Biện pháp tăng sinh khối rễ tơ cây đan sâm

MỤC LỤC MỤC LỤC 1 PhẦn 1. Lý do chỌn đỀ tài 2 PhẦn 2. TỔNG quan 3 I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1. Đan Sâm 3 2. Cơ sở lý thuyết 3 II. ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI 3 PhẦn 3. Nghiên cỨu và kẾt quẢ 4 I. PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 4 1. Phương pháp nghiên cứu 4 2. Nội dung nghiên cứu 4 II. KẾT QUẢ 7 1. Ảnh hưởng của thành phần môi trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dòng A5.14 7 2. Ảnh hưởng của trạng thái môi trường đến sự tăng sinh khối rễ tơ đan sâm 7 3. Ảnh hưởng của một số chất elicitor đến sự tăng sinh khối rễ tơ và sự tổng hợp hoạt chất mục tiêu 9 4. Ảnh hưởng của dạng bình nuôi cấy đến sự tăng sinh khối rễ tơ 11 III. HưỚNg phát triỂn 12 PhẦn 4. KẾt luẬn 13 I. KẾT LUẬN 13 II. Ý NGHĨ CỦA ĐỀ TÀI 13 Tài liỆu tham khẢo 14

SỞ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO HÀ NỘI TRƯỜNG THPT CHUYÊN HÀ NỘI - AMSTERDAM QUẬN CẦU GIẤY – THÀNH PHỐ HÀ NỘI ************** ĐỀ TÀI DỰ THI KHOA HỌC, KỸ THUẬT DÀNH CHO HỌC SINH TRUNG HỌC CẤP THÀNH PHỐ LẦN THỨ TƯ (NĂM HỌC 2014 - 2015) Tên đề tài: NGHIÊN CỨU BIỆN PHÁP TĂNG SINH KHỐI RỄ TƠ CÂY ĐAN SÂM (SALVIA MILTIORRHIZA BUNGE) PHỤC VỤ NGÀNH CƠNG NGHIỆP DƯỢC Lĩnh vực: Cơng nghệ sinh học NGƯỜI HƯỚNG DẪN TÁC GIẢ: GV Trần Thu Hương Đinh Thục Anh (Nhóm trưởng) - Lớp 11 Sinh – Trường THPT Chuyên HN – Amsterdam THPT Chuyên HN – Amsterdam PGS.TS Nguyễn Thị Phương Thảo Nguyễn Minh Châu – Lớp 11 Sinh – Học viện Nông nghiệp Việt Nam THPT Chuyên HN – Amsterdam Hà Nội, tháng 12 năm 2014 MỤC LỤC MỤC LỤC PHẦN LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI PHẦN TỔNG QUAN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 Đan Sâm Cơ sở lý thuyết II ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI PHẦN NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ I PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .4 Phương pháp nghiên cứu .4 Nội dung nghiên cứu .4 II KẾT QUẢ .7 Ảnh hưởng thành phần môi trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dòng A5.14 .7 Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm Ảnh hưởng số chất elicitor đến tăng sinh khối rễ tơ tổng hợp hoạt chất mục tiêu Ảnh hưởng dạng bình ni cấy đến tăng sinh khối rễ tơ 11 III HƯỚNG PHÁT TRIỂN 12 PHẦN KẾT LUẬN .13 I KẾT LUẬN 13 II Ý NGHĨ CỦA ĐỀ TÀI 13 Tài liỆu tham khẢo 14 PHẦN LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Cùng song song với phát triển đời sống đại xói mịn nhiễm mơi trường người, kèm xuất nhiều loại bệnh, đáng quan ngại bệnh nan y liên quan đến tim mạch Xưa có câu “Nhất vị đan sâm, cộng đồng tứ vật thang “ Nghĩa vị đan bốn vị: đơn quy, địa hoàng, xuyên khung, bạc thược – vốn thuốc huyết kinh điển Đơng y Bên cạnh đó, nghiên cứu dược lý đại cho thấy Đan Sâm đặc biệt tốt cho tim mạch Ở Việt Nam, Đan Sâm phải nhập gần 100% từ Trung Quốc nên giá trị loài trở nên lớn kèm theo rủi ro, sai phạm trình sản xuất vận chuyển khơng kiểm sốt chất lượng sản phẩm, nhiễm kim loại nặng, dư lượng thuốc trừ sâu, bị thay loại thảo mộc khác thuốc thảo dược Trung Quốc Nhưng để nuôi trồng khai thác tự nhiên phải tới hai, thêm vào chịu ảnh hưởng thời tiết, loại dịch bệnh, ô nhiễm môi trường việc quỹ đất dành cho việc phát triển dược liệu ngày bị thi hẹp, cạnh tranh từ ngành trồng khác dẫn đến số lượng thành phẩm thu không đáp ứng đủ nhu cầu Với nhiều khó khăn nêu trên, việc đưa kĩ thuật công nghệ sinh học nuôi cấy rễ bất định, rễ tơ… vào sản xuất, thu nhận hợp chất có hoạt tính cao nghiên cứu, thử nghiệm rộng rãi Các nhà khoa học Việt Nam nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống vơ tính sâm Ngọc Linh, rút ngắn thời gian trồng mà có đầy đủ lượng hoạt chất saponin thân, củ, rễ… thu hoạch tự nhiên.Vậy không thay cho phương pháp truyền thống nhiều rủi ro cácg áp dụng kỹ thuật công nghệ sinh học vào sản xuất hợp chất thứ cấp chất lượng cao? Dù địi hỏi chi phí ban đầu đội ngũ kỹ thuật viên trình độ cao chìa khóa mở cánh cửa công nghiệp dược liệu tương lai Phương pháp nuôi cấy rễ tơ với ưu điểm vượt bậc hứa hẹn hướng đầy triển vọng Vậy làm để tăng sinh khối rễ tơ đan sâm nuôi cấy intro để thu hợp chất có hoạt tính dược liệu cao ? Với lý trên, chúng em tiến hành đề tài: “Nghiên cứu biện pháp tăng sinh khối rễ tơ đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) phục vụ ngành công nghiệp dược.” PHẦN TỔNG QUAN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Đan Sâm Đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) thuốc quý y học cổ truyền Hơn 80 hợp chất khác xác định đan sâm, 50 số chất hòa tan nước, 30 chất lại chất tan lipit Các thành phần tan lipit hợp chất diterpene thuộc nhóm “tanshinones”, hai hợp chất quan trọng tanshinone IIA cryptotanshinone Các thành phần hòa tan nước gồm nhiều axit polyphenolic bao gồm axit salvianolic, aldehyde protocatechuic acid, danshensu (axit salvianic A) Hợp chất đáng ý khác beta- sitosterol, axit ursolic, baicalin, Vitamin E Hoạt tính dược lý đan sâm gồm có: hoạt động chống vi khuẩn hoạt động hỗ trợ, bảo vệ tim mạch, hoạt tính kháng viêm, cảm ứng q trình apoptosis hoạt động chống ung thư, hoạt tính bảo vệ thần kinh, hoạt động chống oxi hóa, bảo vệ chống lại chứng thiếu máu cục não tim tưới máu lại Nhu cầu dược liệu đan sâm hai thập kỷ gần gia tăng nhanh chóng, từ 4.500 tấn/ năm vào năm 1998 số lên tới 15.000 tấn/năm Tại Việt Nam, dược liệu đan sâm phải nhập 100% từ Trung Quốc Cơ sở lý thuyết Agrobacterium rhizogenes (tên cũ Phytomonas rhizogenes) định danh lần cách đâu 70 năm, vi khuẩn đất, hỉnh que gram âm, thuộc chi Agrobacterium, tác nhân gây bệnh thực vật – hội chứng tạo rễ tơ Rễ tơ tạo chuyển gen sử dụng hệ thống vector tự nhiên từ tác nhân bệnh - Agrobacterium rhizogenes vào tế bào thực vật Rễ tơ đặc trưng phát triển nhanh, không hướng đất, không phụ thuộc vào chất điều hòa tăng trưởng ngoại sinh, bền vững mặt di truyền Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tạo rễ tơ: độ tuổi cây, loại mô, loại cây, chủng vi sinh vật, thời gian đồng nuôi cấy, thời gian ngâm mẫu II ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI - Phát nhân tố ảnh hưởng đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm - Tạo sở khoa học đánh giá tính dược liệu rễ đan sâm - Sử dụng nguyên vật liệu dễ kiếm, giá thành không cao để phục vụ mục đích nghiên cứu làm thí nghiệm PHẦN NGHIÊN CỨU VÀ KẾT QUẢ I PHƯƠNG PHÁP VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Phương pháp nghiên cứu  Phương pháp nhân nuôi rễ tơ Rễ tơ nuôi cấy môi trường (MS, B5) với trạng thái môi trường khác (đặc, lỏng, bán lỏng phân lớp) có bổ sung chất điều tiết sinh trưởng yếu tố elicitor khác để khảo sát khả tăng trưởng tích lũy hoạt chất mục tiêu rễ tơ đan sâm Môi trường đặc môi trường chứa 0,7 % agar, môi trường bán lỏng chứa 0,35 % agar Môi trường phân lớp mơi trường có pha đặc (25 ml) pha lỏng (25 ml) Môi trường nuôi cấy điểu chỉnh pH = 5,8 trước hấp khử trùng nhiệt độ 1210C 20 phút, 1,1 atm Điều kiện nuôi cấy in vitro: 14h sáng, cường độ ánh sáng 2000-2500 lux, nhiệt độ 25 ± 20C  Phương pháp xác định khối lượng rễ khô Rễ tơ sau thu sinh khối sấy nhiệt độ 45 0C đến khối lượng không đổi để xác khối lượng rễ khô (Ge cs., 2005)  Phương pháp phân tích hoạt chất mục tiêu Các hoạt chất mục tiêu (Crytotanshinone, Tanshinone I, Tanshinone IIA) phân tích phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC)  Phương pháp bố trí thí nghiệm xử lý số liệu Các thí nghiệm nhân bố trí nhắc lại lần công thức, mồi lần 10-20 mẫu tùy thí nghiệm Các tiêu theo dõi đo đếm sau tuần Số liệu xử lý thống kê theo chương trình Excel IRRISTAT 5.0 Nội dung nghiên cứu Nôi dụng Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố môi trường nuôi cấy đến tăng sinh khối hàm lượng hoạt chất mục tiêu Thí nghiệm Ảnh hưởng thành phần mơi trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dịng A5.14 CTTN Môi trường CT1 MS CT2 B5 Thành phần môi trường MS B5 theo bảng sau: Bảng Thành phần môi trường MS B5 Thành phần Môi trường (Mg/l) Murashige Skoog (MS) Gamborg (B5) Khoáng đa lượng NH4NO3 1650 - NH4SO4 - 134 CaCl2.2H2O 332,2 150 MgSO4.7H2O 370 250 KNO3 1900 2500 KH2PO4 170 - NaH2PO4 - 130,5 Khoáng vi lượng H3PO3 6,2 3,0 CoCl2.6H2O 0,025 0,025 CuSO4.5H2O 0,025 0,025 Na2EDTA 37,3 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 27,8 MnSO4.H2O 16,9 10,0 KI 0,83 0,75 Na2MoO4.2H2O 0,25 0,25 ZnSO4.7H2O 2,0 8,6 Chất hữu Myo-inositol 100 100 Glycine 2,0 - Acid nicotinic 0,5 1,0 B1 0,5 0,1 B6 0,1 10,0 Nội dung Nghiên cứu sản xuất sinh khối rễ tơ số hệ thống ni cấy khác Thí nghiệm Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm CTTN Trạng thái môi trường CT1 Đặc CT2 Bán Lỏng CT3 Lỏng, tĩnh CT4 Phân lớp Thí nghiệm Ảnh hưởng số yếu tố elicitor đến tăng sinh khối rễ tơ tổng hợp hoạt chất mục tiêu Công thức Elicitor CT1 Đối chứng (B5) CT2 B5 + 100 mg/l YE + 50 g/l Sorbitol CT3 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM Salicylic acid CT4 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM Methyl Jasmonate CT5 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM ABA Thí nghiệm Ảnh hưởng dạng bình ni cấy đến tăng sinh khối rễ tơ Cơng thức Dạng bình ni cấy CT1 Bình trụ CT2 Bình tam giác CT3 Bình chữ nhật CT4 Túi nilon II KẾT QUẢ Ảnh hưởng thành phần mơi trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dịng A5.14 Trong số dòng rễ tơ cảm ứng thành cơng, dịng rễ tơ A5.14 có tăng sinh khối nhanh, ổn định môi trường nuôi cấy không bổ sung chất điều tiết sinh trưởng nên sử dụng làm vật liệu nuôi cấy hai môi trường MS B5 đặc Tốc độ tăng trưởng rễ tơ môi trường B5 cao so với mơi trường MS (Hình 1A, B) Từ 0,57 gram rễ nuôi cấy môi trường B5, sau tuần, khối lượng rễ tăng 7,67 lần, đạt 4,34 gram khối lượng rễ tươi 0,373 gram khối lượng rễ khô Trong đó, khối lượng rễ tăng mơi trường MS 5,96 lần, đạt 3,25 gram khối lượng tươi 0,297 gram khối lượng khô từ 0,55 gram rễ ban đầu (Bảng 2) Bảng Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh khối rễ tơ đan sâm dịng A5.14 sau tuần ni cấy Mơi trường Khối lượng rễ ban đầu (gram) Khối lượng rễ tươi sau tuần (gram) Khối lượng rễ tăng Khối lượng rễ khô (lần) (gram) MS 0,55 3,25 5,96 0,297 B5 0,57 4,34 7,67 0,373 Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm Trong bốn trạng thái môi trường thử nghiệm gồm đặc; bán lỏng; lỏng nuôi cấy phân lớp với 25 ml môi trường đặc dưới, 25 ml môi trường lỏng trên, rễ tơ môi trường đặc cho tốc độ tăng trưởng cao nhất, theo sau môi trường bán lỏng; lỏng, tĩnh phân lớp với khối lượng rễ tăng 7,67; 3,67; 3,08 2,83 lần so với khối lượng rễ ban đầu sau tuần ni cấy (Bảng 3) Về mặt hình thái, rễ đan sâm mơi trường đặc có màu vàng, trắng lại có xu hướng hóa đen mơi trường bán lỏng, lỏng phân lớp (Hình 1B, C, D, E) Bảng Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dòng A5.14 sau tuần nuôi cấy Trạng thái môi trường Khối lượng rễ Khối lượng rễ Khối lượng rễ Khối lượng rễ ban đầu tươi sau tăng (lần) khô (gram) (gram) tuần (gram) Đặc 0,57 4,34 7,67 0,373 Bán lỏng 0,69 2,53 3,67 0,14 Lỏng, tĩnh 0,73 2,25 3,08 0,11 Phân lớp 0,77 2,18 2,83 0,11 Hsia cs (2007) khảo sát ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đặc lỏng, lắc 100 vòng/phút đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm nhận thấy rễ tơ nuôi cấy môi trường lỏng, lắc cho khối lượng tươi cao gấp lần và khối lượng khô cao gấp lần so với rễ tơ nuôi cấy môi trường đặc Tuy nhiên nghiên cứu này, môi trường đặc cho hiệu nuôi cấy rễ tơ đan sâm cao so với ba phương thức ni cấy cịn lại ni cấy mơi trường bán lỏng; lỏng, tĩnh; rễ tơ đan sâm ngập chìm mơi trường, kết tạo nghèo thống khí, làm mẫu rễ bị chết, xảy tượng trương nước làm ảnh hưởng đến tốc độ tăng trưởng rễ tơ đan sâm Mơi trường đặc thích hợp cho nhân nuôi sinh khối rễ tơ điều kiện hạn chế trang thiết bị mà đảm bảo tăng sinh khối rễ cao Hình Rễ tơ đan sâm sau tuần nuôi cấy môi trường MS đặc (A), B5 đặc (B), B5 bán lỏng (C), B5 lỏng (D), B5 phân lớp (E) Ảnh hưởng số yếu tố elicitor đến tăng sinh khối rễ tơ tổng hợp hoạt chất mục tiêu Thí nghiệm tiến hành điều kiện tốt thu từ thí nghiệm thí nghiệm bổ sung elicitor vào môi trường nuôi cấy sau tuần nuôi cấy Sau ngày bổ sung elicitor thu kết bảng bảng Bảng Ảnh hưởng yếu tố elicitor đến sinh khối rễ tơ đan sâm Khối lượng rễ ban đầu (g) Khối lượng rễ tươi sau tuần + ngày bổ sung elicitor (g) 0.68 4.85 7.13 0.35 B5 + 100 mg/l YE + 50 g/l 0.67 Sorbitol 4.94 7.37 0.36 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM 0.70 Salicylic acid 6,03 8,61 0.37 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM 0.62 Methyl Jasmonate 5.22 8.42 0.36 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM 0.64 ABA 5.54 8.66 0.38 Công thức Đối chứng (B5) Khối rễ lượng tăng (lần) Khối lượng rễ khô (g) Từ bảng kết cho thấy rễ mơi trường có bổ sung elicitor cho sinh khối lớn so với rễ mẫu đối chứng Tỉ lệ tăng sinh khối rễ tốt thu cơng thức có bổ sung YE ABA Bảng Ảnh hưởng yếu tố elicitor đến tích lũy hoạt chất mục tiêu rễ tơ đan sâm Công thức Cryptotanshinone Tanshinone I Tanshinone IIA (mg/g) (mg/g) (mg/g) Đối chứng (B5) 0.12596 0.08199 0.11310 B5 + 100 mg/l YE + 50 g/l Sorbitol 0.22694 0.10596 0.14128 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM Salicylic acid 0.16149 0.09814 0.10849 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM Methyl Jasmonate 0.54866 0.23020 0.21253 B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM ABA 0.22100 0.09353 0.10303 Có thể thấy thay đổi rõ rệt màu sắc rễ sau ngày bổ sung elicitor, biểu động thái tích lũy hoạt chất mục tiêu rễ tơ Theo nghiên cứu số nhà khoa học giới, việc sử dụng số elicitor làm tăng cường tích lũy hoạt chất mục tiêu rễ tơ Bảng cho thấy rằng, sử dụng dịch chiết nấm men Methyl Jasmonate, tích lũy hàm lượng cryptotanshinone, tanshinone I, tanshinone IIA rễ tăng lên 4,3; 2,8 1,9 lần so với mẫu đối chứng A B C D E Hình Rễ tơ đan sâm sau tuần nuôi cấy ngày bổ sung yếu tố elicitor: (A): B5, (B): B5 + 100 mg/l YE + 50 g/l Sorbitol; (C): B5 + 100 mg/l A B YE + 0.1 mM Salicylic acid; (D): B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM Methyl Jasmonate; (E): B5 + 100 mg/l YE + 0.1 mM ABA Ảnh hưởng dạng bình ni cấy đến tăng sinh khối rễ tơ Trên môi trường B5 tiến hành nuôi cấy rễ tươi loại bình ni cấy khác nhằm nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng dạng bình, diện tích bề mặt tiếp xúc thể tích khí bình ni có ảnh hưởng đến tăng sinh khối tổng hợp hoạt chất mục tiêu Kết trình bày bảng Bảng Ảnh hưởng dạng bình ni đến tăng sinh khối rễ tơ Loại bình Khối lượng Khối lượng rễ tươi sau 10 ban đầu (g) tuần nuôi cấy (g) Khối lượng rễ Khối lượng rễ tăng (lần) khô (g) Bình trụ 0.80 11.40 14.25 0.647 Bình tam giác 0.83 13.12 15.90 0.757 Bình chữ nhật 1.55 15.05 9.70 0.837 Túi nilon 12.95 14.7 0.703 0.85 Kết từ bảng số liệu cho thấy với loại bình ni khác (cùng thể tích) phát triển tăng sinh khối rễ tơ khác Biểu tốt ni dạng bình tam giác, với thể tích môi trường B5 sử dụng 100ml sau 10 tuần nuôi cấy khối lượng rễ tươi tăng gần 16 lần so với khối lượng ban đầu Sự khác giải thích khả thu nhận ánh sáng rễ bình tam giác lớn diện tích bề mặt rễ tiếp xúc với mơi trường bình tam giác thích hợp cho phát triển sinh khối rễ tơ Hình Rễ tơ đan sâm sau 10 tuần nuôi cấy bình trụ (A), bình tam giác (B), túi nilon (C) bình chữ nhật (D) III HƯỚNG PHÁT TRIỂN - Phân tích hoạt chất thứ cấp rễ thu - Hồn thiện quy trình nhân ni sinh khối rễ tơ đan sâm (Salvia miltiorrhiza Bunge) - Phát triển sản phẩm thực phẩm chức có nguồn gốc từ rễ tơ đan sâm (Chè nhúng, chè tan, nước tăng lực, viên nén, viên nang…) PHẦN KẾT LUẬN I KẾT LUẬN Mơi trường thích hợp sử dụng nhân nuôi sinh khối rễ tơ in vitro đan sâm mơi trường B5 bổ sung 3% sucrose Tìm phương thức nuôi cấy phù hợp cho việc nhân nuôi sinh khối rễ tơ in vitro đan sâm phương thức nuôi cấy môi trường rắn Elicitor phù hợp cho tăng sinh khối rễ tơ in vitro đan sâm dịch chiết nấm men (YE) bổ sung ABA Elicitor phù hợp cho tích lũy hoạt chất dịch chiết nấm men (YE) bổ sung Methyl Jasmonate - Loại bình nhân ni sinh khối thích hợp bình tam giác II Ý NGHĨ CỦA ĐỀ TÀI - Về sức khỏe ngýời: Cung cấp nguồn dýợc liệu sạch, chất lýợng cao phục vụ cho việc phòng ðiều trị số bệnh tim mạch bệnh ung thý - Về mặt kinh tế: Khắc phục khó khãn nhân ni phýõng pháp truyền thống; biện pháp cho nãng suất cao, thu nhận sản phẩm dễ dàng, rút ngắn thời gian nuôi trồng, giảm chi phí sản xuất - Về mơi trýờng: Chủ ðộng tạo nguồn ðan sâm sạch, chất lýợng cao, qua ðó làm giảm nguy cõ khai thác mức nguồn ðan sâm tự nhiên - Về mặt nghiên cứu khoa học: Làm tiền ðề cho quy trình sản xuất hoạt chất thứ cấp phục vụ công nghiệp dýợc liệu Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài Liệu Tiếng Việt : Lê Xuân Thao (2012) Nghiên cứu tạo rễ tơ khoai lang chuyển gen cry3 kháng sâu non bọ hà (cylas formicarius) Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Phạm Kim Ngọc, Trần Vãn Minh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2009) Cõ sở công nghệ sinh học tế bào Nhà xuất giáo dục Việt Nam 548 trang Tạp chí Dược liệu, tập 18, số 1/2013 Tạp chí Dược liệu, tập 17, số 6/2012 Tài Liệu Tiếng Anh : Chan K., Chui S H., Wong D Y., Ha W Y., Chan C L., Wong R N (2004) Protective effects of Danshensu from the aqueous extract of Salvia miltiorrhiza (Danshen) against homocysteine-induced endothelial dysfunction Life Sciences 75: 3157-71 Chen H., Chen F., Zhang Y L., Song J Y (1999) Production of lithospermic axit B and rosmarinic axit in hairy root cultures of Salvia miltiorrhiza J Ind Microbiol Biotec 22:133-138 Kai G., Xu H., Zhou C., Liao P., Xiao J., Luo X., You L., Zhang L (2011) Metabolic engineering tanshinone biosynthetic pathway in Salvia miltiorrhiza hairy root cultures Metab Eng 13(3): 139-27 Hsia C N., Lin J F., Chen U C., Tsao C Y., Chan H.S (2007) Establishment Hairy Root Culture System of Salvia militorrhiza (P-20) International Symposium on Ecological and Environmental Biosafety of Transgenic Plants December 7-8 ARI, Taichung, Taiwan Yan Q., Hu Z., Tan R X., Wu J (2005) Efficient production and recovery of diterpenoid tanshinones in Salvia miltiorrhiza hairy root cultures with in situ adsorption, elicitation and semi-continuous operation J Biotec 119: 416-424.  ... trường đến sinh khối rễ tơ đan sâm dòng A5.14 .7 Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến tăng sinh khối rễ tơ đan sâm Ảnh hưởng số chất elicitor đến tăng sinh khối rễ tơ tổng... hưởng đến tốc độ tăng trưởng rễ tơ đan sâm Mơi trường đặc thích hợp cho nhân ni sinh khối rễ tơ điều kiện hạn chế trang thiết bị mà đảm bảo tăng sinh khối rễ cao Hình Rễ tơ đan sâm sau tuần nuôi... trường nuôi cấy đến sinh khối rễ tơ đan sâm dòng A5.14 sau tuần nuôi cấy Môi trường Khối lượng rễ ban đầu (gram) Khối lượng rễ tươi sau tuần (gram) Khối lượng rễ tăng Khối lượng rễ khô (lần) (gram)