Luận văn thạc sĩ nghiên cứu khả năng tích lũy coenzyme q10 của một số chủng vi khuẩn tía quang hợp phân lập tại việt nam

i Lời cam đoan Tôi xin cam đoan: Đây cơng trình nghiên cứu tơi số kết cộng tác với cộng khác; Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực, phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả; Phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Đồn Thị Bắc ii Lời cảm ơn Với tất lịng, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Thị Nhi Cơng, Trưởng phịng Cơng nghệ sinh học Môi trường, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam TS Tạ Thu Hằng, Trưởng phịng Cơng nghệ sinh học Nông nghiệp, Viện Nghiên cứu Phát triển Vùng, người thầy dành cho ý tưởng quý báu, hướng dẫn tận tình, tạo điều kiện thuận lợi động viên suốt q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Liên anh chị Phịng Cơng nghệ sinh học Môi trường, Viện Công nghệ sinh học giúp đỡ nhiệt tình đóng góp ý kiến quý báu tận tình dạy, tạo điều kiện giúp đỡ thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban lãnh đạo Học Viện Khoa học Công nghệ với Ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học- Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu suốt thời gian thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu Phát triển Vùng tạo điều kiện cho tơi có thời gian để học tập thời gian công tác Viện, nhận hỗ trợ nhiệt tình từ Phịng Cơng nghệ sinh học Nông nghiệp nơi công tác, giúp đỡ nhiệt tình động viên anh, chị, em đồng nghiệp, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến bố mẹ, người thân gia đình người bạn thân thiết bên cạnh, động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tác giả Đoàn Thị Bắc iii Danh mục ký hiệu chữ viết tắt Chữ viết tắt, kí hiệu Tiếng anh Bchl Bacteriochlorophyll CoQ Coenzyme Q Tiếng việt Sắc tố diệp lục vi khuẩn CoQ10 Coenzyme Q with chain containing 10 isoprene subunits Coenzyme Q với chuỗi isoprene có chứa 10 tiểu đơn vị HPLC High-performance liquid chromatography Sắc kí lỏng hiệu cao OD Optical Density Mật độ quang TCL Thin layer chromatography Sắc kí lớp mỏng VKQH VKTQH Vi khuẩn quang hợp Vi khuẩn tía quang hợp iv Danh mục bảng Bảng 1.1 Hàm lượng Coenzyme Q10 (μg/g) số loại thực phẩm Bảng 3.1 Kết đánh giá hàm lượng Coenzyme Q10 chủng 28 Bảng 3.2 So sánh khả sử dụng số nguồn C chủng lựa chọn với Rhodopseudomonas palustris (Molish) van Niel BCRC16408 31 Bảng 3.3 Hàm lượng CoQ10 chủng VKTQH tích lũy mơi trường nuôi cấy khác 42 v Danh mục hình vẽ, đồ thị Hình 1.1 Chuỗi vận chuyển điện tử Hình 1.2 Hình ảnh quang phổ vi khuẩn tía quang hợp 13 Hình 3.1 Khả sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quan hợp mơi trường DSMZ 27 sau hoạt hóa 27 Hình 3.2 Sắc ký mỏng thể có mặt Coenzyme Q10 28 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc hình thái tế bào chủng FO2 (A, B) chủng DQ4 (C, D) 30 Hình 3.4 Cây phát sinh chủng loại chủng FO2 DQ4 dựa vào so sánh trình tự gen 16S rRNA 32 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 34 Hình 3.6 Ảnh hưởng pH ban đầu đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 35 Hình 3.7 Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 36 Hình 3.8 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 37 Hình 3.9 Ảnh hưởng NaCl đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 39 Hình 3.10 Phương pháp thu nhận CoQ10 từ chủng FO2 DQ4 40 vi MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 1.1 TỔNG QUAN VỀ COENZYME Q10 1.1.1 Cấu tạo Coenzyme Q10 1.1.2 Đặc tính Coenzyme Q10 1.1.2.1 Đặc tính lý hóa 1.1.2.2 Đặc tính sinh học thể sinh vật 1.1.3.1 Tổng hợp hóa học 1.1.3.2 Coenzyme từ động vật thực vật 1.1.3.3 Coenzyme Q10 từ vi sinh vật 1.1.4 Các nghiên cứu phương pháp tách chiết Coenzyme Q10 1.1.5 Ứng dụng Coenzyme Q10 10 1.1.5.1 Ứng dụng y học 10 1.1.5.2 Trong mỹ phẩm 11 1.2 MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA VI KHUẨN TÍA QUANG HỢP VÀ ỨNG DỤNG TRONG VIỆC SẢN XUẤT COENZYME Q10 11 1.2.1 Giới thiệu chung vi khuẩn quang hợp 11 1.2.2 Giới thiệu chung vi khuẩn tía quang hợp 12 1.2.3 Ảnh hưởng nhân tố lý hóa đến sinh trưởng vi khuẩn tía quang hợp 13 1.2.4 Các nghiên cứu khả tích lũy Coenzyme Q10 vi khuẩn tía quang hợp 15 1.2.4.1 Nghiên cứu giới khả tích lũy Coenzyme Q10 vi khuẩn tía quang hợp 15 1.2.4.2 Nghiên cứu nước khả tích lũy Coenzyme Q10 vi khuẩn tía quang hợp 16 vii CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ MÁY MÓC 18 2.1.1 Nguyên vật liệu 18 2.1.2 Các thiết bị máy móc 18 2.1.3 Hóa chất 19 2.1.4 Thành phần môi trường nuôi cấy 19 2.2 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 20 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.3.1 Phương pháp ni cấy, hoạt hóa đánh giá sinh trưởng vi khuẩn tía quang hợp 20 2.3.2 Phương pháp xác định Coenzyme Q10 từ chủng vi khuẩn tía quang hợp 20 2.3.3 Phương pháp xác định đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn tía quang hợp 22 2.3.3.1 Phương pháp đánh giá sinh trưởng xác định đặc điểm hình thái 22 2.3.3.2.Phương pháp xác định khả sử dụng số nguồn carbon 22 2.3.3.3 Phương pháp phân tích gene mã hóa 16S rRNA 23 2.3.4 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 23 2.3.5.Xây dựng phương pháp tách chiết Coenzyme Q10 từ chủng lựa chọn 25 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VKTQH CĨ KHẢ NĂNG TÍCH LŨY COENZYME Q10 CAO 26 viii 3.1.1.Sàng lọc chủng vi khuẩn tía quang hợp có khả tích lũy Coenzyme Q10 cao 26 3.1.1.1.Hoạt hóa đánh giá khả sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp 26 3.1.1.2 Sàng lọc chủng vi khuẩn tía quang hợp có khả tích lũy Coenzyme Q10 cao 27 3.1.2 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng lựa chọn 29 3.1.2.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc hình thái tế bào 29 3.1.2.2 Khả sử dụng nguồn carbon 31 3.1.2.3 Xác định trịnh tự gene 16S rRNA chủng lựa chọn 32 3.2 KHẢO SÁT CÁC ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY ĐẾN SINH TRƯỞNG CỦA CHỦNG VI KHUẨN TÍA QUANG HỢP LỰA CHỌN 33 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 33 3.2.2 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 35 3.2.3 Ảnh hưởng cường độ chiếu sáng đến sinh trưởng chủng vi khuẩn tía quang hợp lựa chọn 36 3.2.4 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến sinh trưởng chủng lựa chọn 37 3.2.5 Ảnh hưởng nồng độ muối NaCl đến sinh trưởng chủng lựa chọn 38 3.3 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT COENZYME Q10 TỪ CÁC CHỦNG VI KHUẨN TÍA QUANG HỢP LỰA CHỌN 39 CHƯƠNG 4.KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 KẾT LUẬN 44 4.2 KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 MỞ ĐẦU Coenzyme Q10 hay gọi ubiquinone (ubidecarenone CoQ10) ba Coenzyme tham gia vào chuỗi vận chuyển điện tử màng tế bào sinh vật nhân sơ lớp màng ty thể sinh vật nhân chuẩn CoQ10 có vai trị quan trọng q trình sinh tổng hợp ATP – lượng sinh học thể sống Ngoài ra, CoQ10 cịn có tính chất chống oxy hóa mạnh có khả trung hịa gốc tự do, CoQ10 ngày ứng dụng rộng rãi làm nguồn thực phẩm chức năng, giúp cải thiện sức khỏe; đưa vào mỹ phẩm làm đẹp chất chống oxy hóa, chống lão hóa để giúp thể trẻ hóa; ứng dụng y tế nhằm ngăn ngừa ung thư, điều trị nhiều bệnh tim mạch, tiểu đường, Parkinson, tăng cường hệ thống miễn dịch … Với nhiều ứng dụng có lợi nên nhu cầu CoQ10 ngày tăng lên có nhiều phương pháp sử dụng để tổng hợp CoQ10 như: lên men, tổng hợp sinh học, tổng hợp hóa học tách chiết từ mơ động vật thực vật Đối với q trình tổng hợp hóa học bị nhược điểm chất hóa học sử dụng gây độc mơi trường CoQ10 thu nhận từ động vật thực vật, nhiên nồng độ CoQ10 tế bào thấp tách chiết qui mô công nghiệp chi phí cao Vì vậy, q trình tổng hợp CoQ10 phương pháp sinh học sử dụng nhiều nay, đem lại hiệu thương mại, đặc biệt sản phẩm CoQ10 an toàn cho người sử dụng, đồng thời giá thành lại rẻ CoQ10 tổng hợp thơng qua q trình lên men nhờ vi khuẩn (Agrobacterium tumefaciens, Paracoccus denitrificans, Rhizobium radiobacter, Rhodobacter sphaeroides, Rhodobacter sulfidophilus, Rhodopseudomonas palustris …), nấm mốc nấm men (Asperillus, Bullera, Bulleromyces, Cyptococcus, Fellomyces, Kockovaella, Rhodoturola, Sporobolomyces, Utilago) Trong số vi khuẩn này, vi khuẩn tía quang hợp (VKTQH) nguồn vi sinh vật lý tưởng để thu nhận CoQ10 chúng có khả tổng hợp, tích luỹ hàm lượng ubiquinone cao vi sinh vật khác, đặc biệt cho sản phẩm chủ yếu CoQ10 Bên cạnh đó, VKTQH nuôi cấy dễ dàng môi trường đơn giản ánh sáng mặt trời Vì vậy, nguồn tiềm thu nhận lượng lớn chất có tác dụng sinh học, đặc biệt CoQ10 VKTQH có nhiều lồi khả tích lũy CoQ10 khác phụ thuộc vào sinh trưởng điều kiện ni cấy lồi Ở tế bào VKTQH, CoQ10 nằm vùng kỵ nước lớp màng phospholipid màng tế bào, điều cần thiết phá vỡ màng tế bào để chiết xuất thành phần Phương thức phá vỡ màng tế bào VKTQH ảnh hưởng đến hiệu việc chiết xuất CoQ10 Một số phương pháp chiết xuất CoQ10 thực với hiệu khác chủ yếu phù hợp cho quy mơ phịng thí nghiệm Các nghiên cứu tác động số yếu tố nhiệt độ, ánh sáng, độ pH nồng độ muối ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển VKTQH khả tích lũy CoQ10 VKTQH chưa công bố nhiều Việt Nam Vì vậy, chúng tơi thực đề tài: “Nghiên cứu khả tích lũy Coenzyme Q10 số chủng vi khuẩn tía quang hợp phân lập Việt Nam” *Mục tiêu nghiên cứu: - Lựa chọn xác định điều kiện ni cấy thích hợp chủng vi khuẩn tía quang hợp có khả tích lũy CoQ10 cao - Xây dựng phương pháp tách chiết CoQ10 nhằm định hướng ứng dụng sản xuất thực phẩm chức *Nội dung nghiên cứu - Tuyển chọn đánh giá đặc điểm sinh học 1-2 chủng VKTQH có khả tích lũy CoQ10 cao - Khảo sát điều kiện ni cấy thích hợp cho việc sinh trưởng chủng lựa chọn - Xây dựng phương pháp tách chiết CoQ10 từ chủng VKTQH lựa chọn 49 diphosphate synthase gene and foreign mevalonate pathway, Metabolic Engineering, 8, pp 406–416 40 Sander S., Coleman C.I., Patel A.A., Klujer J., White C.M., 2006, The impact of Coenzyme Q10 on systolic function in patients with chronic heart failure, J Card Fail, 12, pp 464-472 41 Hadj A., Pepe S., Rosenfeldt F., 2007, The clenical application of metabolic therapy for cardiovascular disease, Heart Lung Circ, 16, pp 5664 42 Cooper O., Seo H., Andrabi S., Guardia-Laguarta S., Graziotto J., et al., 2012, Pharmacological rescue of mitochondrial deficits in iPSC-derived neurl cells from patients with familial Parkinson’s disease, Sci Transl Med, 4, pp 141-190 43 Stack E.C., Matson W.R., Ferrante R.J., 2008, Evidence of oxidant damage in Huntington’s disease, Transitional strategies using antioxidants, Ann N Y Acad Sci, 1147, pp 79-92 44 Lee J., Boo J.H., Ryu H., 2009, The failure of mitochondria leads to neurodegeneration; mitochondria need a jump start? Adv Drug Deliv Rev, 61, pp 1316-1323 45 Wadsworth T., Bishop J.A., Pappu A.S., Woltjer R.L., Quinn J.F., 2008, Evaluation of Coenzyme Q as an antioxidant strategy for Alzheimer’s disease, J Alzheimers Dis, 14, pp 225-234 46 Rusciani L., Proietti I., Rusciani A., Paradisi A., Sbordoni G., et al., 2006, Low plasma Coenzyme Q10 levels as an independent prognostic factor for melanoma progression, J Am Acad Dermitol, 54,pp 234-241 47 Brea-Calvo G., Rodriguez-Hernandez A., Fernantez-Ayala D.J., Navas P., Sanchez-Alkazar J.A., 2006, Chemotherapy induces an increase in Coenzyme Q10 levels in cancer cell lines, Free Radic Biol Med, 40, pp.1293-1302 50 48 Roffe L., Schmidt K., Ernst E., 2004, Efficacy of Coenzyme Q10 for improved tolerability of cancer treatments; a systematic review, J Clin Oncol, 22, pp.4418-4424 49 Villalba J.M., Parrado C., Santos-Gonzalez M., Al-cain F.J., 2010, Therapeutic use of Coenzyme Q10 and Coenzyme Q10 related compounds and formulations, Expert Opin Investig Drugs, 19, pp 535-554 50 Hernandez-Ojeda J., Cardona-Munoz E.G., Roman-Pintos L.M., TroyoSanroman R., Ortiz-Lazareno P.C., et al., 2012, The effect of ubiquinone in diabetic polyneuropathy; a randomized double-blind placebo-controlled study, J Diabetes Complications, 26, pp.352-358 51 Gvozdjakova A K., Bartkovjakova M., 2005, Coenzyme Q10 supplementation reduces corticosteroids dosage in patients with bronchial asthma, Biofactors, 25, pp.235-240 52 Rozen T.D., Oshinsky M.L., Gebeline C.A., Bradley K.C., Young W.B., Shechter A.L., Silberstein S.D., 2002, Open label trial of Coenzyme Q10 as a migraine preventive, Cephalalgia, 22(2), pp.137-41 53 Codgell R J., Gall A and Kohler J., 2006, The architecture and function of the light-harvesting apparatus of purple bacteria: From single molecule to in vivo membranes, Quart Rev Biophys 39: 227-324 54 Imhoff J.F., 2001, The Anoxygenic Phototrophic Purple Bacteria In: Boon and Garrity (Eds.) Bergey’s manual of Systematic Bacteriology, 2nd Ed., Vol.1, Springer-Verlag 55 Bergey D.H., Noel R K., John G H., 1984, Bergey's manual of systematic bacteriology, Baltimore, MD : Williams & Wilkins 56 Michael T M and Deborah O J., 2008, An Overview of Purple Bacteria: Systematics, Physiology, and Habitats, Department of Microbiology, Southern Illinois University, Carbondale, IL 62901, U.S.A 57 Imhoff J.F., Hiraishi A and Süling J., 2005, Anoxygenic phototrophic bacteria In: Brenner DJ, Krieg NR and Staley JT (eds) Bergey’s Manual 51 of Systematic Bacteriology, 2nd ed, Vol 2, part A, pp 119–132 Springer, New York 58 Hunter C.N., Daldal F., Thurnauer M.C and beatty J.T., 2009, The Purple Phototrophic Bacteria, Chapter 1: An Overview of Purple Bacteria: Systematics, Physiology, and Habitats, pp 1-12 59 Pfennig N., 1969, Rhodopseudomonas acidophila, sp n., a new species of the budding purple nonsulfur bacteria, J Bacteriol, 99, pp.597–602 60 Pfennig N., 1974, Rhodopseudomonas globiformis, sp n., a new species of the Rhodospirillaceae, Arch Microbiol, 100, pp 197–206 61 Kamble K D., 2016, Influence of various lights on growth of purple phototrophic bacteria, World J Pharma Pharmacol Sci., (1), pp.17051712 62 Madigan M.T., Cox S.S and Stegeman R.A., 1984, Nitrogen fixation and nitrogenase activities in members of the family Rhodospirillaceae, J Bacteriol, 157, pp 73–78 63 Garcia D., Parot P., Verméglio A and Madigan M.T., 1986, The lightharvesting complexes of a thermophilic purple sulfur photosynthetic bacterium Chromatium tepidum, Biochim Biophys Acta, 850, pp.390–395 64 Castenholz R.W and Pierson B.K., 1995, Ecology of thermophilic anoxygenic phototrophs In: Blankenship RE, Madigan MT and Bauer CE (eds) Anoxygenic Phototrophic Bacteria, pp 87–103 Kluwer Academic Publishers, Dordrecht 65 Jung D.O., Achenbach L.A., Karr E.A., Takaichi S and Madigan M.T., 2004, A gas vesiculate planktonic strain of the purple non-sulfur bacterium Rhodoferax antarcticus isolated from Lake Fryxell, Dry Valleys, Antarctica, Arch Microbiol, 182, pp.236–243 66 Tian Y., Yue T., Yuan Y., Soma P.K., Lo Y.M., 2010, Improvement of cultivation medium for enhanced production of Coenzyme Q10 by photosynthetic Rhodospirillum rubrum, Biochem Eng J, 51, pp.160-166 52 67 Jiang S., Yu L., 2008, Increasing CoQ10 Production by Rhodopseudomonas palustris J001 Using a Two-Stage Fermentation Process, Z Naturforsch, 63, pp.884-888 68 Wang J., Nie X, Zhang L and Zhao Z., 2016, Optimization of production procedures for Coenzyme Q10 from Rhodobacter sphaeroides, J Chem Pharmacal Research, 8(7), pp.924-929 69 Lê Quang Huấn, Đỗ Thị Tố Uyên, Trần Văn Nhị, 1999, Phương pháp thu nhận carotenoid ubiquinone từ vi khuẩn quang hợp thuộc chi Rhodobacter phân lập Việt Nam, Hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội, tr.526-530 70 Đỗ Thị Tố Uyên, Trần Văn Nhị, 2005, Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất ubiquinone từ sinh khối vi khuẩn tía quang hợp, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, tr.846-949 71 Lê Thị Thanh Thảo, Nguyễn Văn Thanh, Trần Thị Hồng Kim, 2014, Khảo sát mơi trường ni cấy thích hợp cho việc sản xuất ubiquinon q10 từ vi khuẩn quang dưỡng tía khơng lưu huỳnh Rhodopseudomonas palustris, Y Học TP Hồ Chí Minh 18, tr 216 – 221 72 Paterson R.R.M., Buddie A., 1991, Rapid determination of ubiquinone profiles in Penicillium by reversed phase performance thin-layer chromatography, Lett Appl Microbiol, 13, pp.133–136 73 Cao X L., 2006, Purification of Coenzyme Q10 from fermentation extract: Highspeed counter-current chromatography versus silicagel column chromatography, J Chrom A, 1127, pp 92–96 74 Wong W.T., Tseng C.H., Hsu S.H., Lur H.S., Mo C.W., Huang C.N., Hsu S.C., Lee K.T., and Liu C.T, 2014, Promoting Effects of a Single Rhodopseudomonas palustris Inoculant on Plant Growth by Brassica rapa chinensis under Low Fertilizer Input, Microbes Environ, 29(3), pp.303– 313 53 75 Imhoff J F and Trüper H G., 1992, The genus Rhodospirillum and related genera, In The prokaryotes, second edition, pp 2141–2155, Editor A Balaws, H G Trüper, M Dworkin, W Harder and K Schleifer Springer–Verlag, London 76 Imhoff J F and Trüper H.G., 1989, The purple nonsulfur bacteria In Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology vol pp 1658–1661 Editor J T Staley, M P Bryant, N Pfennig and J G Holt, Williams and Wilkins Co Baltimore 77 Kien N.B., Kong I.S., Lee M.G, Kim J.K., 2010, “Coenzyme Q10 production in a 150 l reactor by a mutant strain of Rhodobacter sphaeroides”, J Fish Sci Technol, 37, pp 521–529 78 Trần Thị Lệ Quyên Đào Thị Lương, 2010, Phân loại nghiên cứu điều kiện ni thích hợp cho sinh trưởng tổng hợp CoQ10 chủng nấm men PL5-2 Di truyền học ứng dụng – Chuyên san CNSH (Viện VSV CNSH, ĐHQG Hà Nội), tr 6: 7-13 79.Đinh Thị Thu Hằng, 2007, Nghiên cứu phân hủy sinh học hợp chất hydrocarbon mạch vòng số vi khuẩn quang hợp tía phân lập Việt Nam, Luận án Tiến sỹ sinh học 54 PHỤ LỤC 1.KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM NGHIÊN CỨU Bảng P1 Kết đánh giá khả sinh trưởng chủng sau ngày nuôi cấy Chủng ΔOD800 ±SD FO2 1,98a 0,05 DQ1 1,56c 0,04 DQ2 1,67b 0,05 DQ3 1,52c 0,03 DQ4 1,93a 0,04 DQ5 1,67b 0,03 LSD 0,05 0,07 Trong cột, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Bảng P2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến mức độ tích lũy sinh khối chủng VKTQH sau ngày nuôi cấy Đơn vị: ΔOD800 Nhiệt độ (oC) DQ4 FO2 14-16 27-30 38-40 LSD 0,05 TB 0,85c 1,85a 1,30b 0,2 ±SD 0,02 0,03 0,03 TB 0,90c 1,92a 1,50a ±SD 0,01 0,03 0,02 0,3 Trong hàng, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% 55 Bảng P3 Ảnh hưởng pH đến mức độ tích lũy sinh khối chủng VKTQH sau ngày nuôi cấy pH DQ4 ΔOD800 ±SD 0,02 0,02 0,04 0,02 0,05 0,03 0,05 0,04 0,03 e FO2 ΔOD800 f ±SD 0,03 0,05 0,04 0,03 0,02 0,02 0,04 0,02 0,05 0,18 0,19 d 0,80 0,88e 1,41c 1,46c 6,5 1,67a 1,72a 1,66a 1,70a 7,5 1,60ab 1,64b 1,50c 1,56bc 8,5 1,40c 1,45c 1,18d 1,20d LSD 0,05 0,13 0,12 Trong cột, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Bảng P4.Ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến mức độ tích lũy sinh khối chủng VKTQH sau ngày nuôi cấy Cường độ ánh sáng DQ4 FO2 (lux) ΔOD800 ±SD ΔOD800 ±SD 5000 1,90a 0,05 1,92a 0,05 4000 1,96a 0,02 2,02a 0,03 3000 1,56b 0,03 1,54b 0,03 2000 1,00c 0,07 1,03c 0,04 1000 0,60d 0,02 0,64d 0,06 0,17e 0,03 0,18e 0,03 LSD 0,05 0,15 0,16 Trong cột, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% 56 Bảng P5.Ảnh hưởng nồng độ muối đến mức độ tích lũy sinh khối chủng VKTQH sau ngày nuôi cấy NaCl (%) DQ4 FO2 ΔOD800 ±SD ΔOD800 ±SD 1,90a 0,05 1,95a 0,03 0,5 1,72b 0,04 1,75ab 0,05 1,57bc 0,03 1,60bc 0,04 1,5 1,54c 0,02 1,58bc 0,03 1,38d 0,02 1,41cd 0,04 2,5 1,34de 0,04 1,35de 0,03 1,19e 0,03 1,18ef 0,02 3,5 1,02ef 0,05 1,03fg 0,02 0,95f 0,04 0,93g 0,04 0,60g 0,03 0,62h 0,05 LSD 0,05 0,17 0,21 Trong cột, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% 57 Bảng P6.Ảnh hưởng cường độ ánh sáng đến mức độ tích lũy sinh khối chủng VKTQH sau ngày nuôi cấy Đơn vị: ΔOD800 NaCl (%) DQ4 FO2 ΔOD800 ±SD ΔOD800 ±SD NH4Cl 2,02b 0,03 2,09b 0,03 Pepton 2,22a 0,03 2,30a 0,04 (NH4)2SO4 1,87b 0,03 1,96b 0,04 Co(NH2)2 1,50c 0,04 1,40c 0,05 NH4NO3 1,02d 0,03 1,40c 0,03 NaNO2 1,15d 0,02 1,05d 0,03 KNO3 0,80e 0,02 0,93de 0,04 Ca(NO3)2 0,81e 0,04 0,80e 0,04 LSD 0,05 0,18 0,20 Trong hàng, cơng thức có số mũ khác khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% 58 PHỤ LỤC 2.MỘT SỐ HÌNH ẢNH KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 27-30oC 38-40oC 14-16oC Hình P1.Sinh trưởng chủng FO2 nhiệt độ khác sau ngày ni cấy 27-30oC 38-40oC 14-16oC Hình P2.Sinh trưởng chủng DQ4 nhiệt độ khác sau ngày nuôi cấy 59 pH4 pH5 pH6 pH6,5 pH7 pH7,5 pH8 pH8,5 pH9 Hình P3.Sinh trưởng chủng FO2 điều kiện pH khác sau ngày nuôi cấy pH4 pH5 pH6 pH6,5 pH7 pH7,5 pH8 pH8,5 pH9 Hình P4.Sinh trưởng chủng DQ4 điều kiện pH khác sau ngày nuôi cấy 60 0% 0,5% 1% 1,5% 2% 2,5% 3% 3,5% 4,5% Hình P5.Sinh trưởng chủng FO2 nồng độ muối khác sau ngày nuôi cấy 0% 0,5% 1% 1,5% 2% 2,5% 3% 3,5% 4,5% Hình P6.Sinh trưởng chủng DQ4 nồng độ muối khác sau ngày nuôi cấy 5000 lux 4000 lux 3000 lux 2000 lux 1000 lux lux Hình P7.Sinh trưởng chủng FO2 cường độ ánh sáng khác sau ngày nuôi cấy 61 5000 lux 4000 lux 3000 lux 2000 lux 1000 lux lux Hình P8.Sinh trưởng chủng DQ4 cường độ ánh sáng khác sau ngày nuôi cấy FO2-5 ngày NH4Cl pepton (NH4)2SO4 Urea NH4NO3 NaNO3 KNO3 Ca(NO3)2 Hình P9.Sinh trưởng chủng FO2 nguồn nito khác sau ngày nuôi cấy DQ4-5 ngày NH4Cl pepton (NH4)2SO4 Urea NH4NO3 NaNO3 KNO3 Ca(NO3)2 Hình P10.Sinh trưởng chủng DQ4 nguồn nito khác sau ngày nuôi cấy 62 63