VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM Nucleopolyhedrosis virus (NPV) ĐỂ PHÒNG TRỪ SÂU KHOANG Spodoptera litura Ngành CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành CÔNG NGHỆ S[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH VIỆN KHOA HỌC ỨNG DỤNG HUTECH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM Nucleopolyhedrosis virus (NPV) ĐỂ PHÒNG TRỪ SÂU KHOANG Spodoptera litura Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực hiện: HUỲNH THỊ NGỌC DIỆU MSSV: 1411100016 Lớp: 14DSH01 TP Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu chúng em hướng dẫn tiến sĩ Nguyễn Thị Hai Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH trường Đại học Cơng Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Những kết hồn tồn khơng chép từ nghiên cứu khoa học khác hình thức Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên thực Huỳnh Thị Ngọc Diệu năm Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, chúng em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình chúng em tạo điều kiện cho chúng em học tập để chúng em có thành ngày hôm Trong suốt khoảng thời gian học trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, chúng em thầy Viện Khoa Học Ứng Dụng HUTECH hết lòng hướng dẫn giúp đỡ chúng em trình học tập trường, trình thực đồ án Chúng em xin chân thành cám ơn đến Thầy Cơ, nhờ có Thầy Cơ trang bị kiến thức cho chúng em để thực đồ án Chúng em xin cảm ơn Thầy Cơ phịng thí nghiệm bạn khóa quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện để chúng em hoàn thành đồ án tốt nghiệp Đặc biệt, chúng em xin chân thành cảm ơn Tiến sĩ Nguyễn Thị Hai tận tình hướng dẫn, bảo chúng em suốt trình thực đồ án Cuối cùng, chúng em xin cảm ơn Thầy Cô hội đồng Phản Biện dành thời gian đọc nhận xét đồ án tốt nghiệp Chúng em xin gửi đến Thầy Cô lời chúc sức khỏe trân trọng Trong trình làm đồ án, kinh nghiệm cịn thiếu kiến thức chưa đầy đủ, nên có nhiều thiếu sót, mong thầy bỏ qua Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng Sinh viên thực Huỳnh Thị Ngọc Diệu năm Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sâu khoang Spodoptera litura 1.1.1 Đặc điểm hình thái 1.1.2 Đặc điểm sinh học sinh thái 1.1.3 Mức độ gây hại 1.1.4 Biện pháp phòng trừ 1.2 Các nghiên cứu phòng trừ sâu khoang……………………………………… 1.2.1 Ngoài nước 1.2.2 Trong nước 1.3 Giới thiệu Nucleopolyhedrosis virus (NPV) 1.3.1 Giới thiệu chung 1.3.1.1 Đặc điểm hình thái 10 1.3.1.2 Cơ chế tác động virus lên côn trùng 11 1.3.1.3 Hiệu lực diệt sâu 14 1.3.1.4 Ưu nhược NPV 15 1.3.2 Nghiên cứu sử dụng NPV để trừ sâu hại trồng 16 1.3.2.1 Ngoài nước 16 1.3.2.2 Trong nước 19 1.3.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình sản xuất NPV 20 1.3.3.1 Nồng độ lây nhiễm 20 1.3.3.2 Tuổi sâu 20 1.3.3.3 Thời gian thu hoạch sâu chết 21 1.3.4 Ảnh hưởng chất phụ gia đến hiệu lực diệt sâu NPV 21 1.3.5 Ảnh hưởng chất phụ gia chất mang đến hiệu lực diệt sâu NPV 24 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 26 Đồ án tốt nghiệp 2.2 Vật liệu 26 2.2.1 Nguyên liệu 26 2.2.2 Dụng cụ 26 2.2.3 Hóa chất 26 2.3 Nội dung phƣơng pháp nghiên cứu 27 2.3.1 Ảnh hƣởng Acid boric đến hiệu lực diệt sâu NPV 27 2.3.1.1 Chuẩn bị 27 2.3.1.2 Tiến hành thí nghiệm 30 2.3.2 Ảnh hƣởng rỉ đƣờng đến hiệu lực diệt sâu NPV 32 2.3.2.1 Chuẩn bị 32 2.3.2.2 Tiến hành thí nghiệm 34 2.3.3 Ảnh hƣởng chất mang chất phụ gia việc tạo chế phẩm 35 2.3.3.1 Chuẩn bị 36 2.3.3.2 Tiến hành thí nghiệm 38 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 40 3.1 Ảnh hưởng acid boric đến hiệu lực trừ sâu NPV 40 3.2 Ảnh hưởng rỉ đường đến hiệu lực diệt sâu NPV 41 3.3 Ảnh hưởng chất mang đến hiệu lực diệt sâu NPV 44 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 4.1 Kết luận 47 4.2 Kiến nghị 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 A TÀI LIỆU NƢỚC NGOÀI 48 B TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT 52 C TÀI LIỆU INTERNET 52 PHỤ LỤC 53 I Ảnh hƣởng acid boric đến hiệu lực diệt diệt sâu NPV 53 Đồ án tốt nghiệp II Ảnh hƣởng rỉ đƣờng đến hiệu lực diệt diệt sâu NPV 54 III Ảnh hƣởng chất phụ gia chất mang đến hiệu lực diệt sâu NPV 57 PHỤ LỤC 61 I Ảnh hƣởng acid boric đến hiệu lực diệt diệt sâu NPV 61 II Ảnh hƣởng rỉ đƣờng đến hiệu lực diệt diệt sâu NPV 62 III Ảnh hƣởng chất phụ gia chất mang đến hiệu lực diệt sâu NPV 63 PHỤ LỤC 68 HÌNH ẢNH 68 Hình Dịch ly tâm 68 Hình Dịch đem ly tâm 68 Hình Pha dịch 68 Hình Hộp thức ăn nhân tạo 68 Hình Cắt thức ăn thành 40 miếng………………………………………………69 Hình Hộp ni sâu có thức ăn nhân tạo 69 Hình Sâu tuổi 69 Hình Phun dịch vào thức ăn nhân tạo 69 Hình Gắp sâu vào thức ăn …………………………………………………… 70 Hình 10 Các hộp sâu…………………………… 70 Hình 12 Thể vùi virus 70 Hình 11 Buồng đếm 70 Hình 13 Sâu công thức 71 Hình 14 Sâu chết NPV 72 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các chế phẩm NPV đăng ký kiểm soát dịch hại nhiều nơi giới Bảng 3.1 Ảnh hƣởng acid boric bổ sung đến hiệu lực diệt sâu (%) NPV 40 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng rỉ đƣờng bổ sung đến hiệu lực diệt sâu (%) NPV 42 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chất mang bổ sung đến số sâu chết NPV 44 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng chất mang bổ sung đến hiệu lực sâu NPV sau ngày 45 Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Sâu khoang Spodoptera litura Hình 1.2 Ngài Hình 1.3 Vòng đời sâu khoang Hình 1.4 Cơ chế tác động Baculovirus 11 Hình 1.5 Biểu sâu chết NPV 12 Hình 1.6 Sự lây nhiễm NPV lên sâu ký chủ 13 Hình 1.7 Chu trình sống virus côn trùng 14 Hình 1.8 Rỉ đƣờng 24 Hình 2.1 Quy trình thử nghiệm ảnh hƣởng acid boric đến hiệu lực diệt sâu NPV 27 Hình 2.2 Lấy sâu chết NPV nghiền với nƣớc cất, lọc thu dịch thơ 28 Hình 2.3 Quy trình ni sâu phịng thí nghiệm 29 Hình 2.4 Thức ăn nhân tạo 30 Hình 2.5 Phun dịch gắp sâu 31 Hình 2.6 Quy trình thử nghiệm ảnh hƣởng rỉ đƣờng đến hiệu lực diệt sâu NPV 32 Hình 2.7 Các hộp thức ăn đƣợc phun dịch gắp sâu 35 Hình 2.8 Quy trình thử nghiệm ảnh hƣởng rỉ đƣờng đến hiệu lực diệt sâu NPV 36 Hình 3.1 Ảnh hƣởng acid boric bổ sung đến hiệu lực diệt sâu (%) NPV 41 Hình 3.2 Ảnh hƣởng rỉ đƣờng bổ sung đến hiệu lực diệt sâu (%) NPV 43 Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU 1.Tính cấp thiết đề tài Việt Nam nước sản xuất nơng nghiệp, khí hậu nhiệt đới nóng ẩm Việt Nam thuận lợi cho phát triển trồng thuận lợi cho phát sinh, phát triển sâu bệnh, cỏ dại gây hại mùa màng Do việc sử dụng thuốc BVTV để phòng trừ sâu hại, dịch bệnh bảo vệ môi trường, giữ vững an ninh lương thực quốc gia biện pháp quan trọng chủ yếu Từ thập niên 70 đến kỷ 20, với phát triển nhanh chóng ngành khoa học, lĩnh vực hóa học kỹ thuật sử dụng thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) có thay đổi mạnh mẽ: hiểu biết sâu phương thức tác động thuốc BVTV cho phép phát nhiều hoạt chất có phương thức tác động BVTV cho phép phát nhiều hoạt chất có phương thức tác động khác trước, sử dụng cách hiệu an tồn ngành sản xuất nơng nghiệp Việc sử dụng thuốc trừ sâu mức bừa bãi thời gian dài dẫn đến loạt vấn đề như: ô nhiễm môi trường, đa dạng sinh học, phát triển quần thể sâu bệnh kháng thuốc, bùng phát dịch hại thứ cấp, tăng đầu vào hóa chất nguy hiểm độc hại tích tụ dư lượng thuốc trừ sâu chuỗi thức ăn (Armes et al 1992; Kranthi et al 2002) Sâu khoang S litura loài sâu ăn tạp, gây hại nhiều loài trồng (Matsuura and Naito 1997; Sahayaraj and Paulraj 1998) Các nghiên cứu cho biết, sâu khoang kháng lại với nhiều loại thuốc trừ sâu hóa học dẫn đến bùng phát thành dịch thất bại biện pháp quản lý loài sâu hại (Ahmad et al 2007, Hong Tong et al, 2013) Để khắc phục tình trạng kháng thuốc sâu khoang, Nucleopolyhedrosis sử dụng khả gây chết sâu cao lại an tồn thiên địch mơi trường (Tohnishi et al., 2005; Shaurub et al., 2014; Nasution et al., 2015) SLNPV chứng Đồ án tốt nghiệp minh có hiệu gây chết cao (Trang and Chaudhari, 2002; Kumari and Sing, 2009; Nguyễn Thị Hai, Nguyễn Hoài Hương, 2015) Tuy nhiên tác nhân sinh học nên NPV bị ảnh hưởng yếu tố môi trường Vì vậy, việc nghiên cứu để bảo quản virus, trì hiệu lực diệt sâu virus cần thiết Xuất phát từ yêu cầu trên, nhóm sinh viên tiến hành đề tài “Nghiên cứu tạo chế phẩm Nucleopolyhedrosis virus NPV phù hợp để phòng trừ sâu khoang Spodoptera litura” 2.Mục đích nghiên cứu Tìm chất bổ sung thích hợp để tạo chế phẩm NPV trừ sâu khoang Spodoptera litura 3.Mục tiêu nghiên cứu Xác định ảnh hưởng acid boric đến hiệu lực diệt sâu khoang NPV Xác định ảnh hưởng rỉ đường đến hiệu lực diệt sâu khoang NPV Tìm loại chất mang phụ gia phù hợp để tạo chế phẩm 4.Nội dung nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng acid boric đến hiệu lực diệt sâu NPV Khảo sát ảnh hưởng rỉ đường đến hiệu lực diệt sâu NPV Khảo sát khả diệt sâu dạng chế phẩm Đồ án tốt nghiệp CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu sâu khoang Spodoptera litura Tên khoa học: Spodoptera litura Họ: Noctuidae Bộ: Lepidoptera 1.1.1 Đặc điểm hình thái Sâu khoang trưởng thành loại ngài có màu xám nâu xám, cánh trước có màu nâu vàng, có vân ngang bạc trắng óng ánh, cánh sau màu trắng Trứng hình bán cầu, đẻ màu vàng, sau màu tro tối xếp với thành ổ, có phủ lớp lơng màu vàng rơm Hình 1.1 Sâu khoang Spodoptera litura (https://www.forestryimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=1949066) Hình 1.2 Ngài (Nguồn: Trần Văn Hai, 2009) Đồ án tốt nghiệp Sâu non nở có màu xanh sáng, dài khoảng 1mm, đầu to đen bóng Sâu non đẫy sức có màu xám tro đến nâu đen, vạch lưng màu vàng đốt bụng thứ có khoang đen to nên gọi sâu khoang Sâu có 5- tuổi, đẫy sức trước hóa nhộng dài 38-50 mm Sâu làm nhộng đất (Hill, 1975; USDA, 1982; CABI, 2009) Nhộng dài từ 15-22mm, có màu xanh nõn chuối, mềm hình thành, sau chuyển dần sang màu vàng xanh, cuối có màu nâu, thân cứng dần có màu nâu đỏ Khi vũ hố, nhộng có màu nâu đen, đốt cuối nhộng cử động Mép trước đốt bụng thứ vòng quanh mép trước đốt bụng thứ 5-7 có nhiều chấm lõm, cuối bụng có đơi gai ngắn (USDA, 1982; CABI, 2009) 1.1.2 Đặc điểm sinh học sinh thái Thời gian trứng: 2-6 ngày Sâu non có tuổi: 12-37 ngày Tiền nhộng: 1-4 ngày Nhộng: 4-14 ngày Trưởng thành: 5-8 ngày Vịng đời trung bình sâu khoang từ 25-48 ngày Hai đến năm ngày sau xuất hiện, trưởng thành cái đẻ 50 đến 300 trứng theo ổ mặt (ưa thích) Trứng nở ba đến bốn ngày (Chari Patel, 1983) Một trưởng thành đẻ 1.500 đến 2.500 trứng khoảng sáu đến tám ngày Cây thầu dầu loại vật chủ ưa chuộng cho đẻ trứng (Chari Patel, 1983) Các cánh đồng tưới nước hấp dẫn đẻ trứng Đồ án tốt nghiệp Hình 1.3 Vịng đời sâu khoang (Nguồn http://tiennong.vn/w79/sau-khoang-sau-an-tap-hai-rau-dau-spodopteralitura.aspx) Sâu khoang thường trải qua tuổi Sâu tuổi đến tuổi không lẩn trốn ánh sáng Sâu từ tuổi đến tuổi chui xuống đất, có tượng lẫn trốn ánh sáng nên ban ngày thường ẩn nấp chỗ kín mặt đất, chui xuống khe nẻ mặt đất đến tối chui lên để gây hại Khi sâu đẫy sức chui xuống đất hố nhộng, trước hố nhộng làm kén đất có hình bầu dục chui vào hố nhộng (Chari Patel, 1983) Nhộng thường vũ hoá vào buổi chiều mát vào lúc chập tối, sau vũ hoá vài trưởng thành bắt đầu giao phối vào đêm hơm sau bắt đầu đẻ trứng Tuổi thọ trung bình trưởng thành 8,3 ngày đẻ 2.673 trứng Tuổi thọ trung bình trưởng thành đực 10,4 ngày (Yamanaka cộng sự, 1975; Ahmed cộng sự, 1979) Theo Yamanaka et al (1975), trung bình trưởng thành đẻ 2000 – 2600 quả, thời gian đẻ trong khoảng ngày 25 ° C (77 ° C) Sâu khoang phá nhiều loại nên có mặt quanh năm đồng ruộng Sâu cắn phá mạnh vào lúc sáng sớm có ánh nắng sâu chui xuống tán để ẩn Đồ án tốt nghiệp nắp Chiều mát sâu bắt đầu hoạt động trở lại phá hại suốt đêm Sâu vừa nở gặm vỏ trứng sống tập trung 1-2 ngày, bị động sâu bị phân tán nhả tơ bng xuống đất Sâu tuổi 1-2 ăn gặm phần diệp lục chừa lại lớp biểu bì trắng, từ tuổi trở sâu ăn phá mạnh cắn thủng gân Ở tuổi lớn thiếu thức ăn, sâu cịn tập tính ăn thịt lẫn khơng ăn phá mà cịn ăn trụi thân, cành, trái non Sâu non phát triển thích hợp nhiệt độ ẩm độ cao Khi làm nhộng, sâu chui xuống đất làm thành khoang nằm yên có hóa nhộng (Nguyễn Văn Huỳnh Lê Thị Sen, 2004) 1.1.3 Mức độ gây hại Spodoptera litura đối tượng gây hại nặng rau muống Sâu non tuổi nhỏ thường gây hại nghiêm trọng hàng trăm sâu non tập trung lại ăn nhanh chóng làm xơ xác Sâu non cịn gặm ăn vỏ làm giảm chất lượng Sâu non có tuổi, sâu tuổi nhỏ ăn biểu bì lá, sâu tuổi lớn ăn thịt chừa lại gân Khi mật độ sâu cao làm cho rụng nhanh 1.1.4 Biện pháp phòng trừ Biện pháp canh tác Vệ sinh đồng ruộng trước sau trồng, cày ải phơi đất, phơi xử lý thuốc trừ sâu cho ruộng ngập nước 2-3 ngày để diệt nhộng, sâu non có đất Phải thường xuyên thăm ruộng để kịp thời phát sâu, ngắt bỏ ổ trứng tiêu diệt sâu non nở chưa phân tán xa Biện pháp giới vật lý Diệt ổ trứng sâu non tay Biện pháp sinh học Hạn chế phun thuốc để bảo tồn loài thiên địch thường xuất ruộng: Nhiều tác nhân sinh học sử dụng để trừ sâu khoang ăn tạp : loại nấm côn trùng Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Paecilomyces Đồ án tốt nghiệp fumosorosea (Asi et al, 2013), vi khuẩn Bacillus thuringiensis (Agsaoay, 1998), Nuclepolyhedrosis viru Ngài sâu khoang có khuynh hướng thích mùi chua ánh sáng đèn, dùng bẫy bả chua để thu hút ngài chúng phát triển rộ Bả chua gồm phần giấm + phần mật + phần rượu + phần nước Sau đem bả mồi vào chậu đặt ruộng vào buổi tối nơi thống gió có độ cao 1m so với mặt đất Dùng bẫy pheromone để dự báo trước đẻ trứng sâu ăn tạp Hàng ngày theo dõi dự báo phát triển sâu qua bẫy pheromone, thường xuyên ngắt bỏ ổ trứng diệt ấu trùng ruộng dẫn dụ Dùng hoa hướng dương hay lồi dẫn dụ sâu ăn tạp trồng xung quanh ruộng canh tác để dễ dàng tiêu diệt Dùng sản phẩm sinh học có nguồn gốc nấm, vi khuẩn có dấu hiệu cắn phá Thông thường 10 ngày sau phải phun thuốc lại Các loại chế phẩm vi sinh: thuốc có nguồn gốc từ Bt V-BT; Biocin 8000 SC, Dipel 32 WP thuốc thảo mộc Rotenone Neem Có thể dùng thuốc gốc Cúc tổng hợp Karate 2.5 EC, SecSaigon EC…, loại thuốc có hoạt chất Emamectin; Lufenuron hay hỗn hợp (Chlorantraniliprole + Abamectin)… Biện pháp hóa học Có thể dùng thuốc có gốc Pyrethroid Sherpa, Polytrin Dùng loại chế phẩm vi sinh NPV, Vi-BT Chú ý phun sâu nhỏ tuổi (sâu tuổi – 2) 1.2 Các nghiên cứu phòng trừ sâu khoang 1.2.1 Ngoài nƣớc Sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura) loài sâu hại nguy hiểm cho nông nghiệp nhiều nước châu Á, châu Phi vùng Thái Bình Dương Lồi sâu ăn tạp gây hại cho 150 loài trồng khác lồi sâu hại lồi trồng có giá trị kinh tế bơng, đậu nành, cà chua, thuốc lá, bắp, khoai tây loài rau ăn (Hill, 1993 ; Rao et al, 1993) Sâu khoang phân bố khắp nơi Đồ án tốt nghiệp giới gây hại nặng cho nhiều nước nhiệt đới như: Ấn Độ, Pakistans, Banglades, Srilanca, Indonesia, Philippin, Nhật Bản, Hàn Quốc, Trung Quốc, Úc, Hawaii, nước Đông Nam Á (Hill, 1993; Singh and Jalali, 1997) 1.2.2 Trong nƣớc Nghiên cứu môi trường dinh dưỡng nhân sinh khối nấm Isaria tenuipes để ứng dụng phòng trừ sâu khoang Spodoptera litura (Fab.) hại trồng (Trần Văn Cảnh, 2012) Nghiên cứu khả phòng trừ sâu khoang (Spodoptera litura fabricius) nấm ký sinh côn trùng Isaria javanica (friedrichs & bally) samson & hywel-jones (Nguyễn Thị Bích Thảo, 2013) Bằng phương pháp thu thập, tuyển chọn khai thác khả phòng trừ sinh học chủng Nucleopolyhedrosis NPV (NPV), nhóm tác giả Nguyễn Thị Hai, Nguyễn Hoài Hương (2016) phân lập chủng NPV có hiệu cao sâu khoang ăn tạp Nghiên cứu sản xuất chế phẩm NPV-Spl (Nucle Polyhedrosis Virus) từ tế bào gốc sâu khoang để phịng trừ sâu hại trồng nơng nghiệp (Nguyễn Thị Như Quỳnh, 2014) 1.3 Giới thiệu Nucleopolyhedrosis virus (NPV) 1.3.1 Giới thiệu chung Nuclear polyhedrosis virus (NPV) thuộc họ Baculoviridea thành viên thuộc nhóm virus ký sinh trùng Virus NPV có dạng hình que, kích thước 40 – 70 x 250 – 400 nm (80 – 180 kbp) (Phạm Thị Thùy, 2004) Baculovirus thuộc họ Baculoviridae có chi Chi chia thành nhóm phụ virus đa diện nhân (NPV), virus hạt (GV) Oryctes giống virus (OV) Theo Nguyễn Thị Như Quỳnh (2014), NPV có cấu tạo gồm: vỏ ngoài, vỏ capsid, lõi acid nucleic Đồ án tốt nghiệp Vỏ ngoài: lớp màng nhầy có tính chất protein gọi protein ngồi Protein ngồi mang trính kháng ngun có tác dụng kích thích hệ thống miễn dịch thể vật chủ Vỏ capsid: Vỏ capsid nằm bên lớp vỏ ngăn cách với lớp vỏ ngồi lớp keo dính Protein cấu tạo nên vỏ Capsid gọi protein Protein mang tính kháng nguyên làm tăng khả gây bệnh vi rút Genom: Genom virus NPV phân tử DNA gồm mạch xoắn kép (DNA ds) Khi nhiễm vào tế bào vật chủ virus tuồn lõi DNA vào tế bào vật chủ, DNA virus sử dụng lượng, nguyên liệu riboxom tế bào vật chủ để tổng hợp nên protein trình nhân lên DNA Mặt khác tế bào bị nhiễm virus, DNA vi rút sinh men azenaza ức chế DNA tế bào chủ phân giải tạo thành nucleotit tự Sau tổng hợp đủ thành phần vỏ, DNA (lõi ), virus tiến hành lắp ráp để tạo thành thể virus Bảng 1.1 Các chế phẩm NPV đăng ký kiểm sốt dịch hại nhiều nơi giới Cơn trùng Tên thƣơng mại sản phẩm Quốc gia Heliothis spp Biotrol VHZ and Virion H Mỹ Heliothis spp Elcar Mỹ Lymantria dispar Gypcheck Mỹ Mamestra brassicae Mamestrin Phần Lan Neodiprion lecontei Lecont-virus Mỹ/Canada Orgyia seudotsugata Biocontrol-1 and Virtuss Mỹ Nguồn: Erayya et al (2013) Đồ án tốt nghiệp 1.3.1.1 Đặc điểm hình thái NPV có cấu trúc hình học, - đến 20 cạnh với nhiều nhóm virus khác Các acid nucleic (DNA, RNA) gồm dạng sợi đơn sợi đôi Theo Phạm Thị Thùy (2004), virus thuộc nhóm có dạng hình que, kích thước từ 40 - 70 nm x 250 - 400 nm, bên ngồi lớp vỏ có cấu tạo từ lipoprotein bao quanh lớp protein nằm lõi DNA (Nucleocapsid), có chứa virion, virion bao gồm 11 - 25 polypeptide Trong số polypeptide có khoảng - 11 polypeptide kết hợp với nucleocapsid số polypeptide lại kết hợp với capsid DNA dạng sợi vòng gồm hai sợi, với trọng lượng phân tử từ 50 - 10 x 106 virion bao quanh tinh thể protein gọi thể vùi Kelly (1985) cho rằng, virus có dạng hình que có nhiều nucleocapsid bao bọc lớp vỏ, nucleocapsid phức hợp gồm DNA protein (gọi tắc Deoxyribo Nucleo Protein - DNP) chúng bao quanh lớp vỏ capsid (bên lớp vỏ capsid có nhiều nucleocapsid), nucleocapsid gọi NPVs Nucleocapsid đơn, có nhiều nucleocapsid vỏ capsid gọi NPVs Nucleocapsid – Multiple Cấu tạo nucleocapsid: nucleocapsid có dạng hình que, dáng cong, đường kính 40 nm, dài 350 nm, có màng bọc bên (capsid) Nucleocapsid bao gồm hai loại protein, lõi DNP protein màng capsid protein từ - polypeptide nhỏ (Summer, M.D et al, 1978) Cấu tạo thể virus: thể virus hình gậy gồm nucleocapsid bao bọc, vỏ bao có nhiều nucleocapsid, có loại có tới 30 nucleocapsid Lớp vỏ bao gồm có lipid, vỏ cịn có - 10 polypeptide (Harrap, K.A., 1972., Kelly, D.C., 1982, 1985) Cấu tạo khối đa diện (polyhedral): Theo Crook, N.E et al (1982) polyhedral khối kết tinh lớn, kích thước từ - µm, có dạng hình vng gần hình cầu, bên có chứa nhiều hạt virus, có lên tới 100 hạt, bao quanh 10 Đồ án tốt nghiệp virus mạng lưới kết tinh hình mắt cáo Polyhedral bao gồm nhiều polypeptide Protein polyhedron có trọng lượng phân tử thay đổi từ 27.000 - 34.000 million , phụ thuộc vào loại virus (Bergold, G.H., 1963 Harrap, K.A., 1972) Polyhedral có đặc điểm ổn định pH trung tính pH kiềm 9,5 trở lên làm bị hịa tan (Faust, R.M et al , 1966) Minon, F et al (1979) cho biết polyhedra hồn thiện lớp vỏ có hình thái riêng biệt vây quanh, chức lớp vỏ chưa xác định 1.3.1.2 Cơ chế tác động virus lên trùng Hình 1.4 Cơ chế tác động Baculovirus (https://sites.google.com/site/allaboutbiopesticides/home/entomopathogenic-virus) Chế phẩm virus NPV phun điều lên Sau sâu ăn nhiễm virus NPV Thể vùi virus thức ăn xăm nhiễm vào ruột côn trùng Tại ruột côn trùng tác động men tiêu hóa thể vùi bị hịa tan giải phóng virion Qua mơ ruột virion nhân lên vào tế bào nhân ruột Tại hệ virion hình thành xâm nhập vào quan khác hạt bạch huyết, tế bào thể mỡ, ống tiêu hóa, Sau giai đoạn cuối lây nhiễm hình thành vỏ bọc bảo vệ virion sau tạo thành PIB Khi trùng chết giải phóng PIB tiếp tục lây 11 Đồ án tốt nghiệp nhiễm sang khác Sâu chết chứa lượng virus khoảng 108 PIB, thời gian gây chết virus côn trùng từ – ngày Virus NPV lây nhiễm khoảng 400 lồi trùng (chủ yếu cánh vẩy, cánh màng, hai cánh) A B Hình 1.5 Biểu sâu chết NPV (Nguồn: https://sinhhoc247.com/virus-gay-benh-va-ung-dung-cua-virus-trongthuc-tien-a5088.html) Sâu non sau nhiễm NPV khơng có biểu rõ rệt khơng thay đổi thức ăn Sau 5-7 ngày đốt thân sưng phồng lên, căng mộng nước Cơ thể sâu chuyển sang màu trắng đục, da bở, dễ bị vỡ Trước chết sâu thường leo lên cây, bám chân vào cành cây, trút đầu xuống đất Dịch chiết trắng chảy sâu chết (hiện tượng sâu chết treo) Dịch trắng tiếp tục chảy (Phạm Thị Thùy, 2004) 12 ... NPV phù hợp để phòng trừ sâu khoang Spodoptera litura? ?? 2.Mục đích nghiên cứu Tìm chất bổ sung thích hợp để tạo chế phẩm NPV trừ sâu khoang Spodoptera litura 3.Mục tiêu nghiên cứu Xác định ảnh... Polytrin Dùng loại chế phẩm vi sinh NPV, Vi-BT Chú ý phun sâu nhỏ tuổi (sâu tuổi – 2) 1.2 Các nghiên cứu phòng trừ sâu khoang 1.2.1 Ngoài nƣớc Sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura) lồi sâu hại nguy... nƣớc Nghiên cứu môi trường dinh dưỡng nhân sinh khối nấm Isaria tenuipes để ứng dụng phòng trừ sâu khoang Spodoptera litura (Fab.) hại trồng (Trần Văn Cảnh, 2012) Nghiên cứu khả phòng trừ sâu khoang