MỤC LỤC PHẦN 1 MỞ ĐẦU 1 1 Lý do chọn đề tài 1 2 Mục đích của nghiên cứu 2 3 Đối tượng nghiên cứu 2 4 Nội dung nghiên cứu 3 5 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn 3 PHẦN 2 NỘI DUNG 4 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LI[.]
MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn PHẦN NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Màng VLC tạo từ Gluconacetobacter xylinus 1.1.1 Vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus 1.1.1.1.Cây phân loại vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus 1.1.1.2 Đặc điểm sinh học Gluconacetobacter xylinus 1.1.2 Cellulose vi khuẩn ( CVK ) 1.1.3 Môi trường nuôi cấy G xylinus 1.2 Thuốc Dicofenac natri 1.2.1.Công thức phân tử: C14H10Cl2NNaO2 1.2.2 Tính chất 1.2.3 Tác dụng dược lí chế tác dụng 1.2.4 Dược động học thuốc 1.2.5 Phân bố - chuyển hoá 1.2.6 Thải trừ 1.2.7 Chỉ định chống định 1.3 Lịch sử nghiên cứu vấn đề CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.1.1 Chủng vi khuẩn 2.1.2 Nguyên liệu hóa chất 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 2.1.4 Môi trường lên men thu vật liệu CVK 10 2.1.5 Môi trường pH dùng để xác định lượng thuốc giải phóng thơng qua hệ thống thiết kế 12 2.2 Phương pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Phương pháp dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac natri 13 2.2.2 Tạo vật liệu BC nạp thuốc 14 2.2.3 Nghiên cứu giải phóng thuốc từ vật liệu CVK nạp thuốc 15 2.2.4 Phương pháp thống kê xử lý kết 16 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 17 3.1 Kết thu màng CVK 17 3.1.1 Màng CVK lên men từ môi trường chuẩn 17 3.1.2 Màng CVK nạp thuốc Diclofenac natri 18 3.2 Xác định lượng thuốc Diclofenac giải phóng khỏi màng CVK 18 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Môi trường lên men tạo vật liệu CVK 10 Bảng 2.2 Bảng xây dựng đường chuẩn 13 Bảng 3.1 Khối lượng thuốc hấp thụ vào màng .18 Bảng 3.2 Giá trị OD thu thời điểm khảo sát tiến hành màng giữ nguyên với loại môi trường giải phóng thuốc Diclofenac 20 Bảng 3.3 Giá trị OD thu thời điểm khảo sát tiến hành màng ép 50 % với loại mơi trường giải phóng thuốc Diclofenac 21 Bảng 3.4 Tỉ lệ giải phóng thuốc (%) màng chưa ép môi trường pH khác khoảng thời gian khác (n = 3) 24 Bảng 3.5 Tỉ lệ giải phóng thuốc (%) màng ép 50% môi trường pH khác khoảng thời gian khác (n = 3) 25 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Quy trình tinh chế màng CVK .11 Hình 2.2 Phương trình đường chuẩn Diclofenac OD278 nm .14 Hình 3.1 Màng CVK thu nuôi cấy MTC sau ngày 17 Hình 3.2 Màng cho vào dung dịch đệm dùng máy khuấy từ gia nhiệt 19 Hình 3.3 Mẫu rút để đo OD sau khoảng thời gian 19 Hình 3.4 Biểu đồ thể khác mật độ quang lượng thuốc giải phóng loại màng nguyên khác môi trường khảo sát 23 Hình 3.5 Biểu đồ thể khác mật độ quang lượng thuốc giải phóng loại màng ép 50% khác môi trường khảo sát 23 PHẦN MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Một bệnh gây nhức nhối, đau đớn cho người bệnh không kể đến bệnh viêm khớp Căn bệnh xảy không người già mà xuất người trẻ tuổi Nguyên nhân gây bệnh người lớn tuổi thường thối hóa khớp, cịn hệ trẻ tuổi nguyên nhân chủ yếu viêm đa khớp dạng thấp bệnh khớp tự miễn khác Vậy vấn đề đặt chữa trị bệnh này, liệu phương pháp có điều trị dứt điểm bệnh hay khơng Hiện nay, chưa có biện pháp chữa trị triệt để bệnh này, dừng mức giảm đau, cố gắng giúp hoạt động khớp trở lại gần giống mức bình thường, hạn chế bệnh tái hát nguy hiểm biến dạng khớp Mặt khớp xương có lớp sụn trơn, bóng đàn hồi, có tác dụng làm giảm cọ xát hai đầu xương Đây đối tượng để viêm xương khớp tác động, làm lớp sụn mòn đi, di chuyển hai đầu xương cọ sát vào gây đau đớn cho người bị mắc bệnh Nếu không điều trị kị thời dẫn đến việc sụn bị há hủy, hai đầu xương trực tiếp ma sát với gây khớp bị biến dạng xương bị dịch chuyển khỏi vị trí ban đầu Các vị trí thường hay bị viêm xương khớp đầu gối, bàn tay, đặc biệt xương cột sống Đối tượng cần ý dễ bị viêm khớp tuổi trung niên, người phải lao động nặng nhọc người có đặc điểm nghề nghiệp ngồi im chỗ, di chuyển[10] Do để lại hậu vô nghiêm trọng ảnh hưởng trực tiếp đến sinh hoạt thường ngày nên mắc chứng viêm khớp cần điều trị sớm tốt Một thuốc để điều trị viêm xương khớp phổ biến Diclofenac natri Thuốc Diclofenac biệt dược thuộc dẫn chất acid phenylacetic có khả chống viêm khơng steroid với công dụng hiệu chống viêm, giảm đau giảm sốt mạnh Thuốc Dicofenac sau sử dụng dung nạp dễ dàng thơng qua đường tiêu hóa hấp thụ cách nhanh chóng sử dụng thuốc vào lúc đói Trong huyết tương nồng độ đạt mức tối đa sau tiếng hấp thu, nồng độ dịch bao hoạt dịch sau sử dụng thuốc từ đến tiếng đạt mức cao nhất[] Màng cellulose vi khuẩn (CVK) tạo từ vi khuẩn Gluconacerobacter xylinus có cấu trúc hóa học gần giống với cellulose thực vật có số tính chất ưu việt [1] khơng có kết hợp hợp chất cao phân tử ligin, hemicellulose, peptin sáp nến,… mà cấu thành từ sợi microfibrin, từ tạo nên bó sợi song song cấu thành mạng lưới cellulose với vượt bậc cellulose thực vật Ngoài CVK bền, sức căng lớn cịn mạng lưới polymer sinh học dẻo dai, có khả giữ nước lớn đặc biệt màng kháng khuẩn[2] Nhờ ưu điểm mà màng CVK nhà khoa học quan tâm coi nguồn nguyên liệu nhiều lĩnh vực khác màng bọc thực phẩm, mặt nạ dưỡng da, màng phân tách trình xử lí nước, lĩnh vực y học, màng CVK nghiên cứu ứng dụng trình điều trị bỏng, loét da,…[3] đáng ý hệ thống kiểm soát vận chuyển thuốc, kết cho thấy màng CVK giúp thuốc giải phóng cách kéo dài làm tăng hiệu sử dụng thuốc Với mục đích nghiên cứu để bổ sung dẫn chứng khả giải phóng thuốc Diclofenac natri vật liệu CVK, chọn đề tài: “Nghiên cứu giải phóng thuốc vật liệu cellulose nạp diclofenac natri tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy mơi trường chuẩn” Mục đích nghiên cứu Khảo sát Diclofenac natri giải phóng tốt điều kiện từ loại vật liệu CVK tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng Celluluse vi khuẩn lên men từ môi trường chuẩn Phạm vi nghiên cứu: thí nghiệm tiến hành phịng thí nghiệm Địa điểm nghiên cứu: Viện Nghiên cứu Khoa học Ứng dụng trường Đại học Sư phạm Hà Nội Nội dung nghiên cứu Tạo màng cellulose vi khuẩn tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn, xây dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac natri, tiến hành hấp thụ thuốc vào màng cellulose vi khuẩn, nghiên cứu giải phóng thuốc từ màng hấp thụ thuốc, tính tốn số liệu xử lý thống kê Ý nghĩa khoa học thực tiễn Ý nghĩa khoa học: + Thêm để bổ sung dẫn chứng khả giải phóng thuốc Diclofenac natri vật liệu CVK + Từ thực nghiệm tìm thời gian thuốc diclofenac giải phóng hiệu Ý nghĩa thực tiễn: + Hồn thiện sơ đồ trình tạo màng CVK từ G Xylinus + Sử dụng thuốc diclofenac cách hiệu PHẦN NỘI DUNG CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Màng VLC tạo từ Gluconacetobacter xylinus 1.1.1 Vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus 1.1.1.1.Cây phân loại vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus Tên: Gluconacetobacter xylinus (G xylinus) Chi: Gluconacetobacter Họ: Acetobacteraceae 1.1.1.2 Đặc điểm sinh học Gluconacetobacter xylinus G xylinus thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, hiếu khí bắt buộc, hố dị dưỡng Chúng thường tìm thấy giấm, dịch rượu, nước ép hoa quả, đất G xylinus có dạng trực khuẩn, kích thước khoảng μm, đứng riêng lẻ xếp thành chuỗi, khơng có khả di động Bên ngồi tế bào có lớp màng nhày bao bọc, mà cellulose chất lớp màng nhày Khi thử thuốc thử Iot acid sunfuric dạng dung dịch bắt màu xanh Ở điều kiện thích hợp, vi khuẩn phát triển mạnh, điều kiện tích lũy nhiều acid acetic hoạt động vi khuẩn bị ức chế[4] 1.1.2 Cellulose vi khuẩn ( CVK ) Năm 1886, A.J Brown lần trình bày tổng hợp cellulose vi khuẩn Gluconacetobacter Tuy nhiên đến nửa sau kỷ XX, cellulose vi khuẩn thực quan tâm nghiên cứu Cấu trúc cellulose vi khuẩn : Cellulose vi khuẩn đựợc cấu tạo chuỗi β-1,4 glucopyranose mạch thẳng đươc tổng hợp từ số loài vi khuẩn, đặc biệt tự nhiên phải kể đến Gluconacetobacter.[9] Khi nuôi cấy Gluconacetobacter môi trường lỏng, điều kiện tĩnh hình thành nên lớp màng nhìn giống thạch dừa, thực chất tế bào vi khuẩn liên kết với cellulose Cellulose cấu trúc màng CVK có thành phần hóa học tương tự cellulose thực vật cấu trúc đặc tính lại khác xa nhau, đồng thời khả kết tinh cao (khoảng 60%), độ polymer hóa lớn nên màng CVK có độ bền học cao, khả thấm hút nước lớn Những đặc tính ưu việt hẳn so với cellulose thực vật cellulose là: độ chịu lực, tính đàn hồi, độ bền học Quan sát kính hiển vi điện tử thấy đường kính sợi cellulose vi khuẩn 1/100 so với sợi cellulose tế bào thực vật [5] Cellulose vi khuẩn cellulose sinh học tổng hợp mà khơng gắn lignin, dễ dàng bị phân hủy số nhóm vi sinh vật Vì vậy, cellulose vi khuẩn xem nguồn vật liệu có nhiều ưu tương lai 1.1.3 Môi trường nuôi cấy G xylinus G xylinus sinh trưởng phát triển nhanh môi trường có đầy đủ chất dinh dưỡng thiết yếu, khơng thể khơng kể đến đường G xylinus sử dụng tương đối nhiều đường giữ vai trị quan trọng q trình sinh tổng hợp màng CVK, vi khuẩn G xylinus nuôi cấy môi trường lỏng điều kiện phịng thí nghiệm, sau đến 12 ngày tạo nên lớp màng CVK màu trắng thạch dừa phía bình ni cấy, ta dễ lấy chúng khỏi bình 1.2 Thuốc Dicofenac natri 1.2.1.Công thức phân tử: C14H10Cl2NNaO2 Diclofenac natri natri 2-[(2,6-diclorophenyl)amino]phenyl]acetat, phải chứa từ 99,0 đến 101,0% C14H10Cl2 NNaO2, tính theo chế phẩm làm khơ[12] * Khối lượng phân tử: 296,148g mol *Loại thuốc: Thuốc chống viêm không steroid *Chế phẩm: Viên nén, thuốc tiêm, thuốc đạn, thuốc nhỏ mắt, thuốc gel xoa ngồi 1.2.2 Tính chất Bột kết tinh trắng vàng, hút ẩm nhẹ Dễ tan methanol, tan ethanol 96%, tan nước, khó tan aceton 1.2.3 Tác dụng dược lí chế tác dụng Diclofenac, dẫn chất acid phenylacetic thuốc chống viêm không steroid Thuốc có tác dụng chống viêm, giảm đau giảm sốt mạnh Diclofenac chất ức chế mạnh hoạt tính cyclooxygenase, làm giảm đáng kể tạo thành prostaglandin, prostacyclin thromboxan chất trung gian q trình viêm Diclofenac điều hịa đường lipoxygenase kết tụ tiểu cầu Giống thuốc chống viêm không steroid khác, diclofenac gây hại đường tiêu hóa giảm tổng hợp prostaglandin dẫn đến ức chế tạo mucin (chất có tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa) Prostaglandin có vai trị trì tưới máu thận Các thuốc chống viêm không steroid ức chế tổng hợp prostaglandin nên gây viêm thận kẽ, viêm cầu thận, hoại tử nhú hội chứng thận hư đặc biệt người bị bệnh thận suy tim mạn tính Với người bệnh này, thuốc chống viêm khơng steroid làm tăng suy thận cấp suy tim cấp [6] Diclofenac hấp thu dễ dàng qua đường tiêu hóa sau uống Thuốc hấp thu nhanh uống lúc đói Diclofenac gắn nhiều với protein huyết tương, chủ yếu với albumin (99%) Khoảng 50% liều uống chuyển hóa qua gan lần đầu sinh khả dụng máu tuần hoàn xấp xỉ 50% sinh khả dụng liều tiêm tĩnh mạch Nồng độ thuốc tối đa huyết tương xuất sau uống, nồng độ dịch bao hoạt dịch đạt mức cao sau uống từ đến Tác dụng thuốc xuất 20 - 30 phút sau tiêm bắp, 30 - 60 phút sau đặt thuốc vào trực tràng, 60 - 120 phút sau uống Nửa đời huyết tương khoảng - Nửa đời thải trừ khỏi dịch bao hoạt dịch - Xấp xỉ 60% liều dùng thải qua thận dạng chất chuyển hóa cịn phần hoạt tính 1% dạng thuốc nguyên vẹn; phần lại thải qua mật phân Hấp thu, chuyển hóa đào thải có phụ thuộc vào tuổi hay khơng cịn xem xét Nếu liều lượng khoảng cách R% = 𝐶𝑡×𝑉1+∑𝑖=𝑛−1 𝐶𝑖×𝑉2 𝑖=1 𝑚 ×100% (3) Trong đó: R : Tỉ lệ giải phóng thuốc (%) Ct: Nồng độ Diclofenac dung dịch thời điểm t V1: Thể tích dung dịch đệm giá trị pH khác n: Số lượng mẫu lấy từ dịch giải phóng V2: Thể tích dung dịch đệm thêm vào 2.2.4 Phương pháp thống kê xử lý kết Sử dụng hần mềm Excel 2010, số liệu nghiên cứu biểu diễn dạng số trung bình ± độ lệch chuẩn Số trung bình cộng giá trị trung bình lần thí nghiệm làm lặp lại Những khác biệt coi có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 16 ... tài: ? ?Nghiên cứu giải phóng thuốc vật liệu cellulose nạp diclofenac natri tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn? ?? Mục đích nghiên cứu Khảo sát Diclofenac natri giải phóng. .. pháp nghiên cứu 12 2.2.1 Phương pháp dựng đường chuẩn thuốc Diclofenac natri 13 2.2.2 Tạo vật liệu BC nạp thuốc 14 2.2.3 Nghiên cứu giải phóng thuốc từ vật liệu CVK nạp thuốc. .. phóng tốt điều kiện từ loại vật liệu CVK tạo từ Gluconacetobacter xylinus nuôi cấy môi trường chuẩn Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: khả giải phóng thuốc Diclofenac natri màng Celluluse