H�I NGH� HÓA SINH 2017 GIÁ TRỊ CỦA DNA THAI TỰ DO TRONG SÀNG LỌC TRƯỚC SINH KHÔNG XÂM LẤN PHÁT HIỆN LỆCH BỘI NST THAI SỬ DỤNG CÔNG NGHỆ GIẢI TRÌNH TỰ BÁN DẪN HỘI NGHỊ SẢN PHỤ KHOA TOÀN QUỐC 2019 Báo c[.]
HỘI NGHỊ SẢN PHỤ KHOA TOÀN QUỐC 2019 GIÁ TRỊ CỦA DNA THAI TỰ DO TRONG SÀNG LỌC TRƯỚC SINH KHÔNG XÂM LẤN PHÁT HIỆN LỆCH BỘI NST THAI SỬ DỤNG CƠNG NGHỆ GIẢI TRÌNH TỰ BÁN DẪN Báo cáo viên: Ths.Bs Hoàng Hải Yến TỶ LỆ BẤT THƯỜNG NST TRONG CĐTS • 50% trường hợp sảy thai Trisomy 21 • 0,5 - 1%: trẻ sinh Trisomy 18 13% • Trisomy:TCL, dị tật bẩm sinh, chậm phát triển thể chất, tâm thần, tử vong sớm sau sinh • 85 %: trisomy 13, 18, 21và lệch 53% 5% 4% 8% Trisomy 13 17% X/Y trisomy 45,X Other bội NST giới tính Diana Wellesley et al Rare chromosome abnormalities, prevalence and prenatal diagnosis rates from populationbased congenital anomaly registers in Europe European Journal of Human Genetics (2012) 20, 521–526 hinhanhykhoa.com SÀNG LỌC, CHẨN ĐỐN TRƯỚC SINH HIỆN NAY • Tỷ lệ phát hiện: ≤ 94% Sàng lọc - Siêu âm - Hóa sinh • Tỷ lệ dương tính giả: 5% • Rủi ro từ thủ thuật xâm lấn: 0,1-1% - STGR - Chọc ối Tư vấn • Khơng sàng lọc rối loạn NST giới tính Phân tích di truyền NONINVASIVE PRENATAL SCREENIG (NIPS) Giảm rủi ro Ứng dụng rộng rãi? MỤC MỤC TIÊU TIÊU CỦA NIPS NIPT CỦA Tỷ lệ phát cao Giảm tỷ lệ dương tính giả CƠ SỞ NIPS: DNA THAI TỰ DO (cffDNA) Nguồn gốc: Tế bào rau thai (cytotrophoblast) Phát máu mẹ từ 9-10 tuần thai Đoạn DNA ngắn: 150-200 bp Thời gian bán huỷ 16,3 phút, Tăng dần theo tuổi thai: 3-13% sau sinh PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN cffDNA Giải trình tự đoạn song song khối lượng lớn ngẫu nhiên (MPS) MPS sau làm giàu đoạn đích DNA MPS dùng vị trí đích đoạn đích ngắn đặc hiệu NST MPS dùng vị trí đích đa hình đơn nucleotid, SNP Thomas Harasim et al Current status of non-invasive prenatal testing (NIPT): genetic counseling, dominant methods and overall performance J Lab Med 2016; 40(5): 299–306 TẦM QUAN TRỌNG CỦA cfDNA Phát trisomy huyết tương phụ thuộc vào tỷ lệ cfDNA thai Tỷ lệ cfDNA thai cao, dễ phát lệch bội Tỷ lệ cfDNA thai 3-4% giảm độ nhạy NIPS (*) (*) Sparks AB, Struble CA, Wang ET, Song K, Oliphant A: Non-invasive prenatal detection and selective analysis of cellfree DNA obtained from maternal blood: evaluation for trisomy 21 and trisomy 18 Am J Obstet Gynecol GIÁ TRỊ CỦA NIPS (37 NC, n=21.608) LỆCH BỘI n DR (%) FPR (%) Trisomy 21 1.051 99,2 0,09 Trisomy 18 389 96,3 0,13 Trisomy 13 139 91 0,13 Monosomy X 177 90,3 0,23 Khác 56 93 0,14 Đồng thuận với thai kỳ nguy cao MỤC TIÊU Xác định giá trị cffDNA sàng lọc trước sinh không xâm lấn phát lệch bội NST 21, 18, 13 NST giới tính thai sử dụng cơng nghệ giải trình tự bán dẫn dựa vào phương pháp SeqFF hinhanhykhoa.com PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang, theo dõi dọc Cỡ mẫu nghiên cứu: 1231 mẫu Địa điểm nghiên cứu: - Bộ mơn Hóa sinh, Trường Đại học Y Hà Nội - Trung tâm SL, CĐTS & SS, Bệnh viện Phụ sản Hà nội Thời gian nghiên cứu: 5/2016 – 8/2018 Xử lý số liệu: phần mềm Epidata 3.1, STATA 14 thuật toán thống kê PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Mẫu bệnh phẩm: 10ml máu tĩnh mạch vào ống Streck Dụng cụ nghiên cứu: TTSL,CĐTS, BVPSHN Hóa chất nghiên cứu: - Hóa chất tách cfDNA tự động Perkin Elmer - Hóa chất chuẩn bị mẫu nhân DNA phục vụ GTT Thermo Fisher - Chip bán dẫn dùng cho GTT Thermo Fisher hinhanhykhoa.com KỸ THUẬT SỬ DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU Phân tích Kq ISP SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 1231 thai phụ nguy cao Lấy máu tĩnh mạch Giải trình tự hệ NGS Sàng lọc (z-score) Nguy cao Nguy thấp Chọc hút dịch ối (từ tuần 16) Theo dõi đến sinh Karyotype Kết luận hinhanhykhoa.com KẾT QUẢ ĐẶC ĐIỂM ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Đặc điểm Giá trị Tuổi mẹ Tuổi mẹ trung bình (năm) 34,3 5,7 (17-47) 3.5% Tổng số n % n % n % 47 3,8 17 36,2 17 1,36 1201 96,2 30 63,8 1231 98,6 1248 100 47 100 1248 100 - Gil MM, Quezada MS, Revello R, Akolekar R, Nicolaides KH (2015) Analysis of cell-free DNA in maternal blood in screening for fetal aneuploidies: updated meta-analysis Ultrasound Obstet Gynecol - Saskia Tamminga, Merel van Maarle, et al (2016) Maternal Plasma DNA and RNA Sequencing for PrenatalTesting Advances in Clinical Chemistry TỶ LỆ cffDNA VÀ TUỔI THAI cff DNA n Tuần SD 10-13 tuần ngày (1) 459 7,42 2,80 14-20 tuần ngày (2) 679 7,58 2,65 ≥ 21 tuần (3) 42 9,60 3,50 1180 7,59 2,77 p1-2 p1-3 p2-3 Tuổi thai Tổng 1,000(1) 0,000(2) 0,000(2) Suzumori N, Ebara T, Yamada T, et al Fetal cell-free DNA fraction in maternal plasma is affected by fetal trisomy J Hum Genet 2016;61:647–52 .2 Zhou Y, Zhu Z, Gao Y, et al Effects of maternal and fetal characteristics on cell-free fetal DNA fraction in maternal plasma Reprod Sci 2015;22:1429–35 hinhanhykhoa.com ... trường hợp sảy thai Trisomy 21 • 0,5 - 1%: trẻ sinh Trisomy 18 13% • Trisomy:TCL, dị tật bẩm sinh, chậm phát triển thể chất, tâm thần, tử vong sớm sau sinh • 85 %: trisomy 13, 18, 21và lệch 53% 5%... Genetics (2012) 20, 521–526 hinhanhykhoa.com SÀNG LỌC, CHẨN ĐOÁN TRƯỚC SINH HIỆN NAY • Tỷ lệ phát hiện: ≤ 94% Sàng lọc - Siêu âm - Hóa sinh • Tỷ lệ dương tính giả: 5% • Rủi ro từ thủ thuật xâm lấn: 0,1-1%... tĩnh mạch vào ống Streck Dụng cụ nghiên cứu: TTSL,CĐTS, BVPSHN Hóa chất nghiên cứu: - Hóa chất tách cfDNA tự động Perkin Elmer - Hóa chất chuẩn bị mẫu nhân DNA phục vụ GTT Thermo Fisher - Chip