Luận án nghiên cứu thu nhận, khảo sát cấu trúc và tính chất của exopolysaccharide sinh tổng hợp từ lactobacillus fermentum

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu khoa học độc lập riêng tơi Các số liệu sử dụng phân tích luận án có nguồn gốc rõ ràng, cơng bố theo quy định Các kết nghiên cứu luận án tơi tự tìm hiểu, phân tích cách trung thực, khách quan phù hợp với thực tiễn Việt Nam Các kết chưa công bố nghiên cứu khác Nghiên cứu sinh Trần Thị Ái Luyến i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt BMM C CFU/mL COSY DMSO DPPH EPS EPS-TC13 EPS-TC16 EPS-TC21 EPS-MC3 EtOH FDA Fruc FTF HePS HMBC HoPS HPLC HSQC Gal GalNAc GalT GC-MS GDP Glc Glc-1-P Glc-6-P GlcNAc Tiếng anh tên khoa học Tiếng việt basal minimum medium Môi trường tối ưu Carbon Cacbon colony-forming unit/Ml số lượng tế bào/mL Correlated Spectroscopy Dimethyl sulfoxide 1, 1-diphenyl-2picrylhydrazyl Exopolysaccharide Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC13 Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC16 Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC21 Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum MC3 Ethanol Cồn etylic Food and Drug Administration Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ Fructose fructosyltransferase heteropolysaccharide Polysaccharide phức tạp Heteronuclear multiple - Bond Correlation homopolysaccharide Polysaccharide High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu cao chromatography Heteronuclear SpectroscopyQuantum Coherence galactose N-acetyl-D-galactosamine galactose 1-phosphateuridyltransferase Gas Chromatrography Mass Sắc ký khí ghép khối phổ Spectometry guanosine diphosphate glucose glucose-6-phosphate glucose-1-phosphate N-acetyl-D-glucosamine ii GlcA GRAS GTF La LAB Lac Lb Leu Man-6-P Man-1-P MeOH MRS MTTH N NDP NMR NOESY P PEP-PTS PGM PMM PS Rha S Suc TCA TDP TFA TGP TMS UDP WPC glucuronic acid Generally Recognized As Safe Vi sinh vật an toàn glycosyltransferase Lactococcus Lactic Acid bacteria Vi khuẩn lactic Lactose Lactobacillus Leuconostoc Mannose-6-Phosphate Mannose-1-Phosphate Methanol Man Rogosa Sharpe Mơi trường thích hợp Nitrogen Nitơ diphosphate nucleoside Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy Pediococcus phosphoenolpyruvatephosphotransferase phosphoglucomutase phosphomannomutase Polysaccharide Rhamnose Streptococcus Sucrose trichloroacetic acid tyrosine diphosphate Trifluoroacetic acid TDP-glucose pyrophosphorylase Tetramethylsilan Uridine diphosphate whey protein concentration iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan polysaccharide 1.1.1 Giới thiệu chung polysaccharide 1.1.2 Ứng dụng polysaccharide 1.2 Tổng quan Lactobacillus fermentum 1.3 Tổng quan exopolysaccharide từ vi khuẩn lactic 1.3.1 Khái niệm 1.3.2 Đặc điểm phân loại số đặc tính lý hóa 1.3.3 Tính chất chức ứng dụng 14 1.4 Tình hình nghiên cứu exopolysaccharide từ LAB 20 1.4.1 Về điều kiện nuôi cấy thu nhận EPS .20 1.4.2 Về trình tách chiết tinh chế EPS 23 1.4.3 Về đặc tính hóa lý: khối lượng phân tử, thành phần, liên kết cấu trúc .24 1.4.4 Về tính chất cơng nghệ tác dụng sức khỏe 34 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 3.1 Đối tượng nghiên cứu 37 3.2 Hóa chất, thiết bị dụng cụ .37 2.2.1 Hóa chất 37 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 37 3.3 Phương pháp nghiên cứu .38 2.3.1 Phương pháp xác định mật độ tế bào vi khuẩn phương pháp đo mật độ quang (OD) 38 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy thu nhận sinh khối [6] 38 2.3.3 Phương pháp thu nhận tách EPS 39 2.3.4 Sơ đồ tổng thể phương pháp nghiên cứu cải thiện hiệu suất thu nhận EPS từ số chủng Lb fermentum 40 2.3.5 Xác định hàm lượng EPS phương pháp phenol-sulfuric [37] 43 2.3.6 Xác định hàm lượng nitơ tổng số phương pháp Kjeldahl [5] 44 iv 2.3.7 Phương pháp khảo sát số tính chất có tiềm ứng dụng công nghệ thực phẩm 45 2.3.8 Phương pháp xác định khối lượng phân tử đặc điểm cấu trúc EPS 47 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu .50 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 52 3.1 Kết nghiên cứu cải thiện hiệu suất thu nhận EPS từ số chủng Lb fermentum 52 3.1.1 Kết tuyển chọn số chủng Lb fermentum sinh tổng hợp EPS cao 52 3.1.2 Kết khảo sát ảnh hưởng thành phần mơi trường lên q trình sinh tổng hợp EPS từ chủng Lb fermentum tuyển chọn 54 3.1.3 Ảnh hưởng điều kiện ni cấy đến q trình sinh tổng hợp EPS chủng Lb fermentum TC13, TC16, TC21, MC3 66 3.1.4 Kết khảo sát điều kiện tách EPS từ dịch lên men 82 3.2.1 Khả hòa tan nước 89 3.2.2 Khảo sát khả giữ nước giữ dầu 91 3.2.3 Khả chống oxy hóa 95 3.3 Kết phân tích khối lượng phân tử số đặc điểm cấu trúc EPS sinh tổng hợp từ Lb fermentum MC3 99 3.3.1 Khối lượng phân tử 99 3.3.2 Đặc điểm cấu trúc EPS-MC3 .103 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 128 Kết luận 128 Kiến nghị 130 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CĨ LIÊN QUAN ĐÃ CÔNG BỐ 131 TÀI LIỆU THAM KHẢO 133 PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Tổng quan số điều kiện nuôi cấy nhằm thu nhận EPS cao từ loài Lactobacillus công bố 22 Bảng 1.2 Thông tin cấu trúc phương pháp NMR tương ứng 27 Bảng 1.3 Tổng quan nghiên cứu cấu trúc EPS sinh tổng hợp từ LAB công bố .29 Bảng 1.4 Tổng quan nghiên cứu liên quan đến sức khỏe EPS sinh tổng hợp từ LAB công bố 35 Bảng 2.1 Chương trình nhiệt độ phân tích mẫu thiết bị sắc ký GC-MS 50 Bảng 3.1 Điều kiện thu nhận EPS cao chủng Lb fermentum nghiên cứu luận án .81 Bảng 3.2 Các điều kiện tách EPS từ dịch nuôi cấy thích hợp chủng Lb fermentum luận án 89 Bảng 3.3 Độ hòa tan nước EPS từ chủng Lb fermentum 90 Bảng 3.4 Khả giữ nước EPS từ chủng Lb fermentum 92 Bảng 3.5 Khả giữ dầu EPS từ chủng Lb fermentum 93 Bảng 3.6 Tỷ lệ bắt gốc tự DPPH (%) EPS thu từ chủng Lb fermentum (TC13, TC16, TC21, MC3) 96 Bảng 3.7 Các dẫn xuất monosaccharide thu từ EPS sinh tổng hợp Lb fermentum MC3 103 Bảng 3.8 Tỷ lệ, thành phần (%) monosaccharide cấu trúc EPS sinh tổng hợp Lb fermentum MC3 103 Bảng 3.9 Các dẫn xuất methyl alditol acetate monosaccharide thu liên kết glycoside tương ứng EPS sinh tổng hợp Lb fermentum MC3 110 Bảng 3.10 Độ chuyển dịch hóa học 1H –NMR 13C – NMR EPS-MC3 đo DMSO .118 Bảng 3.11 Các dạng liên kết cấu trúc EPS-MC3 qua phổ NOESY, HMBC 119 Bảng 3.12 Đặc điểm cấu trúc EPS sinh tổng hợp từ chi Lactobacillus công bố EPS-MC3 luận án 123 vi DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc dạng vịng cạnh -pyranose (a) glucose cạnh -furanose (b) fructose Hình 1.2 Hình dạng khuẩn lạc Lb fermentum Hình 1.3 Cấu trúc dạng mạch thẳng (a) mạch nhánh (b) HoPS Hình 1.4 Mơ hình trình sinh tổng hợp glucan fructan Hình 1.5 Sơ đồ phân loại đặc điểm cấu tạo HoPS sinh tổng hợp từ LAB .9 Hình 1.6 Cấu trúc dạng mạch thẳng (a) mạch nhánh (b) HePS 10 Hình 1.7 Sơ đồ trình sinh tổng hợp HePS tế bào LAB 11 Hình 1.8 Cấu tạo UDP-glucose TDP-glucose, TDP-rhamnose UDPglactose 12 Hình 1.9 Sơ đồ phân loại đặc điểm cấu tạo HePS sinh tổng hợp từ LAB 14 Hình 1.10 Sơ đồ biểu diễn tính chất tăng cường sức khỏe EPS từ LAB 15 Hình 2.1 Sơ đồ nuôi cấy thu nhận sinh khối 38 Hình 2.2 Sơ đồ thu nhận tách EPS .39 Hình 2.3 Sơ đồ nghiên cứu khảo sát cải thiện hiệu suất thu nhận EPS 40 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu số tính chất có tiềm ứng dụng công nghệ thực phẩm .45 Hình 2.5 Sơ đồ quy trình xử lý mẫu phân tích GC-MS để xác định liên kết glycoside 48 Hình 2.6 Sơ đồ quy trình xử lý mẫu phân tích GC – MS 49 Hình 3-1 Khả sinh tổng hợp EPS số chủng vi khuẩn lactic 53 Hình 3.2 Ảnh hưởng nguồn carbon nồng độ bổ sung chúng vào môi trường MRS đến khả tổng hợp EPS chủng Lb fermentum 55 Hình 3.3 Ảnh hưởng nguồn N nồng độ bổ sung chúng vào MTTH đến khả tổng hợp EPS chủng Lb fermentum .61 Hình 3.4 Ảnh hưởng mật độ tế bào ni cấy ban đầu lên q trình sinh tổng hợp EPS chủng Lb fermentum 66 Hình 3.5 Ảnh hưởng pH ban đầu lên trình sinh tổng hợp EPS chủng Lb fermentum 69 Hình 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ ni cấy lên trình sinh tổng hợp EPS chủng Lb fermentum 72 vii Hình 3.7 Ảnh hưởng thời gian lên men đến trình sinh tổng hợp EPS chủng Lb fermentum 77 Hình 3.8 Ảnh hưởng nồng độ TCA bổ sung lên khả loại bỏ protein lượng EPS tách từ dịch lên men Lb fermentum TC13 .83 Hình 3.9 Ảnh hưởng nồng độ TCA bổ sung lên khả loại bỏ protein lượng EPS tách từ dịch lên men Lb fermentum TC16 .83 Hình 3.10 Ảnh hưởng nồng độ TCA bổ sung lên khả loại bỏ protein lượng EPS tách từ dịch lên men Lb fermentum TC21 .83 Hình 3.11 Ảnh hưởng nồng độ TCA bổ sung lên khả loại bỏ protein lượng EPS tách từ dịch lên men Lb fermentum MC3 84 Hình 3.12 Ảnh hưởng thể tích ethanol so với dịch đến khả tách EPS 87 Hình 3.13 Ảnh hưởng thời gian tủa ethanol lên khả tách EPS .88 Hình 3.14 Sắc kí đồ khối lượng phân tử EPS-MC3 phương pháp sắc ký thẩm thấu gel 100 Hình 3.15 Sơ đồ xử lý mẫu cho phân tích NMR 111 Hình 3.16 Phổ 1H-NMR EPS-MC3 .112 Hình 3.17 Phổ 13C-NMR EPS-MC3 113 Hình 3.18 Phổ HSQC (a, b, c) EPS-MC3 .116 Hình 3.19 Phổ đồ COSY EPS-MC3 .117 Hình 3020 Phổ đồ HMBC EPS-MC3 .118 Hình 3.21 Phổ đồ NOESY EPS-MC3 119 Hình 3.22 Các đơn vị lặp lại cấu trúc EPS-MC3 thủy phân phần 120 viii MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, khuynh hướng ứng dụng polymer tự nhiên nhiều lĩnh vực tăng lên dẫn đến phát triển nghiên cứu thu nhận exopolysaccharide (EPS) từ vi khuẩn Nhiều vi khuẩn tổng hợp polysaccharide (PS) ngoại bào tiết chúng bên ngồi mơi trường [115] Các PS tách chiết có đa dạng cấu trúc tính chất chức Chính vậy, nguồn EPS ngày sử dụng rộng rãi công nghệ thực phẩm mỹ phẩm Chúng tác nhân làm đặc, ổn định kết cấu, nhũ hóa, tạo gel, Hơn nữa, gần đây, hoạt tính sinh học khác liên quan đến EPS khả chống oxy hóa, chống ung thư, làm giảm cholesterol, hoạt động probiotic nghiên cứu phổ biến [88], [125], [139] … Mặc dù có nhiều đóng góp quan trọng công nghiệp y học EPS từ vi khuẩn tồn nhược điểm suất thu nhận thấp Đây lý khiến khả thương mại hóa EPS từ vi khuẩn nói chung từ vi khuẩn lactic (LAB-Lactic acid bacteria) nói riêng cịn hạn chế Từ LAB "cơng nhận vi sinh vật an toàn” (GRAS-Generally Recognized As Safe), việc cải thiện trình thu nhận, tách chiết EPS coi phương pháp hữu ích để sản xuất EPS đáp ứng phương diện ứng dụng thực phẩm [59] Nhiều chủng LAB biết đến nguồn sản xuất EPS – với tác động liên quan đến việc cải thiện cấu trúc sản phẩm lên men sữa chua, phomat, Bên cạnh đó, nhờ đặc điểm đa dạng cấu trúc an toàn sức khỏe người mà EPS sinh tổng hợp từ vi khuẩn lactic (LAB) quan tâm nhiều so với EPS từ loài khác Nhiều nghiên cứu kết luận rằng, thành phần monosaccharide, vị trí liên kết cấu trúc tính chất có tiềm ứng dụng EPS sinh tổng hợp chủng thuộc LAB khác phụ thuộc vào loại chủng, điều kiện nuôi cấy thành phần môi trường [74], [102], [104], [126],… Như vậy, đa dạng cấu trúc lồi vi khuẩn khác liên quan đến nguồn phân lập vi khuẩn, thành phần chất dinh dưỡng trình lên men điều kiện nuôi cấy thu nhận Sự đa dạng tạo nên ảnh hưởng không nhỏ đến hoạt tính sinh học tính chất chức cơng nghệ thực phẩm Chính vậy, để nâng cao hiệu thu nhận EPS đặc biệt cung cấp số thông tin chi tiết đặc tính cấu trúc EPS sinh tổng hợp từ chủng LAB nói chung số chủng Lactobacillus fermentum nói riêng, chúng tơi thực đề tài “Nghiên cứu thu nhận, khảo sát cấu trúc tính chất exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lactobacillus fermentum” Với đề tài luận án này, xác định được: 1) Điều kiện thu nhận EPS từ số chủng Lb fermentum hiệu nhất; 2) Một số tính chất có tiềm ứng dụng công nghệ thực phẩm; 3) Một số thông tin phân tử lượng, thành phần đường, mối liên kết số EPS tách chiết từ chủng vi khuẩn nghiên cứu Với đặc tính phát hiện, chúng tiền đề cho nghiên cứu ứng dụng y dược, thực phẩm thay cho hợp chất tổng hợp hóa học 94.14 93.98 77.18 73.81 73.15 71.60 71.41 70.60 67.40 67.07 61.54 61.47 40.00 39.83 39.66 39.50 39.33 39.16 38.99 MC3-DMSO-C13CPD Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 11.40 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT DMSO NS 3074 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 sec RG 198.57 DW 16.000 usec DE 6.50 usec TE 302.5 K D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec TD0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 125.7892253 MHz NUC1 13C P1 10.00 usec PLW1 88.00000000 W ======== CHANNEL f2 ======== SFO2 500.2020008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz16 PCPD2 80.00 usec PLW2 22.00000000 W PLW12 0.34375000 W PLW13 0.22000000 W F2 - Processing parameters SI 32768 SF 125.7754500 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.40 200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 ppm 95 94.14 93.98 90 MC3-DMSO-C13CPD 85 80 77.18 75 73.81 73.15 71.60 71.41 70.60 70 67.40 67.07 65 61.54 61.47 ppm MC3-DMSO-COSYGP Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 5000.000 Hz FIDRES 2.441406 Hz AQ 0.2048000 sec RG 142.98 DW 100.000 usec DE 6.50 usec TE 300.9 K D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020000 sec 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2022509 MHz NUC1 1H P0 10.00 usec P1 10.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 3.6 3.8 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 4.0 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.2023 MHz FIDRES 78.125000 Hz SW 9.996 ppm FnMODE QF 4.2 4.4 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000109 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 4.6 4.8 5.0 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2000087 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB MC3-DMSO-COSYGP Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 5000.000 Hz FIDRES 2.441406 Hz AQ 0.2048000 sec RG 142.98 DW 100.000 usec DE 6.50 usec TE 300.9 K D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020000 sec 3.4 3.6 3.8 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2022509 MHz NUC1 1H P0 10.00 usec P1 10.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 4.0 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 4.2 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.2023 MHz FIDRES 78.125000 Hz SW 9.996 ppm FnMODE QF 4.4 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000109 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 4.6 4.8 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 3.2 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2000087 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB MC3-DMSO-COSYGP Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 5000.000 Hz FIDRES 2.441406 Hz AQ 0.2048000 sec RG 142.98 DW 100.000 usec DE 6.50 usec TE 300.9 K D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020000 sec 3.0 3.1 3.2 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2022509 MHz NUC1 1H P0 10.00 usec P1 10.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 3.3 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 3.4 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.2023 MHz FIDRES 78.125000 Hz SW 9.996 ppm FnMODE QF 3.5 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000109 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 3.6 3.7 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2000087 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB MC3-DMSO-COSYGP Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.33 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG cosygpppqf TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 5000.000 Hz FIDRES 2.441406 Hz AQ 0.2048000 sec RG 142.98 DW 100.000 usec DE 6.50 usec TE 300.9 K D0 0.00000300 sec D1 2.00000000 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D13 0.00000400 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00020000 sec 3.20 3.25 3.30 3.35 3.40 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2022509 MHz NUC1 1H P0 10.00 usec P1 10.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 3.45 3.50 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 10.00 % P16 1000.00 usec 3.55 F1 - Acquisition parameters TD 128 SFO1 500.2023 MHz FIDRES 78.125000 Hz SW 9.996 ppm FnMODE QF 3.60 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000109 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 3.65 3.70 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 QF SF 500.2000087 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB MC3-DMSO-HMBC ppm 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 115 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 ppm MC3-DMSO-HMBC ppm 68 70 72 74 76 78 80 82 84 86 88 90 92 94 96 5.1 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4 4.3 4.2 4.1 4.0 98 ppm MC3-DMSO-HMBC ppm 56 58 60 62 64 66 68 70 72 74 76 78 80 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 ppm MC3-DMSO-HSQC ppm 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 100 ppm MC3-DMSO-HSQC ppm 92.0 92.5 93.0 93.5 94.0 94.5 95.0 95.5 96.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 ppm MC3-DMSO-HSQC ppm 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 3.2 3.1 3.0 ppm MC3-DMSO-NOESY Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.53 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG noesygpphpp TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 6009.615 Hz FIDRES 2.934382 Hz AQ 0.1703936 sec RG 89.63 DW 83.200 usec DE 6.50 usec TE 300.8 K D0 0.00007057 sec D1 1.98156798 sec D8 0.44999999 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00016660 sec 2.0 2.5 3.0 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2017507 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec P2 20.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 3.5 4.0 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 40.00 % P16 1000.00 usec 4.5 F1 - Acquisition parameters TD 256 SFO1 500.2018 MHz FIDRES 46.893757 Hz SW 12.000 ppm FnMODE States-TPPI 5.0 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000619 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 5.5 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 States-TPPI SF 500.2000619 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB MC3-DMSO-NOESY Current Data Parameters NAME 110LUYEN_MC3 EXPNO PROCNO ppm F2 - Acquisition Parameters Date_ 20180425 Time 13.53 INSTRUM spect PROBHD mm PABBO BB/ PULPROG noesygpphpp TD 2048 SOLVENT DMSO NS DS SWH 6009.615 Hz FIDRES 2.934382 Hz AQ 0.1703936 sec RG 89.63 DW 83.200 usec DE 6.50 usec TE 300.8 K D0 0.00007057 sec D1 1.98156798 sec D8 0.44999999 sec D11 0.03000000 sec D12 0.00002000 sec D16 0.00020000 sec IN0 0.00016660 sec 3.0 3.2 3.4 3.6 ======== CHANNEL f1 ======== SFO1 500.2017507 MHz NUC1 1H P1 10.00 usec P2 20.00 usec P17 2500.00 usec PLW1 22.00000000 W PLW10 3.25440001 W 3.8 4.0 ====== GRADIENT CHANNEL ===== GPNAM[1] SMSQ10.100 GPZ1 40.00 % P16 1000.00 usec 4.2 F1 - Acquisition parameters TD 256 SFO1 500.2018 MHz FIDRES 46.893757 Hz SW 12.000 ppm FnMODE States-TPPI 4.4 F2 - Processing parameters SI 1024 SF 500.2000619 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB PC 1.00 4.6 4.8 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 ppm F1 - Processing parameters SI 1024 MC2 States-TPPI SF 500.2000619 MHz WDW QSINE SSB LB Hz GB Phụ lục 10: Một số hình ảnh thao tác trình nghiên cứu xix ... 1-diphenyl-2picrylhydrazyl Exopolysaccharide Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC13 Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC16 Exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lb fermentum TC21 Exopolysaccharide. .. Lactobacillus fermentum nói riêng, chúng tơi thực đề tài ? ?Nghiên cứu thu nhận, khảo sát cấu trúc tính chất exopolysaccharide sinh tổng hợp từ Lactobacillus fermentum? ?? Với đề tài luận án này, xác... tương ứng 27 Bảng 1.3 Tổng quan nghiên cứu cấu trúc EPS sinh tổng hợp từ LAB công bố .29 Bảng 1.4 Tổng quan nghiên cứu liên quan đến sức khỏe EPS sinh tổng hợp từ LAB công bố