Nghiên cứu thành phần hóa học và tác dụng chống oxy hóa, kháng viêm của lá khôi tía (ardisia silvestris pit , primulaceae)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN DUY HIỀN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA, KHÁNG VIÊM CỦA LÁ KHƠI TÍA (ARDISIA SILVESTRIS PIT., PRIMULACEAE) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRẦN DUY HIỀN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA, KHÁNG VIÊM CỦA LÁ KHƠI TÍA (ARDISIA SILVESTRIS PIT., PRIMULACEAE) NGÀNH: DƯỢC LIỆU – DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THỊ VÂN ANH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH, NĂM 2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Trần Duy Hiền TÓM TẮT Luận văn Thạc sĩ Dược học – Khóa 2019-2021 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA, KHÁNG VIÊM CỦA LÁ KHƠI TÍA (ARDISIA SILVESTRIS PIT., PRIMULACEAE) Trần Duy Hiền Người hướng dẫn khoa học: TS Trần Thị Vân Anh Mở đầu Khơi tía (Ardisia silvestris Pit., Primulaceae) dược liệu sử dụng phổ biến điều trị chứng viêm, lt dày Việt Nam Có đề tài nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý dược liệu thực giới Việt Nam Do vậy, đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng chống oxy hóa, kháng viêm Khơi tía (Ardisia silvestris Pit., Primulaceae)” thực nhằm cung cấp sở khoa học việc sử dụng tiền đề để tiêu chuẩn hóa, phát triển dược liệu tiềm Đối tượng phương pháp nghiên cứu Lá Khơi tía thu hái tỉnh Thừa Thiên Huế vào 02/2020 Tác dụng chống oxy hóa đánh giá phương pháp DPPH Tác dụng kháng viêm thử nghiệm phương pháp ức chế phóng thích NO đại thực bào chuột RAW 264.7 Chiết xuất, phân lập chất phương pháp chiết ngấm kiệt, chiết phân bố, sắc ký kết tinh lại Cấu trúc hóa học xác định phương pháp phổ học (MS NMR) Kết Phân tích sơ thành phần hóa thực vật cho thấy diện carotenoid, tinh dầu, triterpenoid tự do, anthraquinon, tannin, saponin, chất khử polyuronid Cồn 96% lựa chọn làm dung môi chiết xuất Các cao phân đoạn từ cao cồn 96% có tác dụng chống oxy hóa với kết cao EtOAc > cao CHCl3 > cao nước > cao n-hexan Cao CHCl3 EtOAc cho tác dụng kháng viêm với IC50 22,95 μg/ml 77,97 μg/ml 3,7 kg bột Khôi tía chiết ngấm kiệt với cồn 96% thu 650 g cao toàn phần Phân tách chiết phân bố lỏng – lỏng thu 124 g cao n-hexan, 79 g cao CHCl3, 84 g cao EtOAc 208 cao nước Phân lập từ 45 g cao EtOAc thu 11 chất: 2-methylpyridin-3-ol (22,4 mg), bockiosid A (32,5 mg), hydroxymaltol 3-O-(6’-O-trans-caffeoyl)-β-Dglucopyranosid (28,4 mg), rengyolon (141,5 mg), cleroindicin B (17,1 mg), isocleroindicin E (72,1 mg), cleroindicin E (56,3 mg), rengyol (23,4 mg), isorengyol (15,1 mg), trans-1-[2(acetyloxy) ethyl]-cyclohexan-1,4-diol (10,1 mg), 3-(3’-hydroxypropanoyl)cyclopentan1-on (16,4 mg) Thử nghiệm tác dụng sinh học chất phân lập cho thấy hydroxymaltol 3-O-(6’O-trans-caffeoyl)-β-D-glucopyranosid có tác dụng chống oxy hóa (IC50 = 25,68 μM) rengyolon có tác dụng kháng viêm (IC50 = 273,90 μM) Kết luận Từ phân đoạn cao EtOAc có hoạt tính chống oxy hóa kháng viêm, đề tài phân lập xác định cấu trúc 11 chất Tất chất lần phân lập chi Ardisia 3-(3’-hydroxypropanoyl)cyclopentan-1-on hợp chất lần đầu báo cáo Hydroxymaltol 3-O-(6’-O-trans-caffeoyl)-β-D-glucopyranosid có tác dụng chống oxy hóa rengyolon có tác dụng kháng viêm mơ hình thử nghiệm tác dụng sinh học i ABSTRACT Thesis of Pharmacy Master’s degree – Academic year 2019-2021 CHEMICAL CONSTITUENTS AND ANTIOXIDANT, ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITIES OF THE LEAVES OF ARDISIA SILVESTRIS PIT., PRIMULACEAE Tran Duy Hien Supervisor: PhD Tran Thi Van Anh Introduction The leaves of Ardisia silvestris Pit (Primulaceae) have been used in folk medicine for treating stomach pain in Vietnam There are not many studies on the chemical composition and bioactivity of this herb ultil now Therefore, study on “Chemical constituent and antioxidant, anti-inflammtory activities of the leaves of Ardisia silvestris Pit., Primulaceae” was carried out to provide the scientific evidence for the usage and standardization this potential plant in future Material and methods The leaves of A silvestris was collected in Thua Thien Hue province in February 2020 Antioxidant effect was conducted by DPPH assay Anti-inflammatory ability was evaluated by inhibition of NO production in mouse macrophages RAW 264.7 method Extraction and isolation were carried out by percolation, liquid – liquid extraction, chromatography and recrytallization Their chemical structures of isolated compounds were elucidated by spectroscopic methods (MS and NMR) Results Preliminary phytochemical analysis revealed the presence of carotenoids, essential oils, free triterpenoids, anthraquinones, tannins, saponins, reducing agents and polyuronides 96% ethanol was used for primary extraction Fraction extracts showed antioxidant activity EtOAc extract > CHCl3 extract > water extract > n-hexan extract Moreover, CHCl3 and EtOAc extracts showed potent anti-inflammatory effects with IC50 values of 22.95 μg/ml and 77.97 μg/ml, respectively 3,7 kg of the leaves of A silvestris was percolated with 96% ethanol to give 650 g concentrated extract The crude extract was separated by liquid – liquid distribution to obtain n-hexane (124 g), CHCl3 (79 g), EtOAc (84 g) and water (208 g) extracts EtOAc extract (45 g) was separated to afford 11 compounds which were elucidated as 2-methylpyridine-3-ol (22.4 mg), bockioside A (32.5 mg), hydroxymaltol 3-O-(6’-O-trans-caffeoyl)-β-Dglucopyranoside (28.4 mg), rengyolone (141.5 mg), cleroindicin B (17.1 mg), isocleroindicin E (72.1 mg), cleroindicin E (56.3 mg), rengyol (23.4 mg), isorengyol (15.1 mg), trans-1-[2-(acetyloxy) ethyl]-cyclohexane-1,4-diol (10.1 mg), and 3-(3’hydroxypropanoyl)cyclopentane-1-one (16.4 mg) Among these isolated compounds, hydroxymaltol 3-O-(6'-O-trans-caffeoyl)-β-Dglucopyranoside showed antioxidant activity with IC50 = 25.68 μM and rengyolone showed anti-inflammatory effects with IC50 = 273.90 μM Conclusion From EtOAc extract with antioxidant and anti-inflammatory activities, 11 compounds were isolated and determined All of them were isolated for the first time in the genus Ardisia and 3-(3'-hydroxypropanoyl)cyclopentane-1-one is a new compound Hydroxymaltol 3-O-(6'-Otrans-caffeoyl)-β-D-glucopyranoside showed antioxidant activity and regyolone had antiinflammatory effects in biological experimental assays MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iv DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC SƠ ĐỒ xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan chi Ardisia 1.2 Tổng quan loài khơi tía (Ardisia silvestris Pit.) 20 1.3 Tổng quan phương pháp thử nghiệm tác dụng sinh học 24 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Đối tượng nghiên cứu 36 2.2 Phương pháp nghiên cứu 38 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 45 3.1 Kiểm tra nguyên liệu 45 3.2 Khảo sát hoạt tính sinh học cao tồn phần 52 3.3 Chiết xuất, tách phân đoạn khảo sát hoạt tính sinh học cao phân đoạn 54 3.4 Phân lập chất từ phân đoạn cao ethyl acetat 59 3.5 Xác định cấu trúc hóa học chất phân lập 87 3.6 Khảo sát hoạt tính sinh học chất phân lập 108 3.7 Bàn luận 111 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 115 4.1 Kết luận 115 4.2 Kiến nghị 116 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN 118 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ nguyên Ý nghĩa 13 13 C-Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân 13C 1 H-Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân 1H C-NMR H-NMR AA Arachidonic acid ABTS 2,2'-Azino-Bis (3-ethylbenzothiazoline6- Sulphonic Acid ADN Acid Deoxyribonucleic brs broad single Đỉnh đơn rộng CFU Colony Forming Unit Đơn vị hình thành khuẩn lạc COSY Correlation Spectroscopy COX Cycloxygenase CUPRAC Cupric ion Reducing Antioxidant Capacity Khả chống oxy hóa cách khử ion đồng d doublet Phân đỉnh đôi DCM Dochloromethane dd doublet of doublet DĐVN Dược Điển Việt Nam DMSO Dimethyl sulfoxide DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl EP-receptor Prostaglandin E2 Receptors FRAP Ferric Reducing Ability of Plasma Khả khử sắt huyết tương GC-MS Gas chromatography-Mass spectrometry Sắc ký khí đầu dị khối phổ GSH Glutathione HMBC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IC50 Inhibitory concentration 50% IL Interleukin Phân đỉnh đôi kép Nồng độ ức chế 50% i iNOS Inducible Nitric Oxide Synthase IR Infrared Hồng ngoại J Coupling constant Hằng số ghép LOX Lipooxygenase LPS Lipopolysaccharide m multiple Phân đỉnh phức tạp MBC Minimum Bactericidal Concentration Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MCP-1 Monocyte Chemoattractant Protein-1 MIC Minimum Inhibitory concentration Nồng độ ức chế tối thiểu MS Mass Spectrometry Phổ khối lượng MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide NADPH Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân ORAC Oxygen Radical Absorbance Capacity Khả hấp thụ gốc tự có oxy PE Petroleum ether Ether dầu PG Prostaglandin ppm parts per million PTP1B Protein tyrosine phosphatase 1B RNS Reactive Nitrogen Species Gốc tự có nitơ ROS Reactive Oxygen Species Gốc tự có oxy s single Đỉnh đơn SKLM Sắc ký lớp mỏng SOD Superoxide dismutase t triplet Phân đỉnh ba TNF-α Tumor Necrosis Factors - α Yếu tố hoại tử khối u α UV Ultraviolet Tử ngoại VSMC Vascular Smooth Muscle Cell Tế bào trơn mạch máu Phần triệu .i DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh số loài thuộc chi Ardisia Việt Nam Hình 1.2 Cấu trúc hóa học số saponin triterpen phân lập từ lồi thuộc chi Ardisia 11 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học số dẫn chất quinon phân lập từ loài thuộc chi Ardisia 12 Hình 1.4 Cấu trúc hóa học số dẫn chất alkyl resorcinol phân lập từ loài thuộc chi Ardisia 14 Hình 1.5 Các hợp chất flavonoid phân lập từ số loài thuộc chi Ardisia 16 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học số hợp chất isocoumarin phân lập từ loài thuộc chi Ardisia 17 Hình 1.7 Hình ảnh thực vật học Khơi tía (trích TLTK [11]) 21 Hình 1.8 Cấu trúc hóa học dẫn chất alkenyl resorcinol phân lập từ Khơi tía 22 Hình 1.9 Phản ứng DPPH• với chất chống oxy hóa 27 Hình 1.10 Phản ứng ABTS•+ với chất chống oxy hóa 28 Hình 1.11 Phản ứng thử nghiệm ức chế phospholipase A2 in vitro 34 Hình 1.12 Phản ứng thuốc thử Ellman với sản phẩm acetylcholin 33 Hình 1.13 Phản ứng thuốc thử Griess với dẫn chất nitrit 34 Hình 2.1 Hình ảnh mẫu nguyên liệu nghiên cứu 36 Hình 3.1 Hình thái Khơi tía 45 Hình 3.2 Biểu bì Khơi tía 46 Hình 3.3 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo Khơi tía 46 Hình 3.4 Cấu tạo chi tiết vi phẫu gân Khơi tía 47 Hình 3.5 Cấu tạo chi tiết vi phẫu phiến Khơi tía 48 Hình 3.6 Vi phẫu sơ đồ cấu tạo thân Khơi tía 48 Hình 3.7 Cấu tạo chi tiết thân Khơi tía 49 Hình 3.8 Các cấu tử bột Khơi tía 50 Hình 3.9 Các cấu tử bột thân Khơi tía 50 Hình 3.10 So sánh giá trị IC50 cao toàn phần thử nghiệm DPPH 53 Hình 3.11 So sánh giá trị IC50 cao phân đoạn thử nghiệm DPPH 56 Hình 3.12 % Ức chế phóng thích NO cao phân đoạn 57 Hình 3.13 Sắc ký đồ phân tích cao phân đoạn Khơi tía 58 Hình 3.14 Sắc kỳ đồ tổng kết phân đoạn C.1 – C.13 60 Hình 3.15 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.7.1 – C.7.13 61 Hình 3.16 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.7.7.1 – C.7.7.5 62 Hình 3.17 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.7.7.1 C.7.7.5 63 Hình 3.18 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.12.1 – C.12.11 64 Hình 3.19 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.12.5.1 – C.12.5.3 65 Hình 3.20 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.12.5.1.1 – C.12.5.1.3 66 Hình 3.21 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.12.5.1.2 67 Hình 3.22 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.12.5.2.1 – C.12.5.2.3 68 Hình 3.23 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.12.5.2.3 68 ii Hình 3.24 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.14.1 – C.14.15 69 Hình 3.25 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.14.12.1 – C.14.12.7 71 Hình 3.26 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.14.12.2.1 – C.14.12.2.4 72 Hình 3.27 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.14.12.2.4 72 Hình 3.28 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.14.12.4.1 – C.14.12.4.5 73 Hình 3.29 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.14.12.4.4 74 Hình 3.30 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.18.1 – C.18.14 75 Hình 3.31 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.18.5.C 76 Hình 3.32 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.18.7.1 – C.18.7.3 77 Hình 3.33 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.18.7.2 78 Hình 3.34 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.18.9.1 – C.18.9.3 79 Hình 3.35 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.18.9.2.1 – C.18.9.2.3 80 Hình 3.36 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.18.9.2.3 80 Hình 3.37 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.20.1 – C.20.14 81 Hình 3.38 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.20.8.1 – C.20.8.4 83 Hình 3.39 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.20.8.3.C 83 Hình 3.40 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.20.11.1 – C.20.11.3 84 Hình 3.41 Sắc ký đồ tổng kết phân đoạn C.20.11.2.1 – C.20.11.2.3 85 Hình 3.42 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết phân đoạn C.20.11.2.2 86 Hình 3.43 Sắc ký đồ tổng kết chất phân lập từ cao Ardi-C 87 Hình 3.44 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-1 89 Hình 3.45 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-2 90 Hình 3.46 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-4 92 Hình 3.49 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-9 94 Hình 3.50 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-8 95 Hình 3.51 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-3 97 Hình 3.47 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-5 99 Hình 3.48 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-6 101 Hình 3.52 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC chất AS-7 102 Hình 3.53 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-10 104 Hình 3.54 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY chất AS-11 108 Hình 3.55 Sắc ký đồ chất AS-1 – AS-11 phản ứng với thuốc thử DPPH 108 Hình 3.56 Hoạt tính chống oxy hóa AS-11 vitamin C 110 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ 1H-NMR (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 6,2 – 8,1 ppm Phổ 1H-NMR (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 3,3 – 5,0 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-10 Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 6,2 – 8,1 ppm x 115 – 160 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 3,3 – 5,0 ppm x 55 – 105 ppm Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-10 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 6,0 – 8,2 ppm x 115 – 180 ppm Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 4,3 – 4,9 ppm x 140 – 170 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 3,3 – 4,5 ppm x 65 – 105 ppm Phổ COSY (CD3OD) chất AS-10 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ COSY (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 6,2 – 8,2 ppm Phổ COSY (CD3OD) chất AS-10 trích vùng 3,3 – 5,0 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 16 Phổ MS NMR AS-11 (hydroxymaltol 3-O-(6’-O-transcaffeoyl)-β-D-glucopyranosid) Phổ ESI-MS (positive) AS-11 Phổ ESI-MS (negative) AS-11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ 13C-NMR (CD3OD) chất AS-11 Phổ 13C-NMR (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 105 – 175 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ 13C-NMR (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 47 – 80 ppm Phổ 1H-NMR (CD3OD) chất AS-11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ 1H-NMR (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 6,1 – 8,1 ppm Phổ 1H-NMR (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 3,2 – 5,1 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-11 Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 6,2 – 8,1 ppm x 110 – 160 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HSQC (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 3,3 – 5,0 ppm x 55 – 105 ppm Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 6,2 – 8,1 ppm x 110 – 175 ppm Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 4,3 – 5,0 ppm x 140 – 168 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ HMBC (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 3,3 – 4,5 ppm x 60 – 105 ppm Phổ COSY (CD3OD) chất AS-11 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phổ COSY (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 6,1 – 8,1 ppm Phổ COSY (CD3OD) chất AS-11 trích vùng 3,3 – 5,0 ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn