Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN7774 2007 Công ty luật Minh Khuê www luatminhkhue vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7774 2007 SỮA XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN PHƯƠNG PHÁP NHUỘM ĐEN AMIDO (PHƯƠNG PHÁP THÔNG THƯỜNG) Mi[.]
Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7774:2007 SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN - PHƯƠNG PHÁP NHUỘM ĐEN AMIDO (PHƯƠNG PHÁP THÔNG THƯỜNG) Milk - Determination of protein content - Amido black dye-binding method (Routine method) Lời nói đầu TCVN 7774:2007 hồn tồn tương đương với ISO 5542:1984; TCVN 7774:2007 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG PROTEIN - PHƯƠNG PHÁP NHUỘM ĐEN AMIDO (PHƯƠNG PHÁP THÔNG THƯỜNG) Milk - Determination of protein content - Amido black dye-binding method (Routine method) Phạm vi áp dụng 1.1 Tiêu chuẩn qui định phương pháp nhuộm đen amido để xác định hàm lượng protein sữa phương pháp thông thường Do thành phần vật liệu nhuộm đen amido thay đổi, nên phương pháp mô tả theo kinh nghiệm phụ thuộc vào số liên quan đến hàm lượng protein thu từ việc xác định hàm lượng nitơ sữa phương pháp chuẩn Kjeldahl (ví dụ: mơ tả IDF Standard 20) 1.2 Phương pháp áp dụng cho sữa tươi nguyên liệu sữa nguyên chất, sữa tách phần chất béo sữa gầy xử lý nhiệt chế biến học (ví dụ: trùng, tiệt trùng, đồng hóa, hồn ngun), với điều kiện mẫu trạng thái tốt Trong vài trường hợp, phương pháp áp dụng cho mẫu bảo quản (xem 10.1) Phương pháp cho phép xác định đơn giản nhanh hàm lượng protein sữa thích hợp cho phép xác định đơn lẻ cho phép xác định số lượng nhỏ mẫu cho dãy nhiều phép xác định Đối với dãy phép xác định, cần đến thiết bị đặc thù (nghĩa dụng cụ pipet nhiều đầu, máy ly tâm) (xem 6.4 6.7) thường xuyên kiểm tra mẫu kiểm chứng việc hiệu chỉnh “độ trệch” (xem 8.6.2) Vì phương pháp tốn nhiều thời gian hiệu chuẩn, nên phòng thử nghiệm mà thực vài phép xác định loại mẫu cụ thể thường trơng cậy vào phịng thử nghiệm trung tâm dung dịch nhuộm mẫu kiểm chứng CHÚ THÍCH: Tùy theo nguồn gốc mẫu phương pháp chuẩn sử dụng mà phương pháp mơ tả tiêu chuẩn dùng cho phép xác định thông thường hàm lượng protein sữa (nghĩa nitơ tổng số x 6,38) mà để xác định hàm lượng “protein thực” có cải biến cho hàm lượng protein casein protein whey sữa bò sữa thu từ loài động vật khác (dê, cừu…) Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm ban hành áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm ban hành áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu IDF Standard 20: Determination of protein content of milk by the Kjeldahl method (Xác định hàm lượng protein sữa phương pháp Kjeldahl) Định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng định nghĩa sau: Hàm lượng protein (protein content) Giá trị qui ước thu cách nhân hàm lượng nitơ xác định phương pháp Kjeldahl (ví dụ: mơ tả IDF Standard 20) tính phần trăm khối lượng, với hệ số thích hợp CHÚ THÍCH: Cần ý để phân biệt "hàm lượng protein" sữa theo định nghĩa với "hàm lượng protein thực" mà loại bỏ phần nitơ phi protein (NPN) sữa LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Nguyên tắc Cho dung dịch đen amido đệm pH 2,4, vào phần mẫu thử, kết tạo thành phức chất protein nhuộm màu khơng hịa tan Loại bỏ hợp chất không tan ly tâm (hoặc lọc) xác định hàm lượng protein từ độ hấp thụ dung dịch tạo thành có chứa lượng thuốc nhuộm vượt trội Thuốc thử Tất thuốc thử sử dụng phải thuộc loại phân tích, trừ có qui định khác Nước sử dụng phải nước cất nước có chất lượng tương đương CHÚ THÍCH: Các ion canxi cản trở phép xác định 5.1 Thuốc nhuộm đen amido 10B, (axit đen 1, Cl 204701) để thử nghiệm sữa, có độ ẩm nhỏ % (phần khối lượng), sản phẩm tinh CHÚ THÍCH: Thuốc nhuộm loại hút ẩm cần bảo vệ để không bị hấp thụ ẩm 5.2 Dung dịch chuẩn đen amido Chuẩn bị dung dịch chuẩn theo qui trình đây: 5.2.1 Dung dịch chuẩn ban đầu, để chuẩn bị dung dịch chuẩn đối chứng Cho vào bình định mức 000 ml có chứa khoảng 600 ml nước loại sau đây: - 0,900 g thuốc nhuộm đen amido 10B tinh có hàm lượng thuốc nhuộm cao; - 2,08 g dinatri hydro octophosphat ngậm hai phân tử nước (Na 2HPO4.2H2O); - 15,8 g axit nitric ngậm phân tử nước (C 6H8O7.H2O) Khuấy học h để hòa tan Dùng máy đo pH (6.8) để kiểm tra pH, pH phải 2,40 ± 0,10 20 0C; chỉnh pH cách thêm dung dịch axit sulfuric dung dịch natri hydroxit, cần Pha loãng nước đến vạch lắc 15 Để yên dung dịch qua đêm trước sử dụng Nếu dung dịch sử dụng vài ngày bảo quản cách thêm 0,1 ml dung dịch thymol % cồn 94 % đến 97 % (phần thể tích) Từ dung dịch chuẩn ban đầu này, chuẩn bị dung dịch so sánh chuẩn 5.3.2 5.3.3 Xác định độ hấp thụ tương nước cất bước sóng chuẩn cuvet chuẩn 5.2.2 Dung dịch chuẩn, dùng cho phép xác định thông thường với số lượng giới hạn Hòa tan hết cốc có mỏ: - 0,90 g đến 0,95 g thuốc nhuộm đen amido 10B (5.1) (tùy thuộc vào hàm lượng thuốc nhuộm); - 2,08 g dinatri hydro octophosphat ngậm hai phân tử nước (Na 2HPO4.2H2O); - 15,8 g axit nitric ngậm phân tử nước (C 6H8O7.H2O) khoảng từ 100 ml đến 200 ml nước, nhiệt độ từ 70 0C đến 80 0C, lượng gấp đôi gấp ba thuốc thử nước Làm nguội chuyển sang bình định mức 000 ml, 000 ml 000 ml, pha loãng đến 600 ml, 200 ml 800 ml tương ứng trộn Chỉnh pH đến 2,40 ± 0,10 20 0C 5.2.1 Pha loãng đến vạch lắc trộn 15 Để yên qua đêm Từ dung dịch ban đầu này, chuẩn bị dung dịch so sánh chuẩn bị 5.3.2 5.3.3 Xác định độ hấp thụ tương nước cất 5.2.1 Pha loãng dung dịch ban đầu với lượng dung dịch đệm xitrat (5.2.4) biết để thu dung dịch chuẩn mà dung dịch chuẩn có độ hấp thụ thu từ chuẩn ban đầu (5.2.1) Bảo quản mô tả 5.2.1 để n qua đêm CHÚ THÍCH: Vì nồng độ đen amido thay đổi từ mẻ đến mẻ khác, nên mẻ thuốc thử cần điều chỉnh nồng độ dung dịch chuẩn ban đầu 5.2.1, độ hấp thụ dung dịch so sánh chuẩn chuẩn bị 5.3.2 5.3.3 giống với độ hấp thụ thu trình hiệu chuẩn (xem 8.5) 5.2.3 Dung dịch chuẩn, dùng cho dãy xác định thông thường 1) Vật liệu thích hợp có bán sẵn thị trường Các chi tiết lấy từ Ban thư ký ISO/TC 34 (MSZH, Hungary) từ Ban thư ký trung tâm ISO LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn Khuấy học h để hòa tan hết lượng tương ứng thuốc thử qui định 5.2.2 với lượng nước vừa đến mức thấp vạch thích hợp, đựng bình có vạch mức 000 ml (có nhiều vạch) Chỉnh pH đến 2,40 ± 0,10 20 0C mô tả 5.2.1 Pha loãng nước đến vạch lắc 15 Để yên dung dịch qua đêm Từ dung dịch ban đầu này, chuẩn bị dung dịch so sánh chuẩn qui định 5.3.2, 5.3.3 xác định độ hấp thụ tương nước cất 5.2.1 Pha loãng dung dịch ban đầu với lượng biết dung dịch đệm xitrat (5.2.4) để thu dung dịch chuẩn, từ dung dịch chuẩn bị dung dịch so sánh chuẩn có độ hấp thụ thu từ chuẩn ban đầu (5.2.1) Bảo quản dung dịch theo 5.2.1 để yên qua đêm Xem thích 5.2.2 Kiểm tra lần cuối chỉnh nồng độ sử dụng mẫu kiểm chứng sữa lấy từ thùng lớn (xem 8.6) có hàm lượng protein xác định phương pháp chuẩn Kjeldahl (IDF Standard 20) 5.2.4 Dung dịch đệm, để pha lỗng Cho vào bình định mức 000 ml có chứa khoảng 600 ml nước loại sau đây: - 2,08 g dinatri hydro octophosphat ngậm hai phân tử nước (Na 2HPO4.2H2O); - 15,8 g axit nitric ngậm phân tử nước (C 6H8O7.H2O) Khuấy trộn pha lỗng nước đến vạch Có thể lấy bội số thuốc thử nước theo yêu cầu Mọi pha loãng thực với dung dịch đệm 5.3 Đen amido, dung dịch so sánh chuẩn Chuẩn bị dung dịch (các dung dịch so sánh chuẩn) dung dịch đen amido chuẩn (5.2) sau: 5.3.1 Trộn 10 thể tích dung dịch đen amido chuẩn với 90 thể tích nước cách dùng pipet lấy 10 ml dung dịch đen amido chuẩn cho vào bình định mức vạch 100 ml pha loãng đến vạch CHÚ THÍCH: Dung dịch sử dụng thay cho nước để thiết lập thang đọc zero máy đo quang phổ (6.6), cho thu giãn nở thang đo phần thang đo logarit vạch chia sử dụng 5.3.2 Trộn 50 thể tích dung dịch đen amido chuẩn với 50 thể tích nước cách dùng pipet lấy 50 ml dung dịch đen amido chuẩn cho vào bình định mức vạch 100 ml pha loãng đến vạch 5.3.3 Trộn 20 thể tích dung dịch đen amido chuẩn với 80 thể tích nước cách dùng pipet lấy 20 ml dung dịch đen amido chuẩn cho vào bình định mức vạch 100 ml pha loãng đến vạch CHÚ THÍCH: Các dung dịch 5.3.2 5.3.3 tương đương với nồng độ protein thấp, cao cho giá trị tương ứng Chúng sử dụng để kiểm soát hiệu chuẩn (xem 8.6.2) 5.4 Dung dịch đệm chuẩn, để chuẩn hóa máy đo pH (6.8) Thiết bị, dụng cụ Tất thiết bị, dụng cụ tiếp xúc với thuốc thử dung dịch thử phải làm vật liệu khơng ăn mịn điều kiện thử nghiệm không hấp thụ thuốc nhuộm với lượng mà ảnh hưởng đến kết 6.1 Ống nghiệm ống ly tâm, có nắp đậy cao su, cần 6.2 Giá đỡ, dùng cho ống nghiệm ống ly tâm (6.1) 6.3 Pipet xyranh, dùng để phân phối 1,0 ml ± 0,003 ml sữa (xem thích 6.4) 6.4 Pipet xyranh, dùng để phân phối 20 ml ± 0,02 ml dung dịch đen amido chuẩn (5.2) CHÚ THÍCH 1) Có thể sử dụng pipet xyranh (6.3 6.4) có dung tích khác, với điều kiện tỷ lệ thể tích phần mẫu thử (xem 8.2) thể tích dung dịch đen amido (xem 8.3.1) 1:20 nồng độ đen amido dịch lỏng phía (xem 8.3.3) ln lớn 0,1 g/l 2) Mọi dụng cụ pipet nhiều đầu sử dụng phải thỏa mãn điều kiện pipet xyranh đơn mô tả tiêu chuẩn 6.5 Máy lắc học máy trộn quay thiết bị trộn khí nén, cần LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn 6.6 Máy đo quang phổ, đo bước sóng khoảng từ 550 nm đến 620 nm, có cuvet (tốt kiểu dịng xun) với chiều dài đường quang từ 0,2 mm đến 1,0 mm CHÚ THÍCH: Khơng cần thiết phải thực bước sóng xác tương ứng với độ nhạy tối đa thực tế cho thấy việc hiệu chuẩn bù trừ cho độ lệch (xem 8.4) 6.7 Máy ly tâm dụng cụ lọc 6.7.1 Máy ly tâm, có cốc to giá đỡ, tạo gia tốc (350 ± 50) g phần ống nghiệm, vịng (xem 10.1) Gia tốc tạo ly tâm có bán kính hiệu lực (khoảng cách từ tâm trục máy ly tâm phần cuối phía ống nghiệm) thực tần số quay nêu bảng sau Bảng Bán kính hiệu lực Tần số quay mm min-1 240 140 245 130 250 120 255 110 260 100 265 090 270 080 275 070 300 020 325 980 CHÚ THÍCH: Gia tốc ly tâm tương đối tạo máy ly tâm tính theo công thức sau đây: 1,12 r n2 x 10-6 r bán kính nằm ngang hiệu lực, tính milimet; n tần số quay, phút 6.7.2 Thiết bị lọc Có thể cách lọc qua sợi thủy tinh, tốt silicon hóa, với áp suất nhẹ, để thay cho việc ly tâm Cần phải kiểm tra lượng thuốc thử hấp phụ lên lọc tối thiểu không đổi diện tích bề mặt cho Đối với áp suất cho, độ xốp lọc cho phép hiệu chỉnh việc lọc kết tủa hình thành phức chất protein nhuộm (xem thêm 10.1) 6.8 Máy đo pH, có điện cực thủy tinh điện cực chuẩn thích hợp, cho phép đo pH xác đến 0,01 đơn vị pH 6.9 Bình định mức vạch, dung tích 100 ml, 000 ml, 000 ml 000 ml 6.10 Cân, có độ xác đến 0,001 g Lấy mẫu Xem TCVN 6400 (ISO 707) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị mẫu thử Đưa mẫu thử nhiệt độ từ 20 0C đến 30 0C cách đặt chai đựng mẫu vào nồi cách thủy, cần Trộn kỹ mẫu sữa cách đảo chiều nhẹ nhàng chai đựng mẫu ba đến bốn lần, không làm tạo bọt làm xáo trộn chất béo Nếu gặp phải khó khăn việc làm phân tán lớp cream, thấy LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Kh www.luatminhkhue.vn có tạo kem nhẹ, làm ấm từ từ mẫu đến khoảng 35 0C đến 40 0C nồi cách thủy, lắc nhẹ; sử dụng đồng hóa mẫu để làm phân tán chất béo, cần Nếu chất béo phân tán không đồng đều, đưa nhanh mẫu nhiệt độ 20 0C Để yên mẫu phút sau chỉnh nhiệt độ lần cuối để bọt khí (khơng kéo dài thời gian làm xáo trộn chất béo) 8.2 Phần mẫu thử Dùng pipet xyranh (6.3) lấy ml mẫu thử chuẩn bị (8.1) cho vào ống nghiệm máy ly tâm (6.1) Lắc nhẹ thời gian ngắn trước lấy pipet 8.3 Xác định 8.3.1 Dùng pipet xyranh (6.4) lấy 20 ml dung dịch đen amido chuẩn (5.2) cho vào phần mẫu thử, đậy ống, cần dùng tay để lắc lượng chứa bên ống 30 s cách đưa lệch khỏi tâm khoảng 25 cm máy lắc học (6.5) Cách khác, sử dụng khí nén để trộn 8.3.2 Tháo nắp đậy có tách kết tủa protein lọc ly tâm Trong trường hợp ly tâm đặt ống vào máy ly tâm (6.7.1) cho ly tâm sau đạt gia tốc đáy ống (350 ± 50) g 8.3.3 Đổ đầy dịch lỏng phía vào cuvet đo độ hấp thụ sau chỉnh máy đo quang phổ (6.6) độ hấp thụ zero dựa vào dung dịch so sánh chuẩn đen amido (5.3.1) bước sóng chọn (xem 6.6) 8.4 Dựng đường chuẩn Lấy 40 mẫu sữa khác (nếu lấy mẫu từ bị riêng lẻ) có hàm lượng protein tổng số dao động từ 2,5 % đến 4,5 % (phần khối lượng) lớn (xem thích) Xác định hàm lượng protein mẫu sử dụng phương pháp chuẩn (IDF Standard 20) Chỉnh kết việc bảo quản, cần (xem 10.1) Ngoài ra, dùng phương pháp mô tả để đo độ hấp thụ dịch phía thu từ mẫu Dựng đồ thị hàm lượng protein thu phương pháp chuẩn theo độ hấp thụ Nếu có sai lệch khỏi tuyến tính protein cao (độ hấp thụ thấp) cuối đường cong, bỏ kết phép tính hồi qui (Qui trình xác định hàm lượng protein cao mô tả 10.2) Cũng bỏ qua giá trị sai lệch nhiều, nghĩa hàm lượng protein xác định phương pháp chuẩn sai khác hai lần độ lệch chuẩn (được suy từ việc tính phương trình hồi qui đây) từ giá trị tương ứng đồ thị Suy luận phương trình hồi qui hàm lượng protein xác định phương pháp chuẩn (y) dựa vào độ hấp thụ (x) dựng đồ đường chuẩn y x CHÚ THÍCH: Các sản phẩm sữa xử lý nhiệt (thanh trùng tiệt trùng) sữa hồn ngun cần đến đường chuẩn khác 8.5 Dung dịch so sánh chuẩn Đồng thời với việc dựng đường chuẩn, đo độ hấp thụ hai dung dịch so sánh chuẩn chuẩn bị 5.3.2 5.3.3 (xem thích 5.2.2) 8.6 Kiểm soát hiệu chuẩn 8.6.1 Các mẫu sữa kiểm chứng Vì việc hiệu chuẩn bị ảnh hưởng biến đổi theo mùa phần nitơ khác sữa, cần kiểm tra thường xuyên Việc thực cách sử dụng mẫu đại diện từ lượng sữa lớn (nghĩa từ lượng lớn sữa bị) hàm lượng protein trung bình, hoặc, tốt sử dụng hai mẫu có hàm lượng protein cao hàm lượng protein thấp, xác định phương pháp chuẩn Kjeldahl (IDF Standard 20) 8.6.2 Sử dụng mẫu sữa kiểm chứng Phải lấy đủ mẫu kiểm chứng cách lấy mẫu đại diện từ mẫu kiểm chứng sữa 8.6.1 Có thể bổ sung chất bảo quản (xem 10.1) vào mẫu đại diện cho mẫu sử dụng quãng thời gian mà giá trị hàm lượng protein chuẩn không bị thay đổi Mẫu mẫu kiểm chứng cần thử nghiệm hai lần giống trước ngày thử nghiệm mẫu Thông thường, chúng phải thực sau dãy xác định tần số 10, vào khoảng định kỳ q trình thử nghiệm liên tục để kiểm sốt "độ trệch" Tương tự, cần kiểm LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 Công ty luật Minh Khuê www.luatminhkhue.vn tra số đọc máy đo quang phổ sử dụng dung dịch so sánh chuẩn, số đọc thang đo máy đo quang phổ xác định thời điểm hiệu chuẩn (xem 8.5 8.6.1) Biểu thị kết 9.1 Phương pháp tính Từ đường chuẩn (xem 8.4), từ độ hấp thụ đo suy hàm lượng protein mẫu biểu thị kết gam protein 100 g mẫu Hiệu chỉnh chênh lệch "hàm lượng protein Kjeldahl" hàm lượng protein đọc từ đường chuẩn mẫu sữa kiểm chứng (8.6.1 8.6.2) 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch kết hai phép xác định tiến hành liên tục nhanh, người thực hiện, không vượt 0,03 g protein 100 g mẫu 10 Trường hợp đặc biệt 10.1 Mẫu bảo quản Phương pháp áp dụng mà không cần sửa đổi, cho mẫu bảo quản cách bổ sung từ 0,07 % đến 0,1 % (phần khối lượng) thủy ngân (II) clorua (qui định cho phép) từ 0,02 % đến 0,3 % (phần khối lượng) natri azit Đối với mẫu bảo quản kali dicromat 0,1 % (phần khối lượng) phương pháp áp dụng thời gian tính từ lúc bổ sung dung dịch đen amido vào sữa đến lúc lấy số đọc quang phổ ngắn, trường hợp sử dụng phương pháp lọc (xem 6.7); áp dụng qui trình ly tâm Phương pháp khơng thể áp dụng cho mẫu bảo quản formaldehyt Trong trường hợp bảo quản viên thuốc, thường khoảng 0,5 % (phần khối lượng) natri clorua Điều ảnh hưởng đến độ hấp thụ, kết thu phương pháp Kjeldahl cần phải hiệu chỉnh kết Nên suy hàm lượng protein từ đường chuẩn đặc thù thu với mẫu bảo quản dựa vào kết thu phương pháp Kjeldahl hiệu chỉnh bảo quản (ảnh hưởng pha loãng viên thuốc, nitơ từ azit thuốc nén) 10.2 Sự lệch khỏi đường tuyến tính đường chuẩn Đối với loại sữa có hàm lượng protein cao mà cho kết khơng nằm đường chuẩn tuyến tính tiến hành sau: Pha loãng lượng định mẫu sữa có hàm lượng protein cao với thể tích tương tự mẫu sữa có hàm lượng protein biết (dung dịch chuẩn dung dịch kiểm chứng), trộn xác định hàm lượng protein hỗn hợp theo 8.3 9.1 Tính hàm lượng protein mẫu có hàm lượng protein cao (w 1) từ hàm lượng protein hỗn hợp (w2) hàm lượng protein sữa chuẩn (w3) công thức sau đây: w1 = 2w2 - w3 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ phương pháp lấy mẫu sử dụng kết thử nghiệm thu Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm: a) hệ số sử dụng để thu hàm lượng protein từ hàm lượng nitơ xác định phương pháp chuẩn (IDF Standard 20); b) quan sát cho thấy kết nghi ngờ độ xác; c) thông tin cần thiết nhận biết đầy đủ mẫu thử LUẬT SƯ TƯ VẤN PHÁP LUẬT 24/7 GỌI 1900 6162 ... vệ để không bị hấp thụ ẩm 5.2 Dung dịch chuẩn đen amido Chuẩn bị dung dịch chuẩn theo qui trình đây: 5.2.1 Dung dịch chuẩn ban đầu, để chuẩn bị dung dịch chuẩn đối chứng Cho vào bình định mức 000... (phần thể tích) Từ dung dịch chuẩn ban đầu này, chuẩn bị dung dịch so sánh chuẩn 5.3.2 5.3.3 Xác định độ hấp thụ tương nước cất bước sóng chuẩn cuvet chuẩn 5.2.2 Dung dịch chuẩn, dùng cho phép xác... chỉnh nồng độ dung dịch chuẩn ban đầu 5.2.1, độ hấp thụ dung dịch so sánh chuẩn chuẩn bị 5.3.2 5.3.3 giống với độ hấp thụ thu trình hiệu chuẩn (xem 8.5) 5.2.3 Dung dịch chuẩn, dùng cho dãy xác