Resveratrol ngăn chặn sự tăng hoạt tính của enzyme acetylcholinesterase và chứng suy giảm trí nhớ ở chuột bị gây bệnh đái tháo đường bởi streptozotocin

MỤC LỤC Tổng quan chứng Sa sút trí tuệ Enzyme Acetylcholinesterase Hợp chất Resveratrol Quá trình gây bệnh, điều trị đánh giá Mơ hình đánh giá 5.1 In vivo 5.2 In vitro Kết luận chung Tài liệu tham khảo Tổng quan chứng Sa sút trí tuệ (Dementia) 1.1 Định nghĩa - Chứng sa sút trí tuệ (Dementia) suy giảm kéo dài chức trí tuệ bệnh nhân tỉnh táo - Một bệnh nhân bị sa sút trí tuệ điều khiển thân so với họ ngày trước - Chẩn đốn bệnh nhân mắc Dementia dựa vào thông tin người nhà cung cấp để phát hiện sớm Tổng quan chứng Sa sút trí tuệ (Dementia) 1.2 Phân loại nguyên nhân gây bệnh BẢNG BA NHÓM BỆNH DẪN ĐẾN CHỨNG SA SÚT TRÍ TUỆ Nhóm bệnh Ví dụ Thối hóa tế bào thần kinh não ● ● ● ● Alzheimer Pick Parkinson Huntington Hội chứng gây rối loạn chức não (một số có khả hồi phục) ● ● ● ● Thiếu máu não Đa xơ cứng Não úng thủy Các chấn thương não Hội chứng khác có khả hồi phục ● ● ● ● Rối loạn trao đổi chất Ngộ độc Nhiễm trùng: HIV (AIDS), giang mai, lao, Rối loạn trầm cảm Tổng quan chứng Sa sút trí tuệ (Dementia) 1.2 Phân loại nguyên nhân gây bệnh - Tồn chẩn đoán lâm sàng nguy bệnh nhân đái tháo đường có khả cao mắc chứng sa sút trí tuệ gia tăng hoạt động AChE nhiên chưa xác định xác nguyên nhân - Sử dụng chất ức chế Enzyme Acetylcholinesterase để cải thiện Tổng quan Enzyme Acetylcholinesterase (AChE) 2.1 Tổng quan Enzyme Acetylcholinesterase (AChE) một serine thủy giải chủ yếu nằm điểm nối thần kinh khớp thần kinh cholinergic (sử dụng acetylcholine làm chất dẫn truyền) Acetylcholine Acetic acid Lực hút tĩnh điện Choline Vùng Anion Acetylcholinesterase SERINE Vùng Ester HÌNH Cơ chế hoạt động AChE Tổng quan Enzyme Acetylcholinesterase (AChE) 2.2 Chất ức chế AChE - Các chất ức chế AChE giúp ức chế khả thủy giải Acetylcholin Enzyme Acetylcholinesterase - Dựa vào chế hoạt động, chia thành hai nhóm: ● Thuận nghịch (cạnh tranh hoặc không cạnh tranh) ● Không thuận nghịch - Nhóm thuận nghịch ứng dụng điều trị Tổng quan Enzyme Acetylcholinesterase (AChE) 2.2 Chất ức chế AChE HÌNH Cơ chế q trình ức chế hoạt động AChE Tổng quan chất ức chế Resveratrol 3.1 Nguồn gốc cấu trúc Resveratrol stilbene thuộc nhóm chất polyphenol, chủ yếu vỏ nho rượu vang đỏ Hình Resveratrol ( 3,5,4 - trihydroxy - trans - stilbene) Tổng quan chất ức chế Resveratrol 3.2 Hoạt tính nguyên nhân chọn làm chất ức chế - Resveratrol có khả kháng oxy hóa, kháng viêm, chống máu loãng, bảo vệ tim mạch ngăn ngừa ung thư - Hoạt tính bảo vệ mơ thần kinh khỏi tình trạng thối hóa hiện tượng stress oxy hóa 10 Tổng quan chất ức chế Resveratrol 3.2 Hoạt tính nguyên nhân chọn làm chất ức chế - Resveratrol có hoạt tính bảo vệ thần kinh - Bệnh đái tháo đường gây gia tăng hoạt động AChE dẫn đến suy giảm nhận thức khả ghi nhớ ➔ Nghiên cứu tập trung vào khả tiếp thu ghi nhớ hoạt động Enzyme Acetylcholinesterase máu não tác động chất ức chế Resveratrol đối tượng chuột bị gây bệnh đái tháo đường 11 Mô hình đánh giá 5.1 In vivo (Phương pháp đánh giá hành vi) 5.1.2 Thí nghiệm trường mở (Open field ) Quy trình: - Hộp 56x40x30 cm - Sàn chia thành 12 vng, có kích thước 12x12 cm - Thời gian thí nghiệm: phút - Crossing response - Rearing response HÌNH Mơ hình thí nghiệm trường mở 18 Mơ hình đánh giá 5.1 In vivo (Phương pháp đánh giá hành vi) 5.1.3 Kiểm tra độ nhạy bị sốc điện chân (Foot shock sensitivity test) Mục tiêu: Xác định ngưỡng “nao núng” (Flinch) ngưỡng nhảy (Jump) Quy trình: - Phương pháp “Up and down”: Thiết bị tương tự thí nghiệm kháng ức chế khơng có phần bệ - Chuỗi sốc điện 1s 10s - Cường độ điện 0.1 mA - 0.5 mA với lần sốc tăng 0.1 mA - Cường độ sốc thay đổi theo phản ứng chuột HÌNH 10 Mơ hình thí nghiệm độ nhạy bị sốc chân 19 Mơ hình đánh giá 5.1 In vivo (Phương pháp đánh giá hành vi) 5.1.4 Kết Thí nghiệm trường mở: Số Crossing response Rearing response có P>0.05 Bệnh tiểu đường hay điều trị với Resveratrol không làm chuột khả vận động Độ nhạy sốc chân: Ngưỡng “nao núng” ngưỡng nhảy: P = 1.57 Độ trễ bước xuống: Giảm Nhóm Diabetic/Saline vs nhóm Control/Saline Nhóm Diabetic/Saline vs Diabetic/RV (10, 20) Khả ghi nhớ chuột mắc đái tháo đường giảm HÌNH 11 Kết độ trễ bước xuống nhóm chuột huấn luyện kiểm tra 20 Mô hình đánh giá 5.2 In vitro 5.2.1 Hoạt tính AChE não ● Chuẩn bị mẫu (mô não): Thuốc mê Ethyl ether ➔ ➔ ➔ ➔ ➔ Vỏ đại não (Cerebral cortex) Hồi hải mã (Hippocampus) 10 mM Tris–HCl, pH 7.4 Mẫu mô não o bảo quản - C Thể vân (Striatum) Vùng đồi (Hypothalamus) Tiểu não (Cerebellum) 21 Mơ hình đánh giá 5.2 In vitro 5.2.1 Hoạt tính AChE não ● Quy trình: Phương pháp quang phổ Ellmann cộng (1961) - Hỗn hợp phản ứng chứa 100 mM Đệm Kali phosphate, pH 7.5 mM 5,5′-dithiobis nitrobenzoic acid (DTNB) - AChE (từ 40–50 μg protein) ủ trước phút - Thêm 0.8 mM acetylthiocholine iodide (AcSCh) ủ phút 25 °C - Đo độ hấp thu 412 nm anion 5,5′-dithio-bis-acid-nitrobenzoic có màu vàng - Đo lặp lại 2-3 lần hoạt tính enzyme tính theo μmol AcSCh/h/mg protein 22 Mơ hình đánh giá 5.2 In vitro 5.2.1 Hoạt tính AChE não Phương pháp Ellmann: - Sự tạo thành Thiocholine từ phản ứng thủy phân Acetylthiocholine với xúc tác AChE - Đo dung dịch anion màu vàng RS- 412 nm tạo thành từ phản ứng Thiocholine với DTNB Acetylthiocholine AChE Thiocholine + Acetate Thiocholine + RSSR Màu vàng 23 Mơ hình đánh giá 5.2 In vitro 5.2.1 Hoạt tính AChE não ● Kết quả: So với nhóm Control/Saline Nhóm Diabetic/Saline Hoạt tính AChE Tăng đáng kể (P