ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN NGỌC TUÂN NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DA[.]
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC TRẦN NGỌC TUÂN NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2019 KHOA Y DƯỢC ac y, Người thực : TRẦN NGỌC TUÂN VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD Khóa: QH2014.Y Người hướng dẫn: ed ic TS Hoàng Lê Sơn ine an KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Co py rig ht @ Sc ho ol of M PGS.TS Nguyễn Thanh Hải HÀ NỘI – 2019 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma LỜI CẢM ƠN ac y, VN U Trước tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Hoàng Lê Sơn – Khoa Bào chế Chế biến PGS.Tiến sĩ Nguyễn Thanh Hải – Chủ nhiệm môn Bào chế khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Dược Liệu người tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ tơi suốt q trình thực khóa luận dP rm Tôi xin cảm ơn thầy cô môn Bào chế - khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội khoa Bào chế Chế biến – Viện Dược Liệu, tạo điều kiện để tơi thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm, Phòng ban khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tồn thể thầy giáo khoa cho kiến thức quý báu suốt năm học tập, sinh hoạt rèn luyện khoa ine an Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè ln bên cạnh, động viên tơi lúc khó khắn q trình thực khóa luận tháng năm 2019 Trần Ngọc Tuân Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic Hà Nội, ngày PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Giới hạn phát (Limit Of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit Of Quantitation) HPLC Sắc ký lỏng hiệu Chromatography) DAD Máy đo quang (Diode Array Detector) RSD Độ lệch chuẩn tương đối ACN Acetonitrile USP Dược điển Hoa Kì ICH Hội nghị quốc tế hài hồ hố thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người (High Performance Liquid Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm cao ac y, VN U LOD PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC BẢNG BIỂU VN U Tên bảng Bảng Số trang Hóa chất thuốc thử dùng nghiên cứu Trang thiết bị, máy móc sủ dụng nghiên cứu 16 Kết sắc ký đồ khảo sát hệ dung mơi pha động với chương trình chạy đẳng dịng HPLC-DAD, bước sóng phát 220nm Kết diện tích pic lần chiết mẫu Bạch truật với Ethanol 96% phân tích HPLC-DAD 17 Các thông số đánh giá HPLC Atractylenolide III 18 Kết độ tuyến tính phương pháp HPLC định lượng Atractylenolide III với dãy nồng độ chuẩn 20 21 Kết đánh giá tính thích hợp hệ thống phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu chuẩn nồng độ 26µg/ml Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu Bạch truật chiết với Ethanol 96% 22 Kết đánh giá độ thu hồi phương pháp định lượng mẫu thử thêm chuẩn Atractylenolide III 22 10 Kết xác định hàm lượng Atractylenolide III mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc 23 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma DANH MỤC HÌNH ẢNH Tên hình Số trang VN U Hình Cơng thức cấu tạo số chất bạch truật Cơng thức cấu tạo Atractylenolide III Sắc ký đồ phân tích bước sóng 220nm - 254nm bước sóng hấp thụ cực đại Atractylenolide III 15 Sắc ký đồ HPLCđánh giá độ đặc hiệu phương pháp định lượng Atractylenolide III với mẫu thử, mẫu thử thêm chuẩn mẫu chuẩn 28 Sắc ký đồ HPLC Atractylenolide III với nồng độ 0,065µg/ml 0,65µg/ml 19 Đường chuẩn biểu diễn mối quan hệ nồng độ diện tích pic dung dịch chất chuẩn Atractylenolide III 20 Sắc ký đồ phân tích Atractylenolide III mẫu Bạch truật HPLC-DAD 24 Phổ hấp thụ UV thành phần khác mẫu Bạch truật Việt Nam 24 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an dP rm ac y, PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma MỤC LỤC VN U MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG - TỔNG QUAN ac y, 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học dP rm 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý .5 an 1.2 Tổng quan vị thuốc Bạch thuật ine 1.3 Vài nét hoạt chất Atractylenolide III 1.4 Các nghiên cứu định lượng Atractylenolide III bạch truật .8 ed ic CHƯƠNG - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu M 2.2 Trang thiết bị, dung mơi, hóa chất of 2.3 Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 10 ho ol 2.3.2 Phương pháp xử lý mẫu 10 2.3.3 Thẩm định quy trình phân tích 10 Sc 2.3.4 Phương pháp xử lý đánh giá kết 13 CHƯƠNG - KẾT QUẢ 15 @ 3.1 Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III 15 ht 3.1.1 Xác định bước sóng phát chất chuẩn Atractylenolide III 15 rig 3.1.2 Xây dựng điều kiện sắc ký mẫu Bạch truật HPLC-DAD 15 Co py 3.1.3 Xác định điều kiện tối ưu hóa xử lý mẫu 17 3.1.4 Điều kiện chạy sắc ký HPLC 17 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 18 PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma 3.2.1 Tính đặc hiệu phương pháp 18 VN U 3.2.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng 19 3.2.3 Độ tuyến tính 19 3.2.4 Độ thích hợp hệ thống 21 ac y, 3.2.5 Độ lặp lại 21 3.2.6 Độ 22 dP rm 3.3 Ứng dụng phương pháp xác định hàm lượng dược chất củ Bạch truật 23 CHƯƠNG - BÀN LUẬN 25 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 26 Co py rig ht @ Sc ho ol of M ed ic ine an TÀI LIỆU THAM KHẢO PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma MỞ ĐẦU VN U Bạch truật vị thuốc từ lồi Atractylodes macrocephala Koidz (Họ Compossitae), có vị trí quan trọng cổ phương đơn độc Đông Á ngàn năm để điều trị số chứng bệnh đau dày, bụng ac y, trướng đầy, ung thư, chứng loãng xương béo phì Khoảng bảy mươi hợp chất xác định cấu trúc hóa học đa phần thuộc nhóm dP rm sesquiterpenoid, phenolic acid polyacetylene mối liên hệ với tác dụng lâm sàng chưa rõ ràng Cả chất tinh khiết lẫn cao dịch chiết thể tác dụng dược lý mạnh cải thiện hệ tiêu hóa thơng qua bào IEC-6, kháng số dòng tế bào ung thư gồm HepG2, LOVO, CEM, MKN-45, kích thích miễn dịch, kháng viêm, chống oxy hóa, cải thiện khả nhớ chuột Với lợi ích an lâm sàng hiệu điều trị chứng minh, Bạch truật bắt đầu di thực ine Việt Nam từ năm 1970 trồng phổ biên Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội Lâm Đồng Hiện tại, nghiên cứu công bố hàm lượng dược ed ic chất có Bạch truật di thực cịn hạn chế Do đó, chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật M (Atractylodes macrophala Koidz) sắc ký lỏng hiệu cao bắt cặp - of detector DAD” với hai mục tiêu đây: Xây dựng phương pháp định lượng Atractylenolide III thân rễ - ho ol Bạch truật phương pháp HPLC-DAD Ứng dụng phương pháp để định lượng hàm lượng Atractylenolide III Sc mẫu Bạch truật Việt Nam Trung Quốc @ Lựa chọn chất nghiên cứu Atractylenolide III hoạt chất thể tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa, chống lỗng xương, cải thiện trí nhớ, kháng ht viêm mơ hình dược lý giải thích sau Hàm lượng Atractylenolide rig III thấp so với atractylenolide I II gây khó khăn q trình định lượng py điều phản ảnh thực tế tác dụng cao dịch chiết Bạch truật lại tốt đơn chất riêng biệt Kiểm sốt chất nhỏ có lợi ích trường hợp Co PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma CHƯƠNG - TỔNG QUAN VN U 1.1 Giới thiệu chung bạch truật 1.1.1 Tên khoa học ac y, Bạch truật có tên khoa học Atractylodes macrocephala Koidz thuộc họ Cúc (Compossitae) [1] dP rm 1.1.2 Mô tả thực vật, phận dùng Đặc điểm: Cây thảo, sống lâu năm, có thân rễ to, mọc đất Thân thẳng, cao 0.3-0.8m, đơn độc phân nhánh phận trên, phần thân hóa gỗ Lá mọc cách, dài Lá phần thân có cuống dài, phần có cuống ngắn, gốc rộng, bọc lấy thân Phiến xẻ sâu thành thùy, thùy lớn, hình trứng trịn, an hai đầu nhọn, hai thùy bên nhỏ hơn, hình trứng mũi mác, phần gốc không đối xứng ine Các gần thân có phiến ngun, hình thn hình trứng mũi mác, mép có cưa Đầu lớn, phần có bắc hình xẻ sâu, hình lơng chim Bao ed ic hình chng, có bắc mỏng xếp thành hàng Lá bắc nhỏ hình trứng tam giác, to dần phía Hoa nhiều, tràng hình ống, phần màu trắng, phần M màu đỏ tím, xẻ làm thùy hình mũi mác, xoắn ngồi Năm nhị hàn liền (có of nhị bị thối hóa), nhị hình sợi dẹp Bầu thon mặt ngồi có lơng nhung, màu nâu nhạt, đoạn có lơng hình lơng chim Vịi hình màu tím nhạt đầu nhị xẻ thành ho ol thùy nơng hình đầu, mặt ngồi có lơng ngắn Quả bế, thn, dẹp, màu xám [2] ngà [2,10] Sc Bộ phận dùng làm thuốc: Dùng thân rễ cứng chắc, có dầu thơm nhẹ, ruột màu trắng @ 1.1.3 Phân bố, thu hái chế biến Phân bố: Bạch truật trồng chủ yếu Trung Quốc Đến năm 1970, Bạch truật ht bắt đầu di thực trồng Lào Cai, Sơn La, Hà Giang, Hà Nội rig Lâm Đồng [2,10] py Thu hái sơ chế: Cây trồng bạch truật thu hái từ cuối tháng 10 đến đầu tháng 11 Co (thường từ 8-22/11) Lúc thu hoạch, chọn ngày nắng ráo, đất khô, nhổ nhẹ nhàng Sau nhổ, lấy dao cất bỏ thân đem củ chế biến [1,10] PDF Watermark Remover DEMO : Purchase from www.PDFWatermarkRemover.com to remove the waterma ... Bạch truật di thực cịn hạn chế Do đó, chúng tơi thực đề tài ? ?Nghiên cứu định lượng Atractylenolide III thân rễ bạch truật M (Atractylodes macrophala Koidz) sắc ký lỏng hiệu cao bắt cặp - of detector. .. DƯỢC ac y, Người thực : TRẦN NGỌC TUÂN VN U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI dP rm NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ATRACTYLENOLIDE III TRONG THÂN RỄ BẠCH TRUẬT (Atractylodes macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU... macrophala Koidz) BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO BẮT CẶP DETECTOR DAD Khóa: QH2014.Y Người hướng dẫn: ed ic TS Hoàng Lê Sơn ine an KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Co py rig ht @ Sc ho ol of