Nghiên cứu bổ sung axít béo và các chế phẩm làm giàu thức ăn sống trong ương ấu trùng cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790)

Nghiên cứu bổ sung axít béo và các chế phẩm làm giàu thức ăn sống trong ương ấu trùng cá chẽm (Lates calcarifer Bloch, 1790)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG LỤC MINH DIỆP NGHIÊN CỨU BỔ SUNG AXÍT BÉO VÀ CÁC CHẾ PHẨM LÀM GIÀU THỨC ĂN SỐNG TRONG ƯƠNG ẤU TRÙNG CÁ CHẼM - Lates calcarifer (Bloch, 1790) Chuyên ngành: Nuôi thủy sản nước mặn, lợ Mã số: 62 62 70 05 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS Elin Kj∅rsvik PGS-TS Nguyễn Đình Mão Nha Trang – Năm 2010 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các kết thu luận án thành nghiên cứu Chương trình Nghiên cứu Đào tạo Sau Đại học Nuôi trồng Hải sản Việt Nam, chương trình liên kết Trường Đại học Nha Trang Trường Đại học Khoa học Công nghệ Na Uy, với tài trợ Hội đồng Đào tạo Đại học Na Uy (NUFU) Tôi thành viên tham gia thực dự án với tư cách nghiên cứu sinh, nằm kế hoạch hoạt động đào tạo dự án Tơi đồng ý Ơng Chủ nhiệm Dự án cho phép sử dụng tất số liệu nghiên cứu cho luận án tiến sĩ Tơi xin cam đoan kết quả, số liệu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình NGHIÊN CỨU SINH LỤC MINH DIỆP ii LỜI CÁM ƠN Tơi xin trân trọng kính gửi đến Ban Giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, Ban Chủ nhiệm Khoa Ni trồng Thủy sản, Phịng Đào tạo Đại học Sau Đại học Trường Đại học Nha Trang kính trọng lòng tự hào nghiên cứu sinh học tập, nghiên cứu Trường Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn đến hai Cơ, Thầy hướng dẫn: Giáo sư Elin Kj∅rsvik Phó Giáo sư - Tiến sĩ Nguyễn Đình Mão tư vấn, động viên, dìu dắt tơi suốt thời gian nghiên cứu hồn thành luận án Xin kính gửi đến Thầy Chủ nhiệm Chương trình “Nghiên cứu Đào tạo Sau Đại học Nuôi trồng Hải sản Việt Nam”, Giáo sư Helge Reinertsen, đến Thầy Ban Điều hành Dự án: Phó Giáo sư - Tiến sĩ Nguyễn Đình Mão, Phó Giáo sư Tiến sĩ Lại Văn Hùng, Tiến sĩ Nguyễn Hữu Dũng, lòng biết ơn sâu sắc giúp đỡ tận tình, tạo điều kiện thuận lợi để học tập nghiên cứu Cho phép kính gửi lịng biết ơn chân thành đến Giáo sư Maria Teresa Dinis, Tiến sĩ Luis Conceicao cán Trung tâm Nghiên cứu Khoa học Biển, Đại học Algave, Bồ Đào Nha, tư vấn, giúp đỡ tơi suốt q trình nghiên cứu Đại học Nha Trang học tập phương pháp nghiên cứu Bồ Đào Nha Tôi chân thành cám ơn cán Viện Sinh học Bratt∅ra, khoa Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Đại học Khoa học Công nghệ NaUy (NTNU), giúp đỡ thời gian học tập phương pháp nghiên cứu Na Uy Tôi xin chân thành cám ơn giúp đỡ Giám đốc Viện Công nghệ Sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang cán Viện tạo điều kiện thuận lợi để làm việc Viện Xin chân thành cám ơn động viên, khích lệ giúp đỡ Thầy, Cô Khoa Nuôi trồng Thủy sản, Đại học Nha Trang; cám ơn hỗ trợ tích cực nghiên cứu thầy cô giáo trẻ Xin cám ơn em sinh viên khóa 41NT đến 45NT, lớp Tại chức NTTS 2001 đến 2005 nhiệt tình hỗ trợ công tác nghiên cứu Cuối lời cám ơn đến gia đình động viên, giúp đỡ suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận án iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cám ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng ix Danh mục hình xii Danh mục từ viết tắt xiv MỞ ĐẦU Chương TỔNG LUẬN 1.1 HIỆN TRẠNG NGHỀ SẢN XUẤT GIỐNG CÁ BIỂN NHÂN TẠO 1.1.1 Hiện trạng nghề sản xuất giống cá biển giới 1.1.2 Hiện trạng nghiên cứu sản xuất giống cá biển Việt Nam 1.2 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CHỦ YẾU CỦA CÁ CHẼM 1.3 NHỮNG THÀNH TỰU NGHIÊN CỨU VỀ DINH DƯỠNG Ở GIAI ĐOẠN ẤU TRÙNG CỦA CÁ BIỂN VÀ ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT GIỐNG 1.3.1 Sự hình thành quan tiêu hóa, chế tiêu hóa, hấp thụ dinh dưỡng ấu trùng cá biển 1.3.1.1 Quá trình phát triển đường tiêu hóa 10 1.3.1.2 Sự biến đổi pH đường ruột hoạt động enzyme tiêu hóa 12 ấu trùng cá biển 1.3.1.3 Cơ chế tiêu hóa, hấp thụ dinh dưỡng 1.3.2 Nhu cầu lipid ấu trùng cá biển 14 15 1.3.2.1 Axít béo vai trò chúng ấu trùng cá biển 15 1.3.2.2 Khả chuyển hóa axít béo cá biển 21 1.3.2.3 Nhu cầu phospholipid HUFA ấu trùng cá biển cần 24 thiết bổ sung vào thức ăn iv 1.3.3 Nhu cầu protein ấu trùng cá biển 28 1.3.3.1 Axít amin vai trị chúng trứng ấu trùng cá biển 29 1.3.3.2 Khả cung cấp axít amin từ loại thức ăn cho ấu trùng 30 cá biển 1.3.4 Nhu cầu vitamin ấu trùng cá biển 1.4 KỸ THUẬT LÀM GIÀU VÀ CHUYỂN ĐỔI THỨC ĂN 1.4.1 Kỹ thuật làm giàu 31 33 33 1.4.1.1 Sự cần thiết việc làm giàu 33 1.4.1.2 Các phương pháp làm giàu 34 1.4.2 Chuyển đổi thức ăn 36 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 38 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 38 2.3 SƠ ĐỒ KHỐI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 38 2.4 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH CÁC NGHIÊN CỨU 39 2.4.1 Các giai đoạn phát triển ấu trùng cá chẽm biến đổi hàm 39 lượng axít béo 2.4.1.1 Xác định giai đoạn phát triển 39 2.4.1.2 Xác định biến đổi hàm lượng axit béo trứng ấu trùng cá 39 chẽm 2.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ HUFA (DHA:EPA:ARA) 40 thức ăn làm giàu đến sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm (Thí nghiệm 1) 2.4.2.1 Điều kiện thí nghiệm 40 2.4.2.2 Bố trí thí nghiệm 40 2.4.2.3 Thức ăn, chế độ cho ăn quản lý mơi trường bể thí nghiệm 41 2.4.2.4 Thu mẫu, xác định thông số đánh giá sinh trưởng tỉ lệ 43 sống v 2.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng loại thức ăn làm giàu đến sinh 45 trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm (Thí nghiệm 2) 2.4.3.1 Điều kiện thí nghiệm 45 2.4.3.2 Bố trí thí nghiệm 45 2.4.3.3 Thức ăn, chế độ cho ăn quản lý mơi trường bể thí nghiệm 46 2.4.3.4 Thu mẫu, xác định thông số đánh giá sinh trưởng tỉ lệ 47 sống 2.4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng sản phẩm làm giàu Selco đến sinh 48 trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm (Thí nghiệm 3) 2.4.4.1 Điều kiện thí nghiệm 48 2.4.4.2 Bố trí thí nghiệm 48 2.4.4.3 Thức ăn, chế độ cho ăn quản lý môi trường bể thí nghiệm 49 2.4.4.4 Thu mẫu, xác định thông số đánh giá sinh trưởng tỉ lệ 49 sống 2.4.5 Thực nghiệm qui trình, góp phần hồn thiện qui trình ương ấu trùng 50 cá chẽm 2.4.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ ấu trùng, lượng thức ăn đến 50 sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm (Thí nghiệm 4) 2.4.5.2 Thực nghiệm qui trình ương ấu trùng cá chẽm 2.5 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH CÁC THÔNG SỐ 51 51 2.5.1 Xác định yếu tố môi trường 51 2.5.2 Xác định sinh trưởng tỉ lệ sống 51 2.5.3 Phân tích hàm lượng lipid axit béo 53 2.6 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 53 vi Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CƯU VÀ THẢO LUẬN 54 3.1 CÁC GIAI ĐOẠN PHÁT TRIỂN CỦA ẤU TRÙNG CÁ CHẼM VÀ 54 SỰ BIẾN ĐỔI HÀM LƯỢNG AXÍT BÉO 3.1.1 Các giai đoạn phát triển hình thành dày ấu trùng cá chẽm 54 3.1.2 Sự tiêu biến nỗn hồng, giọt dầu, biến đổi kích thước miệng 58 thời điểm cho ăn loại thức ăn phù hợp 3.1.3 Sự biến đổi hàm lượng lipid axít béo trình phát triển 61 ấu trùng 3.1.3.1 Hàm lượng lipid tổng số 62 3.1.3.2 Hàm lượng axít béo tổng số nhóm axít béo 63 3.1.3.3 Hàm lượng axít béo chủ yếu trứng ấu trùng cá 67 chẽm 72 3.1.3.4 Tỉ lệ axít béo 3.2 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TỈ LỆ CÁC HUFA 75 (DHA:EPA:ARA) TRONG THỨC ĂN LÀM GIÀU ĐẾN SINH TRƯỞNG VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA ẤU TRÙNG CÁ CHẼM 3.2.1 Các yếu tố mơi trường thí nghiệm nghiên cứu tỉ lệ HUFA 75 (DHA:EPA:ARA) thức ăn làm giàu 3.2.2 Sự sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm 75 thức làm giàu với tỉ lệ DHA:EPA:ARA khác 3.2.2.1 Tỉ lệ sống 75 3.2.2.2 Sinh trưởng 77 3.2.3 Hàm lượng lipid axít béo thức ăn sống ấu trùng cá 80 chẽm nghiệm thức làm giàu với tỉ lệ DHA:EPA:ARA khác 3.2.3.1 Lipid axít béo thức ăn sống 80 3.2.3.2 Lipid axít béo ấu trùng cá chẽm 14 ngày tuổi 27 85 ngày tuổi vii 3.2.4 Quan hệ HUFA với sinh trưởng, tỉ lệ sống ấu trùng cá 92 chẽm 3.2.4.1 Quan hệ HUFA với sức sống ấu trùng cá chẽm 91 3.2.4.2 Quan hệ HUFA với sinh trưởng ấu trùng cá chẽm 94 3.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC LOẠI THỨC ĂN LÀM 98 GIÀU ĐẾN SINH TRƯỞNG VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA ẤU TRÙNG CÁ CHẼM 3.3.1 Các yếu tố mơi trường thí nghiệm nghiên cứu loại thức ăn làm 98 giàu 3.3.2 Tỉ lệ sống sinh trưởng ấu trùng cá chẽm nghiệm thức 98 thức ăn làm giàu khác 3.3.3 Hàm lượng lipid axít béo ấu trùng 15 ngày tuổi thức 103 ăn sống sau làm giàu 3.4 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC SẢN PHẨM LÀM GIÀU 112 SELCO ĐẾN SINH TRƯỞNG VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA ẤU TRÙNG CÁ CHẼM 3.4.1 Các yếu tố môi trường thí nghiệm làm giàu sản phẩm 112 Selco 3.4.2 Ảnh hưởng thức ăn làm giàu Selco đến sinh trưởng tỉ lệ sống 112 ấu trùng cá chẽm 3.5 THỰC NGHIỆM QUI TRÌNH, GĨP PHẦN HỒN THIỆN QUI 116 TRÌNH ƯƠNG ẤU TRÙNG CÁ CHẼM 3.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng mật độ ấu trùng lượng thức ăn đến sinh 116 trưởng, tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm 3.5.2 Thực nghiệm qui trình ương ấu trùng cá chẽm 120 3.5.2.1 Tóm tắt qui trình ương 120 3.5.2.2 Kết ương ấu trùng cá chẽm 124 3.5.3 Các điểm cải tiến qui trình ương ấu trùng cá chẽm 128 viii KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 130 KẾT LUẬN 130 KIẾN NGHỊ 131 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Kết phân tích phương sai yếu tố (Two way ANOVA ) (Ảnh hưởng mật độ ương lượng thức ăn đến sinh trưởng, tỉ lệ sống ) Tests of Between-Subjects Effects Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: SL9 Dependent Variable: WW9 Source Corrected Model Type III Sum of Squares 179(a) Intercept 160.632 denlavae 012 Mean Square 030 df 160.632 006 F 1.811 9732.464 370 Mean Square 005 000 Intercept 1.913 1.913 697 denlavae 004 002 4.024 042 018 009 16.004 000 7.558 006 Sig .169 Source Corrected Model Type III Sum of Squares 027(a) df denrot 087 043 2.624 108 denrot denlavae * denrot 074 037 2.236 144 denlavae * denrot 008 008 14 2.034 3434.428 000 001 Total Sig .001 004 Error F 8.094 21 Error 231 14 Total 167.298 21 017 Corrected Total Corrected Total 410 20 a R Squared = 437 (Adjusted R Squared = 196) 035 20 a R Squared = 776 (Adjusted R Squared = 680) Tests of Between-Subjects Effects Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: SL16 Source Corrected Model Intercept Dependent Variable: WW16 Type III Sum of Squares 4.257(a) 438.188 Mean Square 709 F 24.530 Sig .000 Source Corrected Model 438.188 15149.720 000 Intercept 74.542 df Type III Sum of Squares 3.334(a) Mean Square 556 F 77.126 Sig .000 74.542 10346.213 000 2.366 1.183 164.231 000 2.518 1.259 174.767 000 5.247 020 df denlavae 2.984 1.492 51.584 000 denlavae denrot 3.348 1.674 57.871 000 denrot 871 denlavae * denrot 076 038 Error 101 14 007 Total 81.003 21 denlavae * denrot 008 004 Error 405 14 029 Total 460.410 21 Corrected Total 4.662 20 a R Squared = 913 (Adjusted R Squared = 876) 139 Corrected Total 3.435 20 a R Squared = 971 (Adjusted R Squared = 958) - 27 - Tests of Between-Subjects Effects Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: DW16 Dependent Variable: SGRSL16 Source Corrected Model Intercept denlavae denrot denlavae * denrot Type III Sum of Squares 112(a) Mean Square 019 df 2.392 070 2.392 070 035 018 035 003 2.632 009 14 Total 10687.264 157.284 155.633 Type III Sum of Squares 32.635(a) Mean Square 5.439 F 6.916 Sig .001 1020.815 1297.992 000 25.308 12.654 16.090 000 20.595 10.297 13.093 001 1.113 356 Sig .000 Source Corrected Model 000 Intercept 1020.815 000 denlavae 000 denrot 000 denlavae * denrot df 41.186 21 000 1.750 875 Error 11.010 14 786 Total Error F 83.674 1108.086 21 Corrected Total Corrected Total 115 20 a R Squared = 973 (Adjusted R Squared = 961) 43.646 20 a R Squared = 748 (Adjusted R Squared = 640) Tests of Between-Subjects Effects Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: SGRWW16 Dependent Variable: Survival16 Source Corrected Model Intercept Type III Sum of Squares 98.225(a) 13625.200 Mean Square 16.371 F 10.315 Sig .000 Source Corrected Model 13625.200 8585.301 000 Intercept 87569.934 df denlavae 70.672 35.336 22.265 000 denlavae denrot 28.999 14.499 9.136 003 denrot 005 denlavae * denrot denlavae * denrot 25.520 12.760 Error 22.219 14 1.587 Total 14262.415 21 Corrected Total 120.443 20 a R Squared = 816 (Adjusted R Squared = 736) 8.040 Type III Sum of Squares 808.794(a) df Mean Square 134.799 F 6.418 Sig .002 87569.934 4169.507 000 519.806 259.903 12.375 001 531.298 265.649 12.648 001 1.899 186 79.759 39.879 Error 294.035 14 21.002 Total 93571.507 21 Corrected Total 1102.828 20 a R Squared = 733 (Adjusted R Squared = 619) - 28 - PHỤ LỤC KẾT QUẢ XÉT TƯƠNG QUAN Ký hiệu Hàm Phương trình LIN Linear (đường thẳng) Y = b0 + b1X LOG Logarithmic (logarit) Y = b0 + b1ln(X) INV Inverse (ngược) Y = b + b1 / X QUA Quadratic (bậc 2) Y = b0 + b1X + b2X2 POW Power (luỹ thừa) Y = b0Xb1 ln(Y) = ln(b0) + b1ln(X) EXP Exponential (mũ) Y = b0eb1X ln(Y) = ln(b0) + b1X Nội dung Ảnh hưởng tỉ lệ HUFA (DHA:EPA:ARA) thức ăn làm giàu đến sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm Independent (X): Nồng độ DHA làm giàu luân trùng (mg/l) Dependent (Y): Hàm lượng DHA luân trùng sau làm giàu (mg/g khô) Mth Rsq LIN LOG QUA POW EXP 0,650 0,629 0,704 0,665 0,687 d.f 13 13 12 13 13 F 24,18 22,06 14,25 25,77 28,60 Sigf b0 b1 0,000 0,000 0,001 0,000 0,000 -1,5444 -8,3573 9,8340 0,0348 0,4958 0,2520 3,9298 -1,1995 1,5323 0,0983 b2 0,0452 Independent (X): Nồng độ ARA làm giàu luân trùng (mg/l) Dependent (Y): Hàm lượng ARA luân trùng sau làm giàu (mg/g khô) Mth Rsq d.f F Sigf b0 b1 b2 LIN LOG QUA POW EXP 0,808 0,787 0,830 0,860 0,860 13 13 12 13 13 54,73 48,07 29,25 79,80 79,67 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,5603 0,6275 0,3095 0,7037 0,6761 0,2012 0,7007 0,3711 0,5222 0,1480 -0,0179 - 29 - Independent (X): Nồng độ ARA làm giàu Artemia (mg/l) Dependent (Y): Hàm lượng ARA Artemia sau làm giàu (mg/g khô) Mth Rsq LIN QUA EXP 0,936 0,937 0,938 d.f 16 15 16 F Sigf b0 234,51 110,73 241,10 0,000 0,000 0,000 0,8390 0,8025 1,0218 b1 0,2194 0,2400 0,0933 b2 -0,0012 Independent (X): Hàm lượng ARA luân trùng (mg/g khô) Dependent (Y): Hàm lượng ARA ấu trùng cá 14 ngày tuổi (mg/g khô) Mth Rsq LIN QUA EXP 0,916 0,934 0,884 d.f 19 18 19 F Sigf b0 b1 b2 207,50 126,59 145,16 0,000 0,000 0,000 0,7726 0,7090 0,7845 0,5666 0,8604 0,4463 -0,1284 Independent (X): Hàm lượng ARA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Hàm lượng ARA ấu trùng cá 14 ngày tuổi (mg/g khô) Mth Rsq LIN LOG QUA EXP 0,882 0,882 0,916 0,822 d.f 19 19 18 19 F Sigf b0 b1 141,34 141,50 97,83 87,50 0,000 0,000 0,000 0,000 0,6704 1,1127 0,4007 0,7312 0,3144 0,5605 0,6720 0,2433 b2 -0,0709 Independent (X): Hàm lượng DHA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Hàm lượng DHA ấu trùng cá 14 ngày tuổi (mg/g khô) Mth Rsq d.f F LIN QUA EXP 0,709 0,760 0,748 5 12,20 6,32 14,87 Sigf 0,017 0,058 0,012 b0 b1 0,8311 0,6470 0,8106 0,4064 0,6693 0,3022 b2 -0,0616 Independent (X): Hàm lượng n-3HUFA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Hàm lượng n-3HUFA ấu trùng cá 14 ngày tuổi (mg/g khô) Mth Rsq d.f F LIN LOG QUA EXP 0,558 0,542 0,562 0,641 5 6,32 5,93 2,56 8,93 Sigf 0,054 0,059 0,192 0,030 b0 b1 1,4738 1,7150 1,3765 1,5561 0,2558 0,7786 0,3178 0,1040 b2 -0,0068 - 30 - Independent (X): Hàm lượng ARA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Hàm lượng ARA ấu trùng cá 27 ngày tuổi (mg/g khô) Mth Rsq d.f LIN LOG QUA EXP 0,885 0,775 0,886 0,824 19 19 18 19 F 145,85 65,59 69,91 89,00 Sigf b0 b1 0,000 0,000 0,000 0,000 0,3001 0,5587 0,3282 0,3516 0,1760 0,2937 0,1387 0,2597 b2 0,0074 Independent (X): Hàm lượng DHA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN QUA 0,498 0,936 d.f 19 18 F Sigf b0 b1 b2 18,87 131,78 0,000 0,000 6,4883 8,7495 -1,4192 -4,6479 0,7573 Independent (X): Hàm lượng EPA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN LOG INV QUA POW EXP 0,734 0,845 0,891 0,933 0,562 0,463 d.f 19 19 19 18 19 19 F Sigf b0 b1 52,35 103,50 155,59 126,21 24,36 16,38 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001 9,4805 7,6840 0,2078 13,7768 6,6937 9,5901 -1,9397 -4,2215 7,0444 -6,8211 -0,9310 -0,4167 b2 0,9785 Independent (X): Hàm lượng ARA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN LOG INV QUA POW EXP 0,326 0,623 0,880 0,742 0,510 0,294 d.f 19 19 19 18 19 19 F Sigf b0 b1 9,17 31,39 138,95 25,91 19,81 7,91 0,007 0,000 0,000 0,000 0,000 0,011 5,1425 4,2375 0,8995 9,4491 3,2208 4,1226 -0,8750 -2,1576 2,4058 -6,5865 -0,5282 -0,2248 b2 1,1317 Independent (X): Hàm lượng n-3HUFA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN LOG INV QUA POW 0,620 0,832 0,897 0,937 0,556 d.f 19 19 19 18 19 F Sigf b0 b1 31,05 94,26 165,90 133,17 23,75 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 7,9299 7,8402 1,1273 10,9319 6,9425 -0,8505 -3,0420 6,3034 -2,7622 -0,6722 b2 0,2096 - 31 - Independent (X): Hàm lượng DHA ấu trùng cá 27 ngày tuổi (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN LOG INV QUA POW EXP 0,691 0,766 0,802 0,830 0,616 0,575 d.f 19 19 19 18 19 19 F Sigf b0 b1 42,50 62,03 76,79 44,06 30,53 25,69 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 12,0518 12,6770 -3,9216 23,9924 24,9101 22,1827 b2 -2,6494 -8,0772 22,0835 -10,941 -1,9602 -0,6535 1,3382 Independent (X): Hàm lượng n-3HUFA ấu trùng 27 ngày tuổi (mg/g khô) Dependent (Y): Tỉ lệ chết sốc học ấu trùng cá 27 ngày tuổi (%) Mth Rsq LIN LOG INV QUA POW EXP 0,639 0,713 0,755 0,795 0,583 0,538 d.f 19 19 19 18 19 19 F Sigf b0 b1 33,70 47,12 58,62 34,82 26,54 22,11 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 12,3899 16,3371 -4,8734 27,8961 62,0920 24,4242 b2 -1,9986 -8,7623 35,0316 -9,4730 -2,1431 -0,4958 0,8522 Independent (X): Hàm lượng ARA luân trùng (mg/g khô) Dependent (Y): Khối lượng tươi ấu trùng cá chẽm 14 ngày tuổi (mg) Mth Rsq QUA 0,503 d.f 18 F Sigf b0 b1 b2 9,12 0,002 1,5909 0,9430 -0,3736 Independent (X): Hàm lượng ARA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Khối lượng tươi ấu trùng cá chẽm 27 ngày tuổi (mg) Mth Rsq QUA 0,590 d.f 18 F Sigf b0 b1 b2 12,95 0,000 55,4537 13,5946 -3,0676 Independent (X): Hàm lượng ARA nauplius Artemia (mg/g khô) Dependent (Y): Khối lượng khô ấu trùng cá chẽm 27 ngày tuổi (mg) Mth Rsq QUA 0,555 d.f 18 F Sigf b0 b1 b2 11,21 0,001 12,3130 3,5056 -0,7574 - 32 - Nội dung Nghiên cứu ảnh hưởng loại thức ăn làm giàu đến sinh trưởng tỉ lệ sống ấu trùng cá chẽm Independent (X): Hàm lượng lipid ấu trùng cá 15 ngày tuổi (mg/g khô) Dependent (Y): Khối lượng khô ấu trùng cá chẽm 15 ngày tuổi (mg) Mth Rsq d.f F Sigf b0 LIN LOG INV QUA POW EXP 0,704 0,763 0,804 0,899 0,782 0,721 6 6 14,25 19,33 24,61 22,33 21,51 15,49 0,009 0,005 0,003 0,003 0,004 0,008 0,6331 -2,1626 2,0849 -1,3067 0,0874 0,7670 b1 0,0057 0,7302 -88,574 0,0377 0,5672 0,0045 b2 -0,0001 Independent (X): n-3PUFA ấu trùng cá 15 ngày tuổi (mg/g khô) Dependent (Y): Khối lượng khô ấu trùng cá chẽm 15 ngày tuổi (mg) Mth Rsq d.f F Sigf b0 b1 LIN LOG INV QUA POW EXP 0,632 0,677 0,720 0,790 0,666 0,618 6 6 10,31 12,60 15,45 9,39 11,99 9,71 0,018 0,012 0,008 0,020 0,013 0,021 0,6602 0,4707 2,1768 -1,9437 0,6859 0,7936 0,2139 0,7573 -2,6140 1,7500 0,5764 0,1623 b2 -0,2206 - 33 - PHỤ LỤC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH LIPID VÀ AXÍT BÉO Chiết tách lipid este hóa tạo thành methyl este axít béo (FAMEs) Chuẩn bị mẫu: Đông khô mẫu máy đông khô Flexi-DryTM MP, Model MNL030-A (FTS Systems, New York, Mỹ) 48 Nghiền mẫu mẫu ấu trùng cá Cân mẫu: khoảng 20 mg Tách chiết lipid: Tách chiết lipid theo phương pháp Bligh and Dyer (1959) Q trình tách chiết lipid mơ tả tóm tắt hình 1.pl6 Mẫu đơng khơ - 800μl nước cất - 2ml methanol - 1ml chloroform (có C17:0) Đồng thể hóa phút - 1ml chloroform Đồng thể hóa 20 giây - 1ml nước cất Đồng thể hóa 20 giây Ly tâm 4000 vịng/phút, phút, 5oC Hình 1.pl6 Sơ đồ trình tách chiết lipid Sau ly tâm, tồn lipid tan ml dung mơi chloroform nằm lớp Dùng micropipet hút 0,5 ml chloroform chứa lipid cho vào tuýp thủy tinh (đã cân khối lượng) để xác định hàm lượng lipid tổng số (Phần lại, lấy 0,8 ml cho vào ống nghiệm có nút đậy teflon để chuẩn bị cho bước este hóa lipid) Để bay tự nhiên hết chloroform nhiệt độ phòng cabin hút độc (>10 giờ) Cân lại khối lượng tuýp thủy tinh chứa lipid Hàm lượng lipid tổng số xác định: Hàm lượng lipid tổng số (mg/g khơ) = (m2 − m1 ) × ×1000 ms Trong đó: m2: khối lượng thủy tinh có lipid (mg) m1: khối lượng tuýp thủy tinh ban đầu (mg) ms: khối lượng mẫu đưa vào phân tích (mg) tỉ lệ thể tích (2ml/0,5 ml) 1000: đổi đơn vị khối lượng mẫu từ mg g - 34 - Thủy phân este hóa lipid Với 0,8 ml chloroform chứa lipid ống nghiệm có nút đậy teflon, q trình este hóa lipid thực tóm tắt hình 2.pl6 Lipid chiết từ mẫu (0,8 ml chloroform có lipid) thổi khơ chloroform ni tơ ml NaOH 0,5N methanol đậy nắp - lắc (vortex mix) Đun nóng (100oC, 15 phút) Làm lạnh nước đá (2-3 phút) ml BF3 12% methanol đậy nắp - lắc (vortex mix) Đun nóng (100oC, phút) Làm lạnh nước đá (2-3 phút) ml Isooctane đậy nắp - lắc (vortex mix) Đun nóng (100oC, phút) Làm lạnh nước đá ml NaCl 5M đậy nắp - lắc (vortex mix) Ly tâm, 4000 vòng/phút, phút (1) Tách Isooctane chứa FAMEs mcropipet đến mức (lớp trên) (2) (Lặp lần) 0,5 ml Isooctane đậy nắp - lắc (vortex mix) Ly tâm 4000 vịng/phút, phút Hình 2.pl6 Sơ đồ q trình thủy phân este hóa lipid - 35 - Phân tích axít béo máy sắc ký khí (GC) Máy GC: Phân tích thực hệ thống máy sắc ký khí loại Hewlett-Packard 6890 (GMI Inc., Minnesota, Mỹ), Agilent (Mỹ) phân phối với thơng số kỹ thuật sau: - Cột sắc ký: HP-FFAP, dài 30m, đường kính 320 µm, độ dày film 0,25 µm - Khí mang: Nitơ - Đầu dị: đầu dị ion hóa lửa (FID) Nhiệt độ đầu dị: 240oC; tốc độ dịng khí hyđrơ 40 lít/phút; tốc độ dịng khơng khí: 400 lít/phút - Tiêm mẫu tay; tỷ lệ chia dòng 1:10; thể tích mẫu tiêm µl Chế độ nhiệt: Được thiết lập trước lập đường chuẩn định lượng axít béo Chọn chế độ nhiệt tách axít béo tốt nhất, đỉnh không chồng lấn lên Đã chạy thử chọn chế độ nhiệt với điều kiện máy GC Viện Công nghệ Sinh học Môi trường, Đại học Nha Trang (bảng 1.pl6) Bảng 1.pl6 Chế độ nhiệt thiết lập Bậc Tốc độ tăng nhiệt (oC/phút) Ban đầu Nhiệt độ đạt đến (oC) 90 Thời gian chạy tích lũy (phút) Thời gian lưu (phút) Bậc 30,0 150 Bậc 3,0 225 2,0 30 Bậc - - - - Thiết lập đường chuẩn (Calibration curves) Sử dụng chất chuẩn 68D (Nu-Check Prep, Minnesota, Mỹ) phương pháp pha loãng theo hệ thống với tỉ lệ pha loãng 50% để tạo nên mẫu có nồng độ axít béo biết Axít béo nội chuẩn C17:0 tính tốn đưa vào mẫu để có nồng độ 80 ng/μl mẫu Chạy GC, phân tích mẫu với chế độ nhiệt thiết lập (tiêm μl) Với nồng độ biết axít béo, có diện tích đỉnh (peak) tương ứng Từ đó, thiết lập phương trình đường thẳng: y=ax, với y: diện tích đỉnh - 36 - (Area), x: lượng axít béo (ng) μl tiêm vào (Amount; ng/μl), xác định hệ số a cho loại axít béo Tương tự, xác định hệ số a cho nội chuẩn C17:0 Hệ số a axít béo sử dụng để tính tốn định lượng cho axít béo phân tích mẫu Ví dụ: Đường chuẩn C14:0 thiết lập với chế độ nhiệt bảng 1.pl6 Bảng 2.pl6 Nồng độ C14:0 mẫu chuẩn bị từ 68D, pha loãng theo hệ thống với tỉ lệ 50% - Diện tích đỉnh tương ứng sau chạy GC Hàm lượng 1μl mẫu tiêm (ng) Amount C14:0 Kết chạy GC Area 3,75000 7,50000 15,00000 30,00000 17,73853 46,24125 91,43303 201,80052 C14:0 250,00000 200,00000 y = 6,558x R = 0,9934 Area 150,00000 100,00000 50,00000 0,00000 0,00000 10,00000 20,00000 30,00000 40,00000 Amount Hình 3.pl6 Thiết lập đường chuẩn C14:0 Phương trình đường thẳng C14:0 là: Area = 6,55798375*Amount (ng/μl ) (Amount lượng có μl mẫu tiêm vào GC, nên nồng độ ng/μl có Isooctane chuẩn bị) - 37 - Định tính định lượng axít béo phân tích mẫu Kết định tính định lượng axít béo phân tích phần mềm GC ChemStation A.08.03 (Agilent© Technologies Inc., Santa Clara, Mỹ) Khi chuẩn bị đợt mẫu phân tích, chuẩn bị kèm theo mẫu chuẩn từ 68D Đồng thời mẫu chuẩn bị cho vào nội chuẩn C17:0 với nồng độ tính tốn 80 ng/μl Trong lần chạy máy GC, chạy mẫu chuẩn để xác định vị trí axít béo biết Định tính axít béo mẫu phân tích cách so sánh với thời gian lưu axít béo biết tên mẫu chuẩn, kết hợp với vị trí nội chuẩn C17:0 cho vào mẫu Định lượng axít béo mẫu phân tích dựa vào đường chuẩn thiết lập Sau có kết phân tích từ GC, tính hàm lượng axít béo có mẫu: - Giả sử: Khối lượng mẫu phân tích ms (mg) Với loại axít béo C, kết phân tích từ GC K (ng/μl) - Từ sơ đồ hình 1.pl6 hình 2.pl6, thấy: Tồn lipid có ms (mg) mẫu hịa vào ml chloroform, sau lấy 0,8 ml, thổi khơ ni tơ, hịa vào 2,5 ml Isooctane (1ml + × 0,5ml) ⇒ Có thể tính lượng axít béo C có tồn mẫu phân tích là: 6,25 × K (μg) Vì vậy, hàm lượng axít béo C mẫu cần xác định: 6,25 × K (μg/mg khơ) ms - 38 - PHỤ LỤC 7: THÀNH PHẦN MỘT SỐ SẢN PHẨM THƯƠNG MẠI Bảng 1.pl7 Thành phần sản phẩm làm giàu Selco Thành phần Độ ẩm Protein Lipid Khoáng Xơ Calcium Phosphorus Vitamin A Vitamin D3 Vitamin E Vitamin C n-3HUFA DHA/EPA Đơn vị % % % % % % % IU/kg IU/kg mg/kg mg/kg mg/gDW EASY DHA SELCO 30 67 1 PROTEIN SELCO PLUS 21 45 4,5 0,2 1500000 150000 3600 800 min-200 2,5 0,5 750000 75000 5400 20000 min-90 2,5 DHA PROTEIN SELCO Max- min- 24 min- 21 max- 1,5 max-1 min- 0,01 min- 0,05 750000 150000 7200 20000 min- 75 min- 2,5 Bảng 2.pl7 Thành phần thức ăn chuyển đổi Gemma Thành phần Protein Lipid Xơ Khoáng Ca P Nguyên liệu Đạm động vật Dầu thực vật Vỏ (giáp xác, động vật thân mềm) Khác Gemma Micro 300 Tỉ lệ % Gemma 0,3 Tỉ lệ % 55 15 15 2,0 1,5 58 17 12 1,5 1,0 72 71 8,5 5,5 15 24 - 39 - Bảng 3.pl7 Thành phần chế phẩm vi sinh Mazzal Thành phần Tỉ lệ % HydroCloric Acid (H-C-L) (USP) 5,00 Quzyme (organic enzymee) USP 2,00 Humic Acid (organic base enzymee) USP 5,00 Sarapogenin (organic bacterial system) USP 5,50 Laminarin (organic bacterial hormones) USP 10,00 Parigenin (C27H44O3) (Enzymes) USP 22,50 Spirostant (organic wetting agent) USP 20,00 Sarsaponon (organic surfactant) USP 10,00 - 40 - ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG LỤC MINH DIỆP NGHIÊN CỨU BỔ SUNG AXÍT BÉO VÀ CÁC CHẾ PHẨM LÀM GIÀU THỨC ĂN SỐNG TRONG ƯƠNG ẤU TRÙNG CÁ CHẼM - Lates calcarifer (Bloch, 1790) Chuyên... trưởng ấu trùng cá chẽm 94 3.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC LOẠI THỨC ĂN LÀM 98 GIÀU ĐẾN SINH TRƯỞNG VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA ẤU TRÙNG CÁ CHẼM 3.3.1 Các yếu tố môi trường thí nghiệm nghiên cứu loại thức ăn. .. lệ sống ấu trùng cá chẽm nghiệm thức thức ăn làm 98 giàu khác Bảng 3.12 Sinh trưởng ấu trùng cá chẽm nghiệm thức thức ăn làm 100 giàu khác đợt Bảng 3.13 Sinh trưởng ấu trùng cá chẽm nghiệm thức