Luận văn khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dạ dày của một số rau xanh việt nam

MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ung thư dày xếp vào loại ung thư phổ biến thứ tư nguyên nhân hàng đầu gây tử vong liên quan đến ung thư toàn giới Xu hướng gia tăng bệnh chủ yếu tập trung nước châu Á vùng miền có thu nhập thấp Cho đến nay, hiệu điều trị ung thư dày không khả quan tỷ lệ sống trung bình nhóm năm Ung thư dày bệnh phức tạp, đòi hỏi theo dõi nghiên cứu liên tục phòng ngừa, phát sớm phác đồ điều trị Hiện nay, số phương pháp sử dụng cho điều trị ung thư dày, nhiên, hầu hết trường hợp, đáp ứng với điều trị yếu gây nhiều tác dụng phụ Vì vậy, việc tìm kiếm phương pháp để hỗ trợ chữa trị ung thư điều cần thiết cần phải liên tục nghiên cứu Xuất phát từ thực trạng đó, nhiều nghiên cứu thuốc thuốc từ hợp chất thiên nhiên mang lại tiềm lớn cho nhu cầu trị liệu ung thư lâu dài an tồn Vì vậy, sản phẩm có nguồn gốc thảo dược khuyến khích để sử dụng nhằm phịng hỗ trợ điều trị bệnh, có ung thư dày Đặc biệt, Việt Nam biết đến với nguồn tài nguyên thuốc phong phú đa dạng Từ lâu, nhiều cỏ rau xanh sử dụng dân gian để phòng hỗ trợ kiểm sốt bệnh, có ung thư dày Tuy nhiên, sở khoa học cho việc chứng minh chế hoạt động dược liệu thuốc dân gian ung thư dày chưa rõ ràng Xuất phát từ thực tế đó, đề tài luận văn “Khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dày số rau xanh Việt Nam” triển khai thực Mục tiêu đề tài  Mục tiêu chung - Sàng lọc đánh giá hoạt tính ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư dày loại rau ăn mơ hình thí nghiệm In-vitro  Mục tiêu cụ thể - Sàng lọc loại rau cao phân đoạn có hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày - Khảo sát khả kháng oxy hóa cao tổng cao phân đoạn sàng lọc - Khảo sát khả tiêu diệt ức chế di chuyển tế bào ung thư dày cao phân đoạn sàng lọc Đối tượng nghiên cứu - Rau sam, rau diếp cá, rau nhút - Tế bào ung thư dày BGC-823 có nguồn gốc từ ngân hàng tế bào Học viện Khoa học Trung Quốc, Thượng Hải, Trung Quốc Phạm vi nghiên cứu - Nghiên cứu đối tượng rau ăn hàng ngày rau sam, rau diếp cá rau nhút bán cửa hàng rau đạt tiêu chuẩn Việt Gap địa bàn quận 7, Tp Hồ Chí Minh - Mơ hình khảo sát hoạt tính kháng ung thư mơ hình In-vitro - Thí nghiệm tiến hành phịng thí nghiệm trường Đại học Nguyễn Tất Thành trường Đại học Văn Lang Tp Hồ Chí Minh Ý nghĩa khoa học thực tiễn Nghiên cứu giúp thấy vai trị có lợi số loại rau việc ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư dày, từ nhận thấy vai trị tác dụng loại rau ăn hàng ngày việc phòng ngừa hỗ trợ điều trị ung thư dày Kết nghiên cứu tiền đề cho nghiên cứu chuyên sâu nghiên cứu lâm sàng để tiến đến sản xuất ứng dụng phục vụ nhu cầu cộng đồng việc phòng ngừa ung thư dày CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ DẠ DÀY 1.1.1 Giới thiệu ung thư dày Ung thư dày bệnh hiểm nghèo gây ảnh hưởng lớn đến sức khỏe người bệnh toàn cầu Ung thư dày xếp vào loại ung thư phổ biến thứ tư nguyên nhân hàng đầu gây tử vong liên quan đến ung thư toàn giới [1] Mặc dù tỷ lệ tử vong có xu hướng giảm chế độ dinh dưỡng cải thiện, bảo quản thực phẩm tốt, phòng ngừa bệnh tốt hơn, chẩn đoán điều trị sớm hơn, bệnh có xu hướng diễn tiến theo chiều hướng xấu Cho đến nay, ung thư dày thường chẩn đoán giai đoạn tiến triển bệnh Về bản, phương thức điều trị phổ biến phẫu thuật cắt bỏ hóa trị bổ trợ hóa trị trường hợp thích hợp, giúp cải thiện khả sống sót [2] Tuy nhiên, hiệu điều trị ung thư dày khơng khả quan tỷ lệ sống trung bình nhóm cịn năm [3] Ung thư dày bệnh phức tạp, đòi hỏi theo dõi nghiên cứu liên tục phòng ngừa, phát sớm phác đồ điều trị Sự phân bố ung thư dày thay đổi đáng kể khu vực địa lý Đặc biệt, quốc gia châu Á chiếm phần lớn trường hợp giới [4] Ngay khu vực có tỷ lệ người mắc bệnh cao, đa số người mắc bệnh người có thu nhập thấp [5] Các yếu tố môi trường chế độ dinh dưỡng có liên quan đến phát triển bệnh Những thực phẩm bảo quản muối nitrat, thực phẩm hun khói ngâm giấm có liên quan đến việc tăng nguy phát triển ung thư dày [6] Nhiễm trùng niêm mạc mãn tính vi khuẩn Helicobacter pylori xem nguyên nhân quan trọng gây ung thư dày [7] 1.1.2 Tác động ung thư dày Theo thống kê, 73% trường hợp ung thư dày chẩn đoán nước châu Á gần 50% trường hợp giới phát Trung Quốc [4] Châu Âu chiếm thêm 15% Trung Nam Mỹ có 7% trường hợp mắc ung thư dày [8] Đặc biệt, tỷ lệ mắc bệnh nam giới cao gấp đôi phụ nữ tỷ lệ mắc bệnh tăng theo độ tuổi Ngay khu vực địa lý, số nhóm dân tộc có nguy mắc bệnh cao đáng kể Ở Hoa Kỳ, người gốc Tây Ban Nha, người Mỹ gốc Phi người Mỹ địa thường bị ảnh hưởng nhiều người Mỹ da trắng [9] Tuy nhiên, tình trạng kinh tế xã hội ảnh hưởng lớn đến tỷ lệ mắc bệnh ung thư dày Tỷ lệ mắc ung thư dày phân chia thêm theo vị trí dày ung thư phần xa dày (noncardia) ung thư phát sinh khu vực gần tim [10] Sự phân biệt bệnh tim bệnh noncardia quan trọng có biểu gần giống có ngun nhân khác Nhìn chung, quốc gia phát triển có tỷ lệ bệnh ung thư dày cao nước phát triển Trong tất quốc gia bị ảnh hưởng, ung thư dày noncardia có nhiều khả ảnh hưởng đến người thuộc nhóm thu nhập thấp [5] Tương tự, nguy nhiễm Helicobacter pylori có liên quan đến tình trạng thu nhập thấp, tình trạng tải vệ sinh [10] 1.1.3 Đặc điểm phân loại bệnh Một số hệ thống phân loại dùng để xác định ung thư dày thường sử dụng phân loại Lauren Phân loại Lauren định nghĩa theo hai loại bao gồm loại ruột loại khuếch tán [11] Mỗi phân nhóm đại diện cho đặc điểm lâm sàng dịch tễ khác Có trường hợp ung thư dày hiển thị đặc điểm hai loại Sự khác biệt hình thái hai loại có liên quan đến phân tử bám dính nội bào Khuếch đại gene kiểu biểu thường xuyên thay đổi gene ung thư dày Sự biểu mức protein phát phân tích hóa mơ miễn dịch Khuếch đại thụ thể liên quan yếu tố tăng trưởng biểu bì (HER2) thấy khối u đại trực tràng, phổi, dày buồng trứng [12] Trong ung thư dày, biểu mức HER2 báo cáo 7-34% khối u, đặc biệt ngã ba thực quản dày tổn thương đường ruột [13] Sự biểu mức yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR) chứng minh dấu hiệu cho dấu hiệu xấu 10 ung thư dày [14] Biểu yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu A (VEGFA) thụ thể nhận thấy khoảng 40% trường hợp ung thư dày tăng biểu VEGFA có liên quan đến tiến triển bệnh [15] Các protein mục tiêu cho việc lựa chọn liệu pháp trị liệu nhằm kiểm soát ung thư dày 1.1.4 Các liệu pháp cho việc chữa trị Tùy thuộc vào kích thước vị trí khối u nguyên phát, phương pháp trị liệu phẫu thuật cắt bỏ toàn phần Trong đó, liệu pháp hóa trị sử dụng trường hợp di Mặc dù nhiều liệu pháp tiếp cận trực tiếp đến “targets” nghiên cứu, có hai phương pháp phê duyệt để sử dụng Hoa Kỳ dựa thử nghiệm lâm Sự ức chế HER2 thử nghiệm liệu pháp cho số bệnh ung thư Bên cạnh đó, trastuzumab tạo kháng thể đơn dịng nhắm vào HER2 ức chế tín hiệu qua trung gian HER2 ngăn chặn phân tách domain ngoại bào [16] Một nghiên cứu quốc tế gần giai đoạn III đánh giá tính hiệu trastuzumab Bệnh nhân điều trị trastuzumab kết hợp với hóa trị liệu cải thiện tình trạng bệnh so với dùng hóa trị [17] 1.1.5 Khuyến nghị Ung thư dày mối đe dọa đáng kể sức khỏe toàn cầu Mặc dù tỷ lệ mắc bệnh có xu hướng giảm nhiều thập kỷ qua, nhiều chỗ cần cải thiện liên quan đến việc phòng ngừa, phát hiện, can thiệp sớm điều trị để kéo dài sống Đặc biệt trường hợp đột biến “the E-cadherin gene” tiền sử gia đình mắc bệnh ung thư dày, việc sàng lọc để phát nguy bệnh sớm khuyến nghị [18] Thêm vào đó, việc sàng lọc điều trị thường xuyên đối tượng nhiễm vi khuẩn Helicobacter pylori điều cần thiết để phòng ngừa tiến triển ung thư 11 1.2 TỔNG QUAN VỀ QUÁ TRÌNH APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO Apoptosis dạng chết tế bào đặc biệt thể qua đặc điểm hình thái sinh hóa, bao gồm màng tế bào bị phá vỡ, ngưng tụ chất nhiễm sắc, phân mảnh DNA gene kích hoạt phân tử tín hiệu thực bào bề mặt tế bào Tế bào trải qua trình apoptosis khác với tế bào chết hoại tử Hình 1.1 Các đường tín hiệu liên quan đến hoạt hóa apoptosis [6] Các tế bào hoại tử thường hệ thống miễn dịch nhận tín hiệu nguy hiểm; ngược lại, chết theo kiểu apoptosis q trình có trật tự thiết lập theo chương trình chết tế bào Apoptosis quan trọng việc trì chức hầu hết hệ thống thể người lớn Do đó, rối loạn điều hịa q trình truyền tín hiệu apoptosis thường dẫn đến 12 hậu nghiêm trọng, chẳng hạn bệnh thoái hóa thần kinh, ung thư tự miễn dịch [19-23] Hai đường dẫn đến q trình apoptosis hệ thống động vật có vú biết đến, bao gồm đường ngoại sinh nội sinh (Hình 1.1) [24] Con đường ngoại sinh hoạt động thông qua thụ thể chun biệt kiểm sốt q trình chết tế bào Con đường ngoại sinh phụ thuộc vào việc gắn chất trung gian ngoại sinh thích hợp vào thụ thể bề mặt tế bào Tín hiệu apoptosis bắt đầu thụ thể chuyên biệt bề mặt tế bào tương tác với “ligand”, tạo đường chuyền tín hiệu từ màng vào bên tế bào Các thụ thể kích hoạt tín hiệu nội bào vịng vài giây sau liên kết với ligand dẫn đến chết tế bào vài Ba cặp ligand/thụ thể chết tế bào mơ tả, gồm: (1) Fas ligand Fas (FasL) (Fas gọi Apo-1 CD95; FasL gọi CD178 CD95L); (2) thụ thể (DR4 DR5) ligand gây chết apoptosis liên quan đến TNF (TRAIL, gọi Apo2L); (3) TNFα thụ thể TNF (TNFR1) [25-29] Ngược lại, đường nội sinh liên quan đến hoạt hóa tín hiệu từ bên tế bào, liên quan đến ty thể, gây chuỗi hoạt hóa phân tử tín hiệu caspase caspase-3, caspase-8, caspase-9, cuối dẫn đến apoptosis Quá trình hoạt hóa apoptosis bị ngăn chặn thành viên chống apoptosis thuộc họ Bcl-2 Họ Bcl-2 thường chia thành hai phân nhóm nhỏ dựa vai trị chúng trình chết theo chương trình tế bào: nhóm ức chế q trình chết nhóm cịn lại hoạt hóa q trình chết Nhóm ức chế apoptosis bao gồm Bcl-2, Bcl-xL61, Bcl-w 62, Bcl-B 63, A1 64 Mcl-1 65 Nhóm hoạt hóa đường apoptosis gồm Bax 66, Bak 67, 68, Bcl-xs61 Bok 69 Bcl-GL 70 [30-34] 1.3 SỰ OXY HÓA VÀ CÁC CHẤT KHÁNG OXY HĨA 1.3.1 Sự oxy hóa Sự oxy hóa điện tử tăng trạng thái oxy hóa gây phân tử, nguyên tử, ion Chất có khả oxy hóa chất 13 khác (làm cho chúng điện tử) gọi chất oxy hóa Chất có khả khử chất khác (làm cho chúng nhận điện tử) gọi chất khử Chúng chuyển điện tử cho chất khác, tự bị oxy hóa Trong q trình oxy hóa, nhân tố khử thường nhường điện tử thông thường nhường hydro oxy [35] 1.3.2 Gốc tự Gốc tự (free radical) phân tử tồn độc lập, có điện tử chưa ghép đơi Chính điện tử chưa ghép đôi tạo nên số tính chất đặc trưng hầu hết loại gốc tự Có nhiều gốc tự ổn định có khả phản ứng mạnh Chúng cho nhận điện tử từ phân tử khác, vậy, chúng vừa hoạt động chất khử chất oxy hóa [36] Các gốc tự chứa oxygen (ROS) gốc tự chứa nitrogen (RNS) quan trọng nhiều trạng thái bệnh lý, bao gồm: gốc hydroxyl, gốc anion superoxide, gốc hydrogen peroxide, oxygen nguyên tử, hypochlorite, gốc nitric oxide, gốc peroxynitrite Đây gốc có khả phản ứng cao, nhân màng tế bào, gây tổn hại đến đại phân tử sinh học DNA, Protein, Lipid, Carbohydrate Chúng công đại phân tử dẫn đến tổn thương tế bào phá vỡ cân nội môi Tất phân tử thể mục tiêu gốc tự do, đó, protein, axit nucleic lipid dễ bị công gây nhiều bệnh khác ung thư, tiểu đường, tim mạch, thần kinh, lão hóa 1.3.3 Stress oxy hóa bệnh người Stress oxy hóa thuật ngữ dùng để tình trạng tổn hại oxy hóa diễn có cân tốc độ tạo gốc tự tốc độ tạo chất bảo vệ kháng oxy hóa [37] Stress oxy hóa làm tổn hại nhiều đại phân tử sinh học axit nucleic, protein, lipid Stress oxy hóa thời gian ngắn diễn mô bị tổn thương chấn thương, nhiễm trùng, bỏng nhiệt, độc tố tập thể dục sức Các mô sinh enzyme xanthine oxidase, lipogenase, cyclo-oxygenase, hoạt hóa q trình thực bào, giải phóng ion tự do, ion đồng, phá vỡ chuỗi vận chuyển điện tử q trình phosphoryl hóa - oxy hóa tạo ROS lượng lớn 14 Giai đoạn khởi phát, tăng sinh phát triển bệnh ung thư, tác dụng phụ q trình hóa trị xạ trị có liên quan đến cân ROS hệ thống phịng vệ kháng oxy hóa ROS có liên quan đến biến chứng đái tháo đường, bệnh mắt người lớn tuổi, bệnh thối hóa thần kinh bệnh Parkinson [38] Người ta cho rằng, stress oxy hóa nguyên nhân gây nên chứng xơ vữa động mạch, bệnh viêm, số bệnh ung thư trình lão hóa Ngày nay, người ta biết stress oxy hóa ngun nhân gây bệnh viêm như: viêm khớp, viêm mạch, viêm cầu thận, lupus ban đỏ, triệu chứng bệnh hô hấp người lớn, bệnh thiếu máu cục (bệnh tim, đột quỵ, thiếu máu cục ruột), hội chứng suy giảm miễn dịch (AIDS), bệnh khí thủng, cấy ghép nội tạng, viêm loét dày, tăng huyết áp tiền sản giật, rối loạn thần kinh (Alzheimer, Parkinson, teo cơ), nghiện rượu, bệnh liên quan đến hút thuốc lá, nhiều bệnh khác Khi bị stress oxy hóa mức dẫn đến oxy hóa lipid protein, dẫn đến thay đổi cấu trúc chức chúng [39] 1.3.4 Các chất kháng oxy hóa Chất kháng oxy hóa chất có khả nhường điện tử cho chất oxy hóa, gốc tự do, trung hịa gốc tự Các chất kháng oxy hóa ngăn chặn hư hại tế bào thông qua việc làm chậm ức chế q trình oxy hóa Cơ thể có số chế chống lại q trình oxy hóa thơng qua việc sản xuất chất kháng oxy hóa nội sinh chất kháng oxy hóa ngoại sinh cung cấp từ thực phẩm [40] Các chất kháng oxy hóa thể cung cấp nguồn: nội sinh loại thực phẩm, dược phẩm bổ sung Các chất kháng oxy hóa nội sinh bao gồm enzyme kháng oxy hóa chất kháng oxy hóa có phân tử lượng thấp Các enzyme kháng oxy hóa thuộc bốn họ chính: Superoxyde dismutase (SOD), Glutathione peroxydase (GPx), Glutathione reductase (GRx) catalase (CAT) SOD xúc tác cho trình phân giải gốc superperoxyde (O2●) thành H2O2 H2O2 tiếp tục chuyển đổi thành nước oxy tác dụng catalase (CAT) enzyme thuộc họ peroxydase glutathione peroxydase (GPx) Nhóm chất kháng oxy 15 hóa có phân tử lượng thấp bao gồm chất kháng oxy hóa tạo từ q trình chuyển hóa thể lipoid axit, glutathione, L-ariginine, coenzyme Q10, uric axit [41] Các chất kháng oxy hóa cung cấp từ bên ngồi thơng qua nguồn thực phẩm dược phẩm Các chất kháng oxy hóa thơng dụng biết từ nguồn ascrobic axit, glutathione, tocopherols tocotrienols, hợp chất phenolics, astaxanthin, licopen, carotenoit…[42] Việc tiêu thụ chất kháng oxy hóa tự nhiên góp phần đáng kể việc trung hịa gốc tự thể, góp phần cải thiện sức khỏe phòng ngừa nhiều bệnh tật 1.4 CÁC HỢP CHẤT PHENOLIC Các hợp chất phenolic từ thực vật phổ biến nằm hầu hết mơ thực vật đóng góp đáng kể vào sinh lý thực vật Chúng đóng vai trị then chốt hình thành sắc tố, tăng trưởng, sinh sản, kháng bệnh [43] Hoạt chất phenolic tạo thành nhóm lớn phân bố rộng giới thực vật Cho đến nay, khoảng 8000 cấu trúc khác chúng báo cáo định danh Hợp chất phenolic sản phẩm chuyển hóa thứ cấp đa dạng từ hợp chất đơn giản axit phenolic cao phân tử tanin Chúng phân chia thành 10 lớp khác dựa cấu trúc hóa học đơn giản chúng (Hình 1.2) Dẫn xuất phenolic flavonoid hợp chất quan trọng có trọng lượng phân tử nhỏ phổ biến Axit phenolic hợp chất có phân tử nhỏ chẳng hạn axit caffeic, vanillin, axit coumaric [44] Flavonoid hình thành nên nhóm lớn chiếm đến nửa hợp chất phenolic Sự đa dạng nhóm vịng C cấu trúc chúng dẫn đến phân loại nhiều nhóm flavonols, flavones, flavanones, flavanols, isoflavones, anthocyanidins Trong flavonoid có trọng lượng phân tử nhỏ tanin lại có trọng lượng phân tử trung bình cao (∼30,000 Da) hydro hóa [45] Những đặc điểm góp phần hình thành phức hợp với carbohydrate protein khơng tan làm cho có vị đắng chát Tanin phân chia làm hai nhóm hóa học bao gồm tanin thủy phân tanin ngưng tụ Ngược với nhóm chất dinh dưỡng, chẳng hạn vitamin khoáng chất, hợp chất phenolic thực vật không cần thiết cho sinh 16 76.Afshari F., Seraj H., Sadat Hashemi Z., Timajchi M., Ensiyeh O., Ladan G., et al., 2017, The Cytotoxic Effects of Eggplant Peel Extract on Human Gastric Adenocarcinoma Cells and Normal Cells, Modern Medical Laboratory Journal, 1(2), 77-83 77.Jutiviboonsuk A., Zhang H., Tan G.T., Ma C., Van Hung N., Manh Cuong N., Bunyapraphatsara N., Soejarto D.D., Fong H.H., 2005, Bioactive constituents from roots of Bursera tonkinensis, Phytochemistry, 66(23), 2745–2751 78.Liu Z., 2008 Preparation of botanical samples for biomedical research, Endocrine Metabolic Immune Disorders – Drug Targets, 8(2), 112-121 79.Saada M., Falleh H., JalleliI nès, Snoussi M., Ksouri R., 2014, Phenolic profile, biological activities and fraction analysis of the medicinal halophyte Retama raetam, South African Journal of Botany, 94, 114-121 80.Ana C.M.H., Jacqueline A.M., José C.R.V., Aline A.B., Fernanda D’Avila da S., Diego de S., Juliana S.B., João B.T.R and Romaiana P.P., 2018, Ethyl acetate fraction of Cymbopogon citratus as a potential source of antioxidant compounds, New Journal of Chemistry, 42, 36423652 81.Ibukun O.O., Mubo A.S., Badara G., Fatai O.B., Salmon A., Anofi O.T.A., Gertrud M., 2020, Isolation of flavonoids from Musa acuminata Colla (Simili radjah, ABB) and the in vitro inhibitory effects of its leaf and fruit fractions on free radicals, acetylcholinesterase, 15lipoxygenase, and carbohydrate hydrolyzing enzymes, Journal of Food Biochemistry,44(3), e13137 82.Hyun, H.B., Shrestha, S., Boo, K.H., et al., 2015, Evaluation of antioxidant potential of ethyl acetate fraction of Rosmarinus officinalis L and its major components, Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry, 58, 715–722 83.Yang R., Guan Y., Wang W., Chen H., He Z., Jia A-Q., 2018, Antioxidant capacity of phenolics in Camellia nitidissima Chi flowers and their identification by HPLC Triple TOF MS/MS, PLoS ONE, 13(4), e0195508 66 84.Ponnan A., Perumal R., Sathiyavedu T.S and Arabandi R., 2006, Antioxidant activity measured in different solvent fractions obtained from Mentha spicata Linn.: An analysis by ABTS+ decolorization assay, Asia Pacific Journal of Clinical Nutrion, 2006, 119-124 85.Elufioye T.O., Abdul A.A., Moody J.O., 2017, Cytotoxicity studies of the extracts, fractions, and isolated compound of Pseudocedrela kotschyi on cervical cancer (HeLa), breast cancer (MCF-7) and skeletal muscle cancer (RD) Cells Pharmacognosy Research, 9, 46-50 86.Ahmad H.A.F., Chan C.K., Mohamad J., Abdul K.H., 2018, Dioscorea bulbifera induced apoptosis through inhibition of ERK 1/2 and activation of JNK signaling pathways in HCT116 human colorectal carcinoma cells Biomedicine and Pharmacotherapy, 104, 806-816 87.Somadayo N.A., Kania Y.R., Hendriani R., Ferdiansyah F and Halimah E., 2019, Cytotoxic activity of subfraction from ethyl acetate fraction of sablo (Acalypha Wilkesiana) leaves on HeLa servical cancer cells, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 11(9), 3250-3252 88.Amira M., Shaban, Ola H., Laila A.G., Mai R., Mohammed A., El-Magd, 2018, Ethyl acetate fraction of garlic (Allium sativum) inhibits the viability of MCF7 and HepG2 through induction of apoptosis and G2/M phase cell cycle arrest, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 8(09), 142-150 89.Miles F.L., Lynch J.E., Sikes R.A., 2015, Cell-based assays using calcein acetoxymethyl ester show variation in fluorescence with treatment conditions, Journal of Biological Methods, 2(3), e29 90.Ziegler U., Groscurth P., 2004, Morphological features of cell death, News in Physiological Sciences, 19, 124-128 91.Xiangming G., 2015, Cancer metastases: challenges and opportunities, Acta Pharmaceutica Sinica B, 5(5), 402-418 92.Plati J., Bucur O., Khosravi-Far R., 2011, Apoptotic cell signaling in cancer progression and therapy, Integrative Biology (Camb), 3(4), 279296 67 93.Nunez G., Benedict M.A., Hu Y & Inohara N., 1998, Caspases: the proteases of the apoptotic pathway, Oncogene, 17, 3237–3245 94.Jang K.J., Han M.H., Lee B.H., Kim B.W., Kim C.H., Yoon H.M., Choi Y.H., 2010, Induction of apoptosis by ethanol extracts of Ganoderma lucidum in human gastric carcinoma cells, Journal of Acupuncture and Meridian Studies, 3(1), 24-31 95.Hajiaghaalipour F., Kanthimathi M.S., Sanusi J., Rajarajeswaran J., 2015, White tea (Camellia sinensis) inhibits proliferation of the colon cancer cell line, HT-29, activates caspases and protects DNA of normal cells against oxidative damage, Food Chemistry, 169, 401-410 96.Park J.A., Lee K.Y., Oh Y.J., Kim K.W., Lee S.K.,1997, Activation of caspase-3 protease via a Bcl-2-insensitive pathway during the process of ginsenoside Rh2-induced apoptosis, Cancer Letters, 121(1), 73-81 97.Liang Z., Guo Y.T., Yi Y.J., Wang R.C., Hu Q.L., Xiong X.Y., 2014, Ganoderma lucidum polysaccharides target a Fas/caspase dependent pathway to induce apoptosis in human colon cancer cells, Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 15(9), 3981-3986 98.Jiao C., Chen W., Tan X., Liang H., Li J., Yun H., He C., Chen J., Ma X., Xie Y., Yang B.B., 2020, Ganoderma lucidum spore oil induces apoptosis of breast cancer cells in vitro and in vivo by activating caspase3 and caspase-9, Journal of Ethnopharmacology, 247, 112256 99.Diplock A.T., Charleux J.L., Crozier-Willi G., et al., 1998, Functional food science and defence against reactive oxygen species British Journal of Nutrition, 80(Suppl 1), S77-S112 100 Valko M., Leibfritz D., Moncol J., et al., 2007, Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease, International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 39(1), 44-84 101 Lunawati L B., Stephen R., Teresa S., 2012, Role of Antioxidants in the Prevention of Cancer, Journal of Experimental & Clinical Medicine, 4(4), 215-222 102 Hatami T., Emami S.A., Miraghaee S.S., Mojarrab M., 2014, Total Phenolic Contents and Antioxidant Activities of Different Extracts and 68 Fractions from the Aerial Parts of Artemisia biennis Willd, Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 13(2), 551-559 103 Safaa S A., El-kalyoubi M., Abdelrashid A., Manal F S., 2014, Total phenolic contents and antioxidant activities of various solvent extracts from whole wheat and bran, Annals of Agricultural Sciences, 59(1), 6367 104 Amina B., Chaabane R., Mahieddine B., Oumayma A., Chokri M., 2016, Total phenolic content and antioxidant activity of six wild Mentha species (Lamiaceae) from northeast of Algeria, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 6(9), 760-766 69 PHỤ LỤC Bảng Kết thơ q trình chuẩn hóa nguyên liệu Rau nhút độ ẩm bột độ ẩm cao thu hồi Tro Rau sam độ ẩm bột độ ẩm cao thu hồi Tro 7.1 7.9 7.4 7.466667 0.404145 11.2 9.7 5.5 10.5 9.8 5.4 10.7 10.8 0.360555 9.5 9.666667 0.152753 5.7 5.533333 0.152753 10.6 9.3 9.7 9.866667 0.665833 11.7 10.5 4.7 12.2 10.4 4.5 11.6 11.83333 0.321455 10.3 10.4 0.1 4.9 4.7 0.2 9.3 8.5 8.833333 0.416333 11.4 12.2 3.9 10.3 10.83333 0.550757 11.6 11.73333 0.416333 3.3 3.766667 0.416333 Rau diếp cá độ ẩm bột 8.7 độ ẩm cao 10.8 thu hồi 11.4 Tro 4.1 ĐỘ ẩm Cao phân đoạn rau nhút Hexan 12.4 11.5 11.8 11.9 0.458258 CH2Cl2 9.5 8.7 8.8 0.43589 EtOAc 10.4 10.6 10.1 10.36667 0.251661 nBuanol 12.3 11.8 11.5 11.86667 0.404145 Hiệu suất thu Cao phân đoạn rau nhút Hexan 3.5 3.3 CH2Cl2 1.6 EtOAc 0.9 1.1 nBuanol 2.4 2.6 4.2 2.716667 1.090718 1.7 1.766667 0.208167 0.7 0.9 0.2 2.4 2.466667 70 0.11547 Bảng kết thô định lượng hợp chất phenolic tổng cao ethanol từ loại rau TPC Gallic axit 20 0.168 0.158 0.16 0.162 40 0.399 0.391 0.404 0.398 60 0.656 0.661 0.656 0.657667 80 0.829 0.831 0.83 0.83 100 1.039 1.044 1.045 1.042667 Rau nhúc TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml HÀm lượng TB y=ax+b 0.894 A b 0.893 0.0107 -0.019 0.897 0.894667 1.591 1.564 1.595 1.588 1.56 1.595 1.589 1.862 1.595 1.589333 1.662 1.595 0.694667 0.767333 0.700333 66.69782 73.4891 67.22741 69.13811 77509.09 µg/g cao khơ 77.5 mg/g cao khơ 74773.34 82386.88 74.7 82.3 % polyphenol Rau sam TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml Hàm lượng TB 0.524 0.626 0.526 0.558667 1.213 1.209 1.214 1.212 0.653333 62.83489 62.88681 A b 0.0107 1.211 1.208 1.212 1.210333 0.651667 62.67913 1.214 1.216 1.216 1.215333 0.656667 63.14642 71 -0.019 75367.06 75.3 4.225321 71300.24 ug/g 71.3 mg/g 71241.37 71.24137 71064.77 71.06477 0.812 00.815 0.812 0.813 1.552 1.407 1.55 1.407 1.552 1.409 1.551333 1.407667 0.738333 0.594667 70.77882 57.35202 62.62721 70209.87 ug/g 70.2 mg/g y=ax+b A b 0.0107 -0.019 71594.58 71.59458 Diếp cá TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml Hàm lượng TB 1.403 1.401 1.496 1.433333 0.620333 59.75078 79348.45 79.34845 72 64295.99 64.29599 66985.18 66.98518 8.027646 0.269764 Bảng Kết thơ thử độc tính MTT loại rau Độc tính Rau nhút 100 200 400 600 0 IC50 295.9061 297.3231 313.0454 Chung 100 200 400 600 Rau sam 100 200 400 600 IC50 366.9897 360.1084 386.3946 Diếp cá 100 0.548 0.3515 0.208 0.058 0.658 0.6 0.367 0.225 0.057 0.699 0.517 0.351 0.218 0.052 0.598 16.71733 46.58055 68.38906 91.18541 0 14.16309 47.49642 67.81116 91.84549 0 13.54515 41.30435 63.54515 91.30435 0.555 0.3565 0.217 0.055667 0.651667 0.04194 0.009097 0.008544 0.003215 0.050797 99.85636 99.90774 99.94384 99.98559 99.83135 1.681698 3.342128 2.645633 0.351827 9.512706 14.83376 45.29412 66.70077 91.4578 IC50 0.658 0.651 0.699 0.63 0.598 0.568 0.537 0.233 0.112 0.561 0.239 0.132 0.457 0.283 0.118 1.06383 18.38906 64.58967 82.97872 9.871245 19.74249 65.8083 81.11588 5.016722 23.5786 52.67559 80.26756 0.699 0.607 0.598 0.553 301.7131 0.651667 0.616333 0.518333 0.251667 0.120667 5.421995 20.46036 61.38107 81.48338 100 200 400 600 IC50 5.421995 20.46036 61.38107 81.48338 370.2924 13.63125 0.658 0.59 0.651667 0.583333 73 10.48593 100 10.48593 200 400 600 0.463 0.276 0.106 10.33435 29.63526 58.05471 83.89058 IC50 chung 355.0628 20.45352 315.1303 342.7829 IC50 Rau nhút 301.7131 Rau sam 370.2924 Diếp cá 336.94 0.395 0.218 0.108 0.393 0.212 0.102 13.16166 43.4907 68.81259 84.54936 7.525084 34.28094 64.54849 82.94314 0.417 0.235333 0.105333 36.01023 63.88747 83.83632 200 400 600 36.01023 63.88747 83.83632 IC50 9.512706 13.63125 20.45352 Bảng Phenolic tổng cao phân đoạn Hexan CH2Cl2 EtOAc nButanol Hexan CH2Cl2 EtOAc nButanol 25 65 122 28 62 125 88 83 26 26.33333 1.527525 66 64.33333 2.081666 131 126 4.582576 82 84.33333 3.21455 26.33333 1.527525 64.33333 2.081666 126 4.582576 84.33333 3.21455 Bảng Kết thô thử độc tính MTT cao phân đoạn rau nhút Phân đoạn nhút Hexan 1.105 1.04 10 0.909 50 0.709 100 0.571 200 0.308 300 0.179 400 0.027 500 10 5.882353 1.147 1.083 0.963 0.904 0.741 0.482 0.322 0.11 0.95 0.8 0.71 0.444 0.31 0.103 0.033 0.025 16.04185 1.111667 0.984333 0.871 0.72 0.499 0.313333 0.130667 0.028333 12.2807 74 10 50 100 200 300 400 500 11.45427 21.64918 35.23238 55.11244 71.81409 88.24588 97.45127 336.94 50 100 200 300 400 500 17.73756 35.8371 48.32579 72.1267 83.8009 97.55656 21.1857 35.39669 57.97733 71.92677 90.40976 97.12293 26.13112 34.44137 IC50 = 59.00277 71.37581 90.48938 97.6916 10 50 100 200 300 400 500 1.005 1.001 1.132 0.966 1.159 0.986 0.987 0.846 0.688 0.515 0.197 0.093 0.887 0.768 0.534 0.403 0.247 0.097 0.808 0.71 0.507 0.436 0.163 0.094 10 50 100 200 300 400 500 0.39801 1.791045 15.8209 31.54229 48.75622 80.39801 90.74627 14.66431 21.64311 32.15548 52.82686 64.39929 78.18021 91.4311 14.92666 30.28473 38.74029 56.25539 62.38136 85.93615 91.88956 Hexan 207.5806 Ch2Cl2 1.098667 0.984333 0.894 0.774667 0.576333 0.451333 0.202333 0.094667 10 50 100 200 300 400 500 10.40655 18.62864 29.49029 47.54248 58.9199 81.58374 91.3835 Ch2Cl2 IC50 = 239.1863 EtOAc 10 50 100 200 300 400 500 0.95 0.97 0.913 0.793 0.63 0.526 0.391 0.211 0.056 0.731 0.604 0.497 0.35 0.213 0.069 0.758 0.602 0.494 0.328 0.209 0.057 0.014 0.013 0.019 10 50 100 200 300 400 500 16.52632 33.68421 44.63158 58.84211 77.78947 94.10526 98.52632 24.63918 37.73196 48.76289 63.91753 78.04124 92.8866 98.65979 16.977 34.06353 45.89266 64.07448 77.10843 93.75685 97.91895 0.944333 0.760667 0.612 0.505667 0.356333 0.211 0.060667 0.015333 10 50 100 200 300 400 500 EtOAc IC50 = 75 19.44935 35.19238 46.45252 62.26615 77.65619 93.57571 98.37628 172.019 butanol 10 50 100 200 300 400 500 1.15 1.113 1.077 0.986 0.888 0.758 0.619 0.566 0.393 0.192 0.909 0.838 0.759 0.622 0.586 0.442 0.213 0.972 0.852 0.719 0.641 0.501 0.393 0.21 10 50 100 200 300 400 500 14.26087 22.78261 34.08696 46.17391 50.78261 65.82609 83.30435 18.32884 24.708 31.80593 44.115 47.34951 60.28751 80.86253 9.749304 20.89136 33.24048 40.48282 53.48189 63.50975 80.50139 301.7131 207.5806 239.1863 172.019 9.512706 7.451779 36.593 8.182449 277.3353 8.632798 Ethanol Hexan CH2Cl2 EtOAc nbutanol 1.113333 0.955667 0.859333 0.745333 0.627333 0.551 0.409333 0.205 10 50 100 200 300 400 500 butanol IC50 = 14.16168 22.81437 33.05389 43.65269 50.50898 63.23353 81.58683 277.3353 Bảng Kết thơ thử hoạt tính trung hòa gốc tự DPPH Cao rau nhút Blank 10 20 50 80 100 10 20 50 80 100 0.22 0.215 0.208 0.182 0.173 0.164 0.054 0.062 0.063 0.072 0.084 0.22 0.208 0.206 0.18 0.172 0.161 0.056 0.06 0.071 0.07 0.076 0.22 0.212 0.197 0.181 0.171 0.166 0.061 0.069 0.064 0.069 0.078 0.221 0.2116667 0.2036667 0.181 0.172 0.163667 0.057 0.063667 0.066 0.070333 0.079333 30.015083 36.651584 47.963801 53.9969834 61.84012 IC50 = 63.770344 1.30828185 % khử 10 30.015083 20 36.651584 50 47.963801 80 53.996983 100 61.840121 Cao phân đoạn EtOAc Blank 76 10 20 40 60 80 10 20 40 60 80 0.22 0.218 0.227 0.182 0.139 0.14 0.061 0.07 0.075 0.088 0.105 0.22 0.215 0.214 0.205 0.14 0.137 0.064 0.071 0.076 0.089 0.103 0.22 0.229 0.204 0.193 0.134 0.141 0.062 0.075 0.08 0.089 0.105 0.221 0.2206667 28.35596 0.215 35.29412 0.1933333 47.36048 0.13766667 77.82805 0.139333 84.1629 0.062333 0.072 0.077 0.088667 0.104333 10 28.35596 20 35.29412 40 47.360483 60 77.828054 80 84.162896 IC50 = 36.650773 36.207965 0.4763111 36.60358 37.156261 Vitamin C VitaC 7.5 10 15 20 0.614 0.541 0.51 0.475 0.391 0.294 0.612 0.538 0.498 0.471 0.389 0.294 0.614 0.538 0.496 0.474 0.392 0.298 0.613 0.539 0.5013333 0.4733333 0.39066667 0.295333 12.119565 18.26087 22.826087 36.3043478 51.84783 12.119565 7.5 18.26087 10 22.826087 15 36.304348 20 51.847826 IC50 = 19.753846 19.663268 0.1495946 19.634994 19.907077 Vitamin C 19.753846 0.1495946 Ethanol 63.7703 1.3083 EtOAc 36.6508 0.4763 77 Bảng Kết thô thử hoạt tính trung hịa gốc tự ABTS+ Cao rau nhút 0.702 0.714 0.705 10 0.717 0.711 0.703 20 0.612 0.611 0.645 50 0.594 0.523 0.569 80 0.462 0.4651 0.439 100 0.342 0.352 0.349 Blank 10 0.054 0.056 0.061 20 0.062 0.06 0.069 50 0.063 0.071 0.064 80 0.072 0.07 0.069 100 0.084 0.076 0.078 0.707 % khử 0.7103 0.6227 0.562 0.4554 0.3477 0.057 0.0637 0.066 0.0703 0.0793 7.5908 20.934 29.844 45.54 62.046 7.5908 20.934 29.844 45.54 62.046 IC50 = 82.833 Blank 10 0.061 0.064 0.062 20 0.07 0.071 0.075 40 0.075 0.076 0.08 60 0.088 0.089 0.089 80 0.105 0.103 0.105 0.0623 0.072 0.077 0.0887 0.1043 10 20 50 80 100 84.291 83.056 83.091 0.703 40 0.443 0.455 0.458 60 0.409 0.414 0.387 80 0.304 0.316 0.311 0.6023 24.988 0.452 46.959 0.4033 55.493 0.3103 70.863 IC50 = 52.161 52.434 52.665 51.375 0.6879 Cao phân đoạn EtOAc 10 20 0.702 0.706 0.608 0.714 0.713 0.604 0.705 0.7 0.595 0.707 0.7063 8.9109 10 20 40 60 80 8.9109 24.988 46.959 55.493 70.863 VitaC 0.723 0.716 0.719 0.623 0.637 0.644 10 0.512 0.521 0.506 15 0.463 0.448 0.461 20 0.418 0.405 0.415 25 0.318 0.326 0.283 0.7193 0.6347 11.111 0.513 28.151 0.4573 35.948 0.4127 42.204 0.309 56.723 78 10 15 20 25 Vitamin C Cao tong EtOAC 11.77 28.684 36.423 42.632 57.044 IC50 = 22.029 21.168 22.175 22.479 0.6861 22.029 0.6861 82.833 52.161 0.703 0.6879 Bảng Kết realtime PCR Tested Experimental (TE), Gene being Tested Control (TC), Housekeeping Gene Experimental (HE), and Housekeeping Gene Control (HC) Lần 29.783 29.163 28.314 32.200 26.882 27.552 27.611 28.940 26.851 24.880 30.411 Lần 28.782 29.010 28.544 30.933 26.048 27.148 26.824 27.674 25.719 23.610 29.339 AcN100 Lần Trung Bình 28.427 28.997 28.826 29.000 28.351 28.403 30.923 31.352 25.732 26.220 26.931 27.210 27.106 27.180 27.489 28.034 25.932 26.168 23.375 23.955 29.961 29.904 Gene 10 11 Caspase-3 Caspase-8 Bax Bcl-2 PARP1 SOD2 nrf2 HO1 NQO1 GAPDH Std 0.703 0.169 0.123 0.734 0.594 0.315 0.399 0.790 0.602 0.810 0.538 Lần Lần BL.24.G Lần Trung Bình 26.865 26.120 24.883 27.980 22.302 23.846 24.380 24.250 23.258 19.280 26.888 26.598 24.763 28.163 22.850 24.401 24.882 25.376 23.773 19.932 26.613 26.598 24.519 28.329 23.040 24.534 25.282 25.743 24.081 19.932 79 26.789 26.438 24.722 28.157 22.731 24.260 24.848 25.123 23.704 19.715 Std 0.152 0.276 0.185 0.174 0.383 0.365 0.452 0.778 0.416 0.376 20 Caspase-9 Gene Caspase-3 Caspase-8 Bax 10 11 20 Caspase-9 27.808 27.068 26.843 ΔCTE = TE-HE ΔCTC = TC - HC 5.043 7.074 5.045 6.724 4.448 5.007 7.398 8.442 2.266 3.016 3.256 4.545 3.226 5.133 4.080 5.408 2.213 3.989 5.949 7.525 80 27.240 0.505 ΔΔCt = ΔCTE-ΔCTC -2.031 -1.678 -0.559 -1.045 -0.750 -1.290 -1.907 -1.328 -1.776 -1.576 2-∆∆Ct 4.088 3.201 1.473 2.063 1.682 2.445 3.751 2.511 3.426 2.981 ... nội bào tế bào ung thư dày sau xử lý với cao phân đoạn EtOAc 3.7 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ DI CHUYỂN CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA RAU NHÚT Các tế bào khối u có khả xâm nhập vào mơ xung... lại tiềm ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư, chẳng hạn tế bào ung thư dày Các thử nghiệm nghiên cứu khảo sát liên quan đến hoạt tính ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư dày Hình... tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau nhút Hình 3.3B Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau sam 39 Hình 3.3C Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau diếp cá