Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.Nghiên cứu ảnh hưởng của phân mảnh DNA tinh trùng và kỹ thuật chọn lọc tinh trùng đến kết quả thụ tinh trong ống nghiệm.
ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y - DƯỢC NGUYỄN THỊ HIỆP TUYẾT NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG VÀ KỸ THUẬT CHỌN LỌC TINH TRÙNG ĐẾN KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HUẾ - 2023 ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y - DƯỢC NGUYỄN THỊ HIỆP TUYẾT NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA PHÂN MẢNH DNA TINH TRÙNG VÀ KỸ THUẬT CHỌN LỌC TINH TRÙNG ĐẾN KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Ngành: KHOA HỌC Y SINH Mã số: 9720101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ MINH TÂM PGS.TS ĐẶNG CƠNG THUẬN HUẾ - 2023 Lời Cảm Ơn Để hồn thành khóa học luận án này, tơi xin gửi lời câm ơn chån thành såu sắc đến: - Ban Giám đốc Đäi học Huế, Ban Đào täo Sau ọi hc, ọi hc Hu - Ban Giỏm hiu Trỵng ọi hc Y - Dỵc, ọi hc Hu - Ban Giỏm c Bnh vin Trỵng ọi hc Y Dỵc Hu - Phũng o tọo Sau ọi hc, Trỵng ọi hc Y - Dỵc, ọi hc Hu - Vin Y sinh hc, Trỵng ọi Hc Y - Dỵc, ọi hc Hu - Trung tåm Nội tiết Sinh sân Vô sinh, Bnh vin Trỵng ọi hc Y Dỵc Hu c bit xin gửi lời biết ơn, lời câm ơn chån thnh v sồu sc nhỗt n: - PGS.TS Lờ Minh Tõm - Ngỵi Thổy ỏng kớnh - Ngỵi Thổy truyn cõm hng Thổy ó trc tip hỵng dn vi tỗm lịng nhiệt tình, tận týy, đóng góp ý kiến vụ cựng quý bỏu, h tr tụi rỗt nhiu chuyờn mụn, nghiờn cu khoa hc, cỹng nhỵ ó däy bâo học quý giá sống - PGS.TS Đặng Cơng Thuận, câm ơn Thỉy trc tip dọy tụi nghiờn cu khoa hc, hỵng dẫn thực đề tài - GS.TS Cao Ngọc Thành, Thæy täo nhiều điều kiện thuận lợi, giúp tụi quỏ trỡnh hc; Thổy ỵa nhng góp ý q báu để tơi hồn thành luận án Thỉy däy bâo tơi điều q giá công việc sống Tôi xin trån trọng câm ơn đến Thỉy/Cơ: PGS.TS Hà Thị Minh Thi, TS.BS Hong Th Mai Thanh, PGS.TS Phan Th Minh Phỵng, TS.BS Nguyn Phỵng Thõo Tiờn, TS.BS Lờ Phan Minh Trit, cựng q Thỉy Cơ mơn ngành Khoa học Y sinh; Trỵng ọi hc Y - Dỵc, ọi hc Hu Tôi cüng xin trån trọng câm ơn đến tập thể chuyờn viờn phụi hc, bỏc s, iu dỵng tọi Trung tåm Nội tiết Sinh sân Vô sinh Bệnh viện Trỵng ọi hc Y Dỵc Hu ó tọo iu kin thuận lợi hỗ trợ tơi q trình thực nghiên cứu Tôi xin gửi lời câm ơn Ban Giỏm hiu trỵng ọi Hc Y Dỵc, ọi hc Thái Nguyên; Khoa Y học sở; Bộ môn Mô Phụi thai hc trỵng ọi hc Y Dỵc Thỏi Nguyên nơi công tác, täo điều kin tụi ỵc hc v nghiờn cu Tụi xin gửi lời tri ån đến cặp vợ chồng vô sinh tham gia nghiên cứu Con xin gửi nhng tỡnh cõm yờu thỵng v lũng bit n vụ hän đến Bố Mẹ hai bên hỗ trợ v ng viờn vỵt qua mi khú khn; xin gửi lời câm ơn anh, chị, em gia đình ln tin u hỗ trợ Xin đặc biệt câm ơn chồng hai Khánh Hà, bên cänh, chia sẻ với tôi, động lực cûa tơi q trình học tập, nghiên cu, cụng vic, v cuc sng Xin ỵc kớnh chúc Thỉy, Cơ ln mänh khơe hänh phúc Xin chån thành câm ơn! Huế, tháng năm 2023 Nguyễn Thị Hiệp Tuyết LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu nghiên cứu trung thực xác, kết nghiên cứu chưa công bố tài liệu khoa học tác giả khác Nếu có sai sót tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Tác giả luận án Nguyễn Thị Hiệp Tuyết DANH MỤC VIẾT TẮT AMH : Anti-Mullerian Hormone – Hormone kháng ống Muller BMI : Body Mass Index - Chỉ số khối thể DNA : Deoxyribonucleic acid DFI : DNA fragmentation Index – Chỉ số phân mảnh DNA tinh trùng FSH : Follicle-stimulating hormone – Hormone kích thích nang nỗn HBA : Hyaluronic acid binding assay – Kỹ thuật tinh trùng gắn acid hyaluronic HTSS : Hỗ trợ sinh sản hCG : Human Chorionic Gonadotropin - Hormone hướng sinh dục rau thai người IVF : In vitro fertilization – Thụ tinh ống nghiệm ICSI : IntraCytoplasmic Sperm Injection – Tiêm tinh trùng vào bào tương noãn PICSI : Physiological ICSI – Kỹ thuật chọn lọc tinh trùng sinh lý thực ICSI MII : Meiosis II - Giảm phân II MACS : Magnetic-activated cell sorting - Phương pháp phân tách tế bào từ tính NST : Nhiễm sắc thể ROS : Reactive oxygen species – Các gốc oxy hoá hoạt động TUNEL : Phương pháp đánh dấu phân mảnh DNA dUTP MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đánh giá khả sinh sản nam giới 1.2 Đặc điểm phát triển phôi thụ tinh ống nghiệm 19 1.3 Kỹ thuật chọn lọc tinh trùng sinh lý 32 1.4 Các nghiên cứu liên quan 35 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .44 2.1 Đối tượng nghiên cứu 44 2.2 Phương pháp nghiên cứu .45 2.3 Đạo đức nghiên cứu 62 2.4 Sơ đồ nghiên cứu 63 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 66 3.1 Mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng với số tinh dịch đồ, chất lượng phôi kết thụ tinh ống nghiệm .66 3.2 Tác động kỹ thuật chọn lọc tinh trùng sinh lý đến kết tạo phôi thụ tinh ống nghiệm 82 Chương BÀN LUẬN 93 4.1 Mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng với số tinh dịch đồ, chất lượng phôi kết thụ tinh ống nghiệm .93 4.2 Tác động kỹ thuật chọn lọc tinh trùng sinh lý đến kết tạo phôi thụ tinh ống nghiệm .110 4.3 Ưu điểm hạn chế đề tài 116 KẾT LUẬN 118 KIẾN NGHỊ 120 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 121 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Ngưỡng giá trị tham khảo thông số tinh dịch đồ theo WHO Bảng 1.2 Đánh giá tiền nhân đồng thuận Alpha 20 Bảng 1.3 Đánh giá phân loại phôi ngày đồng thuận Alpha 24 Bảng 1.4 Đánh giá phôi ngày theo tiêu chuẩn đồng thuận Alpha 25 Bảng Hệ thống đánh giá phôi nang theo tiêu chuẩn đồng thuận Alpha 27 Bảng 2.1 Đánh giá phân loại phôi nang .59 Bảng 2.2 Phân loại chất lượng phôi nang 61 Bảng 3.1 Đặc điểm chung người vợ .66 Bảng 3.2 Đặc điểm nguyên nhân vô sinh .67 Bảng 3.3 Đặc điểm chung người chồng .68 Bảng 3.4 Đặc điểm số tinh dịch đồ .69 Bảng 3.5 Đặc điểm phân mảnh DNA tinh trùng 70 Bảng 3.6 Đặc điểm phân mảnh DNA tinh trùng với số yếu tố liên quan 71 Bảng 3.7 Đặc điểm phân mảnh DNA tinh trùng theo nguyên nhân vô sinh 71 Bảng 3.8 Mối liên quan số tinh trùng nhóm phân mảnh DNA tinh trùng 72 Bảng 3.9 Mối liên quan mức độ phân mảnh DNA tinh trùng mật độ tinh trùng 73 Bảng 3.10 Mối liên quan mức độ phân mảnh DNA khả di động 74 Bảng 3.11 Mối liên quan mức độ phân mảnh DNA hình dạng tinh trùng.74 Bảng 12 Mối tương quan phân mảnh DNA tinh trùng số tinh trùng 75 Bảng 3.13 Mối liên quan phân mảnh DNA kết thụ tinh, phôi ngày 76 Bảng 3.14 Mối tương quan DFI kết thụ tinh phôi phân chia ngày .78 Bảng 3.15 Mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng kết phôi nang .79 Bảng 3.16 Mối tương quan DFI kết phôi nang 80 Bảng 3.17 Mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng nhóm kết phơi 80 Bảng 3.18 Mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng kết chuyển phôi 82 Bảng 3.19 Đặc điểm chung người vợ kỹ thuật PICSI-ICSI 83 Bảng 3.20 Đặc điểm chung người chồng kỹ thuật PICSI-ICSI 84 Bảng 3.21 Đặc điểm mẫu tinh trùng kỹ thuật PICSI-ICSI 85 Bảng 3.22 Đặc điểm tinh trùng mẫu sau lọc rửa 86 Bảng 3.23 Mối liên quan số tinh trùng với khả gắn kết acid hyaluronic 86 Bảng 3.24 Đánh giá mối tương quan khả gắn kết acid hyaluronic đặc điểm tinh trùng 87 Bảng 3.25 So sánh kết nuôi cấy phôi hai kỹ thuật PICSI ICSI 88 Bảng 3.26 So sánh kết nuôi cấy phôi hai kỹ thuật PICSI ICSI nhóm hình dạng tinh trùng 89 Bảng 3.27 So sánh kết nuôi cấy phôi hai kỹ thuật PICSI ICSI nhóm tinh trùng di động nhanh – chậm 90 Bảng 3.28 So sánh kết nuôi cấy phôi hai kỹ thuật PICSI ICSI nhóm tinh trùng có phân mảnh DNA thấp - cao 91 Bảng 3.29 So sánh kết nuôi cấy phôi hai kỹ thuật PICSI ICSI nhóm tinh trùng có khả gắn kết acid hyaluronic thấp - cao 92 Bảng 4.1 Một số nghiên cứu mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng số tinh trùng 95 Bảng 4.2 Tổng hợp kết số nghiên cứu đánh giá mối liên quan phân mảnh DNA tinh trùng kết thụ tinh ống nghiệm 107 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Đặc điểm phân loại bất thường số tinh trùng .70 Biểu đồ 3.2 Phân nhóm mức độ phân mảnh DNA tinh trùng 71 Biểu đồ 3.3 Tỉ lệ mức độ phân mảnh DNA tinh trùng nhóm tinh trùng bình thường bất thường 73 Biểu đồ 3.4 Kết sau chuyển phôi nhóm phân mảnh DNA tinh trùng 81 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Đánh giá tinh trùng sống/chết phương pháp nhuộm eosin – nigrosin Hình 1.2 Các đặc điểm hình dạng bất thường tinh trùng .7 Hình 1.3 Sơ đồ cấu trúc DNA tinh trùng Hình 1.4 Tinh trùng khơng phân mảnh phân mảnh xét nghiệm Alkaline Comet Neutral Comet 16 Hình 1.5 Hình ảnh mơ tả ngun lý phương pháp khảo sát cấu trúc chất nhiễm sắc tinh trùng 17 Hình 1.6 Hình ảnh mơ tả ngun lý phương pháp TUNEL 18 Hình 1.7 Hình ảnh tinh trùng phương pháp khảo sát phân tán chất nhiễm sắc.19 Hình 1.8 Đánh giá thụ tinh với hình thái hợp tử .21 Hình 1.9 Phơi phân chia ngày chất lượng tốt 23 Hình 1.10 Phôi ngày 25 Hình 1.11 Hình thái phơi nang .28 Hình 1.12 Tinh trùng trưởng thành có thụ thể gắn acid hyaluronic màng tinh trùng chưa trưởng thành 33 Hình 1.13 Minh họa gắn kết acid hyaluronic tinh trùng đĩa PICSI .34 Hình 2.1 Bộ Kit Halosperm 52 Hình 2.2 Hình ảnh tinh trùng xét nghiệm phân tán chất nhiễm sắc 54 Hình 2.3 Vị trí vi điểm acid hyaluronic sơ đồ giọt mơi trường PICSI57 Hình 2.4 Đánh giá hình ảnh phôi giai đoạn phân chia .58 Hình 2.5 Các hình thái phơi nang .60