Chương 3 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN CHĂN NUÔI HÀ MINH TUÂN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH CỌNG RẠ CỦA TRÂU VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI 2014 i BỘ GIÁO DỤC[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN CHĂN NUÔI HÀ MINH TUÂN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH CỌNG RẠ CỦA TRÂU VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - 2014 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN CHĂN NUÔI HÀ MINH TUÂN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH CỌNG RẠ CỦA TRÂU VIỆT NAM CHUYÊN NGÀNH: CHĂN NUÔI MÃ SỐ: 62 62 01 05 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Mai Văn Sánh TS Lê Văn Thông HÀ NỘI - 2014 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu khoa học riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu nêu luận án trung thực, khách quan chƣa đƣợc bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận án đƣợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận án đƣợc rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 05 tháng 12 năm 2014 Tác giả luận án Hà Minh Tuân i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu đề tài hoàn thành luận án vừa qua, nhận đƣợc giảng dạy, hƣớng dẫn bảo thầy cô Đồng thời nhận đƣợc giúp đỡ, động viên vợ con, gia đình, bạn bè đồng nghiệp Nhân dịp hồn thành luận án này, cho phép tơi đƣợc bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới thầy hƣớng dẫn khoa học gồm PGS.TS Mai Văn Sánh TS Lê Văn Thông Hai thầy dành nhiều cơng sức, thời gian hƣớng dẫn tận tình, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực đề tài hoàn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới lãnh đạo Viện Chăn nuôi, thầy cô giáo Viện, cán viên chức phịng Đào tạo Thơng tin tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, nghiên cứu thực đề tài hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn tới TS Lê Bá Quế, chủ nhiệm đề tài “Nghiên cứu sản xuất tinh trâu đông lạnh cọng rạ phục vụ công tác cải tạo giống trâu Việt Nam” cho phép đƣợc sử dụng kết đề tài nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu, hồn thành luận án Tôi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo, cán công nhân viên Trung tâm giống gia súc lớn Trung ƣơng, Trạm nghiên cứu sản xuất tinh đông lạnh Moncada, Bộ môn Sinh lý Sinh sản Tập tính vật ni (Viện Chăn nuôi), Trung tâm Nghiên cứu ứng dụng Khoa học kỹ thuật Chăn ni tỉnh Thanh Hóa Trung tâm Giống chăn ni tỉnh Nghệ An nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình thực đề tài ii Và tơi xin chân thành cảm ơn tới tồn thể gia đình, bố mẹ, vợ con, anh em, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ, động viên, khuyến khích tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận án này! Hà Nội, ngày 05 tháng 12 năm 2014 Tác giả luận án Hà Minh Tuân iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG BIỂU vii MỞ ĐẦU 1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu 2.2 Yêu cầu 3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn 4 PHẠM VI NGHIÊN CỨU NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU VỀ TRÂU VIỆT NAM 1.2 KHAI THÁC TINH DỊCH VÀ MỘT SỐ CHỈ TIÊU SỐ LƢỢNG, CHẤT LƢỢNG TINH DỊCH TRÂU 1.2.1 Khai thác tinh dịch 1.2.2 Một số tiêu số lƣợng chất lƣợng tinh dịch trâu 1.3 MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN MỘT SỐ CHỈ TIÊU SỐ LƢỢNG VÀ CHẤT LƢỢNG TINH DỊCH TRÂU 15 1.3.1 Giống cá thể 16 1.3.2 Tuổi 17 1.3.3 Mùa vụ 18 1.3.4 Thức ăn 19 1.3.5 Quản lý, chăm sóc khai thác tinh 20 iv 1.4 ĐÔNG LẠNH TINH TRÙNG TRÂU 21 1.4.1 Mơi trƣờng pha lỗng tinh trâu 22 1.4.2 Kỹ thuật đông lạnh giải đông tinh trâu 28 1.5 THỤ TINH NHÂN TẠO TRÂU BẰNG TINH ĐƠNG LẠNH 33 1.6 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU Ở NƢỚC NGỒI VÀ TRONG NƢỚC 35 1.6.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc ngồi 35 1.6.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 37 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 41 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 41 2.2 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 41 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 41 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 41 2.3 ĐIỀU KIỆN CHĂM SĨC NI DƢỠNG 41 2.4 ĐIỀU KIỆN KHÍ HẬU KHU VỰC BA VÌ, HÀ NỘI 42 2.5 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 43 2.5.1 Nghiên cứu huấn luyện khai thác tinh trâu Việt Nam 43 2.5.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng cá thể mùa vụ đến số tiêu số lƣợng, chất lƣợng tinh trâu Việt Nam 43 2.5.3 Nghiên cứu lựa chọn mơi trƣờng pha lỗng phƣơng pháp đông lạnh tinh trâu Việt Nam 44 2.5.4 Đánh giá khả sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 44 2.5.5 Kiểm nghiệm chất lƣợng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 45 2.6 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.6.1 Phƣơng pháp nghiên cứu huấn luyện khai thác tinh trâu Việt Nam 45 2.6.2 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng cá thể mùa vụ đến số tiêu số lƣợng, chất lƣợng tinh trâu Việt Nam 46 2.6.3 Phƣơng pháp nghiên cứu lựa chọn mơi trƣờng pha lỗng phƣơng pháp đông lạnh tinh trâu Việt Nam 48 2.6.4 Phƣơng pháp đánh giá khả sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 51 v 2.6.5 Phƣơng pháp kiểm nghiệm chất lƣợng tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 53 2.7 XỬ LÝ SỐ LIỆU 55 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 57 3.1 HUẤN LUYỆN VÀ KHAI THÁC TINH TRÂU VIỆT NAM 57 3.2 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁ THỂ VÀ MÙA VỤ ĐẾN MỘT SỐ CHỈ TIÊU SỐ LƢỢNG, CHẤT LƢỢNG TINH TRÂU VIỆT NAM 60 3.2.1 Ảnh hƣởng cá thể đến số tiêu số lƣợng chất lƣợng tinh trâu Việt Nam 60 3.2.2 Ảnh hƣởng mùa vụ đến số tiêu số lƣợng chất lƣợng tinh trâu Việt Nam 74 3.3 LỰA CHỌN MƠI TRƢỜNG PHA LỖNG VÀ PHƢƠNG PHÁP ĐÔNG LẠNH TINH TRÂU VIỆT NAM 85 3.4 KHẢ NĂNG SẢN XUẤT TINH ĐÔNG LẠNH DẠNG CỌNG RẠ CỦA TRÂU VIỆT NAM 96 3.4.1 Khả sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 96 3.4.2 Ảnh hƣởng mùa vụ đến khả sản xuất tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 104 3.5 CHẤT LƢỢNG TINH ĐÔNG LẠNH DẠNG CỌNG RẠ CỦA TRÂU VIỆT NAM 110 3.5.1 Hoạt lực tinh trùng sau giải đông trâu Việt Nam 110 3.5.2 Tỷ lệ thụ thai lần phối đầu tinh đông lạnh dạng cọng rạ trâu Việt Nam 111 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 115 KẾT LUẬN 115 ĐỀ NGHỊ 116 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO 118 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt A ADN ADP ATP C cs ĐTC FAO FSH K KTT LDL LH MT1 MT2 MT3 PP1 PP2 PGF2α SD TCVN TTNT UI V VAC Ý nghĩa chữ viết tắt Activity (Hoạt lực tinh trùng) Acid Deoxyribo Nucleic Adenosin diphosphat Adenosin triphosphat Concentration (Nồng độ tinh trùng) Cộng Đạt tiêu chuẩn Food and Agriculture Organization of the United Nations: Tổ chức Lƣơng thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc Follicle-stimulating hormone Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình Khai thác tinh Low density lipoproteins Luteinizing hormone Môi trƣờng Môi trƣờng Môi trƣờng Phƣơng pháp Phƣơng pháp Prostaglandin F2α Standard Deviation: Độ lệch chuẩn Tiêu chuẩn Việt Nam Thụ tinh nhân tạo Unit International Volume (Lƣợng xuất tinh) Tổng số tinh trùng sống tiến thẳng vii DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ BẢNG BIỂU Hình 1.1 Các dạng kỳ hình phổ biến tinh trùng trâu 14 Bảng 2.1 Nhiệt độ độ ẩm khu vực nghiên cứu theo mùa giai đoạn 2012-2013 43 Bảng 2.2 Sơ đồ thí nghiệm nghiên cứu lựa chọn mơi trƣờng pha lỗng phƣơng pháp đông lạnh tinh trâu Việt Nam 51 Bảng 3.1 Khoảng thời gian huấn luyện khai thác tinh trâu Việt Nam 57 Bảng 3.2 Lƣợng xuất tinh cá thể trâu Việt Nam 61 Bảng 3.3 Hoạt lực tinh trùng cá thể trâu Việt Nam 63 Bảng 3.4 Nồng độ tinh trùng cá thể trâu Việt Nam 65 Bảng 3.5 Tổng số tinh trùng tiến thẳng cá thể trâu Việt Nam 68 Bảng 3.6 pH tinh dịch cá thể trâu Việt Nam 69 Bảng 3.7 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình cá thể trâu Việt Nam 71 Bảng 3.8 Tỷ lệ tinh trùng sống cá thể trâu Việt Nam 73 Bảng 3.9 Lƣợng xuất tinh trâu Việt Nam mùa năm 75 Bảng 3.10 Hoạt lực tinh trùng trâu Việt Nam mùa năm 77 Bảng 3.11 Nồng độ tinh trùng trâu Việt Nam mùa năm 79 Bảng 3.12 Tổng số tinh trùng tiến thẳng trâu Việt Nam mùa năm 80 Bảng 3.13 pH tinh dịch trâu Việt Nam mùa năm 82 Bảng 3.14 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình trâu Việt Nam mùa năm 83 Bảng 3.15 Tỷ lệ tinh trùng sống trâu Việt Nam mùa năm 84 Bảng 3.16 Hoạt lực tinh trùng, tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tỷ lệ tinh trùng sống tinh dịch trâu Việt Nam trƣớc đƣa vào pha lỗng đơng lạnh 86 Bảng 3.17 Chất lƣợng tinh đông lạnh sau giải đông trâu Việt Nam mơi trƣờng pha lỗng phƣơng pháp đông lạnh nhanh (PP1) 87 Bảng 3.18 Chất lƣợng tinh đông lạnh sau giải đông trâu Việt Nam mơi trƣờng pha lỗng phƣơng pháp đông lạnh chậm (PP2) 88 viii Manik, R S and Mudgal, V D 1984 Monthly and seasonal variation in physiochemical and biochemical attributes of buffalo semen World Review of Animal Prod 20(4): 46-51 Mann, T and Mann, C L 1981 Male Reproductive Funtion and Semen Springer-Verlag Berlin Heidelberg, New York, USA Marai, I F M., El-Darawany A A., Fadiel A and Abdel-Hafez, M A M 2008 Reproductive performance traits as affected by heat stress and its alleviation in sheep - a review Tropical and Subtropical Agroecosystems 8: 209-234 Marai, I F M., Daader, A H., Soliman, A M and El-Menshawy, S M S 2009 Non-genetic factors affecting growth and reproduction traits of buffaloes under dry management housing (in sub-tropical environment) in Egypt Livestock Research for Rural Development 21(3) http://www.lrrd.org/ lrrd21/3/mara21030.htm Marai, I F M and Haeeb, A A M 2010 Buffalo's biological functions as affected by heat stress - A review Livestock Science 127: 89-109 Marshall, C E 1984 Considerations for cryopreservation of semen Zoo Biol 3: 343–-356 Maurya, V P., Tuli, R K and Goyal, R L 2003 Effect of buffer composition, sephadex grade and column size on filtration based quality improvement of semen from Murrah buffalo bull Asian Australasian Journal of Animal Sciences 16(2): 165-171 Maxwell, W M C., Landers, A J and Evans, G 1995 Survival and fertility of ram spermatozoa frozen in pellets, straws and minitubes Theriogenology 43: 1201-1210 Mazur, P 1984 Freezing of living cells: mechanisms and implications Am J Physiol 247: 125-142 138 McCool, C J and Entwistle, K W 1989 The development of puberty and sexual maturity in the Australian Swamp buffalo bull Theriogenology 32: 171-184 Medeiros, C M O., Forell, F., Oliveira, A T D and Rodrigues, J L 2002 Current status of sperm cryopreservation: why is it better Theriogenology 57: 327-344 Mohan, G and Sahni, K L 1990 Efficiency of semen production in buffalo bulls Acharya, R M., Lokeshwar and R R., Kumar, S (Eds.), Recent Advances in Buffalo Research 3: 14-16 Molinia, F C., Evans, G., Casares, P I and Maxwell, W M C 1994 Effect of monosaccharides and disaccharides in Tris-based diluents on motility, acrosome integrity and fertility of pellet frozen ram spermatozoa Anim Reprod Sci 36: 113-122 Morrell, J M 2006 Update on semen technologies for animal breeding Reprod Domest Anim 41: 63-67 Mughal, D H., Ijaz, A., Yousaf, M S., Rehman, H., Aleem, M., Zaneb, H., Rabbani, I and Wadood, F 2013 The influence of taurine supplementation in lactose egg yolk glycerol extender for cryopreservation of buffalo bull (Bubalus bubalis) semen Journal of Animal & Plant Sciences 23(3): 715-720 Narayan, P., Reddy, V N V., Sarma, P A., Honnappa, T G 2000 Employment of the hypoosmotic swelling test (HOST) to evaluate sperm membrane integrity of fresh and frozen buffalo (Bubalus bubalis) bull semen Buffalo Journal 16(2): 207-213 Nasir, M., Zuhairah Abu Bakar, Md Zuki Saad, Mohd Zamri and Kassim Azhar 2012 Evaluation of the semen quality of a buffalo bull in the Buffalo Breeding and Research Centre, Telupid, Sabah, Malaysia In: 7th Proceedings of the Seminar in Veterinary Sciences, 27 February 02 March, Universiti Putra Malaysia 139 Nastri, M J F., Del Sorbo C., Fabbrocini, A., Fasano, G and Sansone, G 1994 Performances motility in cooled and freeze thawed B bubalis spermatozoa at different osmotic pressures In: Bradley, M and Cummins, J M (eds), Proceeding of 7th Int Symp Spermatology, Cairns, Australia Australian Society of Reproductive Biology, Victoria, Australia: 99-100 Nazir, M., 1988 Semen evaluation and sperm morphology Monograph on reproductive pattern of riverine buffaloes and recommendations to improve their reproductive performance at small farmer level Pakistan Agri Res Council, Islamabad, Pakistan Nordin, W., Bongso, T A and Tan, H S 1985 Relationship of semen characteristics and testosterone profiles with age in growing swamp buffalo bulls (Bubalus bubalis) In: Buffalo Seminar, 29 April - May, Bangkok, Thailand Nordin, W., Hilimi, M and Bongso, T A 1990 Semen characteristics related to age in growing Swamp buffalo (Bubalus bubalis) Buffalo J 6: 161166 Nowak, R 1999 Walker‟s Mammals of The World 6th ed, Baltimore, MD, The Johns Hopkins University Press Otoi, T., Tachikawa, S., Kondo, S and Suzuki, T 1993 Effect of different lots of semen from the same bull on in vitrodevelopment of bovine oocytes fertilized in vitro Theriogenology 39: 713-718 Pace, M M and Graham, E F 1974 Components in egg yolk which protect bovine spermatozoa during freezing J Anim Sci 39: 1144-1149 Pace, M M., Sullivan, J J., Elliott, F I., Graham, E F and Coulter, G H 1981 Effects of thawing temperature, number of spermatozoa and spermatozoa quality on fertility of bovine spermatozoa packaged in 0.5-ml French straws J Anim Sci 53: 693-701 140 Pal, A., Chatterjee, P N and Chakravarty, A K 2012 Genetic study of dairy cattleand buffalo bulls based on growth, milk production and reproductive traits Iranian Journal of Applied Animal Science 2(3): 239-245 Palmer, C W., Amundsson, S D., Brito, L F C., Waldner, C L and Barth, A D 2004 Use of oxytocin to facilitate semen collection by electroejaculation or transrectal massage in bulls Animal Reproduction Science 80: 213-223 Panangala, V S., Winter, A J., Wijesinha, A and Foote, R H 1981 Decreased motility of bull spermatozoa caused by Mycoplasma bovigenitalium Am J Vet Res 42: 2090-2093 Pant, H C 2002 Increasing reproductive efficiency and productivity of cattle and buffaloes In: Proceedings of the National Symposium on Reproductive Technologies for Augmentation of Fertility in Livestock of The Indian Society for Study of Animal Reproduction: 14-23 Park, N K., Oh, W Y., Lee, S S., Oh, C A., Kang, S W., Ko, S B., Kang, M S and Kim, H S 1995 Studies on semen freezing in Cheju native stallions J Agric Sci 37: 459-463 Pasha, T N and Hayat, Z 2012 Present situation and future perspective of buffalo production in Asia The Journal of Animal and Plant Sciences 22(3): 250-256 Paul, S S and Lal, D 2010 Nutrient requirements of buffaloes Satish Serial Publishing House, New Delhi, India Persson, Y 2007 Breeding soundness evaluation of young beef bulls Doctoral thesis Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala http://pub.epsilon.slu.se/1374/1/YPfin0.doc.pdf Pesch, S and Hoffmann, B 2007 Cryopreservation of spermatozoa in veterinary medicine J Reproduktionsmed Endokrinol 4(2): 101-105 Pickett, B W and Berndtson, W E 1974 The preservation of bovine spermatozoa by freezing in straws A review J Dairy Sci 57: 1287-1301 141 Polge, C., Smith, A U and Parkes, A S 1949 Revival of spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures Nature (Lond.) 164:666 Prajapati, K B., Nagpaul, P K., Singh, D V and Raina, V S 1998 The effect of exercise and feeding bypass protein on semen quality measures in Mehsana buffalo bulls Indian Journal of Animal Reproduction 19(2): 143-145 Pürhan Barbaros Tuncer, Mustafa Numan Bucak, Serpil Sarıưzkan, Fatih Sakin, Deniz Yeni, İbrahim Hakkı Çiğerci, Ahmet Ateşşahin, Fatih Avdatek, Mustafa Gündoğan and Olga Büyükleblebici 2010 The effect of raffinose and methionine on frozen/thawed Angora buck (Capra hircus ancryrensis) semen quality, lipid peroxidation and antioxidant enzyme activities Cryobiology 61(1): 89-93 Quinn, P J., Salamon, S and White, I G 1968 The effect of cold shock and deep freezing on ram spermatozoa collected by electrical ejaculation and by an artificial vagina Aust J Agric Res 19: 119-128 Raina, V S., Gupta, A K and Singh, K 2002 Effect of antioxidant fortification on preservability of buffalo semen Asian Australasian Journal of Animal Sciences 15(1): 16-18 Rajamahendran, R and Manickavadivale, S 1981 Libido and semen characteristics of Murrah, Surti, and local buffalo bulls in Sri Lanka Beitrage zur tropischen Landwirtschaft und Veterinarmedizin 19(4): 455-459 Ramakrishnan P and Ariff M O 1994 Effect of glycerol level and cooling rate on post-thaw semen quality of Malaysian swamp buffalo In: Vale, W G., Barnabe, V H and Mattos, J C A de, Proceedings of 4th World Buffalo Cong, Sao Paulo, Brazil International Buffalo Federation, Roma, Italy: 540-542 142 Ramaswamy, V., Latha, N., Gnanasubramanian, T and Manickam, R 2002 Aerobic bacteria in buffalo semen and their antibiogram Indian Journal of Animal Reproduction 23(2): 117-119 Ramesha, K P., Goswami, S L and Das, S K 1993 Zona-free hamster oocyte penetration test for assessing fertility of Murrah buffalo (Bubalus bubalis) bull Buffalo J 3: 259-263 Rana, C M., Dhami, A J., Zalu, G K., Vibhakar, K V and Ladani, N G 2003 Preservation of Gir (Bos indicus) and Jafarabadi buffalo (Bubalus bubalis) semen at degrees C and ultra-low temperature using sephadex filtration technique Indian Journal of Animal Sciences 73(8): 858-863 Rao, A V N., Haranath, G B and Somasekharam, G., 1990 Effect of equilibration and thawing rates on survival and acrosomal maintenance of buffalo spermatozoa in straws In: Acharya, R M., Lokeshwar, R R and Kumar, S Eds , Recent Advances in Buffalo Research 3: 97-99 Rao, A V N and Venkataramulu, M C 1994 Effect of single varsus double insemination on conception rate in bovines Indian Vet J 71:1144-1145 Rasul, Z., Anzar, M., Jalali, S and Ahmad, N 2000 Effect of buffering systems on post-thaw motion characteristics, plasma membrane integrity, and acrosome morphology of buffalo spermatozoa Anim Reprod Sci 59: 31-41 Rasul, Z., Ahmad N and Anzar, M 2001 Changes in motion characteristics, plasmamembrane integrity and acrosome morphology during cryopreservation of buffalo spermatozoa J Androl 22: 278-283 Rasul, Z., Anzar, M., Jalali, S and Ahmad, N 2003 Effect of buffering system on post-thaw motion characteristics, plasma membrane integrity, and acrosome morphology of buffalo spermatozoa Animal Reproduction Science 59: 31-41 143 Rasul, Z., Ahmed, N and Anzar, M 2007 Antagonist effect of DMSO on the cryoprotection ability of glycerol during cryopreservation of buffalo sperm Theriogenology 68: 813-819 Raza, M A., Riasat Ali and Chaudhry, R A 2005 Studies on semen productive ability and fertility trials of standard and routine donor buffalo bulls Sarhad Journal of Agriculture 21(4): 521-524 Rehman, Z U., Samo, M U., Qureshi, T A., Khan, S., Qureshi, M S., Khan, F A and Bahadadr, S 2012 Studies on the freezability of Kundhi buffalo bull semen Journal of Animal and Plant Sciences 22(2): 18-23 Rodriguez-Martinez, H 1998 Optimization of sperm quality in AI bulls Reproduction in Domestic Animals (33): 233-237 Rohilla, R K., Tuli, R K and Goyal, R L 2005 Comparative study of the effects of cryoprotective agents in freezing Murrah buffalo bull semen Indian J Vet Res 14: 37-43 Saacke, R G., De Jarnette, J M., Nebel, R L and Nadir, S 1991 Assessing bull fertility In Proc Soc Theriogenology AGM San Diego, CA: 56-69 Sadeg Tajvidi Asr, Rahim Beheshti and Hamid Kohram 2011 The evaluations of Tris-citrate acid or Bioxcell extenders on the postthawed buffalo sperm parameters Annals of Biological Research 2(4): 360-365 Saeed, A 1988 Studies on morphology of buffalo bull semen of different age groups Thesis University of Agriculture Faisalabad, Pakistan Saeed, A., Chaudhry, R A., Khan, I H and Khan, N U 1990 Morphology of semen of buffalo bulls of different age groups Proc II World Buffalo Congr., Vol 12-16 December New Dehli, India Sajjad, M., Ali, S., Ullah, N., Anwar, M., Akhter, S and Andrabi, S M H 2007 Blood serum testosterone level and its relationship with scrotal circumference and semen characteristics in Nili-Ravi buffalo bulls Pakistan Vet J 27(2): 63-66 144 Salamon, S and Maxwell, W M C 2000 Storage of ram semen Anim Reprod Sci 62: 77-111 Sandeep Jasial, Katoch R C., Deepti Narang, Arvind Mahajan 2000 The drug resistant bacteria associated with frozen semen technology of cow and buffalo bulls Indian Journal of Animal Sciences 70(5): 488-489 Sansone, G., M.J.F Nastri and A Fabbrocini 2000 Storage of buffalo (Bubalus bubalis) semen Animal Reproduction Science 62: 55-76 Saxena, V.B and S.S Tripathi 1978 Studies on the physico-chemical attributes and freezability of semen of crossbred bulls Indian J Anim.Sci 48: 865-69 Senger, P L., Becker, W C and Hillers, J K 1976 Effect of thawing rate and post-thaw temperature on motility and acrosomal maintenance in bovine semen frozen in plastic straws J Anim Sci 42: 932-936 Settergren, I 1994 Bull fertility examination XIIth FAO/SIDA International Postgraduate Course on Animal Reproduction, III Veterinary College Upsala Shabd, R., Saxena, V B and Gupta, H P 2003 Protection of cell membrane of buffalo spermatozoa during cryopreservation Indian Journal of Animal Reproduction 24(2): 128-130 Shannon, P and Vishwanath, R 1995 The effect of optimal and suboptimal concentrations of sperm on the fertility of fresh and frozen bovine semen and a theoretical model to explain the fertility differences Anim Reprod Sci 39: 1-10 Sharma, A K and Gupta, R C 1980 Duration of seminiferous epithelial cycle in buffalo bulls (Bubalus bubalis) Animal Reproduction Science 3(3): 217-224 Sharma, A K., Rodriguez, L A., Mekonnen, G., Wilcox, C J., Bachman, K C and Collier, R J 1983a Climatological and genetic effects on milk composition and yield Journal of Dairy Science 66: 119-126 145 Sharma, D B., Singh, C S P and Mishra, H R 1983b Growth rate in the she buffaloes Indian Veterinary Medicine Journal 60: 1017-1018 Shelke, V B and Dhami, A J 2001 Comparative evaluation of physicomorphological attributes and freezability of semen of Gir cattle (Bos indicus) and Jafarabadi buffalo (Bubalus bubalis) bulls Indian Journal of Animal Sciences 71(4): 319-324 Shukla, M K and Misra, A K 2005 Correlation between seminal characteristics in Murrah bulls Indian Journal of Animal Sciences 75(3): 263-266 (Abstract) Shukla, M K and Misra, A K 2007 Effect of Bradykinin on Murrah buffalo (Bubalus bubalis) semen cryopreservation Anim Reprod Sci 97: 175-179 Siddique, M., Ali, R and Ali R 2006 Short Communication: Effect of Buffers on Freezing of Buffalo Bull Semen J Agri Soc Sci 2(2): 117-119 Singh, B., Mahapatro, B B and Sadhu, D P 1969 Chemical composition of cattle and buffalo spermatozoa and seminal plasma under different climatic conditions J Reprod Fert 20: 175-178 Singh, B and Sadhu, D P 1973 Buffering capacity, and CO2 and nitrogen contents of the seminal plasma of cattle and buffalo Indian Journal of Animal Sciences 43(7): 579-583 Singh, J., Pangawkar, G R., Biswas, R K., Srivastava, A K and Sharma, R D 1990 Studies on lactic dehydrogenase and sorbitol dehydrogenase release in relation to deep freezing of buffalo semen in certain extenders Theriogenology 34: 371-378 Singh, J., Pangawkar, G R., Biswas, R K and Kumar, N 1991 Studies on buffalo sperm morphology during various stages of freezing in certain extenders Indian J Anim Reprod 12: 126-129 Singh, B., Sahni, K L and Mohan, G 1995 Effect of osmolatity of extender on freezing of buffalo semen Indian Journal of Animal Sciences 65(1): 65-66 146 Singh P and Raina V S 1999 Comparative effect of certain additives on preservation of buffalo bull semen at refrigeration temperature Indian Journal of Animal Production and Management 15(2): 74-76 Singh, P., Sengupta, B P and Tripathi, V N 2001 Effect of Multiple Showering and Vitamin Supplementation on Sexual Behaviour, Quality and Freezability of Buffalo Bull Semen Asian-Australasian Journal of Animal Sciences 14(2): 184-188 Singh, P B P., Sengupta B P and Tripathi, V N 2000a Effect of supplemental amino acid feeding on sexual behaviour, quality and freezability of buffalo bull semen Buffalo J 1: 41-46 Singh, P., Jindal, J K., Singh, S and Hooda, O K 2000b Freezability of buffalo bull semen using different extenders Indian J Anim Reprod 21: 41-42 Singh, P., Dahiya, S S., Chauhan, T R., Singh S., Kumar, B., Sharma R.K and Singh I 2004 Effect of feeding different sources of rumen undegradable protein on sexual maturity and semen production in buffalo bulls Indian Buffalo J 2: 74-77 Singh, P., Singh, I., Singh, S and Sharma, R K 2006 Initial stage glycerolization prevents the incidence of backward sperm motility during cryopreservation and increases buffalo semen freezability Indian J Anim Sci 76: 777-779 Singh, M 2010 Effect of post-thaw cotton incubation on semen quality of buffalo bulls Revista Veterinaria 21(1): 873-878 Singh, M., Chaudhari, B K., Singh, J K., Singh, A K and Maurya, P K 2013 Effects of thermal load on buffalo reproductive performance during summer season Journal of Biological Sciences 1(1): 1-8 Singh, V K., Kumar, R and Atreja, S K 2014 Cryo-survival, cryo-capacitation and oxidative stress assessment of buffalo spermatozoa cryopreserved in new soya milk extender Livestock Science 160: 214-218 147 Soderquist, L., Janson, K., Larsson, K and Einarsson, S 1991 Sperm morphology and fertility in AI bulls J Vet Med 38: 534-543 Somparn, P., Gibb, M J., Markvichitr, K., Chaiyabutr, N., Thummabood, S and Vajrabukka, C 2004 Analysis of climatic risk for cattle and buffalo production in northeast Thailand Int J Biometeorol 49: 59-64 Stefanov, R., Sabev, M and Ivanova-Kicheva, M 2011 Protective effect of the antioxidant enzyme on sperm from (Bubalus bubalis) type after cryoconservation Biotechnology in Animal Husbandry 27(3): 943-949 Stoianov, T and Kostadinov, B 1978 Attempts at freezing bull semen in a yolk-raffinose medium without glycerin Vet Med Nauki 15(3): 47-54 Sukhato, P., Thongsodseang, S., Utha, A and Songsasen, N., 2001 Effects of cooling and warming conditions on post-thawed motility and fertility of cryopreserved buffalo spermatozoa Anim Reprod Sci 67: 69-77 Sundararaman, M N and Edwin, M J 2008 Changes in Motility Characteristics of Goat Spermatozoa During Glycerol-Equilibration and the Relevance to Cryopreservation Asian Journal of Cell Biology 3: 22-33 Supanuam, P., Alongkoad T., Sitthisak J., Wanpen K., Sarawut K and Anan K 2009 Standardized karyotype and idiogram of Thai native swamp buffalo, Bubalus bubalis (Artiodactyla, Bovidae) by convention staining, G-banding, C-banding and NOR-banding techniques Thai Journal of Genetics 3(1): 83-93 Suryaprakasam, T B., Rao, A V Narasimha and Rao, A Narasimha.1993 Semen production traits in relation to age, body weight and scrotal parameters in Murrah buffalo bulls Indian Veterinary Journal 70(12): 1131-1134 Suzuki, H., Foote, R H., Farrell, P B 1997 Computerized imaging and scanning electron microscope (SEM) analysis of co-cultured fresh and frozen bovine sperm J Androl 18(2): 217-26 148 Swelum, A A., Mansour, H A., Elsayed, A A and Amer, H A 2011 Comparing ethylene glycol with glycerol for cryopreservation of buffalo bull semen in egg-yolk containing extenders Theriogenology 76: 833-842 Talevi, R., Pelosi, S., Sansone, G., Graso, F and Matasino, D 1994 Effect of different prefreezing rates on buffalo sperm motility and ultrastructure preservation In: Vale, W G., Barnabe, V H., Mattos, J C A de, Proceedings of 4th World Buffalo Cong Sao Paulo, Brazil International Buffalo Federation, Roma, Italy: 537-539 Tarr, B 2007 Cold Stress in Cows from http://www.omafra.gov.on.ca/english/livestock/beef/facts/07-001.pdf (date 1/7/2012) Tatham, B 2000 Increasing Buffalo Production using reproduction technology A report for the Rural Industries Research and Development Corporation https://rirdc.infoservices.com.au /downloads/00-165 Terezinha, A P., Gomes, M., Castro, D., Eraldo, M., Jocelim, M G and Fernando, J C D G 1991 Physical and biochemical characteristics from Murrah buffalo bulls semen 3rd Buffalo Cong Bulgaria, Symp IV: 571 Terramoccia, S., Bartocci, S., Amici, A and Martillotti, F 2000 Protein and protein free dry matter rumen degradability in buffalo, cattle and sheep fed diets with different forage to concentrate ratios Livestock Production Science 65:185-195 Tomar, N S., Mishra, B S and Johari, C B 1966 Seasonal variations in reaction time and semen production, and prediction of some semen attributes on initial motility of spermatozoa in Hariana and Murrah bulls Indian J Dairy Sci 19: 87-93 149 Topanurak S., Intaramongkol, J., Ratanapunna, P., Intaramongkol, S., Tumwasorn S and Chatalakhna C 1991 Factors affecting growth performance in Thai swamp buffalo Annual report 1988-1991, The national buffalo research and development project, Bangkok, Thailand: 17-25 Tuli, R K., Mehar, S and Matharoo, J S., 1981 Effect of different equilibration times and extenders on deep freezing of buffalo semen Theriogenology 16: 99-104 Valdez, C A., Bautista, J A N., Rio, A S D., Flor, J A C G and Torres, E B 2003 Ethylene glycol as a cryoprotectant for freezing buffalo spermatozoa: I Effects of concentration and equilibration time on postthaw survival Philipp J Vet Med 40: 37-43 Vale, W G 1994a Collection, processing and deep freezing of buffalo semen of buffalo semen Buff J 2: 65-72 Vale, W G 1994b Reproductive management of buffalo under Amazon conditions Buff J 10:85-90 Vale, W G 1997 Sperm cryopreservation Bubalus Bubalis 1: 129–140 Vale, W G 2010 Deep freezing buffalo semen - state of art Proceedings of the 9th World Buffalo Congress, Buenos Aires, 25-28 Abril: 83-92 Veeramachaneni, D N R., Ott, R S., Heath, E H., Mcentee, K., Bolt, D.J and Hixon, J.E 1986 Pathophysiology of small testes in beef bulls relationship between scrotal circumference, histopathologic features of testes and epididymides, seminal characteristics, and endocrine profiles Amer J Vet Res 47: 1988-1999 Vishwanath, R and Shannon, P 2000 Storage of bovine semen in liquid and frozen state Anim Reprod Sci 62: 23-53 Waheed, S., Ahmad, N., Najib-ur-Rahman, Jamil-ur-Rahman, H., Younis, M and Iqbal, S 2012 Evaluation of duck egg yolk for the cryopreservation of Nili-Ravi buffalo bull semen Anim Reprod Sci 131(1-2):95-99 150 Waites, G M H and Setchell, B P C 1990 Physiology of the mammalian testis In: Marshalls Physiology of Reproduction, 4thEd Lamming, G.E Churchill Livingstone (Ed.) Edinburgh: 1-105 Watson, P 1976 The protection of ram and bull spermatozoa by low density lipoprotein fraction of egg yolk during storage at 5°C and deep freezing J Therm Biol 1: 137-141 Watson, P F., Kunze, E., Cramer, P., Hammerstedt, R H 1992 A comparison of critical osmolality and hydraulic conductivity and its activation energy in fowl and bull spermatozoa J Androl 13: 131-138 Watson, P F 1995 Recent developments and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and the assessment of their post thawing function Reprod Fertil Dev 7: 871-891 Watson, P F 2000 The causes of reduced fertility with cryopreserved semen Anim Reprod Sci 60-61: 481-492 Wei, L Y and Jea, Y S 2006 Conservation of water buffalo in Taiwan: cryopreservation of spermatozoa International seminar on artificial reproduction biotechnologies for buffalo in Bogor, Indonesia 108-113 Wildeus, S and Hammond, A C 1993 Testicular, semen and blood parameters in adapted and non adapted Bos taurus bulls in the semiarid tropics Theriogenology 40: 345-355 Woelders, H 1997 Fundamentals and recent development in cryopreservation of bull and boar semen Vet Quart 19:135-138 Wolfe, D W 2001 Semen collection from bulls Proceedings of the Society for Theriogenology and American College of Theriogenology Annual Conference Vancouver, Canada, 12-15 September: 65-67 Yates, J H., Chandler, J E., Canal, A L., Braden Paul, J 2003 The effect of nocturnal sampling on semen quality and the efficiency of collection in bovine species Theriogenology 60(9):1665-77 151 Younis, M 1996 Studies on semen quality, freezability and fertility of buffalo bulls during low and peak breeding seasons PhD Thesis, Univ.Agri Faisalabad, Pakistan Younis, M., Sarnad, H.A., Ahmad N and Ahmad, I 1999 Fertility of frozenthawed semen collected from young, adult and old buffalo bulls during low and peak breeding seasons Pakistan Vet J 19 (2): 78-80 Younis, M., Samad, H.A., Ahmad, N and Ahmad, I 2003 Effects of age and season on the body weight, scrotal circumference and libido in Nili-Ravi buffalo bulls maintained at the semen production unit, Qadirabad Pakistan veterinary journal 23(2): 155-156 Zafar, A H., Ahmad, N., and Shah, S K 1988 Effect of seasonal variation on semen production of Nili-Ravi buffalo bulls Buffalo J 1: 61-68 Zambelli, D and Cunto, M 2006 Semen collection in cats: techniques and analysis Theriogenology 66: 159-165 Ziada, M S., Adbel-Malak G., El-Sheltawi, M and Ismail, T I M 1995 Studies on frozen buffalo semen: Effect of bulls, diluents and thawing rates Proc 7th Annual Congr Egypt Soc Anim Reprod Fert: 265 Zicarelli, L 1997 Reproductive seasonality in buffalo Proceedings of the Third Course on Biotechnology of Reproduction in Buffaloes (Issue II), Gaserta, Italy, 6-10 October: 29-52 152