Untitled ĐẶ N G T H Ị M I N H T H Ư S I N H H Ọ C T H Ự C N G H IỆ M N Ă M 2 0 2 1 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Đặng Thị Minh Thư N[.]
ĐẶNG THỊ MINH THƯ BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - SINH HỌC THỰC NGHIỆ M Đặng Thị Minh Thư NGHIÊN CỨU SỰ ỨC CHẾ TĂNG SINH TẾ BÀO VÀ CẢM ỨNG APOPTOSIS TRÊN TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY SÂM ĐÁ (CURCUMA SINGULARIS) LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM NĂM 2021 Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2021 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đặng Thị Minh Thư NGHIÊN CỨU SỰ ỨC CHẾ TĂNG SINH TẾ BÀO VÀ CẢM ỨNG APOPTOSIS TRÊN TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CAO CHIẾT CÂY SÂM ĐÁ (CURCUMA SINGULARIS) Chuyên ngành: Mã số : Sinh học thực nghiệm 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Hướng dẫn 1: TS Đồn Chính Chung Hướng dẫn 2: PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo TP HỒ CHÍ MINH - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài “Nghiên cứu ức chế tăng sinh tế bào cảm ứng apoptosis tế bào ung thư cao chiết Sâm đá (Curcuma singularis)” cơng trình nghiên cứu tơi dựa tài liệu, số liệu tơi tự tìm hiểu nghiên cứu hướng dẫn nhiệt tình thầy TS Đồn Chính Chung PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo Chính vậy, kết nghiên cứu đảm bảo trung thực khách quan Đồng thời, kết chưa xuất nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực sai tơi hồn chịu trách nhiệm Tp.Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2021 Học viên cao học Đặng Thị Minh Thư LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Quý Thầy/Cô Học viện Khoa học Cơng nghệ tận tình dạy trang bị cho tác giả kiến thức cần thiết suốt thời gian vừa qua để luận văn hoàn thành cách tốt Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy TS Đồn Chính Chung cô PGS TS Nguyễn Thị Phương Thảo, người hướng dẫn, dẫn dắt trực tiếp cố vấn cho tơi suốt q trình thực đề tài nghiên cứu khoa học Thầy người cho nhiều học chuyên môn cách làm việc thông qua đề tài dự án mình, giúp tơi định hướng phát triển nghiệp Một lần xin gửi lời cảm ơn đến thầy tất lòng chân thành biết ơn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình tơi tạo điều kiện thuận lợi cho việc học tập để đạt thành công ngày hôm Tôi xin cám ơn tất người! Đặng Thị Minh Thư DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại chế hoạt động chất chống oxy hóa 17 Bảng 1.2 Ưu nhược điểm số mơ hình đánh giá khả kháng oxy hóa 21 Bảng 2.1 Các thuốc thử dùng để phân tích sơ thành phần hóa học 28 Bảng 3.1 Khả kháng oxy hóa in vitro chất đối chứng acid ascorbic nồng độ khác 35 Bảng 3.2 Khả kháng oxy hóa in vitro mẫu cao chiết tổng từ củ rễ Sâm Đá nồng độ khác 36 Bảng 3.3 Mức độ gây độc 50% quần thể tế bào (IC50) cao tổng củ rễ Sâm Đá dòng tế bào khác sau 48 xử lý 40 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Mẫu Sâm đá (Curcuma singularis) Hình 1.2 Các protein đường tín hiệu liên quan đến trình apoptosis tế bào Hình 1.3 Các protein đường tín hiệu liên quan trình autophagy tế bào 10 Hình 1.4 Phản ứng trung hoà gốc tự 18 Hình 1.5 Phản ứng hố học phương pháp sử dụng TBA – đo lượng MDA 19 Hình 1.6 Phản ứng FRAP 20 Hình 3.1 Phương trình đường chuẩn axit oleanolic sử dụng định lượng terpenoid tổng cao chiết 39 Hình 3.2 Ảnh hưởng cao chiết tổng củ rẽ Sâm Đá lên tăng sinh tế bào ung thư vú 40 Hình 3.3 Ảnh hưởng cao chiết tổng củ rẽ Sâm Đá lên tăng sinh dòng tế bào ung thư khác 41 Hình 3.4 Ảnh hưởng cao chiết lên tăng sinh nguyên bào sợi WS1 tế bào nội mô HUVEC 44 Hình 3.5 Ảnh hưởng cao chiết củ rẽ Sâm Đá lên tăng sinh tế bào ung thư đại trực tràng Caco2 45 Hình 3.6 Ảnh hưởng của cao chiết củ rẽ Sâm Đá lên hàm lượng enzyme LDH giải phóng mơi trường ni cấy từ tế bào ung thư đại trực tràng Caco2 46 Hình 3.7 Ảnh hưởng cao chiết củ rẽ Sâm Đá lên hình thái tế bào ung thư đại trực tràng Caco2 47 Hình 3.8 Ảnh hưởng của cao chiết củ rẽ Sâm Đá lên hình thành bào lạc tế bào ung thư đại trực tràng Caco2 50 Hình 3.9 Ảnh hưởng cao chiết lên hình thái nhân tế bào ung thư Caco2 51 MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Danh mục bảng Danh mục hình Mục lục Mở đầu Chương Tổng quan tài liệu 1.1 Tổng quan tài liệu 1.1.1 Ung thư 1.1.2 Tổng quan Sâm đá 1.1.3 Tổng quan đường tín hiệu liên quan tới chết tế bào 1.1.4 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học hoạt chất germacrone 11 1.2 Tổng quan tình hình nghiên cứu nước 12 1.2.1 Một số nghiên cứu hỗ trợ điều trị bệnh ung thư dược liệu tự nhiên 12 1.2.2 Một số nghiên cứu Sâm Đá 14 1.2.3 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học hoạt chất germacrone 15 1.2.4 Chất kháng oxy hóa 16 1.3 Tình hình nghiên cứu nước 22 Chương Vật liệu Phương pháp nghiên cứu 25 2.1 Vật liệu sử dụng nghiên cứu 25 2.1.1 Nguyên liệu sử dụng nghiên cứu 25 2.1.2 Các dòng tế bào sử dụng nghiên cứu 25 2.1.3 Các kit sử dụng nghiên cứu 26 2.1.4 Các môi trường hóa chất dùng nghiên cứu 26 2.1.5 Các thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Phương pháp tách chiết cao 26 2.2.2 Phương pháp phân tích sơ hợp chất cao chiết 27 2.2.3 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa in vitro 28 2.2.4 Phương pháp giải đông nuôi cấy tăng sinh tế bào 30 2.2.5 Phương pháp đánh giá mức độ gây độc hay ức chế tăng sinh tế bào 30 2.2.6 Phương pháp xác định hàm lượng enzyme LDH 31 2.2.7 Phương pháp đánh giá thay đổi hình thái tế bào 32 2.2.8 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng dịch chiết lên ức chế hình thành bào lạc tế bào (phương pháp colony assay) 32 2.2.9 Phương pháp nhuộm nhân thuốc nhuộm DAPI 33 2.2.10 Phương pháp xác định chuyển dịch phân tử PS apoptosis tế bào 33 2.2.11 Phân tích thống kê 34 Chương Kết - bàn luận 35 3.1.Kết đánh giá khả kháng oxy hoá cao chiết củ rễ Sâm Đá 35 3.2 Kết đánh giá khả gây độc tế bào cao chiết củ rễ Sâm Đá 38 3.2.1 Khả gây độc cao chiết tế bào ung thư 38 3.2.2 Khả gây độc cao chiết tế bào thường 41 3.3 Ảnh hưởng cao chiết lên tăng sinh tế bào ung thư đại trực tràng 42 3.3.1 Ảnh hưởng cao chiết lên khả sống tế bào ung thư đại trực tràng 42 3.3.2 Ảnh hưởng cao chiết lên hàm lượng enzyme LDH giải phóng từ tế bào ung thư đại trực tràng 44 3.3.3 Ảnh hưởng cao chiết lên hình thái tế bào ung thư đại trực tràng 46 3.3.4 Ảnh hưởng cao chiết lên hình thành bào lạc tế bào ung thư đại trực tràng 47 3.4 Ảnh hưởng cao chiết lên cảm ứng apoptosis tế bào ung thư da 49 3.4.1 Ảnh hưởng cao chiết lên hình thái nhân tế bào ung thư 49 3.4.2 Ảnh hưởng cao chiết lên tỉ lệ apoptosis tế bào ung thư 51 Chương Kết luận – kiến nghị 53 4.1 Kết luận 53 4.2 Kiến nghị 53 Tài liệu tham khảo 54 Phụ lục 60 46 Hadisaputri YE, Miyazaki T, Suzuki S, Kubo N, Zuhrotun A, Yokobori T, Abdulah R, Yazawa S, Kuwano H Molecular characterization of antitumor effects of the rhizome extract from Curcuma zedoaria on human esophageal carcinoma cells Int J Oncol 2015; 47(6): 2255–2263 47 Hu B, Shen KP, An HM, Wu Y, Du Q Aqueous extract of Curcuma aromatica induces apoptosis and G2/M arrest in human colon carcinoma LS-174-T cells independent of p53 Cancer Biother Radiopharm 2011; 26(1): 97–104 48 Geran RI, Greenberg NH, Macdonald MM, Shumacher AM, Abbott BJ Protocols for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other biological systems (3rd edition) Cancer Chemoth Rep 1972; 3: 1–91 49 Chen X, Pei L, Zhong Z, Guo J, Zhang Q, Wang Y Anti-tumor potential of ethanol extract of Curcuma phaeocaulis Valeton against breast cancer cells Phytomedicine 2011; 18: 1238–1243 50 Lee TK, Lee D, Lee SR, Ko YJ, Sung Kang K, Chung SJ, Kim KH Sesquiterpenes from Curcuma zedoaria rhizomes and their cytotoxicity against human gastric cancer AGS cells Bioorg Chem 2019; 87: 117– 122 51 Hadisaputri YE, Miyazaki T, Suzuki S, Kubo N, Zuhrotun A, Yokobori T, Abdulah R, Yazawa S, Kuwano H Molecular characterization of antitumor effects of the rhizome extract from Curcuma zedoaria on human esophageal carcinoma cells Int J Oncol 2015; 47(6): 2255–2263 52 Hanahan D., Weinberg R.A The hallmarks of cancer Cell, 2000, 100: 57-70 53 Johnson V.L., Ko S.C., Holmstrom T.H., Chow S.C Effector caspases are dispensable for the early nuclear morphological changes during chemical-induced apoptosis”, Journal of Cell Science, 200, 113: 29412953 PHỤ LỤC Phụ lục Danh sách dụng cụ sử dụng nghiên cứu TT Tên dụng cụ Hãng sản xuất Đĩa giếng, 24 giếng, 96 giếng Corning Đĩa nuôi tế bào 100 mm Corning Đĩa nuôi cấy chuyển màng (transwell) Corning Bình Flask 25 cm2, 75 cm2 Corning Bình Duran (1000 ml, 500 ml, 250 ml, 100 ml, 50 ml) Schott Màng lọc vô trùng (0,22 µm 0,45 µm) Minisart Micropipette 100-1000 µl, 10-100 µl, 1-10 µl Thermo Pipette aid, Pipette đa kênh Thermo Pipette Pasteur Assistent 10 Đầu tip 1000 µl, 100 µl, 10 µl Watson 11 Eppendorf 1500 µl, 500 µl Kartell Spa 13 Ống ly tâm (15 ml, 50 ml) Corning 14 Các dụng cụ khác: kéo, parafilm, … Phụ lục Các thiết bị sử dụng nghiên cứu TT Tên thiết bị Hãng sản xuất Nước sản xuất Cân số lẻ Pioneer Mỹ Cân số lẻ Sartorius Đức Tủ lạnh – 20oC Sanyo Nhật Tủ lạnh – 70oC n/a Nhật Máy lọc nước tinh khiết Barnstead Mỹ Máy đọc Elisa Amerchan Anh Máy đo quang Thermo Spectronic Mỹ Tủ sấy FD 240 Binder Đức Tủ Hood TT nhiệt đới Việt Nga Việt Nam 10 Bể siêu âm VWRO Mỹ 11 Hệ thống cô quay chân không Buchi Đức 12 Hệ thống sấy đông khô Teflon Trung Quốc 13 Máy đo quang phổ UV SHIMADZU Nhật Bản 14 Bình ngấm kiệt, bình hút ẩm Việt Nam Phụ lục Kết phân tích sơ thành phần nhóm chất củ rễ sâm đá Kết phân tích thử tinh khiết * Xác định độ ẩm Bảng 1.1 Độ ẩm mẫu thử dược liệu củ rễ Sâm Đá Lần Lần Lần Lần Trung bình 8,80 8,77 8,99 8,98 8,88 Độ ẩm (%) Nhận xét: Độ ẩm mẫu thử dược liệu 8,88% * Xác định độ tro toàn phần Bảng 1.2 Tro toàn phần mẫu thử dược liệu củ rễ Sâm Đá Độ tro toàn phần (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 8,98 8,62 9,13 9,05 8,95 Nhận xét: Độ tro toàn phần mẫu thử dược liệu 8,95 % * Hàm lượng chất chiết dược liệu Bảng 1.3 Bảng phân tích sơ thử tinh khiết mẫu thử dược liệu củ rễ Sâm Đá Lần Dược liệu Bì + Dược thực Bì (g) ban đầu (g) liệu sau sấy (g) Nước Độ ẩm (%) Bì + Tro (g) Tro (g) Độ tro (%) 23,9251 2,1028 25,8429 0,185 8,80 24,0974 0,1723 8,98 23,0374 2,199 25,0436 0,1928 8,77 23,2104 0,173 8,62 24,0037 2,0652 25,8832 0,1857 8,99 24,1753 0,1716 9,13 22,9734 2,1043 24,8887 0,189 Trung bình 8,98 23,1467 0,1733 8,88 Phụ lục Kết phân tích sơ thành phần hóa học Tiến hành phân tích sơ thành phần hóa học có mẫu thử theo tài liệu “Giáo trình phương pháp nghiên cứu Dược liệu” môn Dược liệu, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Thực 30 g dược liệu, chiết kiệt hoạt chất với dung mơi có độ phân cực khác nhau, thu dịch chiết tương ứng Xác định nhóm hoạt chất dịch chiết phản ứng hóa học đặc trưng Kết xác định sơ nhóm chất có mẫu dược liệu củ rễ Sâm Đá (Bảng 3.4) Trong dược liệu củ rễ Sâm Đá có chứa số nhóm chất triterpenoid, alkaloid, saponin, chất khử dẫn chất polyuronic Theo kết nghiên cứu Phan Văn Tân cộng (2015) cho thấy củ rễ Sâm Đá có chứa thành phần hợp chất thứ cấp polyphenol, saponin alkaloid Đây nhóm hợp chất có hoạt tính dược học khả kháng ung thư, kháng oxy hóa, ức chế vi sinh vật nhiều nghiên cứu chứng minh [44] Trong đó, nghiên cứu Nguyễn Quốc Bình, 2014 tiến hành đánh giá sơ thành phần hoá học củ rễ Sâm Đá thu nhận huyện Kbang, tỉnh Gia Lai cho thấy thành phần có saponin, có hàm lượng từ 1,16% đến 1,82% hợp chất khác alkaloid Hàm lượng chất mẫu trồng thấp so với mẫu lấy rừng tự nhiên [38] Như vậy, kết đánh giá sơ nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu trước Trong nhóm hợp chất có củ rễ Sâm Đá, nghiên cứu ý tới nhóm hợp chất triterpenoid tiến hành nghiên cứu cụ thể nhóm chất nghiên cứu 9,05 8,95 Phụ lục Bảng phân tích sơ thành phần hóa thực vật mẫu dược liệu củ rễ Sâm Đá Nhóm hợp chất Thuốc thử /phản ứng Phản ứng dương tính Kết định tính Cao chiết Cao ether Cao cồn Cao nước Tinh dầu Bay tới cắn, có mùi thơm + + – Chất béo Nhỏ dd giấy Vết mờ – – – Carotenoid Thuốc thử Carr–Price Xanh chuyển sang đỏ – – – – – – ++ ++ – H2SO4 Triterpenoid Xanh dương hay xanh lục ngả sang xanh dương Lieberman – Burchard Lớp đỏ nâu/tím Mayer (Valse–Mayer) Tủa đục – + – Bouchardat Tủa đục – + – Dragendoff Tủa đục – + – Coumarin Phát quang kiềm Phát quang mạnh – – – Anthraquinon NaOH 10% Dd kiềm có màu hồng tới đỏ – –* –* Flavonoid Mg/HCl đđ Dd có màu hồng tới đỏ – – – Alkaloid Glycosid tim Thuốc thử vòng lacton đường desoxy – – – Dung dịch FeCl3 Xanh rêu hay xanh đen – + – Dung dịch gelatin muối Tủa trắng – – – Saponin Lắc mạnh nước Bọt bền – + + Các chất khử Thuốc thử Fehling Tủa đỏ gạch – ++ ++ Acid hữu NaHCO3 Sủi bọt – – – Polyuronid Kết tủa aceton Tủa – – ++ Tanin * dịch thủy phân - : Âm tính +: Dương tính; ++: Dương tính mạnh Kết luận: Trong dược liệu củ rễ Sâm Đá có: triterpenoid, alkaloid, saponin, chất khử dẫn chất polyuronic Một chất cho kết âm tinh do: • Chất thực khơng có mặt • Hàm lượng chất q ít, ngồi giới hạn phát thuốc thử • Bị chất khác dịch chiết làm mờ phản ứng Do kết mang tính khảo sát đánh giá sơ Phụ lục Kết thu nhận cao chiết từ bột củ rể sâm đá Độ ẩm mẫu củ rễ Sâm Đá thực điều kiện phơi nắng tự nhiên để bảo đảm giữ hoạt tính sinh học mẫu Kết cho thấy độ ẩm mẫu đạt 8,90% Độ ẩm nguyên liệu mẫu nằm giới hạn cho phép bảo quản thực tế Đồng thời, nghiên cứu sử dụng phần trăm độ ẩm để quy kết phân tích phần trăm vật chất khô, tạo thuận lợi việc so sánh thành phần hoạt tính mẫu phân tích Bảng 6.1 Kết kiểm tra độ ẩm cao chiết hiệu suất tách chiết dung môi khác Cao chiết củ rễ Sâm Đá Hiệu suất tách chiết (%) Độ ẩm (%) Cao chiết nước 8,70 20,83 Cao chiết ethanol 10,87 17,06 Cao chiết ether 3,21 18,20 Mẫu bột củ rễ Sâm Đá (100 g) chiết xuất phương pháp ngâm dung môi khác gồm nước, ethanol ether nhiệt độ phòng 24 – 48 Khi sử dụng dung mơi khác để tách chiết, có khác biệt hiệu suất tách chiết, 8,70% với dung môi nước; 10,87% với dung môi ethanol 3,21% với dung mơi ether Trong đó, độ ẩm cao chiết nước, cao chiết ethanol cao chiết ether 20,83%; 17,06% 18,20% (Bảng 3.5) Như vậy, dung môi ethanol cho hiệu suất tách chiết cao (trọng lượng cao thu được) so với dung môi nước hay ether Độ ẩm cao chiết khơng có khác biệt nhiều Bảng 6.2 Kết định tính nhóm hợp chất cao chiết Hợp chất Cao chiết nước Cao chiết ethanol Cao chiết ether Carotenoid - - - Terpenoid - + + Alkaloid - + - Flavonoid + + - Glycosid - - - Saponin - + + Kết phân tích sơ số thành phần hợp chất tự nhiên cho thấy dung môi ethanol ether phù hợp cho việc chiết hợp chất thuộc nhóm terpenoid (Bảng 3.6) Kết tương tự với nghiên trước Nguyen cs., 2016 tiến hành phân tích thành phần nhóm chất có cao chiết Sâm Đá Kết nghiên cứu phát thấy số hợp chất thuộc nhóm terpenoid ý với hàm lượng cao cao chiết dạng dầu rễ (củ) Sâm Đá camphor (25.83%), germacrone (8.00%), caryophyllene oxide (4.48%), terpinen-4-ol (3.84%) germacrone-4,5epoxide (3.84%) [17] Kết nghiên cứu cho thấy dung môi ethanol, dung mơi ether sử dụng cho việc tách chiết nhóm chất terpenoid từ mẫu dược liệu củ rễ Sâm Đá Tuy nhiên, hiệu xuất thu hồi cao dung môi ether thấp, vậy, nghiên cứu sử dụng dung môi ethanol để thu nhận cao tổng từ mẫu dược liệu củ rễ Sâm Đá Phụ lục Kết ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên tỉ lệ sống (%) tế bào ung thư vú MCF7 theo thời gian Sau 12 xử lý Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 104,02 102,35 100,56 94,41 91,02 87,20 84,20 100,00 107,10 99,23 96,12 98,02 89,10 90,52 87,58 100,00 102,30 104,78 99,00 96,10 94,32 88,30 85,30 TB ± SS 100,00 ± 0,00 104,47 ± 2,43 102,12 ± 2.78 98,56 ± 2,25 96,18 ± 1,81 91,48 ± 2,64 88,67 ± 1,79 85,69 ± 2,72 Sau 24 xử lý Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 105,32 100,41 100,20 98,63 91,02 78,32 72,02 100,00 100,56 98,32 100,32 92,30 85,30 75,00 68,35 100,00 106,10 99,17 108,26 92,06 84,32 75,69 68,10 TB ± SS 100,00 ± 0,00 103,99 ± 3,00 99,27 ± 1,01 102,45 ± 4,65 94,32 ± 3,74 86,88 ± 3,62 76,34 ± 1,75 69,49 ± 2,39 Sau 48 xử lý Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 104,23 102,32 100,20 95,32 71,35 50,12 32,02 100,00 106,20 105,10 100 97,02 68,12 42,58 34,56 100,00 100,10 99,16 99,87 93,21 65,02 43,02 35,02 TB ± SS 100,00 ± 0,00 103,51 ± 3,11 102,25 ± 3,10 100,02 ± 0,37 95,18 ± 1,91 68,16 ± 3,17 45,24 ± 4,23 33,87 ± 1,62 Phụ lục Kết ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên tỉ lệ sống (%) dòng tế bào ung thư vú khác sau 48 xử lý Tế bào MCF7 Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 104,23 102,32 100,20 95,32 71,35 50,12 32,02 100,00 106,20 105,10 100 97,02 68,12 42,58 34,56 100,00 100,10 99,16 99,87 93,21 65,02 43,02 35,02 TB ± SS 100,00 ± 0,00 103,51 ± 3,11 102,25 ± 3,10 100,02 ± 0,37 95,18 ± 1,91 68,16 ± 3,17 45,24 ± 4,23 33,87 ± 1,62 Tế bào A375 Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 108,23 106,33 101,36 99,20 88,30 85,70 45,20 100,00 104,57 104,26 104,20 98,32 94,20 81,32 50,82 100,00 110,30 107,58 105,63 95,10 94,55 81,60 52,12 TB ± SS 100,00 ± 0,00 107,59 ± 3,09 106,00 ± 1,70 103,73 ± 2,17 97,50 ± 2,14 92,34 ± 3,48 83,07 ± 1,98 49,38 ± 3,68 Tế bào Caco2 Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 102,36 92,32 88,12 72,23 50,12 30,65 23,23 100,00 104,2 94,56 86,62 78,58 47,2 28,20 20,30 100,00 98,32 90,12 84,39 75,24 45,88 27,23 24,78 TB ± SS 100,00 ± 0,00 101,63 ± 3,01 92,33 ± 2,22 86,38 ± 1,88 75,35 ± 3,18 47,73 ± 2,17 28,69 ± 1,76 22,77 ± 2,28 Tế bào Hep3B Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 105,37 98,20 94,20 84,20 60,12 38,32 34,12 100,00 105,10 94,23 94,10 79,20 63,02 39,12 34,02 100,00 101,23 96,02 90,15 79,78 64,08 43,16 32,54 TB ± SS 100,00 ± 0,00 103,90 ± 2,32 96,15 ± 1,99 92,82 ± 2,31 81,06 ± 2,73 62,41 ± 2,05 40,20 ± 2,59 33,59 ± 0,91 Phụ lục Kết ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên tỉ lệ sống (%) nguyên bào sợi tế bào nội mô Nguyên bào sợi WS1 Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 100,50 104,25 99,12 90,23 84,02 68,12 55,58 100,00 98,00 98,06 92,25 95,02 82,12 72,06 62,47 100,00 102,20 102,12 97,23 93,10 78,01 68,85 57,23 TB ± SS 100,00 ± 0,00 100,23 ± 2,11 101,48 ± 3,14 96,20 ± 3,55 92,78 ± 2,41 81,38 ± 3,07 69,68 ± 2,10 58,43 ± 3,60 Tế bào nội mơ HUVEC Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 100,00 104,23 95,23 92,12 92,02 80,02 75,52 60,12 100,00 100,80 99,21 93,20 89,10 84,04 72,01 64,02 100,00 101,30 97,12 97,12 88,30 77,23 69,69 64,58 TB ± SS 100,00 ± 0,00 102,11 ± 1,85 97,19 ± 1,99 94,15 ± 2,63 89,81 ± 1,96 80,42 ± 3,41 72,41 ± 2,94 62,91 ± 2,43 Phụ lục 10 Kết ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên hàm lượng LDH môi trường nuôi cấy tế bào ung thư đại tràng Caco2 Đơn vị tính: lần Lần Đối chứng 6.25 µg/ml 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 200 µg/ml 1 0,99 0,96 1,22 1,80 2,62 3,02 2,98 1,06 1,07 1,33 1,70 2,57 2,88 3,45 1,04 1,19 1,52 2,12 2,85 2,62 3,22 TB ± SS 1,00 ± 0,00 1,03 ± 0,04 1,07 ± 0,12 1,36 ± 0,15 1,87 ± 0,22 2,68 ± 0,15 2,84 ± 0,20 3,22 ± 0,24 Phụ lục 11 Kết ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên khả hình thành bào lạc tế bào ung thư đại tràng Caco2 Đơn vị tính: số bào lạc Lần Đối chứng 470 12.5 µg/ml 25 µg/ml 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml 472 410 326 230 184 452 448 442 354 195 140 446 460 420 346 218 163 TB ± SS 456 ± 12 460 ± 14 424 ± 16 342 ± 14 218 ± 18 162 ± 22 Phụ lục 12 Kết đánh giá ảnh hưởng cao chiết Sâm Đá lên khả cảm ứng apoptosis tế bào ung thư đại tràng Caco2 hệ thống flow cytometry Đơn vị tính: % Lần Đối chứng 50 µg/ml 100 µg/ml 150 µg/ml Etoposide 3,06 6,12 11,18 18,35 29,01 4,52 9,79 16,62 25,35 30,74 3,98 7,31 13,44 18,63 25,48 TB ± SS 3,85 ± 0,74 7,74 ± 1,87 13,74 ± 2,75 21,78 ± 4,02 28,41 ± 2,68