Tóm tắt: Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào Cai

Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào CaiNghiên cứu đặc điểm nông sinh học, biện pháp kỹ thuật nhân giống và trồng .cây Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) tại Sa Pa, Lào Cai

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯ PHẠM NGỌC KHÁNH NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM NÔNG SINH HỌC, BIỆN PHÁP KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG VÀ TRỒNG CÂY BÁT GIÁC LIÊN (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) TẠI SA PA, LÀO CAI Chuyên ngành: Khoa học trồng Mã số: 62 01 10 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP – 2023 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Ninh Thị Phíp PGS.TS Phạm Thanh Huyền Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện, họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi ngày tháng năm Có thể tìm hiểu Luận án thư viện: - Thư viện Quốc gia - Thư viện Học viện Nơng nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) loài thuốc quý thuộc chi Dysosma sử dụng y học cổ truyền Việt Nam để chữa rắn cắn, ung nhọt, làm thuốc giải độc, tiêu phù (Đỗ Tất Lợi, 2004; Đỗ Huy Bích & cs., 2006) Những nghiên cứu hóa học xác định thân ngầm rễ Bát giác liên có chứa podophyllotoxin (Nguyễn Thị Dung & cs., 2018) hợp chất chứng minh có tác dụng ức chế phát triển tế bào ung thư (Tan & cs., 2018; Wang & cs., 2019; Karuppaiya & Tsay, 2019; Karuppaiya & Wu, 2020; Bui Van Thanh & cs., 2022) Do Bát giác liên đối tượng dược liệu có tiềm để phát triển, tạo nguyên liệu bào chế thuốc theo hướng điều trị ung thư Thế giới (Feng & cs., 2022; Kousar & cs., 2022) Do tình trạng khai thác mức để sử dụng làm thuốc cộng đồng dân tộc khai thác với mục đích thương mại thời gian dài; đồng thời nạn chặt phá rừng, tập quán đốt nương làm rẫy, mở rộng diện tích đất canh tác nhiều nơi ảnh hưởng trực tiếp thu hẹp môi trường sống Nên nguồn gen Bát giác liên tự nhiên ngày bị suy giảm nghiêm trọng, đưa vào Danh lục đỏ thuốc Việt Nam (2006), Sách đỏ Việt Nam (2007) với mức đánh giá nguy cấp (EN) khuyến cáo bảo tồn nguyên vị, thu thập nguồn gen để nhân giống bảo tồn ngoại vi (Ex situ) sở có chức để đảm bảo an toàn cho nguồn gen quý Hiện nghiên cứu đa dạng nguồn gen nhân giống trồng trọt loài Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe) cịn ít, tập trung chủ yếu vào nghiên cứu thành phần hóa học, tác dụng sinh học hoạt chất chiết từ dược liệu Xuất phát từ thực tiễn nêu trên, việc thực nghiên cứu để cung cấp dẫn liệu khoa học đặc điểm nông sinh học nhân giống, trồng Bát giác liên phục vụ cho mục đích bảo tồn, khai thác phát triển nguồn gen quý cần thiết 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu góp phần xác định 1-2 mẫu giống Bát giác liên có suất, chất lượng dược liệu cao đề xuất biện pháp kỹ thuật nhân giống, trồng Bát giác liên phù hợp Sa Pa, Lào Cai 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Thu thập đánh giá đặc điểm nông sinh học mẫu giống Bát giác liên, từ chọn 1-2 mẫu giống có tiềm suất chất lượng tốt phục vụ công tác phát triển dược liệu Bát giác liên Sa Pa, Lào Cai; - Từ mẫu giống Bát giác liên chọn lọc: + Xác định số biện pháp kỹ thuật nhân giống hữu tính nhân giống vơ tính Bát giác liên; + Xác định số biện pháp kỹ thuật trồng Bát giác liên Sa Pa, Lào Cai 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu Các mẫu giống Bát giác liên thu thập Việt Nam từ năm 2014 đến năm 2017 trồng đánh giá Trung tâm nghiên cứu dược liệu Sa Pa 1.3.2 Thời gian nghiên cứu Đề tài thực từ năm 2017 đến năm 2022 1.3.3 Địa điểm nghiên cứu - Đánh giá đặc điểm hình thái, sinh trưởng, phát triển, nhân giống trồng Bát giác liên thực Trung tâm nghiên cứu dược liệu Sa Pa - Viện Dược liệu; - Nghiên cứu đặc điểm giải phẫu phận sinh dưỡng sinh sản thực Khoa Nông học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Trung tâm Tài nguyên dược liệu Viện Dược liệu; - Nghiên cứu phân loại Bát giác liên dựa trình tự gen ITS thực Bảo tàng Thiên Nhiên Việt Nam – Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; - Nghiên cứu đa dạng di truyền mẫu giống Bát giác liên thực Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Nông nghiệp Việt Nam; - Đánh giá hàm lượng podophyllotoxin dược liệu Bát giác liên Khoa Hóa phân tích Tiêu chuẩn– Viện Dược liệu 1.3.4 Nội dung nghiên cứu - Đánh giá đặc điểm nông sinh học mẫu giống Bát giác liên; - Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật nhân giống Bát giác liên; - Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật trồng Bát giác liên 1.4 NHỮNG ĐÓP GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN - Từ 20 mẫu giống Bát giác liên (D.tonkinense) thu thập, xác định đặc điểm nông sinh học, đa dạng di truyền mẫu giống tuyển chọn mẫu giống Bát giác liên M11 thu Vị Xuyên – Hà Giang Mẫu giống có đặc điểm thân ngầm dạng chuỗi với đốt hình trụ dẹt; thân khí sinh màu xanh nhạt, mặt phiến có vết loang hình đa giác màu nâu đỏ, tràng hoa màu đỏ đậm; có đặc điểm sinh trưởng phát triển tốt với suất dược liệu đạt 11,75 tạ/ha hàm lượng hoạt chất podophyllotoxin cao (đạt 3,51%), phù hợp để phát triển sản xuất dược liệu Sa Pa, Lào Cai; - Xác định số biện pháp kỹ thuật nhân giống hữu tính Bát giác liên: sử dụng phương pháp thụ phấn chéo khác mẫu giống cắt tỉa non, để lại 1-2 quả/cây; hạt giống thu hoạch từ chín tách bỏ lớp áo hạt, đãi sạch, để gieo hạt tươi cho tỷ lệ mọc mầm cao Xác định số biện pháp kỹ thuật nhân giống vơ tính đoạn hom thân ngầm gồm đốt cắt vị trí đầu thân ngầm vào thời vụ tháng Đồng thời xác định rễ hình thành chồi bất định sau tách khỏi thân ngầm xây dựng biện pháp kỹ thuật nhân giống vơ tính hom rễ, với thời vụ giâm hom vào tháng 5, hom dài 15 cm cắt vị trí cuối rễ; ngâm hom rễ dung dịch BA 10 ppm giờ, vớt để sau ngâm dung dịch GA3 175 ppm sau đem giâm cho tỷ lệ hom bật mầm cao nhất; - Xây dựng biện pháp kỹ thuật trồng sản xuất dược liệu Bát giác liên với thời vụ trồng cho tỷ lệ sống cao vào tháng tháng 11, trồng với mật độ 62.000 cây/ha (tương ứng khoảng cách trồng 40 x 40 cm), lượng phân bón thích hợp gồm 20 phân hữu hoai mục + 70 kg N + 140 kg P2O5 + 70 kg K2O chế độ che sáng phù hợp cho 60% 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ Ý NGHĨA THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học - Bổ sung cung cấp thơng tin khoa học mới, có giá trị đặc điểm nông sinh học, đa dạng di truyền trình tự gen vùng ITS nguồn gen Bát giác liên giúp sử dụng lồi góp phần vào cơng tác chọn tạo giống có suất, chất lượng; - Là tài liệu tham khảo có giá trị phục vụ cho công tác giảng dạy, nghiên cứu dược liệu nói chung Bát giác liên nói riêng 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Cung cấp dẫn liệu khoa học có giá trị mẫu giống Bát giác liên M11 có tiềm suất chất lượng; khả nhân giống hữu tính hạt, nhân giống vơ tính hom thân ngầm, hom rễ; kỹ thuật nhân giống trồng trọt sơ cho Bát giác liên góp phần bảo tồn, khai thác và phát triển có hiệu nguồn gen Bát giác liên PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY BÁT GIÁC LIÊN Bát giác liên tên gọi loài thuộc chi Dysosma Woodson có nguồn gốc Việt Nam Trung Quốc Đã có lồi thuộc chi Dysosma Woodson ghi nhận, với loài đặc hữu Trung Quốc; D villosa loài phát tỉnh Quý Châu (Trung Quốc) (Wang & cs., 2019) Tại Việt Nam, ghi nhận loài Bát giác liên có tên khoa học D tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe (syn: Podophyllum tonkinense Gagnep.) mọc hoang số tỉnh miền núi phía Bắc, thu hái củ (thân ngầm) rễ để làm thuốc (Phạm Hoàng Hộ, 1997; Đỗ Tất Lợi, 2004, Nguyễn Tiến Bân & cs., 2007) Có quan điểm khác loài Bát giác liên Việt Nam, Shaw & cs (2002) cho loài D tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe phân bố Việt Nam đồng danh loài D versipellis, Ying & cs (2011) lại cho lồi đồng danh loài D difformis phân bố Trung Quốc Điều đặt thực tiễn phải nghiên cứu phân loại để xác định xác lồi Bát giác liên thu hái tự nhiên để làm dược liệu nước ta Do đó, bên cạnh phương pháp so sánh hình thái phương pháp truyền thống phân loại thực vật việc kết hợp với phương pháp sinh học phân tử - giải trình tự gen loài Bát giác liên để giám định loài cần thiết Theo y học cổ truyền Trung Quốc Việt Nam, dược liệu Bát giác liên sử dụng làm thuốc chữa rắn cắn, ung nhọt, giải độc, tiêu phù (Đỗ Tất Lợi, 2004; Đỗ Huy Bích & cs., 2006) Nghiên cứu y học đại cho thấy thân rễ rễ rễ lồi thuộc chi Dysosma Woodson có chứa chất có tác dụng sinh học cao; podophyllotoxin dẫn xuất chúng có tác dụng ức chế tế bào ung thư, ức chế virus, chữa viêm khớp Ngoài ra, hợp chất khác kaempferol, quercetin, quercitrin rutin có tác dụng ức chế virus, vi khuẩn, kháng viêm, chống oxi hóa (Man & cs., 2012; Zhang & cs., 2014; Wang & cs., 2019; Karuppaiya & Tsay, 2019; Karuppaiya & Wu, 2020; Bui Van Thanh & cs., 2022) Do khai thác mức môi trường sống bị thu hẹp nên nguồn gen Bát giác liên tự nhiên ngày bị suy giảm, trở nên cạn kiệt Bởi việc bảo tồn nguyên vị, thu thập nguồn gen bảo tồn ngoại vi (Ex situ), nghiên cứu nhân giống trồng trọt Bát giác liên cấp thiết 2.2 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC SINH SẢN VÀ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA CÁC LỒI THUỘC CHI BÁT GIÁC LIÊN Trong cơng tác chọn tạo sản xuất giống việc nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản loại trồng quan trọng Là sở để đưa phương thức chọn giống biện pháp trì đặc tính giống chọn tạo Đồng thời sở để thực biện pháp nhân giống, tạo nguồn giống chất lượng phục vụ sản xuất Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản cho thấy chi Dysosma Woodson có tượng tự bất hợp phương thức sinh sản hữu tính chúng Khi nghiên cứu đặc điểm sinh sản loài D versipellis, Qiu & cs (2005), Guan & cs (2010) cho biết chúng có tượng tự bất hợp, mà thử nghiệm bao hoa túi vải thụ phấn bổ sung hạt phấn hoa cho thấy hoa theo dõi hồn tồn khơng đậu Tuy nhiên giao phấn khác tỷ lệ đậu hoa đạt đến 62,7% Gong & cs (2015) theo dõi đặc điểm sinh sản loài D pleiantha cho biết chúng có hình thức tự bất hợp sinh sản hữu tính, tương tự với lồi D versipellis Như tượng tự bất hợp nguyên nhân tỷ lệ đậu thấp tự nhiên loài Bát giác liên Đặc điểm sinh sản hữu tính của chúng phát triển theo hướng bắt buộc giao phấn khác cây, chí khác quần thể q trình thụ tinh xảy để hình thành hạt để trì nịi giống Đây nguyên nhân mức độ đa dạng di truyền nguồn gen Bát giác liên nghiên cứu Trong mức độ đa dạng di truyền quần thể thấp, hầu hết cá thể quần thể có kiểu gen hình thức sinh sản vơ tính chiếm ưu Trái lại, quần thể khác nhau, đặc biệt quần thể cách xa mặt địa lý lại có mức độ đa dạng di truyền cao (Qiu & cs., 2005; Zong & cs., 2008; Guan & cs., 2010; Gong & cs., 2015) Thông qua nghiên cứu này, tác giả đưa khuyến cáo cần phải thực bảo tồn nguyên vị; trường hợp thực bảo tồn chuyển vị phải đảm bảo thu thập cá thể từ tất vùng phân bố để giữ đa dạng di truyền loài Bát giác liên Trong đánh giá đa dạng di truyền phương pháp thị phân tử, sử dụng phản ứng PCR với thị ISSR RAPD sử dụng phổ biến áp dụng để đánh giá đa dạng di truyền nguồn gen Bát giác liên 2.3 BIỆN PHÁP NHÂN GIỐNG, TRỒNG CÂY DƯỢC LIỆU VÀ CHI BÁT GIÁC LIÊN 2.3.1 Nhân giống hữu tính Nhân giống hữu tính phương pháp áp dụng phổ biến thay để đảm bảo hiệu sản xuất nhiều lồi dược liệu có hệ số nhân hạt cao hạt có tỷ lệ nảy mầm tốt Đương quy Nhật Bản, Cát cánh, Bạch truật, Bạch chỉ, Ngưu bàng Đây phương pháp nhân giống tối ưu áp dụng cho lồi dược liệu q, có giá trị cao Nhân sâm Hàn Quốc - Panax ginseng (Lee & cs., 2018), Nhân sâm Mỹ - Pannax quinquefolius (Schluter & Punja, 2020), Tam thất Bắc- Panax notoginseng (Guo & cs., 2010) Sâm tam thất - Panax pseudoginseng (Jamir et al., 2016) Tiêu chí quan trọng để đánh giá hiệu nhân giống hữu tính tỷ lệ nảy mầm hạt Những yếu tố có ảnh hưởng trực tiếp đến tỷ lệ nảy mầm hạt nhân giống chất hạt giống gồm cấu trúc hạt chất dự trữ hạt đặc tính sinh lý (sự ngủ nghỉ hạt); yếu tố ngoại cảnh quan trọng ẩm độ, nhiệt độ, hàm lượng ơxy q trình hạt nảy mầm Đối với loài Bát giác liên thuộc chi Dysosma Woodson, tỷ lệ đậu thấp nên lượng hạt thu để nhân giống Tang & cs (2008) thu hạt giống loài D versipellis để làm vật liệu nhân giống invitro, hạt nảy mầm môi trường MS + BA 1,0 mg/l + IBA 0,5 mg/l + GA3 4,0 mg/l với tỷ lệ nảy mầm đạt 72,4% Do lồi Bát giác liên có tượng tự bất hợp, yêu cầu giao phấn để thu hạt nên hệ có phân li cao mặt di truyền Bởi vậy, phương pháp nhân giống hữu tính nên sử dụng để tạo vật liệu khởi đầu cho công tác chọn tạo giống Để tạo nguồn giống trồng trọt nên sử dụng phương pháp nhân giống vơ tính 2.3.2 Nhân giống vơ tính Nhân giống vơ tính phương pháp áp dụng để nhân giống lồi dược liệu khơng hoa kết hạt tỷ lệ kết hạt thấp, hạt có tỷ lệ nảy mầm thấp, có sức sống kém, phân li mạnh tính trạng hình thái chất lượng dược liệu làm ảnh hưởng đến hiệu sản xuất dược liệu Tùy loại dược liệu khác mà lựa chọn biện pháp nhân giống vô tính phù hợp giâm hom, chiết cành, ghép nuôi cấy in vitro Đối với biện pháp giâm hom, hom thân, cành phận sử dụng phổ biến loài dược liệu Đinh lăng, Cà gai leo, Lá khơi Bên cạnh sử dụng hom rễ làm vật liệu nhân giống lồi Đan sâm (Sheng, 2007) Mâm xơi (Hussain & cs., 2016) hom thân rễ loài Podophyllum hexandrum (Nadeem & cs., 2000; Kharkwal & cs., 2008), Tam thất - Panax pseudoginseng (Jamir &cs., 2016) Trong giâm hom, yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu giâm hom thời vụ giâm, vị trí cắt lấy hom, kích thước hom nồng độ chất điều tiết sinh trưởng Đối với loài Bát giác liên, nghiên cứu phương pháp nhân giống vơ tính sử dụng thân rễ làm vật liệu nhân giống áp dụng biện pháp nuôi cấy mơ tế bào Chưa có nghiên cứu sử dụng rễ Bát giác liên để làm vật liệu nhân giống 2.3.3 Kỹ thuật trồng trọt Cho đến nay, chưa có quy trình kỹ thuật trồng lồi Bát giác liên thuộc chi Dysosma Woodson Tuy nhiên, số nghiên cứu trồng trọt lồi thc chi Podophyllum L (có quan hệ gần gũi với chi Dysosma Woodson) Silva (2000) Maqbool (2011) Bộ Y học cổ truyền Ấn Độ (AYUSH, 2016) xây dựng quy trình kỹ thuật trồng trọt cho P hexandrum để phục vụ sản xuất nguyên liệu dược sử dụng nước xuất sau: - Lựa chọn vùng trồng: Cây ưa bóng, đất giàu mùn, phát triển tốt tán rừng khu vực có kiểu khí hậu ơn đới khí hậu phụ núi cao - Kỹ thuật trồng trọt: Đất cày bừa kỹ xử lý cỏ dại Sử dụng phân hoai mục với lượng 10 tấn/ha Su trồng cần tưới giữ ẩm cho Sau tuần trồng tiến hành làm cỏ lần đầu đảm bảo vườn cỏ để giảm cạnh tranh dinh dưỡng nhỏ PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU Vật liệu nghiên cứu mẫu giống Bát giác liên thu thập số tỉnh phía Bắc Kon Tum trình bày bảng 3.1 Các dạng phân bón sử dụng thí nghiệm bao gồm: Đạm ure (46%N), supe lân (16% P2O5), kali clorua (60% K2O)… Dụng cụ hóa chất nội dung nghiên cứu trình tự gen ITS cung cấp Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam – Viện Hàm lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam; dụng cụ hóa chất nội dung nghiên cứu đa dạng di truyền cung cấp Bộ môn Công nghệ sinh học thực vật– Học viện Nơng nghiệp Việt Nam; dụng cụ hóa chất dùng nghiên cứu giải phẫu, đánh giá hàm lượng podophyllotoxin dược liệu Bát giác liên cung cấp Trung tâm Tài nguyên dược liệu, Khoa Hóa phân tích Tiêu chuẩn – Viện Dược liệu Bảng 3.1 Đặc điểm mẫu giống Bát giác liên Mã số Ký hiệu mẫu giống D.ĐB01 M1 D.NH01 M2 D.SH01 M3 D.SH02 M4 D.SP01 M5 D.BH01 M6 D.BH02 M7 D.TY03 M8 D.VC01 M9 D.TC01 M10 D.VX02 M11 D.CH01 M12 D.CH02 M13 D.NHg03 M14 D.VX01 M15 D.TrD01 M16 D.NB01 M17 D.VN01 M18 D.TD01 M19 D.BV01 M20 Đặc điểm Lá có 6-8 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 6-8 thùy sâu, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh nhạt Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh nhạt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh nhạt Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh nhạt, có vân nâu đỏ mặt Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh nhạt, có vân nâu đỏ mặt Lá có 6-8 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 5-6 thùy nơng, màu xanh nhạt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-10 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm, có vân nâu đỏ mặt Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm Lá có 7-8 thùy nơng, màu xanh đậm Nơi thu mẫu Vị trí thu mẫu Đà Bắc, Hịa Bình 20º53'38,63''B, 105º12'35,74''Đ 14º43'56,00''B, 107º32'25,86''Đ 22º18'15,69''B, 103º13'47,85''Đ 22º18'24,87''B, 103º15'51,85''Đ 22º17'49,74''B, 103º56'19,94''Đ 22º36'35,74''B, 104º15'18,71''Đ 22º36'26,67''B, 104º15'39,25''Đ 21º32'56,46''B, 104º40'34,61''Đ 21º33'58''B, 104º40'03,79''Đ 21º58'40,52''B, 103º22'55,58''Đ 22º58'4,0''B, 104º53'10,23''Đ 22º15'59,30''B, 105º17'12,88''Đ 22º07'29,24''B, 105º26'6,65''Đ 22º18'22,57''B, 105º15'55,30''Đ 22º58'910''B, 104º52'946''Đ 22º12'33,34''B, 106º26'23,50''Đ 22º40'23,03''B, 105º48'44,13''Đ 21º48'59,47''B, 105º55'23,00''Đ 21º27'50,58''B, 105º35'41,16''Đ 21º04'15,36''B, 105º21'57,44''Đ Ngọc Hồi, Kon Tum Sìn Hồ, Lai Châu Sìn Hồ, Lai Châu Sa Pa, Lào Cai Bắc Hà, Lào Cai Bắc Hà, Lào Cai Trấn Yên, Yên Bái Văn Chấn, Yên Bái Tủa Chùa, Điện Biên Vị Xuyên, Hà Giang Chiêm Hóa, Tuyên Quang Chiêm Hóa, Tuyên Quang Na Hang, Tuyên Quang Vị Xuyên, Hà Giang Tràng Định, Lạng Sơn Nguyên Bình, Cao Bằng Võ Nhai, Thái Nguyên Tam Đảo, Vĩnh Phúc Ba Vì, Hà Nội 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.2.1 Nghiên cứu đặc điểm nông sinh học mẫu giống Bát giác liên - Đánh giá đặc điểm hình thái, giải phẫu, giám định tên khoa học đánh giá đa dạng di truyền mẫu giống Bát giác liên - Đánh giá đặc điểm sinh trưởng, suất hàm lượng podophyllotoxin dược liệu mẫu giống Bát giác liên 3.2.2 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật nhân giống Bát giác liên Sau đánh giá đặc điểm nông sinh học mẫu giống bát giác liên, chọn mẫu giống có suất chất lượng dược liệu tốt để tiếp tục nghiên cứu cho thí nghiệm tiếp sau: - Nghiên cứu biện pháp chăm sóc nâng cao khả đậu kỹ thuật nhân giống hữu tính Bát giác liên - Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ giâm hom, vị trí cắt hom, kích thước hom nồng độ GA3 đến khả nhân giống Bát giác liên giâm hom thân ngầm giâm hom rễ 3.2.3 Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật trồng Bát giác liên - Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ, khoảng cách trồng, lượng phân bón chế độ che sáng đến khả sinh trưởng phát triển Bát giác liên 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.3.1 Phương pháp nghiên cứu thí nghiệm 3.3.1.1 Đánh giá đặc điểm nông sinh học số mẫu giống Bát giác liên a Đánh giá đặc điểm nông sinh học giám định tên khoa học * Thí nghiệm 1: Nghiên cứu đặc điểm nơng sinh học mẫu giống Bát giác liên Vật liệu thí nghiệm: 20 mẫu giống Bát giác liên (M1-M20) - Phương pháp bố trí thí nghiệm theo dõi: Các mẫu giống Bát giác liên trồng giàn che giảm ánh sáng 60% Thí nghiệm bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ, lần nhắc lại khu thí nghiệm Trung tâm Nghiên cứu dược liệu Sa Pa; thời gian tháng 1/2017 Giám định tên khoa học mẫu giống biện pháp so sánh hình thái, kết hợp với thị DNA (so sánh trình tự gen vùng ITS mẫu giống M12, M8, M3 với trình tự gen lồi thuộc chi Dysosma cơng bố Genbank) * Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng số hình thức thụ phấn đến đậu chất lượng hạt giống Bát giác liên Thí nghiệm thực với mục tiêu đánh giá đặc điểm sinh sản hữu tính tượng tự bất hợp Bát giác liên biện pháp thụ phấn bổ sung hạt phấn hoa (TP2), hạt phấn từ hoa khác (TP3,TP4) hạt phấn từ hoa khác (TP5, TP6), so sánh với hoa nở tự nhiên không thụ phấn bổ sung (TP1) Thời gian thực hiện: thí nghiệm thực năm 2018 Thí nghiệm thực theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ, lần nhắc lại mẫu giống M11, công thức thí nghiệm đánh dấu theo dõi 30 hoa Trong thí nghiệm, Bát giác liên trồng theo kỹ thuật trồng bảo tồn Trung tâm nghiên cứu dược liệu Sa Pa với khoảng cách trồng 40 cm x 30 cm; lượng phân bón (tính cho ha) gồm 20.000 kg phân hữu hoai mục + 50 kg N + 100 kg P2O5 + 50 kg K2O; trồng giàn che lưới đen với mức che sáng 60% b Đánh giá đa dạng di truyền thị phân tử, sử dụng phản ứng PCR * Thí nghiệm 3: Nghiên cứu tối ưu hóa nồng độ DNA mẫu nghiên cứu sử dụng phản ứng PCR cao 2,2m, che lưới đen (thí nghiệm 15, 16, 17 mức che sáng lưới đen 60%) Thí nghiệm 15: Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ trồng đến sinh trưởng suất dược liệu Bát giác liên Thí nghiệm gồm thời vụ trồng: 15/10 (TV1) (ĐC), 15 11 (TV2), 15/12 (TV3), 15/ (TV4), 15/ (TV5) Lượng phân bón gồm 20 phân chuồng + 50kg N + 100 kg P2O5 + 50kg K2O; khoảng cách trồng 40x30 cm Thí nghiệm 16: Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ khoảng cách trồng đến sinh trưởng suất dược liệu Bát giác liên Thí nghiệm gồm mật độ khoảng cách trồng: 8,3 vạn cây/ha (40x30 cm – MĐ1), 6,2 vạn cây/ha (40x40 cm - MĐ2) 5,0 vạn cây/ha (40x50 cm - MĐ3) Cây trồng theo mật độ thí nghiệm vào tháng 10 Lượng phân bón 20 phân chuồng + 50kg N + 100 kg P2O5 + 50kg K2O Thí nghiệm 17: Nghiên cứu ảnh hưởng liều lượng phân bón đến sinh trưởng, suất chất lượng dược liệu Bát giác liên Thí nghiêm nhân tố bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) Trong nhân tố 1là tỷ lệ phân N: P2O5: K2O gồm T1 (1N: 1P2O5: 1K2O) T2 (1N: 2P2O5: 1K2O) nhân tố phụ lượng phân đạm gồm N1 (30kg), N2 (50 kg) N3(70 kg) Diện tích ô thí nghiệm 5m2 Cây trồng vào tháng 10 với lượng phân bón theo thí nghiệm 20 phân hữu Khoảng cách trồng 40 x 30cm Cây trồng giàn che lưới đen với độ che sáng 60% Thí nghiệm 18: Nghiên cứu ảnh hưởng chế độ che sáng đến sinh trưởng suất chất lượng dược liệu Bát giác liên Thí nghiệm thực với mức che sáng 30%; 60% 90% khơng che sáng Diện tích thí nghiệm 10m2, khoảng cách trồng 40 x 30 cm, phân bón 20 phân hữu hoai mục + 50kg N + 100 kg P2O5 + 50kg K2O 3.3.2 Phương pháp lấy mẫu, phân tích xử lý số liệu * Chỉ tiêu đặc điểm hình thái - Hình thái lá, thân rễ, hoa hạt mẫu giống Bát giác liên * Chỉ tiêu nhân giống - Nhân giống hữu tính: + Tỷ lệ mọc mầm (%) = tổng số hạt mọc mầm/ tổng số hạt gieo x 100 + Tỷ lệ hình thành (%) = tổng số con/ tổng số hạt gieo x 100 - Nhân giống vơ tính hom thân rễ hom rễ: + Tỷ lệ bật mầm (%) = tổng số hom bật mầm/ tổng số hom giâm x 100 + Tỷ lệ hình thành (%) = tổng số con/ tổng số hom giâm x 100 *Chỉ tiêu theo dõi sinh trưởng giống Năng suất cá thể (g/cây) Năng suất lý thuyết (tạ/ha) thu hoạch dược liệu sau năm trồng * Phương pháp lấy mẫu Chọn mẫu để theo dõi theo phương pháp đường chéo, ô thí nghiệm chọn 10 *Phương pháp xử lý số liệu Số liệu phân tích phương sai (ANOVA) phần mềm IRRISTAT 5.0 Đồ thị vẽ phần mềm Excel Phân tích thành phần PCA sử dụng phần mềm R Sử dụng chương trình NTSYS 2.1 đánh giá đa dạng di truyền PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 4.1 ĐÁNH GIÁ ĐẶC ĐIỂM NÔNG SINH HỌC CÁC MẪU GIỐNG BÁT GIÁC LIÊN 4.1.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu xác định tên khoa học mẫu giống Bát giác liên Kết nghiên cứu đặc điểm hình thái, giải phẫu cho thấy 20 mẫu giống Bát giác liên thu thập có đồng cao cấu trúc cây, đặc điểm hình thái, giải phẫu quan sinh dưỡng, quan sinh sản thời gian giai đoạn sinh trưởng năm; có khác biệt độ lớn màu sắc phận Tất mẫu giống Bát giác liên thu thập có tượng bất hợp hình thức sinh sản hữu tính thực biện pháp thụ phấn bổ sung hạt phấn từ hoa khác cây, khác mẫu giống để thu hạt giống Bằng phương pháp hình thái so sánh kết hợp giải trình tự vùng gen ITS so sánh với loài thuộc chi Dysosma khẳng định lồi Bát giác liên Việt Nam có tên khoa học Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe loài riêng biệt, khơng đồng danh lồi Dysosma versipellis Dysosma difformis theo quan điểm Shaw (2002) Ying et al., (2011) Hình 4.1 Sơ đồ phả hệ dựa trình tự gen ITS thiết lập thơng qua phân tích gen lồi Bát giác liên Việt Nam loài khác thuộc chi Dysosma Woodson họ Berberidaceae 4.1.2 Đánh giá đa dạng di truyền mẫu giống Bát giác liên Kết đánh giá đa dạng di truyền 20 mẫu giống Bát giác liên thị ISSR cho thấy mẫu giống Bát giác liên có đa dạng di truyền cao, với hệ số tương đồng di truyền trung bình 0,69 (dao động từ 0.59 (D.BH02 với D.DB01) đến 0.85 (D.TC01 với D.VC01 D.CH01 với D.VX02)) Ở mức độ tương đồng di truyền 69% 20 mẫu giống Bát giác liên chia thành nhóm Hình 4.2 Sơ đồ quan hệ di truyền 20 mẫu giống Bát giác liên phân tích thị ISSR Hình 4.3 Sơ đồ quan hệ di truyền 20 mẫu giống Bát giác liên phân tích thị RAPD Sơ đồ quan hệ di truyền 20 mẫu giống Bát giác liên sử dụng phương pháp phân nhóm UPGMA dựa liệu đánh giá thị RAPD cho thấy rằng: mức tương đồng di truyền 79%, 20 mẫu gống Bát giác liên chia thành nhóm Nhóm I bao gồm mẫu giống D.DB01, D.NH01, D.SH01, D.SH02 and D.SP01; nhóm II bao gồm 12 mẫu giống: D.VX01, D.TrD01, D.VC01, D.TC01, D.VX02, D.CH01, D.CH02, D.NHg03, D.NB01, D.VN01, D.TD01, D.BV01; nhóm III gồm mẫu giống D.BH01, D.BH02 nhóm IV có mẫu giống D.TY03 4.1.3 Năng suất hàm lượng podpphyllotoxin mẫu giống Bát giác liên Trong 20 mẫu giống Bát giác liên, mẫu giống M13 có suất dược liệu cao (11,96 tạ/ha) mẫu giống M11 có hàm lượng podophyllotoxin cao (3,51%) Bảng 4.1 Năng suất hàm lượng podophyllotoxin mẫu giống Bát giác liên Năng suất cá thể (g/cây) Năng suất lý thuyết (tạ/ha) M1 M2 18,93 17,53 11,74 10,87 9,56 8,92 0,70 ± 0,01 0,60 ± 0,02 M3 M4 15,88 14,08 9,85 8,73 8,15 7,08 0,83 ± 0,02 0,95 ± 0,01 M5 M6 M7 15,20 15,67 16,42 9,42 9,72 10,18 7,62 7,89 8,22 0,76 ± 0,02 0,79 ±0,01 0,89 ± 0,01 M8 M9 M10 M11 M12 18,88 18,30 15,42 23,08 23,30 11,71 11,35 9,56 14,31 14,45 9,43 9,13 7,65 11,75 11,83 0,12 ± 0,01 0,62 ± 0,02 0,71 ± 0,03 3,51 ± 0,03 2,23 ± 0,02 M13 M14 M15 M16 M17 23,58 21,30 20,85 18,62 18,02 14,62 13,21 12,93 11,54 11,17 11,96 10,31 10,35 9,25 9,08 1,15 ± 0,02 1,08 ± 0,01 1,03 ± 0,02 1,27 ± 0,03 2,43 ± 0,03 M18 M19 M20 LSD 0.05 CV% 21,43 20,92 20,77 2,3 5,7 13,29 12,97 12,88 1,9 5,2 10,31 10,26 10,29 1,1 5,4 1,56 ± 0,03 0,95 ± 0,01 1,08 ± 0,02 Mẫu giống Năng suất thực thu (tạ/ha) Hàm lượng podophyllotoxin 4.2 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIỆN PHÁP KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG CÂY BÁT GIÁC LIÊN 4.2.1 Nghiên cứu nâng cao tỷ lệ đậu nhân giống hữu tính Bát giác liên 4.2.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chế độ phân bón tỉa định đến tỷ lệ đậu chất lượng hạt giống Bát giác liên Việc bón bổ sung phân kali kết hợp với tỉa có hiệu việc nâng cao tỷ lệ đậu nâng cao chất lượng hạt giống Bát giác liên, bón bổ sung phân kali với lượng 60 kg/ha (P2) cách hòa với nước tưới cách gốc 15-20 cm; đồng thời tỉa bớt quả, để lại 1-2 (C2) làm tăng tỷ lệ đậu chất lượng hạt giống Bát giác liên Bảng 4.2 Ảnh hưởng chế độ phân bón tỉa định đến tỷ lệ đậu chất lượng hạt giống Bát giác liên Tỷ lệ đậu Số hạt chắc/ Chiều dài Chiều rộng Chiều dày Khối lượng Tỷ lệ nảy (%) (hạt) hạt (mm) hạt (mm) hạt (mm) 1000 hạt (g) mầm (%) 31,5 9,72 9,14 4,22 2,53 83,90 83,16 C0-ĐC 100,0 18,87 9,36 4,25 2,89 97,40 85,87 C1 P0 100,0 17,56 9,30 4,28 2,83 96,24 85,22 C2 100,0 11,56 9,26 4,20 2,67 87,52 83,84 C3 47,7 13,50 9,23 4,30 2,75 93,14 86,04 C0 100,0 22,32 9,46 4,39 2,87 100,72 90,13 C1 P1 100,0 20,19 9,37 4,38 2,84 100,42 87,22 C2 100,0 15,69 9,30 4,32 2,77 94,12 85,39 C3 52,9 13,07 9,26 4,31 2,74 93,16 86,39 C0 100,0 23,41 9,48 4,50 2,88 104,48 90,88 C1 P2 100,0 20,57 9,44 4,40 2,84 101,11 89,66 C2 100,0 16,43 9,32 4,35 2,84 97,35 87,22 C3 15,7 10,50 9,24 4,20 2,76 90,57 83,25 C0 50,1 18,47 9,42 4,30 2,87 98,36 85,68 C1 P3 33,3 18,13 9,33 4,34 2,85 97,09 85,59 C2 16,7 10,96 9,22 4,21 2,78 90,54 84,56 C3 36,9 14,43 9,27 4,24 2,73 91,27 84,52 P0 86,3 17,87 9,34 4,35 2,81 97,10 87,19 P1 83,3 18,37 9,37 4,39 2,82 99,20 88,54 P2 79,1 14,52 9,30 4,26 2,82 94,14 84,52 Trung P3 82,9 11,65 9,22 4,26 2,69 90,19 84,46 bình C0 86,9 20,77 9,43 4,36 2,88 100,24 88,14 C1 88,2 19,11 9,36 4,35 2,84 98,72 86,93 C2 27,7 13,66 9,28 4,27 2,77 92,38 85,26 C3 LSD0.05 C 0,29 0,92 0,08 0,08 0,06 2,61 0,05 LSD0.05 P 0,23 0,83 0,09 0,09 0,07 2,53 0,04 LSD0.05 C*P 0,46 1,65 0,17 0,16 0,13 5,06 0,08 CV% 3,6 6,1 2,1 2,5 2,8 3,2 4,5 CT Ghi chú: - Yếu tố I: P0-Nền: (20 phân hữu hoai mục + 50kg N + 100kg P2O5); P1: Nền + 30kg K2O; P2: Nền + 60kg K2O; P3: Nền + 90kg K2O - Yếu tố II: C0: Không cắt tỉa quả; C1: Cắt tỉa, để lại quả/ cây; C2: Cắt tỉa, để lại quả/ cây; C3: Cắt tỉa, để lại quả/cây 4.2.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian bảo quản đến tỷ lệ nảy mầm hạt chất lượng giống Bát giác liên Hạt Bát giác liên có thời gian ngủ nghỉ ngắn, nên gieo sau thu hoạch, không bảo quản (BQ0) cho tỷ lệ nảy mầm tốt (đạt 84,4%) Việc kéo dài thời gian bảo quản hạt từ tháng (BQ1) đến tháng (BQ3) có tác động rút ngắn thời gian nảy mầm hạt lại làm giảm tỷ lệ nảy mầm hạt giống Bảng 4.3 Ảnh hưởng thời gian bảo quản đến khả nhân giống Bát giác liên Công thức Gieo-nảy mầm (ngày) Gieo – xuất vườn (ngày) Tỷ lệ hạt nảy mầm Tỷ lệ xuất vườn (%) (%) Chiều cao Số /cây (cm) (lá) BQ0 64 240 84,4 80,0 12,5 1,7 BQ1 57 240 72,2 67,8 12,1 1,7 BQ2 55 240 62,2 55,6 11,3 1,6 BQ3 50 LSD0,05 240 51,1 8,7 44,4 9,4 10,9 0,85 1,5 0,25 3,5 3,7 3,9 3,5 CV% Ghi chú: BQ0 – Hạt gieo sau thu, không bảo quản; BQ1 – Bảo quản hạt tháng; BQ2 – Bảo quản hạt tháng; BQ3 – Bảo quản hạt tháng 4.2.2 Nghiên cứu số biện pháp kỹ thuật nhân giống vô tính Bát giác liên 4.2.2.1 Nghiên cứu nhân giống vơ tính Bát giác liên biện pháp giâm hom thân ngầm a Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ giâm hom thân ngầm đến khả nhân giống Bát giác liên Thời vụ giâm hom thân ngầm Bát giác liên tốt tháng (TV3) Tại thời vụ này, hom thân ngầm bật mầm sau 32-38 ngày xuất vườn sau 82-88 ngày giâm Bảng 4.4 Ảnh hưởng thời vụ giâm hom thân ngầm đến khả nhân giống Bát giác liên Giâm - Giâm - Bật Xuất mầm vườn (ngày) (ngày) TV1 (ĐC) 45 ± 90 ±5 89,54b TV2 35 ± 85 ±3 TV3 35 ± TV4 Tỷ lệ Tỷ lệ Chiều xuất cao vườn (%) (cm) 81,62c 80,23c 15,46c 2,12a 98,92a 88,95b 86,37b 19,21ab 2,54a 85 ±3 97,75a 94,47a 92,36a 21,55a 2,63a 40 ± 110 ±3 98,36a 91,16ab 90,05a 18,91b 2,56a TV5 60 ± 130 ±5 85,74c 75,34d 70,91c 15,72c 2,15a TV6 75 ±5 130 ±5 81,33d 71,54e 70,16c 13,54c 1,82a LSD0.05 3,31 3,23 3,31 3,23 2,14 CV(%) 5,2 4,7 5,2 4,7 5,6 Công thức Tỷ lệ hom rễ (%) hom bật mầm (%) Số (lá) Ghi chú: TV1-thời vụ giâm hom 15/1; TV2- thời vụ giâm hom 15/3; TV3-thời vụ giâm hom 15/5; TV4-thời vụ giâm hom 15/7; TV5-thời vụ giâm hom 15/9; TV6-thời vụ giâm hom 15/1 Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 Đồng thời, thời vụ hom thân ngầm có tỷ lệ bật mầm xuất vườn cao nhất, 94,47 % 92,36% Cây giống thời vụ có đặc điểm sinh trưởng tốt với chiều cao đạt 21,55 cm có 2,63 lá/cây b Nghiên cứu ảnh hưởng vị trí cắt hom thân rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Trong vị trí cắt lấy hom khác nhau, hom lấy từ vị trí đầu mầm (VT1) có thời gian giâm hom nhanh đạt tỷ lệ hom bật mầm tỷ lệ xuất vườn cao nhất, đạt 85,55% 84,71% Trong giống từ hom đầu mầm (VT1) hom thân ngầm (VT2) có đặc điểm sinh trưởng tương đương Bảng 4.5 Ảnh hưởng vị trí cắt hom thân ngầm đến khả nhân giống Bát giác Vị trí cắt hom VT1 VT2 VT3 Giâm Bật mầm (ngày) 45 ± 60 ± 90 ± LSD0.05 CV(%) Giâm Xuất vườn (ngày) 90 ± 120 ± 150 ± Tỷ lệ hom rễ (%) Tỷ lệ hom bật mầm (%) Tỷ lệ xuất vườn (%) Chiều cao (cm) Số (lá) 87,73a 85,55a 84,71a 90,35a 83,26b 82,56b 89,52a 58,73c 56,17c 2,9 5,4 2,15 5,9 2,04 18,35a 20,32a 15,47b 1,02 5,2 2,37a 2,54a 2,03b 0,20 4,6 6,1 Ghi chú: VT1: hom đầu mầm; VT2: hom thân ngầm; VT3: hom cuối thân ngầm Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 c Nghiên cứu ảnh hưởng số đốt hom thân ngầm đến khả nhân giống Bát giác liên Hom thân ngầm gồm đốt (Đ4) hom thân ngầm có đốt (Đ3) có thời gian giâm hom tương đương (giâm-xuất vườn 77-83 ngày) Mặc dù hom đốt có tỷ lệ hom rễ, hom bật mầm hom xuất vườn cao so với hom đốt, chiều cao giống từ hom đốt tương đương với từ hom đốt Đồng thời, việc sử dụng hom đốt tốn nguyên liệu nhân giống, nên sử dụng hom thân ngầm đốt để nhân giống phù hợp Bảng 4.6 Ảnh hưởng số đốt hom thân ngầm đến khả nhân giống Bát giác liên Giâm Công Bật thức mầm (ngày) Đ1 55 ± Đ2 45 ± Đ3 45 ± Đ4 40 ± Giâm Xuất vườn (ngày) 125 ± 90 ± 80 ± 80 ± LSD0.05 CV(%) Tỷ lệ hom rễ (%) Tỷ lệ Tỷ lệ hom bật xuất mầm vườn (%) (%) 85,12d 79,25c 76,84c 89,64c 87,46b 86,57b 97,51b 89,55b 89,55b 100,0a 93,71a 93,71a 2,14 3,25 5,8 5,2 Chiều cao (cm) 14,73c 18,12b 21,41ab 23,54a Số (lá) 2,05c 2,56b 2,77b 3,13a Tỷ lệ khối lượng so với hom đốt (lần) 0,5 1,0 1,67 2,74 Ghi chú: Đ1: hom đầu mầm,1 đốt ; Đ2: hom đầu mầm, đốt; Đ3: hom đầu mầm, đốt; Đ4: hom đầu mầm, đốt Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 4.2.2.2 Nghiên cứu nhân giống vơ tính Bát giác liên biện pháp giâm hom rễ a Nghiên cứu hình thành chồi bất định từ rễ Bát giác liên Rễ Bát giác liên hình thành nên mầm bất định bị cắt rời khỏi mẹ Do sử dụng hom rễ Bát giác liên làm vật liệu nhân giống b Nghiên cứu ảnh hưởng thời vụ giâm đến khả nhân giống Bát giác liên hom rễ Trong thời vụ giâm hom rễ Bát giác liên, thời vụ giâm hom vào tháng (TV3) tốt với thời gian giâm hom ngắn nhất, đồng thời hom rễ có tỷ lệ bật mầm tỷ lệ xuất vườn lớn (đạt 83,76% 81,3%), thời vụ giâm hom vào tháng (TV2) Các thời vụ giâm hom vào tháng (TV5) tháng 11 (TV6) có thời gian giâm hom lâu tỷ lệ hom bật mầm, xuất vườn đặc điểm sinh trưởng giống so với thời vụ lại Bảng 4.7 Ảnh hưởng thời vụ giâm hom rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Công thức TV1 TV2 TV3 TV4 TV5 TV6 Giâm Giâm Tỷ lệ Bật Xuất hom mầm vườn rễ (%) (ngày) (ngày) 75,95b 258 ± 308 ± 78,73b 214 ± 264 ± 160 ± 200 ± 83,76a 180 ± 230 ± 76,71b 75,38b 305 ± 335 ± 71,62c 245 ± 275 ± LSD0.05 CV(%) Tỷ lệ hombật mầm (%) Tỷ lệ xuất vườn (%) 71,52b 78,73ab 83,76a 73,94b 62,37c 70,35b 5,22 3,1 67,64b 75,11ab 81,39a 71,52b 60,05c 68,98b 5,81 3,9 Chiều cao (cm) Số (lá) 8,54b 10,22a 11,55a 7,91b 7,56b 8,03b 1,51b 1,83a 1,92a 1,75ab 1,44b 1,46b 1,3 3,5 0,25 4,5 Ghi TV1-thời vụ giâm hom 15/1; TV2- thời vụ giâm hom 15/3; TV3-thời vụ giâm hom 15/5; TV4-thời vụ giâm hom 15/7; TV5-thời vụ giâm hom 15/9; TV6-thời vụ giâm hom 15/1 Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 c Nghiên cứu ảnh hưởng vị trí cắt hom rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Hom rễ cắt lấy vị trí rễ có khả hình thành mầm bất định, nên sử dụng để làm vật liệu nhân giống, Bảng 4.8 Ảnh hưởng vị trí cắt hom rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Vị trí cắt hom rễ R1 R2 R3 Giâm Bật mầm (ngày) 280 ± 260 ± 235 ± LSD0.05 CV(%) Giâm Xuất vườn (ngày) 335 ± 310 ± 285 ± Tỷ lệ hom rễ (%) Tỷ lệ hom bật mầm (%) Tỷ lệ xuất vườn (%) Chiều cao (cm) Số (lá) Số nhánh (nhánh) 69,34c 67,76c 62,61c 8,09bc 1,25a 1,3a 77,16b 74,83b 72,32b 9,17b 1,45a 1,0b 82,47a 80,67a 78,96a 12,51a 1,54a 1,0b 5,12 4,4 4,64 3,5 4,15 4,2 1,58 4,0 0,35 3,8 0,2 3,5 Ghi R1-Hom đầu rễ; R2-Hom rễ; R3-Hom cuối rễ Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 Trong vị trí cắt hom rễ, hom cuối rễ (R3 – đoạn hom giáp thân rễ) có tỷ lệ hom bật mầm xuất vườn cao (lần lượt 80,67% 78,96%) Đồng thời giống có đặc điểm sinh trưởng tốt rõ ràng so với hom cắt vị trí rễ (R2) đầu rễ (R1) Tuy nhiên sử dụng hom đầu rễ để nhân giống số mầm bất định hom lại nhiều (1-2 mầm/hom rễ) d Nghiên cứu ảnh hưởng độ dài hom rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Kết theo dõi thời gian giâm hom hom rễ có kích thước khác cho thấy loại hom dài có xu hướng bật mầm xuất vườn sớm so với hom có ngắn Trong hom rễ (D6) có thời gian giâm hom nhanh với tổng thời gian giâm hom 280 ngày; hom dài cm có thời gian giâm hom lâu với tổng thời gian giâm hom 350 ngày Hom có kích thước lớn có tỷ lệ hom bật mầm, xuất vườn, lớn hơn, giống có đặc điểm sinh trưởng tốt Trong hom dài 15 cm (D5) hom dài 30 cm (D6) có khả nhân giống tương đương, với tỷ lệ bật mầm (96,73% 97,14%) tỷ lệ xuất vườn (93,72% 94,47%) Rễ vừa vật liệu để nhân giống, vừa vật liệu để làm dược liệu, nên sử dụng hom rễ có độ dài 15 cm (D5) để nhân giống phù hợp Bảng 4.9 Ảnh hưởng kích thước hom rễ đến khả nhân giống Bát giác liên Chiều dài rễ Giâm -Bật mầm Giâm - Tỷ lệ Xuất vườn hom rễ Tỷ lệ hombật mầm Tỷ lệ Chiều xuất vườn cao (%) (cm) Số (lá) (ngày) (ngày) (%) D1 290 ± 350 ± 71,35d 51,17d 45,53d 6,03c 1,12c D2 285 ± 340 ± 74,41c 55,65d 50,84d 7,52c 1,51b D3 270 ± 320 ± 76,76c 63,35c 61,75c 8,55bc 1,53b D4 260 ± 305 ± 90,18b 88,93b 87,56b 10,11b 1,75b D5 250 ± 295 ± 98,92a 96,73a 93,72a 13,74a 2,16a D6 245 ± 280 ± 100,0a 97,14a 94,47a 14,19a 2,19a LSD0.05 2,51 5,64 6,17 2,4 0,3 CV(%) 5,2 4,7 4,3 5,5 5,1 (%) Ghi D1-hom rễ dài cm; D2-hom rễ dài cm; D3-hom rễ dài cm; D4-hom rễ dài 10 cm; D5-hom rễ dài 15 cm; D6hom rễ (dài 30 cm) Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 e Nghiên cứu ảnh hưởng xử lý hom rễ GA3 đến khả nhân giống Bát giác liên Khi không xử lý hom rễ GA3, hom rễ có tỷ lệ bật mầm 72,3% Việc xử lý hom rễ GA3 có hiệu rõ việc rút ngắn thời gian giâm hom Trong nồng độ từ 25ppm đến 250 ppm có hiệu nâng cao tỷ lệ bật mầm hom Các nồng độ từ 275ppm trở lên, tỷ lệ bật mầm hom rễ lại giảm, nồng độ từ 800 ppm trở lên hom rễ không bật mầm Các nồng độ GA3 từ 125ppm đến 175ppm có tỷ lệ hom bật mầm xuất vườn tương đương với nhau, nồng độ 175ppm có tỷ lệ bật mầm xuất vườn cao (đạt 89,1%) Bảng 4.10 Ảnh hưởng nồng độ xử lý GA3 đến khả nhân giống Bát giác liên hom rễ Nồng độ G0 G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 G8 G9 G10 G11 G12 G13 G14 G15 G16 G17-20 LSD0,05 CV% Giâm Giâm -Bật -Xuất mầm vườn (ngày) (ngày) 265 175 175 140 140 125 110 95 125 135 135 145 155 185 210 235 260 - 310 220 220 190 190 170 165 150 190 200 210 215 225 265 285 295 295 - Tỷ lệ hom rễ hình thành mầm bất định (%) 81,4 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 75,8 62,4 53,1 34,5 Tỷ lệ hom bật mầm (%) Tỷ lệ Chiều Số cao Số rễ xuất (lá/cây) (rễ/ vườn (cm) cây) (%) 73,8 75,6 77,6 83,7 87,3 88,6 89,1 89,5 83,7 81,3 75,5 71,2 70,7 57,9 45,0 35,7 17,32 1,2 4,5 72,3 74,5 75,8 81,1 86,9 88,1 89,1 89,5 82,6 78,5 74,8 70,3 67,5 50,2 41,3 30,4 11,6 2,0 5,3 9,3 10,5 10,9 10,9 11,5 11,8 12,5 12,7 13,3 13,5 13,7 13,5 13,4 12,9 12,5 12,1 11,5 0,9 3,9 1,5 1,5 1,6 1,6 1,7 1,7 1,7 1,8 1,7 1,6 1,6 1,6 1,5 1,3 1,3 1,2 1,0 0,5 4,2 4,5 4,5 4,4 4,4 4,0 3,5 3,2 3,2 3,1 3,1 3,0 3,0 3,0 2,8 2,5 2,5 2,0 0,6 5,2 Số nhánh (nhánh/ cây) 1,0 1,0 1,0 1,0 2,0 2,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 - Ghi chú: G0- Ngâm hom nước sạch; Các cơng thức cịn lại ngâm hom dung dịch BA 10 ppm sau ngâm dung dịch GA3 G1- 25ppm; G2- 50ppm; G3- 75ppm; G4- 100ppm; G5- 125ppm; G6- 150ppm; G7- 175ppm; G8- 200ppm; G9- 225ppm; G10- 250ppm; G11- 275ppm; G12- 300ppm; G13- 400ppm; G14- 500ppm; G15- 600ppm; G16- 700ppm; G17- 800ppm; G18- 900ppm; G19- 100ppm; G20- 1500ppm 4.2.2.3 Đánh giá sinh trưởng loại giống Bát giác liên Theo dõi đặc điểm sinh trưởng loại giống Bát giác liên cho thấy Trong từ hạt (C1) có chiều cao thấp (đạt 39,1 cm); khác biệt có ý nghĩa thống kê Cây giống từ thân rễ (C2) rễ (C3) có chiều cao tương đương (47,4 cm 44,8 cm) Khi trồng giống từ vật liệu nhân giống thân rễ (C2), sau năm trồng đạt suất cá thể lớn (23,16g/cây); giống nhân hom rễ (C3) có suất cá thể đạt 21,57g/cây Cây giống từ hạt (C1) có suất cá thể thấp (đạt 18,25g/cây) Năng suất lý thuyết Bát giác liên trồng từ loại giống khác đạt từ 10,42 tạ/ha đến 13,45 tạ/ha Năng suất thực thu Bát giác liên từ loại giống khác đạt từ 9,26 tạ/ha (C1) đến 12,48 tạ/ha (C2) Sự khác biệt suất loại giống có ý nghĩa thống kê Dược liệu Bát giác liên thu hoạch từ nhân từ hom thân rễ có hàm lượng podophyllotoxin cao (đạt 3,50%), dược liệu trồng từ nhân từ hom rễ với hàm lượng podophyllotoxin 3,32% Hàm lượng podophyllotoxin thấp (đạt 2,56%) dược liệu thu hoạch từ nhân từ hạt Bảng 4.13 Ảnh hưởng loại giống đến suất hàm lượng podophyllotoxin dược liệu Bát giác liên Loại giống C1 C2 C3 LSD0.05 CV% Năng suất cá Năng suất lý Năng suất thực thể (g/cây) thuyết (tạ/ha) thu (tạ/ha) 18,25c 23,16a 21,57b 1,45 6,2 11,32c 14,36a 13,37b 1,08 5,1 9,26c 12,48a 10,54b 1,20 5,6 Hàm lượng podophyllotoxin (%) 3,26 ± 0,01 3,50 ± 0,01 3,32 ± 0,02 Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 4.3 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ BIỆN PHÁP KỸ THUẬT TRỒNG CÂY BÁT GIÁC LIÊN 4.3.1 Ảnh hưởng thời vụ trồng đến suất dược liệu Bát giác liên Trong hai thời vụ trồng vào tháng 11 (TV2) tháng 12 (TV3) có chiều cao tương đương đối chứng, hai thời vụ trồng lại vào tháng (TV4) tháng (TV5) có chiều cao thấp đối chứng Số nhánh từ 1,22 nhánh đến 1,51 nhánh khơng có khác biệt rõ số nhánh thời vụ trồng Bảng 4.14 Ảnh hưởng hời vụ trồng đến suất dược liệu Bát giác liên Thời vụ trồng Tỷ lệ sống (%) Đường kính thân rễ (cm) Chiều dài rễ (cm) Năng suất cá thể (g/cây) Năng suất lý thuyết (tạ/ha) TV1- (ĐC) TV2 TV3 TV4 TV5 LSD0.05 CV% 87,65bc 93,54a 89,27b 85,31c 80,76d 2,7 6,2 2,61a 2,63a 2,62a 2,55a 2,47a 0,3 4,6 35,84ab 37,65a 34,32b 32,54bc 30,76c 2,6 5,1 22,23ab 23,16a 21,72b 20,15bc 19,54c 1,1 5,5 13,78ab 14,36a 13,47b 12,49b 12,11b 0,92 5,2 Năng suất thực thu (tạ/ha) 12,28ab 12,83a 11,31b 10,92b 10,64b 1,05 5,8 Ghi Thời vụ trồng 15/10 (TV1 - ĐC); Thời vụ trồng ngày 15 11 (TV2); Thời vụ trồng ngày 15/12 (TV3); Thời vụ trồng ngày 15/ (TV4); Thời vụ trồng ngày 15/ (TV5) Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 Năng suất cá thể thời vụ trồng dao động từ 19,54 g/cây đến 23,16 g/cây, hai thời vụ trồng vào tháng 11 (TV2) tháng 12 (TV3) có suất cá thể tương đương với đối chứng Hai thời vụ trồng lại có suất cá thể thấp so với đối chứng Với suất cá thể đạt trên, suất lý thuyết dược liệu Bát giác liên thời vụ trồng dao động từ 11,44 tạ/ha (TV5 – trồng vào tháng 2) đến 13,51 tạ/ha (TV2 - trồng vào tháng 11) Năng suất thực thu dược liệu Bát giác liên đạt cao thời vụ trồng tháng 11 – TV2 (đạt 12,83 tạ/ha) 4.3.2 Ảnh hưởng mật độ khoảng cách trồng đến suất dược liệu Bát giác liên Sự khác biệt chiều cao khoảng cách trồng rõ ràng, mà trồng với khoảng cách hẹp (trồng dày cây) có xu hướng vươn cao so với trồng với khoảng cách rộng Với mật độ trồng MĐ3, Bát giác lên cho suất cá thể cao Năng suất lý thuyết mật độ trồng MĐ1 cao (16,86 tạ/ha); suất thực thu mật độ trồng MĐ2 MĐ1 tương đương cao rõ ràng so với MĐ3 Trong MĐ1 có suất thực thu cao (13,80 tạ/ha) Bảng 4.15 Ảnh hưởng mật độ khoảng cách trồng đến suất dược liệu Bát giác liên Khoảng cách trồng Đường kính thân rễ (cm) Chiều dài rễ (cm) Năng suất cá thể (g/cây) Năng suất lý thuyết (tạ/ha) Năng suất thực thu (tạ/ha) MĐ1- (Đc) MĐ2 MĐ3 LSD0.05 CV% 2,44b 2,62a 2,71a 0,1 5,3 32,36b 36,54a 38,47a 2,6 5,1 20,31c 23,84b 25,52a 0,9 4,7 16,86a 14,78b 12,76c 1,6 5,6 13,80a 12,56a 10,08b 1,3 5,3 Ghi chú: MĐ1-mật độ 8,3 vạn cây/ha (tương ứng khoảng cách 40x30 cm); MĐ2-mật độ 6,2 vạn cây/ha (tương ứng khoảng cách 40x40 cm); MĐ3-mật độ 5,0 vạn cây/ha (tương ứng khoảng cách 40x50 cm) Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 4.3.3 Ảnh hưởng liều lượng phân bón đến suất chất lượng dược liệu Bát giác liên Tỷ lệ phân bón 1:2:1 (T2) có đặc điểm sinh trưởng tốt so với cơng thức bón phân với tỷ lệ 1:1:1 Bảng 4.16 Ảnh hưởng liệu lượng phân bón đến suất chất lượng dược liệu Bát giác liên Cơng thức T1 T2 Trung bình N1 N2 N3 N1 N2 (ĐC) N3 T1 T2 N1 N2 N3 LSD0.05 T LSD0.05 N LSD0.05 T*N CV% Đường Năng Chiều kính suất cá dài rễ thân rễ thể (cm) (cm) (g/cây) 2,23b 2,30b 2,38ab 2,36ab 2,41ab 2,49a 2,30 2,42 2,29 2,36 2,44 0,11 0,10 0,14 5,6 Năng Năng suất Hàm lượng suất lý thực thu podophyllotoxin thuyết (tạ/ha) (%) (tạ/ha) 25,73c 16,04b 10,65b 27,57bc 18,21b 11,38b 30,54b 19,86ab 12,41ab 29,26b 17,68b 11,05b 33,38ab 20,53a 12,83a 36,82a 21,78a 13,61a 27,95 18,03 11,48 33,15 19,99 12,49 27,49 16,86 10,85 30,48 19,37 12,11 33,68 20,82 13,01 2,51 1,55 0,71 2,96 1,40 0,85 3,62 2,25 1,12 6,1 5,8 5,4 9,48c 10,13bc 11,29b 10,17bc 12,19a 12,93a 10,3 11,76 9,83 11,16 12,11 1,05 0,98 1,36 6,2 2,67 2,87 3,02 2,82 3,23 3,43 Ghi Lượng phân bón 30 N + 30 P2O5 + 30 K2O (T1N1); Lượng phân bón 50 N + 50 P2O5 + 50 K2O (T1N2); Lượng phân bón 70 N + 70 P2O5 + 70 K2O (T1N3); Lượng phân bón 30 N + 60 P2O5 + 30 K2O (T2N1); Lượng phân bón 50 N + 100 P2O5 + 50 K2O (T2N2); Lượng phân bón 70 N + 140 P2O5 + 70 K2O (T2N3) Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 Bên cạnh đó, tăng mức bón phân từ 30kg (N1) đến 70kg (N3) đặc điểm sinh trưởng Bát giác liên có xu hướng tăng lên Các liều lượng phân bón T1N3, T2N2 T2N3 cho suất dược liệu tương đương nhau, liều lượng phân bón T2N3 cho suất cao (đạt 13,61 tạ/ha) hàm lượng podophyllotoxin cao (đạt 3,43%) 4.3.4 Ảnh hưởng chế độ che sáng đến sinh trưởng, suất chất lượng dược liệu Bát giác liên Đối với Bát giác liên loài ưa bóng, có nguồn gốc tán rừng Các chế độ che sáng khác có ảnh hưởng rõ đến đặc điểm hình thái vi phẫu Khi khơng che sáng, phiến mỏng, kích thước nhỏ, có màu vàng xanh, mép nhăn cấu trúc vi phẫu (bao gồm độ dày mô gân thịt lá) nhỏ so với che sáng Bảng 4.17 Ảnh hưởng chế độ che sáng đến suất hàm lượng podophyllotoxin dược liệu Bát giác liên Mức che sáng Năng suất cá thể (g/cây) Năng suất lý Năng suất thực Hàm lượng thuyết (tạ/ha) thu (tạ/ha) podophyllotoxin (%) S0-Đc 12,24c 7,36c 6,52c S1 19,58b 11,77b 10,91b 2,43 ± 0,01 3,14 ± 0,02 S2 23,11a 13,89a 12,16a 3,52 ± 0,01 S3 23,25a 13,97a 12,34a 3,20 ± 0,01 LSD0.05 3,25 2,03 1,77 CV% 5,7 5,2 5,9 - Ghi S0 – không che sáng; S1 – che sáng 30%; S2 – che sáng 60%; S3 – che sáng 90% Các chữ a, b, c, d thể sai khác có ý nghĩa tiêu chuẩn LSD mức ý nghĩa α=0,05 Ở hai mức che sáng 60% 90% Bát giác liên có đặc điểm sinh trưởng chiều cao cây, số kích thước tương đương Đồng thời suất cá thể, suất lý thuyết suất thực thu hai mức che sáng tương đương với Tuy nhiên, mức che sáng 60% dược liệu Bát giác liên lại có hàm lượng podophyllotoxin cao so với mức che sáng 90% PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN 1.) Qua đánh giá đặc điểm nông sinh học 20 mẫu giống Bát giác liên xác định mẫu giống thuộc lồi có tên khoa học Dysosma tonkinense (Gagnep.) M.Hiroe, với đặc điểm thân ngầm dạng chuỗi mập, đốt thân ngầm có nhiều rễ con; phiến có 4-8 thùy nơng; hoa mọc thành cụm, cuống hoa khơng có đốt, dài 3-4 cm; đài 6-8, mặt ngồi có lơng; tràng 6-8 màu đỏ tươi đến đỏ tía; hình elip hình thoi, chín màu xanh vàng; hạt có lớp áo hạt mọng nước Giữa mẫu giống Bát giác liên có đa dạng di truyền cao, với hệ số tương đồng di truyền trung bình từ 0,69 đánh giá thị phân tử ISSR đến 0,79 đánh giá thị phân tử RAPD Xác định mẫu giống Bát giác liên M11 thu thập Vị Xuyên – Hà Giang có đặc điểm sinh trưởng phát triển tốt, có suất dược liệu đạt 11,75 tạ/ha hàm lượng hoạt chất podophyllotoxin đạt 3,51%, mẫu giống phù hợp để phát triển sản xuất dược liệu Sa Pa – Lào Cai 2.) Xác định số biện pháp kỹ thuật nhân giống Bát giác liên: Thực thụ phấn chéo khác mẫu giống cắt tỉa non, giữ lại 1-2 quả/cây để thu làm giống Nhân giống hữu tính thực hiệu với hạt tươi sau thu hoạch, hạt tách bỏ lớp áo hạt, đãi sạch, để nước gieo cho tỷ lệ mọc mầm cao (84,4%) Nhân giống vơ tính hom thân ngầm thực với hom gồm đốt, cắt vị trí đầu mầm thân ngầm, thời vụ giâm hom vào tháng cho tỷ lệ hom bật mầm cao (94,47%) Đồng thời, xác định đặc điểm chồi bất định phát sinh từ rễ sau rễ cắt rời khỏi thân ngầm, nên khẳng định rễ Bát giác liên vật liệu nhân giống vơ tính có hiệu Với thời vụ giâm hom rễ vào tháng 5, hom rễ có độ dài 15 cm cắt vị trí cuối rễ (giáp thân ngầm); ngâm hom rễ dung dịch BA 10 ppm giờ, vớt để sau ngâm dung dịch GA3 175 ppm đem giâm để mang lại hiệu nhân giống tốt nhất; 3.) Xác định số biện pháp kỹ thuật trồng Bát giác liên: thời vụ trồng Bát giác liên tốt vào tháng 11, với mật độ trồng 62.000 cây/ha (tương ứng khoảng cách trồng 40 x 40 cm), lượng phân bón thích hợp cho gồm 20 phân hữu hoai mục + 70 kg N + 140 kg P2O5 + 70 kg K2O; Bát giác liên trồng điều kiện ánh sáng tán xạ với mức che giảm ánh sáng 60% cho suất dược liệu đạt 12,26 tạ/ha hàm lượng hoạt chất podophyllotoxin đạt 3,52% 5.2 Kiến nghị 1.) Chọn mẫu giống Bát giác liên M11 thu thập Vị Xuyên – Hà Giang có đặc điểm sinh trưởng, phát triển, suất chất lượng dược liệu tốt để phát triển sản xuất dược liệu Sa Pa, Lào Cai Sử dụng phương thức nhân giống hạt, giâm hom thân ngầm giâm hom rễ để nhân giống Bát giác liên Trong ưu tiên sử dụng phương thức nhân hữu tính hạt để tạo nguồn giống khởi đầu cho công tác chọn tạo giống, hạt Bát giác liên tạo cách thụ phấn chéo khác mẫu giống Ưu tiên sử dụng phương thức nhân giống vơ tính biện pháp giâm hom thân ngầm giâm hom rễ để tạo nguồn giống phục vụ sản xuất Trồng Bát giác liên vào thời vụ tháng 11 với mật độ trồng 6,2 vạn cây/ha; sử dụng 20 phân hữu hoai mục 70 kg N + 140 kg P2O5 + 70 kg K2O để bón cho trồng điều kiện giàn che lưới đen với mức giảm ánh sáng 60%; 2.) Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện quy trình kỹ thuật nhân giống trồng Bát giác liên vùng có điều kiện sinh thái phù hợp để phát triển trồng trọt tạo nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc từ Bát giác liên nước ta DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ Ngoc Khanh Pham, Thanh Huyen Pham, Quynh Nga Nguyen, Aaron Floden, Thi Phip Ninh, Thi Viet Thanh Tran and Ke Long Phan (2020) Characterisation of Dysosma tonkinense (Gagnep.) M Hiroe based on morphological characteristics and ITS sequence Nordic Journal of Botany, Vol.38, Issue 1: 1-8 Phạm Ngọc Khánh, Pham Thanh Huyền, Ninh Thị Phíp, Nghiêm Tiến Chung (2020) Nghiên cứu cấu tạo giải phẫu rễ xác định vị trí, độ dài hom rễ phục vụ nhân giống vơ tính Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M Hiroe) Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, số 14 (2020): 124-129 Phạm Ngọc Khánh, Ninh Thị Phíp, Phạm Thanh Huyền (2021) Đặc điểm hình thái, giải phẫu khả nhân giống Bát giác liên (Dysosma tonkinense (Gagnep.) M Hiroe) Tạp chí Khoa học nơng nghiệp Việt Nam 2021, số (2021): 173 – 184 Khanh Ngoc Pham, Phip Thi Ninh, Huyen Thanh Pham, Nga Quynh Nguyen, Nga Hang Do and Son Truong Dinh (2021) High Genetic Diversity of Dysosma tonkinense Revealed by ISSR and RAPD Markers Asian Journal of Plant Sciences, Vol.20 Issue 4: 637647 ... tạo nguồn nguyên liệu sản xuất thuốc từ Bát giác liên nước ta DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ Ngoc Khanh Pham, Thanh Huyen Pham, Quynh Nga Nguyen, Aaron Floden, Thi Phip Ninh, Thi Viet Thanh... tonkinense (Gagnep.) M Hiroe) Tạp chí Khoa học nơng nghiệp Việt Nam 2021, số (2021): 173 – 184 Khanh Ngoc Pham, Phip Thi Ninh, Huyen Thanh Pham, Nga Quynh Nguyen, Nga Hang Do and Son Truong Dinh (2021)