Lý thuyết thực tập Hóa sinh Y Cần Thơ CTUMP GÓC HỌC TẬP K46 Nguyễn C T Kiều YD45 1 Bài 1 Các kĩ thuật cơ bản trong phòng xét nghiệm sinh hóa 1 Nội quy phòng thực tập sinh hóa Không được đổ nước vào acid đậm đặc, nhất là acid sulfuric Không được.
GÓC HỌC TẬP K46 Bài Các kĩ thuật phịng xét nghiệm sinh hóa Nội quy phịng thực tập sinh hóa - Khơng đổ nước vào acid đậm đặc, acid sulfuric - Không hút miệng chất acid hay base đậm đặc, dung dịch brom cyanua Các kỹ thuật cấp cứu phịng thí nghiệm sinh hóa - Phỏng da o Do vật nóng ▪ Phỏng nhẹ: lấy vải mùng/gạc tẩm dd acid picric bão hòa đắp lên ▪ Phỏng nặng: đắp vải mùng tẩm acid picric, tránh băng chặt tránh dùng vaselin hay thuốc mỡ o Do hóa chất ▪ Trước tiên: làm trơi hóa chất • Ngâm vào chậu nước lớn/ để vịi nước chảy ▪ Sau đó: trung hịa hóa chất • Do acid: đắp vải mùng tẩm dd natribicarbonate 8% • Do kiềm: đắp vải mùng tẩm dd acid picric 3% - Phỏng mắt o Acid/brom vào mắt ▪ Tắm mắt nước ▪ Tắm mắt dd natribicarbonate 1% o Kiềm vào mắt ▪ Tắm mắt nước ▪ Tắm mắt dd acid boric 1% - Ngộ độc o Vào miệng ▪ Acid: súc miệng nhiều lần dd natribicarbonat 1% ▪ Kiềm: súc miệng nhiều lần dd acid boric 1% ▪ Khác: súc miệng nhiều lần nước lạnh - Nhiễm độc o Đem nạn nhân nơi thống khí, nới rộng quần áo o Cho uống ly cafe đen/1 muỗng siro cafein o Hô hấp nhân tạo (nếu cần) - Điện giật o Ngắt cầu dao o Đem nơi thoáng, nới rộng quần áo o Hô hấp nhân tạo (nếu cần) - Hỏa hoạn o Lửa nhỏ: dập khăn/vải bố ướt/cát o Cháy quần áo: lăn đất, lấy vải bố ướt trùm lên chỗ cháy, ép sát o TRÁNH CHẠY HOẢNG Cách sử dụng số dụng cụ thường dùng thực tập sinh hóa - Ống nghiệm - Cốc có mỏ (becher) - Bình cầu (ballon) - Ống đơng (eprouvette) - Ống hút (pipette) o Thường làm thủy tinh o Thường chia vạch loại pipette thể tích có bầu để thể tích dd bên o Đầu pipette có vạch nhám: thổi giọt cuối (khơng có vạch nhám khơng thổi) o Dùng ball cao su để hút o Khi hút để pipette thẳng đứng, dùng NGĨN TRỎ điều chỉnh thể tích (ngón tay khơ), để ống hút ngang tầm nhìn mắt o Có loại: Nguyễn C.T Kiều YD45 GĨC HỌC TẬP K46 ▪ ▪ Pipette thường Micropipette: • Hút xác lượng dd nhỏ (ul) • Điều chỉnh thể tích dd nhanh chóng, dễ dàng, sai số • Dùng NGĨN CÁI điều chỉnh - Bình nón (erlenmeyer) - Ball cao su - Một số dụng cụ khác: cọ ống nghiệm, lưới tráng amiant, phễu lọc, đũa khuấy, kẹp ống nghiệm Nguyên tắc phương pháp quang - Định luật hấp thu ánh sáng (ĐL Beer-Lambert) o Chỉ với chùm tia đơn sắc o Mật độ quang tỷ lệ thuận với nồng độ dung dịch o Những lớp chất có chiều dày đồng điều kiện khác nhau, luôn hấp thu tỉ lệ chùm tia rọi vào lớp chất - Phương pháp định lượng đo quang o Chuyển chất X cần xác định nồng độ, khơng màu thành hợp chất có màu đặc biệt RX thuốc thử thích hợp Cơng thức: 𝐶= 𝑂𝐷−𝑂𝐷𝑡𝑟ắ𝑛𝑔 𝑂𝐷𝑜 − 𝑂𝐷𝑡𝑟ắ𝑛𝑔 𝑥 𝐶𝑜 ▪ 𝐶: Nồng độ ống thử ▪ 𝐶𝑜 : Nồng độ ống chuẩn ▪ 𝑂𝐷: Mật độ quang ống thử (chứa chất cần đo) ▪ 𝑂𝐷𝑜 : Mật độ quang ống chuẩn (chứa dd chuẩn) ▪ 𝑂𝐷𝑡𝑟ắ𝑛𝑔 : Mật độ quang ống trắng (chứa thuốc thử) Cách lấy bảo quản mẫu bệnh phẩm - Lấy mẫu máu o Chất chống đông: heparin, natri citrat, natri oxalat o Lấy buổi sáng sớm, nhịn đói 12h o Cần giải thích để BN an tâm (TH XN phân tích rối loạn thăng kiềm toan, tránh gây tăng thơng khí, dẫn đến kiềm hơ hấp thơng số định lượng bị sai lệch) o Vị trí lấy máu: khuỷu tay o Phân biệt máu tồn phần/huyết tương/huyết thanh: ▪ Máu có chứa chất chống đơng gọi máu tồn phần, ly tâm lấy phần dịch gọi huyết tương, huyết tương có chứa yếu tố đơng máu (chất chống đông lấy ion canxi) Máu không chứa chất chống đông→cục máu đông→ly tâm lấy phần dịch gọi huyết o Bảo quản: ▪ Khoảng 4g nhiệt độ phòng ▪ Trên 1-2 ngày 2-8oC ▪ Giữ mẫu lâu →để 0oC - Lấy nước tiểu o XN định tính: ▪ Dùng nước tiểu thời gian nào, lấy nước tiểu dịng ▪ TH đặc biệt: • Viêm tiết niệu: lấy lúc ngủ dậy • Nghi ngờ glucose niệu: lấy sau ăn 2h • Urobilinogen: 14-16h o XN định lượng: ▪ Thu góp nước tiểu 24h: đến ấn định, bỏ lần đầu, lấy lần sau đến hết thứ 24, lấy 0,5l kèm tài liệu liên quan (thông tin BN, thể tích nước tiểu 24h, chế độ ăn, khối lượng nước uống, thuốc dùng, trạng thái hoạt động/nghỉ ngơi, chẩn đoán) o Bảo quản: ▪ Nên dùng nước tiểu tươi phân tích, để nhiệt độ phịng Nguyễn C.T Kiều YD45 GÓC HỌC TẬP K46 ▪ ▪ ▪ Để 2-8oC vòng ngày để phân tích hormon/nồng độ thuốc Để mẫu 0oC ngày Khơng nên dùng hóa chất để bảo quản TN1 Phản ứng Molish TN2 Phản ứng Fehling TN3 Phản ứng màu Polysaccharid Các loại Glucid cho phức chất màu tím với dd Naphtol acid sulfurid đđ Nhận biết Glucid Trong môi trường kiềm mạnh, MS dạng endiols không bền, dễ khử kim loại nặng (𝐶𝑢2+, 𝐴𝑔+ , 𝐻𝑔+ ), nối đôi bị đứt tạo hh đường-acid Các PS kết hợp với Iod tạo thành phức hợp có màu khác tùy độ lớn phân tử PS Tinh bột → xanh dương Glycogen → đỏ nâu - Nhận biết glucid Xét nghiệm amylose có tính khử nước tiểu - Tìm Glucose nước tiểu Định lượng Glucose máu Kết Công thức tính Tiến hành Ý nghĩa Nguyên tắc Tên TN Bài Hóa học, chuyển hóa glucid xét nghiệm chuẩn đoán, theo dõi bệnh đái tháo đường Nguyễn C.T Kiều YD45 TN4 Phản ứng định lượng Glucose huyết tương (Phương pháp Somogyi Nelson) - Phương pháp đo: điểm cuối - Trong mơi trường kiềm, đun nóng Glucose huyết tương phản ứng với dd 𝐶𝑢𝑆𝑂4 tạo thành 𝐶𝑢2 𝑂 ↓ (đỏ gạch) - 𝐶𝑢2 𝑂 + Arsenomolybdat → Oxit molybdine (màu xanh) TN5 Phản ứng tìm Glucose nước tiểu (Phương pháp Benedict) Trong môi trường kiềm, đun nóng Glucose nước tiểu khử 𝐶𝑢2+ thành 𝐶𝑢+ tạo thành 𝐶𝑢2 𝑂 ↓ (đỏ gạch) Phản ứng bán định lượng (thông qua số lượng, màu sắc kết tủa, màu sắc dd thuốc thử sau phản ứng→ ước tính lượng Glucose nước tiểu) Quá trình định lượng gồm Thuốc thử Fehling giai đoạn: loại protein khỏi dùng để tìm huyết tương định lượng Glucose nước tiểu kết mang tính định tính 𝑂𝐷 𝐶 (𝑚𝑔/𝑑𝑙) = 𝑥𝐶 𝑂𝐷𝑜 𝑜 𝑂𝐷 = 𝑥10𝑥10 𝑂𝐷𝑜 - Thuốc thử trong, màu lam → (-) - Có tủa, thuốc thử vấy màu xanh lá→ (+), 𝐶𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒 < 5𝑔/𝐿 - Tủa màu vàng sẫm→ (++),𝐶𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒 − 10𝑔/ 𝐿 - Tủa đỏ gạch→ (+++),𝐶𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒 10 − 20𝑔/𝐿 - Tủa nâu đậm→ (++++),𝐶𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑒 > 20𝑔/𝐿 GĨC HỌC TẬP K46 Biện luận - Bình thường: 75-110mg/dl, lượng Glucose máu tăng vượt ngưỡng thận (180mg/dl) Glucose tiết qua nước tiểu - Thay đổi bệnh lý: Tăng: sau ăn, basedow, cường giáp, u não, viêm màng não, sang chấn sọ não, viêm tụy, đái tháo đường, u tủy thượng thận Giảm: đói, xơ gan, thiểu gan, cường tuyến tụy, nhược giáp TN2 MS + Base → endiols -𝐶𝑢2+, 𝑡 𝑜 → 𝐶𝑢+ + hỗn hợp đường-acid -(𝑂𝐻 − )→ CuOH (màu vàng) → 𝐶𝑢2 𝑂 ↓ (đỏ gạch) Nguyễn C.T Kiều YD45 TN1 Phản ứng định lượng Cholesteron huyết TN2 Phản ứng định lượng Triglycerid huyết TN3 Phản ứng định lượng LDLCholesteron huyết (Định lượng trực tiếp) TN4 Phản ứng định lượng HDLCholesteron huyết Phương pháp đo: điểm cuối Tuyến tính tới nồng độ 750mg/dl TN5 Phản ứng tìm thể Ceton nước tiểu Trong môi trường kiềm, Sodium nitroprussiat tác dụng với Ceton cho phức màu tím - Độ bền màu: 60 phút - Độ tuyến tính: 9,741062mg/dl Hemoglobin>10g/l, bilirubin>40mg/dl ảnh hưởng kết Cơng thức tính Tiến hành Ngun tắc Tên TN GÓC HỌC TẬP K46 Bài Chuyển hóa lipid số xét nghiệm liên quan đến bệnh lý tim mạch Nguyễn C.T Kiều YD45 - Độ tuyến tính: 1,9193mg/dl - Hemoglobin>10g/l, bilirubin>40mg/dl, triglycerid>2000mg/dl ảnh hưởng kết LDL = Cholesteron – HDL-Cholesteron𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑦𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑 (mg/dl) - Gồm giai đoạn - Độ tuyến tính: 1000mg/dl - Bình thường: 260mg/dl Tăng: hội chứng tăng - Tăng có tác dụng làm Tiên phát: bệnh tăng lipid lipid máu nguyên-thứ giảm nguy xơ vữa gia đình, Cholesteron tồn phát, xơ vữa ĐM, hội ĐM bệnh mạch phần lên đến 8-10g/L chứng thận hư, viêm tụy, vành Thứ phát: suy gan, xơ gan rượu - Giảm xơ vữa Bệnh gan: vàng da tắc mật, Nếu 11mmol/L có ĐM, bệnh mạch vành, viêm nhiễm độc, loạn thể dẫn đến viêm tụy cấp béo phì, hút thuốc Glycogen gan tính Bệnh thận: hội chứng thận Giảm: xơ gan, bệnh hư, viêm thận tăng ure, mạn tính, suy kiệt, lupus đỏ cường tuyến giáp Bệnh tụy: sau phẫu thuật tụy, viêm tụy cấp-mãn, đái tháo đường Bệnh tuyến giáp: suy giáp tiên-thứ phát, phù niêm thiếu iod Rối loạn chuyển hóa lipid: xơ vữa ĐM, tăng HA Giảm: 1g/dl, bilirubin>40mg/dl, triglycerid>2g/dl ảnh hưởng kết 𝑂𝐷 𝐶(g/L = 𝑂𝐷 𝑥6,25𝑥10 Cơng thức tính 𝑜 TN3 Phản ứng định lượng Ure - Phương pháp đo: động học điểm phản ứng - Sự giảm mật độ quang NADH→NAD tỉ lệ thuận với nồng độ Ure TN4 Phản ứng định lượng Creatinin - Phương pháp đo: động học điểm - Trong môi trường kiềm, Creatinin phản ứng với acid picric tạo phức hợp màu - Độ tuyến tính: 11,5-300mg/dl Hemoglobin>0,75g/dl, bilirubin>30mg/dl, triglycerid>2g/dl ảnh hưởng kết - Lượng Creatinin nước tiểu 24h: C (mg/24h) = 𝐶𝐶𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛 (mg/dl) x ml nước tiểu 24h x 0,01 - Độ thải Creatinin (ml/phút): Creatinin clearance = 𝐶𝑐𝑟𝑒/𝑛𝑡 𝑥 𝒎𝒍 𝑛ướ𝑐 𝑡𝑖ể𝑢 24ℎ 𝐶𝑐𝑟𝑒/𝑚á𝑢 𝑥1440 Nguyễn C.T Kiều YD45 Biện luận GĨC HỌC TẬP K46 - Bình thường: 60-80g/L - Thay đổi sinh lý: tăng nhu cầu protein (thai nghén, cho bú) - Thay đổi bệnh lý: Tăng: hội chứng nước liên tục (nôn, tiêu chảy), sốt kéo dài, bệnh đa u tủy, bệnh Addison Giảm: xơ gan, viêm gan, hội chứng thận hư, máu - Bình thường: Huyết thanh/huyết tương: Nam: 3,5-7,2mg/dl Nữ: 2,6-6,0mg/dl Nước tiểu: 250750mg/24h - Bệnh lý: tăng Nguyên phát: thống phong (Gout) Thứ phát: Bệnh máu (đa HC, BC cấp, u hạch) Điều trị tia X, chất PX, chống chuyển hóa Bệnh thận: viêm thận mãn, suy thận Ure sản phẩm thối hóa quan trọng Protein - Bình thường: Ure máu: Người lớn: 17-43mg/dl Trẻ em: 1-3 tuổi (11-36mg/dl), 4-13 tuổi (15-36mg/dl), 14-19 tuổi (1845mg/dl) Ure nước tiểu: 26-43g/24h Ure máu/creatinin máu: 20-35 - Thay đổi sinh lý: chế độ ăn, tuổi - Thay đổi bệnh lý: Ure máu tăng: Thận: cấp tính (viêm cầu thận cấp, viêm ống thận cấp nhiễm độc/tai biến truyền nhầm nhóm máu, sốt vàng da chảy máu xoắn khuẩn Leptospira gây hội chứng gan thận cấp), mãn tính (viêm thận mãn tính/suy thận) Ngồi thận: ứ nước tiểu (chướng ngại tiết niệu: sỏi NQ, u tiền liệt tuyến) Ure máu giảm: có thai, truyền nước nhiều, tổn thương gan nặng, chế độ ăn thiếu protid lâu ngày - Bình thường: Creatinin máu: Nam: 0,6-1,1mg/dl Nữ: 0,5-0,9mg/dl Creatinin nước tiểu: 1000-1500mg/24h Độ thải Creatinin: Nam: 98-156ml/phút Nữ: 95-160ml/phút - Thay đổi bệnh lý: Creatinin máu tăng bệnh thận (suy thận, viêm cầu thận cấp-mãn tính TN2 Acid uric + 𝐻2 𝑂 + 𝑂2 -Uricase→ Allantoin + 𝐶𝑂2 + 𝐻2 𝑂2 2𝐻2 𝑂2 + DHBS + 4AAP -Peroxydase→ Quinoneimine dye (phức hợp màu hồng cánh sen) + HCl + 4𝐻2 𝑂 TN3 Ure + 𝐻2 𝑂 -Urease→ 2𝑁𝐻4 + + 𝐶𝑂3 2− 2𝑁𝐻4 + + 𝛼-KG + NADH -GLDH→ L-Glutamate + 𝑁𝐴𝐷 + + 𝐻2 𝑂 TN4 - Trên đường thành lập aa có tạo thành Creatin - Thường lượng Creatin tỉ lệ với khối cơ, thoái biến cho Creatinin acid phosphoric - Creatinin đào thải thận lượng tiết ngày tương đối không thay đổi không bị ảnh hưởng chế độ ăn - ĐỊnh lượng Creatinin máu nước tiểu có giá trị việc thăm dò chức lọc cầu thận Creatinin + Acid picric -𝑂𝐻 − → Creatinin-picrate complex (màu vàng cam) - Creatinin thành phần đạm máu ổn định thường sử dụng song song với xét nghiệm ure để theo dõi bệnh lí thận TN5 Sử dụng giấy nhúng nước tiểu thông số Các thông số pH-Glucose-Protein Nguyễn C.T Kiều YD45 TN6 Tổng phân tích nước tiểu (sử dụng giấy nhúng nước tiểu 10 thơng số) Glucose-Bilirubin-cetone-Tỉ trọng máu-pH-ProteinUrobilinogen-Nitrite-Bạch cầu GĨC HỌC TẬP K46 Nguyên tắc/Chỉ định Cách dùng Chẩn đoán, theo dõi bệnh đái tháo đường, bệnh liên quan đến thận đường tiết niệu Xét nghiệm tình trạng chuyển hóa đường, chức gan, thận, thăng toan kiềm, nhiễm trùng tiết niệu - Nước tiểu mới, lắc đều, không quay li tâm - Máy quang phổ kế đo bán định lượng - Đọc kết sau 60s - Nước tiểu mới, lắc đều, không quay li tâm - Sau phút, độ đậm màu phản ứng khơng cịn xác - pH: vàng cam→xanh (5-9) - Glucose: xanh lam (-)→nâu (+), nâu đậm→nồng độ đường cao Yếu/âm giả: tỉ trọng nước tiểu cao, nồng độ ceton cao, BN dùng nhiều vitamin C Xác định kết Dương giả: dụng cụ lẫn chất sát trùng (Javel, xà phòng) - Protein: vàng nhạt (-)→xanh (+) Dương giả: pH nước tiểu kiềm, nước tiểu BN bị đục, dụng cụ chứa acetat amonium, sau dùng Quinin - pH bình thường: Có tính acid yếu (5-6), thay đổi (4-8), 8: kiềm mạnh Thấp lúc sáng sớm chưa ăn Cao sau bữa ăn - Protein bình thường: Chứa lượng nhỏ albumin globulin (nồng độ thấp, không đủ tạo phản ứng (+), Khi XN nước tiểu cần cô đặc, lấy nước Biện luận tiểu lần tiểu buổi sáng sớm Độ nhạy: 10-15mg/dl - Glucose bình thường: Khơng có nước tiểu, đường huyết tăng vượt ngưỡng thận/hấp thu đường thận bị giảm→Glucose xuất nước tiểu (đái tháo đường, stress, viêm tụy cấp, Cushing, sau gây mê) Độ nhạy: 100mg/dl Độ đặc hiệu: Glucose TN6 Độ nhạy vùng thử Glucose Bilirubin Cetone Máu Protein Nitrite Bạch cầu Nguyễn C.T Kiều YD45 - Glucose: test xảy nhờ enzym: glucose oxydase peroxydase, không bị ảnh hưởng tỉ trọng, pH, ceton Tạo thành phức màu: xanh→nâu - Bilirubin: test xảy dựa kết hợp bilirubin với diazotized dicloroanilin môi trường acid mạnh - Ceton: phản ứng acetoacetic acid với nitroprusside cho màu hồng - Tỉ trọng: có mặt cation, proton giải phóng tạo thay đổi màu chất thị bromothymol từ xanh da trời→xanh cây→vàng - Máu: hoạt động hemoglobin giống peroxydase phân giải diisopropylbenzen dihydroperoxide Màu thay đổi từ cam→xanh - pH: dựa có mặt chất thị màu đỏ methyl xanh bromothymol Màu thay đổi từ cam vàng→xanh - Protein: thay đổi nồng độ protein phụ thuộc vào chất thị pH, xanh lá→protein(+) - Urobilinogen: muối diazonium phản ứng tức với urobilinogen tạo nên chất azo màu đỏ, màu nhạt nồng độ bình thường 1mg% - Nitrite: phát gián tiếp có mặt VK tạo nên nitrite đổi màu từ hồng→đỏ (hồng nhạt→VK(+)) - Bạch cầu: thể có mặt men esterase có bạch cầu hạt tác dụng thủy phân muối este indoxyl, indoxyl phản ứng với muối diazonium tạo sản phẩm màu tím 75-125 mg/dl 0,4-0,8 mg/dl 5-10 mg/dl 0,015-0,062 mg/dl 15-30 mg/dl 0,06-0,1 mg/dl 5-15 tế bào/𝜇𝐿 10 Nguyên tắc GÓC HỌC TẬP K46 Bài Chuyển hóa hemoglobin số xét nghiệm chẩn đoán, theo dõi bệnh lý gan mật TN1 Phản ứng định lượng bilirubin toàn phần TN2 Phản ứng định lượng bilirubin trực tiếp TN3 Phản ứng tìm hemoglobin nước tiểu Bilirubin gluconat phản ứng trực tiếp với muối sulphodiazonium hình thành phức màu azobilirubin Màu azobilirubin hình thành đo bước sóng 540-550nm tỷ lệ thuận với nồng độ bilirubin toàn phần mẫu thử Bilirubin gluconat phản ứng trực tiếp với muối sulphodiazonium hình thành phức màu azobilirubin Màu azobilirubin hình thành đo bước sóng 540550nm tỷ lệ thuận với nồng độ bilirubin trực tiếp mẫu thử - Hemoglobin (ngay bị biến tính) có tác dụng peroxydase (hay catalase) giải phóng oxy hoạt động từ hydroperoxyt (nước oxy già) Oxy có khả oxy hóa số thuốc thử màu đặc biệt (vd: phenolphtalein dạng khử, pyramindin, pyridin) Đối với phenolphtalein, O2 oxy hóa dạng khử phenolphtalein→phức màu đỏ - Phản ứng nhạy→màu xuất Nếu sau phút có màu→phản ứng (-), khơng phải Hb tác dụng - Muốn phân biệt Hb hay hồng cầu→ly tâm soi cặn nước tiểu, có hồng cầu kết luận có máu nước tiểu TN5 Phản ứng định lượng GOT máu - Dùng phương pháp: động học đa điểm để xác định hoạt độ men alanine aminotransferase (ALT) theo IFCC - Sự giảm mật độ quang NADH→NAD tỉ lệ thuận với hoạt độ ALT/GPT mẫu thử - Dùng phương pháp: động học đa điểm để xác định hoạt độ men aspartate amintransferase (AST) theo khuyến cáo IFCC Huyết thanh, huyết tương chống đông heparin EDTA (không sử dụng mẫu bị tán huyết) - Huyết (không sử dụng mẫu bị tán huyết) - Huyết tương chống đông heparin EDTA 0-20 mg/dl 4,4-360 U/L 3,84-390 U/L Hemoglobin >2,5g/l Bilirubin >30mg/dl Triglycerid >2g/dl Bilirubin >30mg/dl Triglycerid >2g/dl Tán huyết (do hoạt động đồng thời AST hồng cầu) 0,18-23 mg/dl Yếu tố ảnh hường Độ tuyến tính Mẫu thử Chú ý Cetrimonium bromid: gia tốc phản ứng bilirubin GT TN4 Phản ứng định lượng GPT máu Nguyễn C.T Kiều YD45 11 Giá trị bình thường Biện luận GĨC HỌC TẬP K46 - Người lớn: ≤2 mg/dl - Trẻ sơ sinh sinh non: 0-1 ngày tuổi: 1-8 mg/dl 1-2 ngày tuổi: 6-12 mg/dl 3-5 ngày tuổi:10-14 mg/dl - Trẻ sơ sinh đủ tháng: 0-1 ngày tuổi: 2-6 mg/dl 1-2 ngày tuổi: 6-10 mg/dl 3-5 ngày tuổi: 4-8 mg/dl 0-0,2 mg/dl Bình thường khơng có máu hay hemoglobin nước tiểu Nam: ≤45 U/L Nữ: ≤34 U/L Nam ≤ 35 U/L Nữ ≤ 31 U/L - Bệnh lí: phân loại vàng da theo giai đoạn chuyển hóa + Vàng da trước gan: Bilirubin GT tăng, TT bình thường Gặp bệnh gây tán huyết: hồng cầu dễ vỡ (hình cầu, bia, liềm), sốt rét, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD + Vàng da gan: Bilirubin GT tăng, TT tăng Gặp bệnh: viêm gan, xơ gan, ung thư gan + Vàng da sau gan: Bilirubin GT bình thường, TT tăng Gặp bệnh: tắc ống dẫn mật (do giun, sỏi mật, ung thư đầu tụy) Trong số trường hợp bệnh lý: + Có thể tiểu Hb bệnh thiếu G6PD, truyền nhầm nhóm máu + Có thể tiểu máu (hồng cầu) sạn, lao đường tiểu, ung thư bọng đái, thận Thay đổi sinh lý: - Giảm: thiếu vitamin B6 - Tăng: thuốc đái tháo đường, ngừa thai, uống rượu, gout, chống tăng HA, chống đau thắt, trợ tim, giảm lipid máu loại clofibrat, chống động kinh, tăng trọng, tư đứng, tuổi 40-60, tập luyện nhiều kéo dài Thay đổi bệnh lí: ý tăng - Khi tăng >10 lần xét nghiệm đặc hiệu hội chứng hủy tế bào - Bệnh lý gan: viêm gan cấp (nhất viêm gan siêu vi), viêm gan cấp ngộ độc, thuốc, nhiễm trùng hay virut GPT tăng cao đặc hiệu GOT - Bệnh lí tim: nhồi máu tim GOT>GPT GOT tăng rõ, 10g sau đau - Bệnh bệnh khác: loạn dưỡng xương, viêm da, viêm cơ, tiêu myoglobin, viêm tụy cấp, tổn thương ruột (phẫu thuật, nhồi máu), nhồi máu phổi (tăng nhẹ), nhồi máu não (tăng tuần 50% số ca), ung thư não, nhồi máu thận Thay đổi bệnh lí: - Enzym AST có nhiều bào tương ty thể tế bào gan, tim, - Hoạt độ AST huyết tương tăng (>ALT) nhồi máu tim - Hoạt độ AST huyết tương tăng bệnh (loạn dưỡng, viêm cơ, tiêu myoglobin) bệnh khác (viêm da, viêm tụy cấp, tổn thương ruột, nhồi máu phổi, thận, não IFCC: Hiệp hội quốc tế hóa học lâm sàng TN4 2-Oxaloglutarate + L-alanine GPT→ L-glutamate + pyruvate Nguyễn C.T Kiều YD45 12 GÓC HỌC TẬP K46 Pyruvate + NADH LDH→ L-lactac + NAD+ ALT (transaminase pyruvate glutamate) thuộc nhóm transaminase xúc tác chuyển đổi axit amin 𝛼 − 𝑘𝑒𝑡𝑜 axit tương ứng thông qua việc chuyển giao nhóm amin, đồng thời xúc tác q trình ngược lại Mặc dù ALT chủ yếu tồn gan, lượng nhỏ phát thận, tim, xương, tụy, lách, phổi Tăng hoạt độ transaminase dấu hiệu nhồi máu tim, hepatopathies, loạn dưỡng cơ, tổn thương nội quan Tăng hoạt độ ALT huyết gợi ý tổn thương nhu mô gan, tăng hoạt độ AST không thiết nguyên nhân từ gan TN5 2-Oxaloglutarate + L-aspartate GOT→ L-glutamate + Oxaloacetate Oxaloacetate + NADH MDH→ Malate + NAD+ AST (glutamate oxaloacetate transaminase) xúc tác axit amin 𝛼 − 𝑘𝑒𝑡𝑜 axit chuyển nhóm amin AST thường tìm thấy mơ người Mặc dù, AST hầu hết có tim, tìm thấy não, gan, niêm mạc dày, mô mỡ, xương, thận AST diện tế bào chất ty thể Trong trường hợp tổn thương mô nhẹ, AST chủ yếu từ tế bào chất, từ ty lạp thể Khi mơ tổn thương nghiêm trọng, AST ti thể xuất Tăng hoạt độ AST báo hiệu nhồi máu tim, bệnh gan, loạn dưỡng cơ, tổn thương quan TN7 Cặn lắng nước tiểu - Nguyên tắc: nước tiểu có lơ lửng thành phần nhỏ như: tế bào tổ chức, tinh thể hóa học Khi ly tâm, thành phần tập trung lại Lấy giọt cặn ly tâm đem soi kính hiển vi lam kính lammelle - Các bước tiến hành kỹ thuật: o Lắc nhẹ bình nón/lọ nước tiểu để cặn phân tán o Rót vào ống ly tâm với khoảng 2/3 ống o Quay ly tâm với tốc độ 1500 vòng/phút phút o Nhẹ nhàng nghiêng ống ly tâm đổ phần nước tiểu o Nhuộm cặn lắng đáy ống nghiệm cách nhỏ giọt sternheiner malbin staining o Dùng pipette Pasteur hút vào thổi 3-4 lần cho cặn đáy ống nghiệm đồng o Lấy giọt cặn đồng để lên lam kính, đậy lammelle lên lam kính (nơi có giọt cặn) Ghi số thứ tự nước tiểu lam o Có thể xem cặn nước tiểu lam kính o Xem kính hiển vi với: vật kính 10X để nhìn tổng qt quang trường, vật kính 40X để xác định loại tế bào - Những hình ảnh xem: Nguyễn C.T Kiều YD45 13 GÓC HỌC TẬP K46 Nguyễn C.T Kiều YD45 14 TN1 Phản ứng xác định hoạt độ amylase nước tiểu (Phương pháp Wohlgemuth) - Dùng phương pháp pha loãng dần nước tiểu để tìm lượng enzym tối thiểu phân hủy hết 2ml dd hồ tinh bột 1/1000 37Oc 30 phút - Kiểm soát độ phân hủy hồ tinh bột iode Tính hoạt độ amylase theo đơn vị Wohlgemuth - Định nghĩa đơn vị Wohlgemuth: lượng amylase tối thiểu có khả thủy phân 1ml dung dịch hồ tinh bột 1/1000 37oC 30 phút Quan sát ống: - Các ống mà tinh bột bị thủy phân hoàn toàn thành maltose, glucose khơng màu - Các ống tinh bột bị thủy phân dở dang dạng dextrin có màu trung gian - Ống tinh bột màu xanh dương - Chọn ống để biểu diễn KQ: chọn ống có màu trung gian hay khơng màu trước ống có màu xanh dương trước tiên Hoạt độ amylase theo đơn vị Wohlgemuth = Độ pha loãng nước tiểu ống biểu diễn KQ x TN2 Phản ứng định lượng amylase huyết TN3 Phản ứng định lượng CK-MB máu TN4 Phản ứng Rivalta - Phương pháp đo động học đa điểm CNPG (2-Chloro-4nitrophenol-𝛽-1-4 galactopyranosylmaltotrioside) Phản ứng trực tiếp với 𝛼amylase giải phóng CNP (2-Chloros-4-nitrophenol) từ chất Độ hấp thu tăng dần theo phút có liên quan trực tiếp đến họat độ 𝛼-amylase mẫu thử - Kháng thể chuyên biệt kháng CK-M ức chế CKMM hoạt hóa tiểu phân CK-M Chỉ cịn CK-B hoạt hóa định lượng - Dựa phản ứng protein bị đông kết acid acetic - Mục đích làm phản ứng để đánh giá lượng protein dịch làm xét nghiệm - Huyết (không sử dụng - Huyết thanh, huyết tương Dịch màng phổi mẫu bị tán huyết) chống đông EDTA - Huyết tương chống đông hay heparin (không sử dụng heparin hay EDTA mẫu bị tán huyết) Mẫu thử Cách tính KQ Chú ý tiến hành Nguyên tắc GÓC HỌC TẬP K46 BÀI ĐỊNH LƯỢNG VÀ PHÂN TÍCH CÁC THAY ĐỔI BỆNH LÝ VỀ ENZYM Độ tuyến tính Yếu tố ảnh hưởng Trị số Từ 16-32 đơn vị (có thể thay đổi bình từ 8-64 đơn vị Wohlgemuth) thường Cách đọc kết Nguyễn C.T Kiều YD45 10,8-1500 U/L Hemoglobin>0,25g/dl, bilirubin>40mg/dl, triglycerid>2g/dl - Huyết thanh, huyết tương