.28: Khối lượng phân đoạn phân tách từ phân đoạn B.21.8.5.1.6 90 i Bảng 3.29: Thông tin phổ NMR NH.2 acid vanillic 93 Bảng 3.30: Thông tin phổ NMR NH.3 acid protocatechuic 94 Bảng 3.31: Bảng thông tin phổ NMR hợp chất NH.4 95 Bảng 3.32: Bảng thông tin phổ hợp chất NH.5 artoflavanocoumarin 101 Bảng 3.33: Thông tin phổ NMR NH.1 apigenin 97 Bảng 3.34: Thông tin phổ NMR hợp chất NH.8 kaempferol 3-O-rutinosid 99 Bảng 3.35: Thông tin phổ NMR NH.6 niga-ichigosid F1 104 Bảng 3.36: Thông tin phổ NMR NH.7 suavissimosid R1 107 Bảng 3.37: Bảng thông tin phổ NMR hợp chất NH.9 109 Bảng 3.38: Hoạt tính chống oxy hóa DPPH hợp chất NH.1-9 nồng độ .112 Bảng 3.39: IC50 hoạt tính chống oxy hóa DPPH chất vitamin C 112 Bảng 3.40: Hoạt tính chống oxy hóa MDA chất nồng độ 1000 µM .113 Bảng 3.41: IC50 hoạt tính chống oxy hóa MDA chất quercetin 114 Bảng 3.42: Hoạt tính kháng viêm ức chế sinh NO hợp chất NH.6, NH.7 .115 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-70 Mẫu thử Vitamin C Chứng DPPH (Rubus-TP) Chứng DPPH (Rubus-A, B, C Vitamin C) Mẫu thử Rubus – TP Rubus-A Rubus-B Rubus-C Rubus-D Vitamin C Nồng độ (µg/ ml) 2,5 1,25 0,5 10 2,5 0,5 Lần 0,632 0,677 0,669 0,669 0,112 0,372 0,524 0,644 0,685 Độ hấp thu Lần Lần 0,637 0,636 0,645 0,666 0,662 0,663 0,674 0,673 0,114 0,121 0,385 0,366 0,505 0,519 0,650 0,643 0,686 0,689 0,2 µM 0,845 0,843 0,833 0,036 Chứng – trắng 0,804 0,2 µM 0,896 0,897 0,982 0,038 Chứng – trắng 0,887 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 1,3307x + 3,8485 ŷ = 1,0764x + 5.5001 ŷ = 1,4624x + 2,2417 ŷ = 0,2946x + 2,6528 ŷ = 0,2744x + 3,6153 ŷ = 0,2902x + 2,1387 ŷ = 2,1189x + 2,2639 ŷ = 2,1452x + 2,8631 ŷ = 2,1078x + 3,2552 ŷ = 2,6125x + 2,2638 ŷ = 2,6385x + 1,9538 ŷ = 2,6769x + 1,1269 ŷ = 1,023x + 3,5098 ŷ = 1,0382x + 4,8227 ŷ = 1,0239x + 4,3947 ŷ = 9.0332x - 0.8184 ŷ = 8,9529x – 0,5808 ŷ = 8,9195x – 0,4202 Trắng 0,025 0,039 0,031 0,033 0,029 0,027 0,044 0,023 0,040 Lần 31,57 28,07 28,07 28,30 90,64 61,10 45,89 29,99 27,28 R2 0,9955 0,9624 0,9942 0,9951 0,9885 0,9897 0,9966 0,9937 0,9913 0,9951 0,9943 0,9867 0,9921 0,9936 0,9915 0,9896 0,9818 0,9846 % ức chế Lần 31,00 31,68 28,86 27,73 90,42 59,64 48,03 29,31 27,17 Lần 31,12 29,31 28,75 27,85 89,63 61,78 46,45 30,10 26,83 IC50 (µg/ ml) 34,68 40,67 32,66 160,72 169,04 164,96 22,53 21,97 22,18 18,27 18,21 18,26 45,44 43,52 44,54 5,63 5,65 5,65 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa phân đoạn cao Rubus-B nồng độ 25 50 µg/ ml Mẫu thử B.1 B.2 Nồng độ (µg/ ml) 25 50 25 50 Lần 0,421 0,422 0,379 0,408 Độ hấp thu Lần Lần 0,418 0,418 0,422 0,422 0,382 0,382 0,402 0,418 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Trắng 0,031 0,046 0,102 0,149 Lần 1,27 4,81 29,87 34,43 % ức chế Lần Lần 2,03 2,03 4,81 4,81 29,11 29,11 35,95 31,90 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-71 Mẫu thử B.3 B.4 B.5 B.6 B.7 B.8 B.9 B.10 B.11 B.12 B.13 B.14 B.15 B.16 B.17 B.18 B.19 B.20 B.21 B.22 B.23 Nồng độ (µg/ ml) 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 25 50 Lần 0,379 0,340 0,443 0,346 0,371 0,310 0,193 0,142 0,210 0,195 0,242 0,099 0,090 0,091 0,095 0,094 0,092 0,094 0,101 0,108 0,096 0,100 0,132 0,095 0,199 0,108 0,115 0,105 0,099 0,104 0,102 0,111 0,103 0,108 0,106 0,112 0,103 0,108 0,106 0,120 0,126 0,151 Độ hấp thu Lần Lần 0,371 0,372 0,321 0,326 0,434 0,448 0,349 0,347 0,367 0,365 0,325 0,327 0,190 0,183 0,137 0,148 0,204 0,214 0,193 0,182 0,251 0,244 0,096 0,102 0,090 0,091 0,091 0,092 0,098 0,101 0,093 0,095 0,094 0,094 0,094 0,095 0,098 0,099 0,107 0,103 0,098 0,097 0,098 0,102 0,133 0,120 0,097 0,098 0,209 0,215 0,103 0,102 0,116 0,116 0,105 0,104 0,100 0,098 0,103 0,102 0,105 0,101 0,108 0,109 0,109 0,108 0,107 0,106 0,105 0,103 0,110 0,115 0,100 0,097 0,109 0,108 0,112 0,115 0,121 0,114 0,123 0,124 0,144 0,142 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Trắng 0,111 0,115 0,092 0,039 0,030 0,033 0,036 0,037 0,034 0,048 0,117 0,055 0,032 0,032 0,038 0,034 0,035 0,037 0,039 0,040 0,036 0,037 0,030 0,034 0,039 0,035 0,033 0,036 0,032 0,034 0,036 0,039 0,040 0,039 0,037 0,041 0,032 0,038 0,042 0,045 0,048 0,066 Lần 32,15 43,04 11,14 22,28 13,67 29,87 60,25 73,42 55,44 62,78 68,35 88,86 85,32 85,06 85,57 84,81 85,57 85,57 84,30 82,78 84,81 84,05 74,18 84,56 59,49 81,52 79,24 82,53 82,73 81,96 82,99 81,44 83,76 82,22 82,22 81,70 81,70 81,96 83,51 80,67 79,90 78,09 % ức chế Lần Lần 34,18 33,92 47,85 46,58 13,42 9,87 21,52 22,03 14,68 15,19 26,08 25,57 61,01 62,78 74,68 71,90 56,96 54,43 63,29 66,08 66,08 67,85 89,62 88,10 85,32 85,06 85,06 84,81 84,81 84,05 85,06 84,56 85,06 85,06 85,57 85,32 85,06 84,81 83,04 84,05 84,30 84,56 84,56 83,54 73,92 77,22 84,05 83,80 56,96 55,44 82,78 83,04 78,99 78,99 82,53 82,78 82,47 82,99 82,22 82,47 82,22 83,25 82,22 81,96 82,22 82,47 82,47 82,73 82,47 82,99 82,22 80,93 82,47 83,25 81,70 81,96 81,96 81,19 80,41 82,22 80,67 80,41 79,90 80,41 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-72 Mẫu thử Vitamin C Chứng DPPH (B.1-B.16 vitamin C) Chứng DPPH (B.17-B.23) Độ hấp thu Lần Lần 0,407 0,406 0,356 0,351 0,298 0,300 0,238 0,246 0,116 0,119 0,094 0,093 % ức chế Lần Lần 4,81 5,06 17,72 18,99 33,42 32,91 47,09 45,06 78,99 78,23 84,30 84,56 Nồng độ (µg/ ml) 1,00 2,50 3,75 5,00 7,50 10,00 Lần 0,411 0,351 0,298 0,244 0,121 0,097 0,1 mM 0,435 0,435 0,427 0,037 Chứng – trắng 0,395 0,1 mM 0,423 0,418 0,434 0,037 Chứng – trắng 0,388 Trắng 0,031 0,031 0,035 0,029 0,033 0,032 Lần 3,80 18,99 33,42 45,57 77,72 83,54 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa hợp chất tinh khiết nồng độ Mẫu thử NH.1 NH.2 NH.3 NH.4 NH.5 NH.6 NH.7 NH.8 NH.9 Chứng Chứng NH.2 Chứng NH.5 Chứng NH.8 Nồng độ (µg/ ml) 50 100 50 100 50 100 50 100 50 100 50 100 50 100 50 100 50 100 0,2 mM 0,2 mM 0,2 mM 0,2 mM Lần 0,739 0,722 0,577 0,531 0,142 0,139 0,135 0,137 0,206 0,192 0.724 0.716 0.691 0,710 0,849 0,809 0,702 0,734 0,700 0,806 0,896 0,858 Độ hấp thu Lần Lần 0,736 0,736 0,712 0,716 0,577 0,586 0,542 0,536 0,143 0,143 0,140 0,139 0,134 0,133 0,135 0,135 0,207 0,203 0,190 0,191 0.704 0.705 0.711 0.696 0.692 0.702 0,721 0,724 0,840 0,841 0,810 0,807 0,717 0,709 0,726 0,718 0,685 0,685 0,747 0,741 0,897 0,982 0,872 0,862 Trắng 0,033 0,042 0,030 0,034 0,032 0,033 0,028 0,032 0,039 0,034 0.028 0.031 0.023 0,036 0,032 0,034 0,020 0,037 0,032 0,039 0,038 0,037 % ức chế Lần Lần Lần 2,75 3,17 3,17 6,34 7,71 7,16 16,87 16,87 15,50 24,47 22,80 23,71 83,28 83,13 83,13 83,89 83,74 83,89 83,74 83,89 84,04 84,04 84,35 84,35 81,17 81,06 81,51 82,19 82,41 82,30 -5.78 -2.74 -2.89 -4.10 -3.34 -1.06 -1.52 -1.67 -3.19 -2,43 -4,10 -4,56 1,21 2,30 2,18 6,29 6,17 6,53 -3,65 -5,93 -4,71 -5,93 -4,71 -3,50 0,658 Chứng – trắng 0,726 Chứng – trắng 0,887 Chứng – trắng 0,827 Chứng – trắng Tìm giá trị IC50 hợp chất tinh khiết Mẫu thử NH.2 Nồng độ (µg/ ml) 50 100 150 Lần 0,594 0,534 0,497 Độ hấp thu Lần Lần 0,590 0,585 0,544 0,533 0,488 0,495 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Trắng 0,029 0,032 0,037 Lần 16,54 25,85 32,05 % ức chế Lần 17,13 24,37 33,38 Lần 17,87 26,00 32,35 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-73 Mẫu thử NH.3 NH.4 NH.5 Vitamin C Chứng NH.1 Chứng NH.3 Chứng NH.4 Chứng NH.5 Chứng Vitamin C Mẫu thử NH.2 NH.3 NH.4 NH.5 Vitamin C Nồng độ (µg/ ml) 200 300 10 15 10 15 20 25 30 1,00 2,50 3,75 5,00 7,50 0,2 mM 0,2 mM 0,2 mM 0,2 mM 0,2 mM Lần 0,439 0,374 0,779 0,719 0,597 0,490 0,392 0,244 0,747 0,588 0,486 0,392 0,301 0,221 0,721 0,615 0,522 0,417 0,252 0,689 0,613 0,496 0,406 0,234 0,750 0,878 0,896 0,936 0,750 Độ hấp thu Lần Lần 0,448 0,446 0,371 0,378 0,790 0,815 0,726 0,730 0,612 0,602 0,482 0,496 0,398 0,393 0,243 0,255 0,746 0,743 0,597 0,604 0,464 0,482 0,401 0,389 0,301 0,265 0,231 0,229 0,739 0,726 0,625 0,618 0,508 0,485 0,405 0,405 0,250 0,236 0,701 0,702 0,591 0,587 0,516 0,519 0,409 0,402 0,229 0,226 0,698 0,682 0,873 0,829 0,897 0,982 0,927 0,943 0,698 0,682 Phƣơng trình hồi quy ŷ = 0,1371x + 11,07 ŷ = 0,1376x + 10,899 ŷ = 0,1294x + 12,32 ŷ = 4,7435x + 6,3472 ŷ = 4,8493x + 5,0191 ŷ = 4,8977x + 3,8811 ŷ = 11,68x + 11,732 ŷ = 11,49x + 12,304 ŷ = 11,986x + 11,094 ŷ = 2,5052x - 2,4814 ŷ = 2,6434x - 5,2452 ŷ = 2,6322x - 3,7519 ŷ = 9,5672x - 6,1029 ŷ = 9,6346x - 6,6587 ŷ = 9,6227x - 6,403 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Trắng 0,027 0,045 0,029 0,031 0,028 0,036 0,029 0,033 0,033 0,034 0,034 0,036 0,037 0,039 0,036 0,041 0,032 0,035 0,033 0,029 0,029 0,032 0,034 0,034 0,033 0,034 0,038 0,038 0,033 R2 0,9939 0,9938 0,9970 0,9898 0,9873 0,9811 0,9860 0,9786 0,9813 0,9856 0,9953 0,9908 0,9849 0,9860 0,9827 % ức chế Lần Lần 39,14 37,81 51,40 51,85 9,20 7,87 16,71 15,86 31,11 29,30 45,04 46,00 56,05 55,33 74,46 74,58 19,50 19,62 37,54 36,53 49,04 51,52 59,86 58,85 70,24 70,24 79,48 78,35 23,63 21,63 36,01 34,89 45,37 46,93 57,41 58,75 75,59 75,81 2,51 0,74 13,74 16,99 31,46 28,51 45,05 44,61 70,46 71,20 Chứng – trắng Chứng – trắng Chứng – trắng Chứng – trắng Chứng – trắng Lần 38,11 50,81 4,84 15,38 30,51 44,31 55,93 73,12 19,95 35,74 49,49 60,20 74,30 78,58 23,08 35,67 49,50 58,75 77,37 0,59 17,58 28,06 45,64 71,64 0,677 0,826 0,887 0,897 0,677 IC50 (µg/ ml) 283,95 284,16 291,19 9,20 9,28 9,42 3,28 3,28 3,25 20,95 20,42 20,49 5,88 5,86 5,86 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-74 Phụ lục 11 Thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa MDA Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa (HTCO) đối chứng quercetin cao phân đoạn phương pháp MDA Mẫu Thử Cao tồn phần 1000 µg/ml Cao A 1000 µg/ml Cao B 1000 µg/ml Cao C 1000 µg/ml Cao D 1000 µg/ml Chứng dung môi NH.1 NH.2 NH.3 NH.4 NH.5 NH.6 NH.7 NH.9 Chứng dung môi OD Thử/chuẩn OD Trắng thử/chuẩn HCTO (%) 0,084 0,087 0,093 0,089 0,096 0,091 102,19 103,80 99,20 0,242 0,249 0,251 0,056 0,054 0,055 18,42 17,72 21,29 0,072 0,076 0,07 0,046 0,048 0,047 88,60 88,19 90,76 0,061 0,063 0,066 0,037 0,038 0,040 89,47 89,45 89,56 0,059 0,073 0,095 0,049 0,053 0,077 95,61 91,56 92,77 0,276 0,285 0,303 0,048 0,048 0,054 0,256 0,260 0,251 0,113 0,095 0,270 0,245 0,281 0,282 0,262 0,256 0,126 0,092 0,288 0,260 0,284 0,289 0,283 0,262 0,143 0,081 0,305 0,269 0,284 0,053 0,039 0,070 0,097 0,064 0,047 0,046 0,056 0,063 0,046 0,08 0,101 0,047 0,049 0,056 0,055 0,054 0,048 0,079 0,114 0,050 0,058 0,060 0,051 16,46 9,05 25,51 93,42 87,24 8,23 18,11 7,41 11,69 12,90 29,03 89,92 81,85 3,63 17,74 7,66 10,65 10,65 30,42 88,97 88,21 6,08 20,53 11,41 0,282 0,29 0,307 0,039 0,042 0,044 Mẫu Quercetin (µg/ml) 50 25 12,5 6,25 Chứng dung mơi OD Thử/chuẩn 0,066 0,068 0,079 0,113 0,120 0,149 0,209 0,226 0,240 0,223 0,235 0,240 OD Trắng thử/chuẩn 0,041 0,046 0,049 0,043 0,061 0,075 0,064 0,075 0,078 0,038 0,040 0,040 0,253 0,039 Cao tồn phần (µg/ml) 200 100 50 25 12,5 Chứng dung môi OD Thử/chuẩn 0,070 0,069 0,089 0,130 0,138 0,148 0,226 0,227 0,235 0,251 0,261 0,266 0,244 0,254 0,251 OD Trắng thử/chuẩn 0,052 0,045 0,048 0,048 0,046 0,061 0,052 0,057 0,059 0,064 0,072 0,078 0,040 0,041 0,042 0,257 0,044 0,256 0,265 0,263 0,264 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 0,039 0,044 HCTO (%) 88,32 89,86 86,30 67,29 72,81 66,21 32,24 30,41 26,03 13,55 10,14 8,68 0,044 0,044 HCTO (%) 91,55 89,14 81,36 61,50 58,37 60,45 18,31 23,08 20,00 12,21 14,48 14,55 4,23 3,62 5,00 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-75 Cao B (µg/ml) 200 100 50 25 12,5 Chứng dung mơi Cao C (µg/ml) 200 100 50 25 12,5 Chứng dung môi Cao D (µg/ml) 400 300 200 100 50 Chứng dung mơi NH.4 (µM) 600 500 400 300 200 Chứng dung mơi NH.5 (µM) 500 400 300 200 OD Thử/chuẩn 0,069 0,065 0,07 0,077 0,088 0,082 0,153 0,165 0,172 0,185 0,191 0,201 0,218 0,226 0,228 OD Trắng thử/chuẩn 0,047 0,041 0,044 0,048 0,047 0,050 0,059 0,062 0,061 0,05 0,056 0,061 0,051 0,059 0,058 0,246 0,054 0,252 0,25 0,057 0,059 OD Thử/chuẩn 0,061 0,064 0,07 0,129 0,139 0,146 0,219 0,222 0,227 0,2 0,206 0,215 0,269 0,29 0,314 OD Trắng thử/chuẩn 0,045 0,046 0,06 0,048 0,067 0,061 0,064 0,068 0,079 0,04 0,042 0,041 0,059 0,07 0,091 0,257 0,044 0,265 0,264 0,044 HCTO (%) 92,49 91,86 95,45 61,97 67,42 61,36 27,23 30,32 32,73 24,88 25,79 20,91 1,41 0,45 -1,36 0,044 OD Thử/chuẩn 0,067 0,067 0,074 0,074 0,071 0,07 0,117 0,132 0,128 0,214 0,221 0,248 0,22 0,236 0,237 0,253 0,256 0,263 OD Trắng thử/chuẩn 0,049 0,051 0,056 0,042 0,045 0,041 0,056 0,056 0,056 0,079 0,073 0,089 0,043 0,048 0,045 0,039 0,039 0,044 OD Thử/chuẩn 0,159 0,161 0,187 0,118 0,131 0,135 0,156 0,157 0,167 0,173 0,203 0,209 0,249 0,252 0,264 0,304 0,313 0,332 OD Thử/chuẩn 0,094 0,101 0,106 0,133 0,144 0,148 0,224 0,248 0,254 0,225 0,225 0,229 OD Trắng thử/chuẩn 0,103 0,115 0,119 0,053 0,055 0,06 0,056 0,056 0,06 0,057 0,063 0,076 0,082 0,092 0,071 0,079 0,088 0,084 OD Trắng thử/chuẩn 0,053 0,054 0,064 0,063 0,068 0,077 0,088 0,102 0,107 0,047 0,051 0,05 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn HCTO (%) 88,54 87,69 86,39 84,90 78,97 83,25 51,04 47,18 41,88 29,69 30,77 26,70 13,02 14,36 10,99 91,59 85,05 71,50 36,92 17,29 HCTO (%) 92,63 91,78 88,02 86,76 64,98 67,12 31,80 27,40 13,36 12,33 HCTO (%) 75,11 79,56 72,58 71,11 66,22 69,76 55,56 55,11 56,85 48,44 37,78 46,37 25,78 28,89 22,18 HCTO (%) 81,78 79,11 83,06 68,89 66,22 71,37 39,56 35,11 40,73 20,89 22,67 27,82 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-76 Quercetin Nồng độ (µg/ml) 50 25 12,5 6,25 HTCO % (Mean ± SD) 88,16 ± 1,79 68,77 ± 3,54 29,56 ± 3,19 10,79 ± 2,50 IC50: 18,10 ± 0,96 µg/ml (59,93 ± 3,18 µM) Cao B Nồng độ HTCO % (µg/ml) (Mean ± SD) 200 87,54 ± 1,09 100 82,37 ± 3,06 50 46,70 ± 4,60 25 29,05 ± 2,11 12,5 12,79 ± 1,69 IC50: 50,59 ± 2,64 µg/ml Cao D Nồng độ HTCO % (µg/ml) (Mean ± SD) 400 92,00 ± 0,55 300 86,61 ± 1,49 200 67,87 ± 3,32 100 32,04 ± 4,76 50 14,33 ± 2,62 IC50: 142,84 ± 7,89 µg/ml NH.4 Nồng độ HTCO % (µM) (Mean ± SD) 600 75,75 ± 3,53 500 69,03 ± 2,52 400 55,84 ± 0,91 300 44,20 ± 5,66 200 25,61 ± 3,36 IC50: 348,46 ± 24,42 µM Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Cao TP Nồng độ (µg/ml) 200 100 50 25 12,5 IC50: 88,64 ± 0,19 µg/ml Cao C Nồng độ (µg/ml) 200 100 50 25 12,5 IC50: 75,40 ± 4,20 µg/ml HTCO % (Mean ± SD) 87,35 ± 5,32 60,11 ± 1,59 20,46 ± 2,42 13,74 ± 1,33 4,28 ± 0,69 HTCO % (Mean ± SD) 93,27 ± 1,92 63,59 ± 3,34 30,09 ± 2,76 23,86 ± 2,60 0,17 ± 1,41 NH.5 Nồng độ (µM) 500 400 300 200 100 IC50: 337,57 ± 13,77 µM HTCO % (Mean ± SD) 81,32 ± 2,02 68,83 ± 2,57 38,46 ± 2,96 23,79 ± 3,60 7,52 ± 2,43 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-77 100.00 100.00 80.00 80.00 60.00 40.00 y = -0.0517x2 + 4.7223x - 18.434 R² = 0.9963 20.00 0.00 20 40 HTCO (%) HTCO (%) Biểu đồ tuyến tính phương trình hồi quy 60.00 40.00 y = -0.0015x2 + 0.7787x - 6.9757 R² = 0.9824 20.00 0.00 60 y = -0.0038x2 + 1.1992x - 0.9748 R² = 0.9963 50 100 150 200 HTCO (%) HTCO (%) Nồng độ quercetin (µg/ml) 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 250 300 50 100 150 200 250 Nồng độ cao C (µg/ml) 80.00 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 y = -0.0007x2 + 0.527x - 11.711 R² = 0.9983 HTCO (%) HTCO (%) 200 y = -0.0019x2 + 0.8825x - 5.4674 R² = 0.979 Nồng độ cao B (µg/ml) 60.00 40.00 y = -0.0002x2 + 0.2519x - 18.136 R² = 0.9976 20.00 0.00 100 200 300 400 500 100.00 80.00 60.00 40.00 y = 6E-05x2 + 0.1578x - 9.7373 R² = 0.9832 20.00 0.00 200 400 200 400 600 Nồng độ NH.4 (µM) Nồng độ cao D (µg/ml) HTCO (%) 100 Nồng độ cao TP (µg/ml) 600 Nồng độ NH.5 (µM) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 800 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-78 Phụ lục 12 Thử nghiệm hoạt tính kháng viêm ức chế sinh NO Khảo sát dung môi chiết Cao cồn 96% (Rubus I) Khảo sát MTT MT DMSO 1,346 1,320 1,337 1,163 1,164 1,178 OD570 100 50 1,092 1,091 1,106 1,118 1,109 1,123 25 12,5 1,158 1,162 1,186 1,212 1,208 1,224 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 93,90 96,13 99,57 104,21 93,73 95,27 99,83 103,78 93,89 95,33 100,68 103,90 MTT test NO MT 1,358 1,347 1,369 - MT +L 0,949 0,931 0,942 % So với mẫu chứng DMSO OD570 D1% 100 +L 1,036 1,103 1,042 1,108 1,052 1,118 D1% 1,164 1,178 1,167 50 25 12,5 100 50 25 12,5 1,074 1,081 1,069 1,058 1,038 1,038 1,047 1,035 1,048 106,47 106,33 106,27 103,67 103,74 101,62 102,12 99,62 98,67 101,06 99,33 99,62 MT: Môi trường nuôi cấy tế bào D 1%: DMSO % MT+L: Môi trường nuôi cấy tế bào + LPS D % + L: DMSO 1% + LPS Thử nghiệm ức chế sinh NO MT 0,12 0,58 0,12 MT+ L 43,36 44,04 43,47 - LPS D 1% 0,12 0,35 0,24 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 1% 100 50 25 37,31 21,87 29,29 32,23 38,00 22,16 30,77 32,57 38,91 23,07 30,89 33,49 % ức chế 12,5 35,71 36,63 36,74 100 41,38 41,68 40,70 50 21,49 19,00 20,61 25 13,62 14,27 13,94 12,5 4,28 3,60 5,57 Cao cồn 50% (Rubus II) Khảo sát MTT MT DMSO 1,346 1,320 1,337 1,163 1,164 1,178 OD570 100 50 1,021 1,044 1,050 1,069 1,063 1,075 25 12,5 1,071 1,065 1,084 1,172 1,169 1,158 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 87,79 91,92 92,09 100,77 89,69 91,32 91,49 100,43 89,13 91,26 92,02 98,30 MTT test NO 50 25 12,5 100 50 25 12,5 1,164 1,009 0,981 0,995 93,92 97,39 94,69 96,04 0,931 1,178 1,042 0,994 1,006 0,990 1,024 95,39 96,55 95,01 98,27 0,942 1,167 1,052 0,996 1,016 0,995 1,017 94,68 96,58 94,58 96,67 1,358 1,347 1,369 MT % So với mẫu chứng DMSO OD570 D1% 100 +L 1,036 0,973 MT + L 0,949 D1% Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-79 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L 0,12 0,58 0,12 43,36 44,04 43,47 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 1% 100 50 25 37,31 29,23 33,81 35,88 38,00 30,06 34,54 36,94 38,91 30,60 34,74 37,11 - LPS D 1% 0,12 0,35 0,24 % ức chế 12,5 38,22 38,22 38,74 100 21,66 20,90 21,35 50 9,38 9,10 10,71 25 3,83 2,79 4,62 12,5 -2,45 -0,60 0,43 Cao nước (Rubus III) Khảo sát MTT MT DMSO 1,346 1,320 1,337 1,163 1,164 1,178 OD570 100 50 0,971 0,982 0,989 1,043 1,056 1,069 25 12,5 1,096 1,113 1,134 1,164 1,168 1,182 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 83,49 89,68 94,24 100,09 84,36 90,72 95,62 100,34 83,96 90,75 96,26 100,34 MTT test NO MT 1,349 1,325 1,325 MT + L 0,909 0,929 0,900 D1% 1,152 1,169 1,143 OD570 D1% 100 +L 1,027 0,871 1,049 0,871 1,030 0,859 % So với mẫu chứng DMSO 50 25 12,5 100 50 25 12,5 0,890 0,907 0,892 0,946 0,968 0,965 1,022 1,031 1,056 84,81 83,03 83,40 86,66 86,46 86,60 92,11 92,28 93,69 99,51 98,28 102,52 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L - LPS D 1% 0,12 0,58 0,12 43,36 44,04 43,47 0,12 0,35 0,24 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 1% 37,31 38,00 38,91 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 24,96 25,64 26,33 29,72 30,06 30,98 32,89 32,89 33,83 36,08 35,94 36,40 33,11 32,52 32,34 20,34 20,88 20,39 11,85 13,44 13,06 3,29 5,40 6,45 Khảo sát cao toàn phần cao phân đoạn Cao cồn toàn phần (Rubus-TP) Khảo sát MTT MT 1,346 1,320 1,337 DMSO 1,163 1,164 1,178 OD570 100 50 1,225 1,249 1,226 1,237 1,242 1,239 25 1,237 1,241 1,268 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 12,5 1,295 1,293 1,305 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 105,33 107,39 106,36 111,35 105,33 106,27 106,62 111,08 105,43 105,18 107,64 110,78 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-80 MTT test NO MT 1,349 1,325 1,325 MT + L 0,909 0,929 0,900 OD570 D1% 100 +L 1,027 1,223 1,049 1,236 1,030 1,240 D1% 1,152 1,169 1,143 % So với mẫu chứng DMSO 50 25 12,5 100 50 25 12,5 1,241 1,246 1,264 1,151 1,188 1,168 1,127 1,116 1,113 119,08 117,83 120,39 120,84 118,78 122,72 112,07 113,25 113,40 109,74 106,39 108,06 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L D 1% 0,58 0,24 0,12 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS - LPS 43,36 44,73 42,90 0,12 0,24 0,81 D 1% 37,06 37,54 38,57 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 20,96 20,50 21,41 28,03 28,49 28,83 34,08 33,51 34,65 37,65 37,65 38,11 43,45 45,39 44,48 24,36 24,12 25,25 8,02 10,73 10,15 -1,61 -0,30 1,18 Cao dichloromethan (Rubus-A) Khảo sát MTT: Nồng độ 100 µg/ ml gây độc tế bào MT 1,346 1,320 1,337 DMSO 1,163 1,164 1,178 OD570 100 50 0,133 0,885 0,135 0,889 0,147 0,896 25 1,242 1,234 1,261 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 106,79 113,33 11,44 76,10 106,01 114,86 11,60 76,37 107,05 113,24 12,48 76,06 12,5 1,318 1,337 1,334 MTT test NO: Nồng độ 100 µg/ ml gây độc tế bào % So với mẫu chứng DMSO OD570 MT 1,270 1,265 1,275 MT +L 0,913 0,922 0,920 D1% 1,141 1,146 1,159 D1% +L 1,029 1,042 1,048 100 0,090 0,092 0,090 50 0,827 0,817 0,829 25 1,072 1,083 1,090 12,5 1,078 1,057 1,058 1,128 1,116 1,116 100 8,75 8,83 8,59 50 80,37 78,41 79,10 25 104,18 103,93 104,01 12,5 104,76 101,44 100,95 109,62 107,10 106,49 Thử nghiệm ức chế sinh NO NỒNG ĐỘ NO (µM) - LPS MT MT +L 0,42 46,38 0,46 45,92 0,75 45,57 % ức chế + LPS D 1% 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 0,12 42,66 0,77 8,29 25,50 36,52 42,11 98,19 80,56 40,23 14,40 1,30 1,21 42,87 0,31 8,74 26,08 37,23 42,73 99,27 79,62 39,16 13,15 0,32 0,64 43,29 0,20 8,54 25,75 37,62 43,02 99,53 80,27 40,52 13,10 0,62 D 1% Phƣơng trình hồi quy R2 IC50 (µg/ ml) ŷ = -0,0066x2 + 2,1405x - 9,9547 0,9992 30,97 ŷ = -0,0063x + 2,1267x - 10,945 0,9990 31,62 ŷ = -0,0077x + 2,2225x - 11,388 0,9981 30,94 2 IC50 = 31,17 ± 0,39 µg/ ml Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-81 Cao ethyl acetat (Rubus-B) Khảo sát MTT MT 1,315 1,314 1,315 DMSO 1,064 1,061 1,050 OD570 100 50 1,162 1,299 1,158 1,300 1,160 1,296 25 1,278 1,264 1,261 12,5 1,283 1,269 1,295 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 109,21 122,09 120,11 120,58 109,14 122,53 119,13 119,60 110,48 123,43 120,10 123,33 MTT test NO MT 1,270 1,265 1,275 MT + L 0,913 0,922 0,920 D1% 1,141 1,146 1,159 % So với mẫu chứng DMSO OD570 D1% 100 +L 1,029 1,275 1,042 1,286 1,048 1,270 50 25 12,5 100 50 25 12,5 1,179 1,196 1,192 1,069 1,079 1,074 1,070 1,036 1,066 123,91 123,42 121,18 114,58 114,78 113,74 103,89 103,55 102,48 103,98 99,42 101,72 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L - LPS D 1% 0,58 0,24 0,12 43,36 44,73 42,90 0,12 0,24 0,81 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 1% 37,06 37,54 38,57 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 19,25 19,82 20,39 30,05 30,28 31,20 31,85 32,28 33,20 36,68 37,43 37,79 48,06 47,21 47,14 18,89 19,33 19,11 14,04 14,00 13,92 1,02 0,30 2,00 Cao n-butanol (Rubus-C) Khảo sát MTT MT 1,315 1,314 1,315 DMSO 1,064 1,061 1,050 OD570 100 50 1,095 1,135 1,110 1,156 1,090 1,130 25 1,167 1,187 1,189 12,5 1,163 1,157 1,134 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 102,91 106,67 109,68 109,30 104,62 108,95 111,88 109,05 103,81 107,62 113,24 108,00 MTT test NO MT 1,244 1,238 1,265 MT + L 0,741 0,732 0,740 D1% 1,112 1,106 1,102 OD570 D1% 100 +L 1,002 1,055 1,006 1,058 1,014 1,088 % So với mẫu chứng DMSO 50 25 12,5 100 50 25 12,5 1,021 0,998 1,020 1,014 1,014 1,028 1,021 0,999 1,019 105,29 105,17 107,30 101,90 99,20 100,59 101,20 100,80 101,38 101,90 99,30 100,49 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-82 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT - LPS MT + L D 1% 0,58 0,24 0,12 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS 43,36 44,73 42,90 0,12 0,24 0,81 D 1% 37,06 37,54 38,57 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 24,67 24,33 24,78 30,12 30,77 31,57 35,18 35,54 35,88 36,65 36,65 38,11 33,43 35,20 35,74 18,73 18,02 18,13 5,06 5,33 6,96 1,09 2,36 1,18 Cao nước (Rubus-D) Khảo sát MTT MT 1,315 1,314 1,315 DMSO 1,064 1,061 1,050 OD570 100 50 1,134 1,134 1,140 1,151 1,136 1,140 25 1,162 1,155 1,164 12,5 1,188 1,188 1,174 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 106,58 106,58 109,21 111,65 107,45 108,48 108,86 111,97 108,19 108,57 110,86 111,81 MTT test NO MT 1,244 1,238 1,265 MT + L 0,741 0,732 0,740 D1% 1,112 1,106 1,102 OD570 D1% 100 +L 1,002 1,053 1,006 1,075 1,014 1,055 % So với mẫu chứng DMSO 50 25 12,5 100 50 25 12,5 0,983 1,035 1,045 0,991 0,998 1,029 0,973 0,973 1,032 105,09 106,86 104,04 98,10 102,88 103,06 98,90 99,20 101,48 97,11 96,72 101,78 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L D 1% 0,58 0,24 0,12 43,36 44,73 42,90 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS - LPS 0,12 0,24 0,81 D 1% 37,06 37,54 38,57 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 25,21 25,67 26,17 26,53 27,36 28,41 31,84 32,32 32,63 34,55 34,35 35,71 31,96 31,62 32,14 28,41 27,12 26,33 14,09 13,91 15,38 6,77 8,51 7,40 Quercetin (chứng dương) Khảo sát MTT MT 1,392 1,407 1,397 DMSO 1,197 1,208 1,214 OD570 100 50 1,199 1,227 1,201 1,219 1,193 1,225 25 1,231 1,243 1,250 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 12,5 1,234 1,231 1,223 % So với mẫu chứng DMSO 100 50 25 12,5 100,17 102,51 102,84 103,09 99,42 100,91 102,90 101,90 98,27 100,91 102,97 100,74 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-83 MTT test NO MT 1,189 1,205 1,221 MT + L 0,868 0,883 0,876 OD570 D1% 100 +L 1,018 1,002 1,035 1,019 1,019 1,008 D1% 1,151 1,143 1,156 % So với mẫu chứng DMSO 50 25 12,5 100 1,046 1,053 1,058 1,065 1,057 1,077 1,099 1,079 1,086 98,43 98,45 98,92 50 25 12,5 102,75 101,74 103,83 104,62 102,13 105,69 107,96 104,25 106,58 Thử nghiệm ức chế sinh NO MT MT + L NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 20 10 1% 42,84 6,48 22,77 35,63 43,45 6,01 22,60 36,67 43,71 6,70 23,08 36,41 - LPS D 1% 0,12 0,31 0,72 47,51 48,14 47,36 1,07 0,62 0,53 Phƣơng trình hồi quy ŷ = -0,0899x + 6,6359x - 11,717 ŷ = -0,1091x2 + 7,2566x - 15,095 ŷ = -0,0996x2 + 6,8727x - 12,768 % ức chế 2,5 20 10 2,5 40,41 41,71 41,45 84,87 86,18 84,67 46,84 47,99 47,20 16,83 15,60 16,70 5,67 4,00 5,17 R2 IC50 (µM) 0,9976 0,9968 0,9976 10,91 10,69 10,83 IC50 = 10,81 ± 0,11 µM NH.6 (niga-ichigosid F1) MT 0,52 0,64 0,34 MT + L 43,10 42,67 42,86 - LPS D 0,5% 0,52 0,45 1,06 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 0,5% 32,28 32,63 32,40 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 30,63 31,61 30,58 32,28 33,42 33,30 32,52 33,19 32,61 33,63 33,07 34,12 5,12 3,14 5,61 0,00 -2,41 -2,79 -0,72 -1,70 -0,64 -4,18 -1,35 -5,30 NH.7 (suavissimosid R1) MT 0,52 0,64 0,34 MT + L 43,10 42,67 42,86 - LPS D 0,5% 0,52 0,45 1,06 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 0,5% 32,28 32,63 32,40 % ức chế 100 50 25 12,5 100 50 25 12,5 30,98 30,88 31,81 30,98 31,23 31,77 32,63 33,30 32,35 32,63 33,19 32,84 4,04 5,36 1,81 4,04 4,29 1,95 -1,08 -2,06 0,16 -1,08 -1,70 -1,36 Quercetin (chứng dương) MT 0,82 0,35 0,48 MT + L 41,33 41,17 40,29 - LPS D 0,5% 1,14 0,35 1,14 NỒNG ĐỘ NO (µM) + LPS D 20 10 0,5% 29,82 8,06 18,08 22,99 29,48 8,28 18,52 22,61 30,07 7,63 18,43 23,03 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn % ức chế 2,5 20 10 2,5 26,38 25,65 25,73 72,98 71,90 74,64 39,38 37,18 38,72 22,91 23,31 23,40 11,53 12,98 14,44 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-84 Phƣơng trình hồi quy y = -0,0233x2 + 3,9924x + 2,365 R2 0,9990 IC50 (µM) 12,90 y = 0,0098x2 + 3,091x + 6,0692 0,9981 13,62 0,9996 13,19 y = 0,0183x + 3,0027x + 7,2222 IC50 = 13,24 ± 0,36 µM Đƣờng chuẩn Natri nitrit: Nồng độ Natri nitrit (µmol/ ml) OD540 nm 200 100 50 25 12,5 6,25 3,13 1,56 1,921 1,063 0,581 0,317 0,179 0,104 0,072 0,053 0,033 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn