PHÁT HIỆN một số đột BIẾN GEN và đối CHIẾU KIỂU GEN với KIỂU HÌNH của BỆNH NHI THALASSEMIA tại BỆNH VIỆN TRẺ EM hải PHÒNG

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC HẢI PHÒNG - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG LUẬN ÁN TIẾN SỸ Y HỌC Chuyên ngành : Nhi Mã số : 97.20.106 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN NGỌC SÁNG TS BẠCH THỊ NHƯ QUỲNH HẢI PHÒNG - 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi Đỗ Thị Quỳnh Mai, nghiên cứu sinh khóa Trường Đại học Y Dược Hải Phòng, chuyên ngành Nhi, xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn của: PGS.TS Nguyễn Ngọc Sáng TS Bạch Thị Như Quỳnh Cơng trình không trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022 Đỗ Thị Quỳnh Mai LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận án này, trước hết tơi xin bày tỏ lịng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Ngọc Sáng TS Bạch Thị Như Quỳnh, người thầy tận tụy dạy dỗ, bảo hết lòng hướng dẫn giúp đỡ, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết Đảng uỷ, Ban Giám hiệu Trường Đại học Y Dược Hải Phòng, Thầy, Cô Bộ môn Nhi, Thầy, Cô cán bộ, nhân viên Phòng quản lý Đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Y Dược Hải Phòng dành thuận lợi, giúp đỡ tận tình dành cho động viên quý giá q trình học tập nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn Ban Giám đốc, phịng Kế hoạch Tổng hợp, Thầy, Cơ, cán bộ, nhân viên khoa Thận – Máu – Nội tiết, Khoa Sinh hóa, Huyết học phịng, ban Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng nhiệt tình tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc Giáo sư, Phó giáo sư, Tiến sỹ, thầy, cô thành viên Hội đồng bảo vệ luận án cấp Bộ môn, cấp Trường, cho ý kiến góp ý bảo quý báu để tơi hồn thiện luận án Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới gia đình bao gồm cha mẹ, người có cơng sinh thành, chồng thân yêu động viên nhiều, anh chị em bạn bè đồng nghiệp chia sẻ, giúp đỡ, động viên giành cho nhiều tình cảm tình làm việc, học tập nghiên cứu Hải Phòng, ngày 08 tháng 11 năm 2022 Đỗ Thị Quỳnh Mai DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT A Adenosine ARMSPCR Amplification Refractory Mutation System – Polymerase Chain Reaction (Hệ thống khuyếch đại đột biến trơ - Phản ứng chuỗi polymerase) ASO Allele-specific Oligonucleotide (Oligonucleotide đặc trưng alen) β0 β+ β++ Không tổng hợp chuỗi Beta Giảm tổng hợp chuỗi Beta Giảm nhẹ tổng hợp chuỗi Beta BC Bạch cầu BVTEHP Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng C Cytidine CS Cộng DNA Desoxyribonucleic acid ĐBG Đột biến gen G Guanin GAP-PCR GAP-Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi polymerase cách đoạn) Hb Hemoglobin HBA Gen quy định tổng hợp chuỗi alpha globin HBB Gen quy định tổng hợp chuỗi beta globin HC Hồng cầu HbE Hemoglobin E HbF Hemoglobin Fetal HbCs Hemoglobin Constant Spring IVS Intervening sequence (Trình tự chèn hay Intron) LIC Liver iron concentration (Nồng độ sắt gan) mRNA message Ribonucleotic acid (RNA thông tin) MCH Mean Corpuscular Hemoglobin (Lượng huyết sắc tố trung bình MCHC hồng cầu) Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (Nồng độ hemoglobin trung bình hồng cầu) MCV Mean Corpuscular Volume (Thể tích trung bình hồng cầu) MLPA Multiplex Ligationdependent Probe Amplification (Khuếch đại đa đoạn dò) NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuyếch đại chuỗi) RNA RNA: Ribonucleic acid TIF T Thalassemia Intermedia Federation (Liên đoàn Thalassemia quốc tế) Thymidine TC Tiểu cầu TVDT Tư vấn di truyền 3’ UTR 3’ Untranscriptional Region (Vùng 3’ không mã) 5’ UTR 5’ Untranscriptional Region (Vùng 5’ không mã) MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh Thalassemia 1.2 Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm 16 1.3 Tổng quan phương pháp lập phân tích phả hệ bệnh Thalassemia 28 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 34 2.2 Phương pháp nghiên cứu 35 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 49 3.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phịng 60 3.3 Mơ tả đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ 67 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 80 4.1 Xác định đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 80 4.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng Error! Bookmark not defined 4.3 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ 107 KẾT LUẬN 113 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN 115 NHỮNG HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI 116 KHUYẾN NGHỊ 117 PHƯƠNG HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO 118 DANH SÁCH BỆNH NHÂN 136 DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Tỷ lệ người mang gen Thalassemia Việt Nam Bảng 1.2 Đột biến gen Hb (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) Bảng 1.3 Tỉ lệ người mang gen nước ta (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) Bảng 1.4 Cấu trúc globin Hb sinh lý Bảng 1.5 Các loại allen đột biến bệnh α-Thalassemia 11 Bảng 1.6 Các đột biến gây bệnh β-Thalassemia 13 Bảng 1.7 Các kiểu gen kiểu hình bệnh α-Thalassemia 17 Bảng 2.1 Trình tự mồi kích thước đột biến thường gặp 40 Bảng 2.2 Các thông số phản ứng GAP-PCR đột biến thường gặp 41 Bảng 2.3 Trình tự mồi kích thước đột biến điểm thường gặp 42 Bảng 2.4 Các thông số phản ứng ARMS-PCR 43 Bảng 3.1 Đặc điểm tuổi vào viện tuổi phát bệnh 49 Bảng 3.2 Phân bố bệnh nhi α β-Thalassemia theo nhóm tuổi vào viện 49 Bảng 3.3 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh 50 Bảng 3.4 Đặc điểm giới đối tượng nghiên cứu 50 Bảng 3.5 Đặc điểm địa dư đối tượng nghiên cứu 51 Bảng 3.6 Phân bố đột biến gen hemoglobin bệnh nhân α-Thalassemia 52 Bảng 3.7 Phân loại bệnh nhân α-Thalassemia theo kiểu đột biến gen 52 Bảng 3.8 Phân bố đột biến gen β-globin bệnh nhân β-Thalassemia 55 Bảng 3.9 Phân loại đột biến β-globin theo vị trí gen bị đột biến 57 Bảng 3.10 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo chức gen bị đột biến 58 Bảng 3.11 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo kiểu gen đột biến 59 Bảng 3.12 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo lý vào viện 60 Bảng 3.13 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng lâm sàng vào viện 61 Bảng 3.14 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo mức độ lách to vào viện 62 Bảng 3.15 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng mặt Thalassemia 62 Bảng 3.16 Đặc điểm niêm mạc lợi đối tượng nghiên cứu vào viện 63 Bảng 3.17 Phân bố bệnh nhân theo tuổi bắt đầu truyền máu 63 Bảng 3.18 Phân bố bệnh nhân theo số lần truyền máu năm 64 Bảng 3.19 Đặc điểm lệ thuộc truyền máu bệnh nhân Thalassemia 64 Bảng 3.20 Đặc điểm huyết học đối tượng nghiên cứu 65 Bảng 3.21 Đặc điểm sắt ferritin huyết bệnh nhân Thalassemia 66 Bảng 3.22 Đặc điểm GOT, GPT, ure, creatinin bệnh nhân Thalassemia 67 Bảng 3.23 Hội chứng tán huyết theo gen đột biến α-Thalassemia 68 Bảng 3.24 Đặc điểm lâm sàng theo gen đột biến α-Thalassemia 68 Bảng 3.25 Đặc điểm huyết học theo số lượng gen đột biến α-Thalassemia (n=27) 69 Bảng 3.26 Đặc điểm điện di huyết sắc tố theo số lượng gen đột biến 69 Bảng 3.27 Đặc điểm lâm sàng theo đột biến gen HBB β-Thalassemia 70 Bảng 3.28 Đặc điểm huyết học theo đột biến gen HBB β-Thalassemia 71 Bảng 3.29 Đặc điểm điện di HST theo đột biến gen HBB β-Thalassemia 71 DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Gen α β globin (trên nhiễm sắc thể 16 11) 14 Hình 3.1 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo kiểu hình bệnh (n=83) 51 Hình 3.2 Hình ảnh điện di thu đột biến SEA, 3.7 Hình 3.3 Hình ảnh điện di thu đột biến c2delT Hình 3.4 Hình ảnh điện di thu đột biến HbCs Hình 3.5 Phân loại bệnh nhân α-Thalassemia theo số lượng gen đột biến (n=27) Hình 3.6 Hình ảnh điện di thu đột biến CD17, CD41/42 Hình 3.7 Hình ảnh điện di thu đột biến CD95 Hình 3.8 Hình ảnh điện di thu đột biến CD26 Hình 3.9 Hình ảnh điện di thu đột biến CD71/72 Hình 3.10 Hình ảnh điện di đột biến IVS1.1 Hình 11 Phả hệ gia đình số Hình 12 Phả hệ gia đình số Hình 13 Phả hệ gia đình số Hình 14 Phả hệ gia đình số Hình 15 Phả hệ gia đình số Hình 16 Phả hệ gia đình số Hình 17 Phả hệ gia đình số Hình 18 Phả hệ gia đình số Hình 19 Phả hệ gia đình số Hình 20 Phả hệ gia đình số 10 Hình 21 Phả hệ gia đình số 11 Hình 22 Phả hệ gia đình số 12 Hình 4.1 Kết phát đột biến CD95 gia đình phả hệ số 11 53 53 54 54 55 56 56 57 57 72 72 73 74 74 75 76 76 77 78 78 79 108 141.Phạm Thị Ngọc Nga (2017), Nghiên cứu di truyền đột biến gây bệnh bệnh nhân Beta thalassemia vùng Đồng sông Cửu Long kỹ thuật sinh học phân tử, Luận án Tiến sĩ y học, Trường Đại học Y Dược Cần Thơ 142.Moghaddam Z.K., Bayat N., Valaei A., Kordafshari et al (2012) Coinheritance of β and α: challenges in prenatal diagnosis of thalassemia Iran J Blood Cancer, 4(2), 51–97 143.Nguyễn Hoàng Nam, Lý Thị Thanh Hà, Dương Bá Trực, et al (2017) Đột biến gen bệnh nhân beta-thalassemia Bệnh viện Nhi Trung ương Tạp chí Nhi khoa, 10(5), 46–51 144.Nguyễn Thị Vân Anh, Hoàng Thị Ngọc Lan, Vũ Hương Ly, et al (2019) Đặc điểm đột biến gen Globin đối tượng nguy cao sinh mắc Thalassemia Trung tâm chẩn đoán trước sinh Bệnh viện Phụ Sản Trung ương năm 2018 Tạp chí phụ sản, 16(3), 22–27 145.Trịnh Văn Bờ Em, Nguyễn Vạn Thông, Nguyễn Thị Thanh Kiều CS (2017) Bước đầu nghiên cứu ứng dụng DNA tự thai máu mẹ (cffDNA) xét nghiệm trước sinh không xâm lấn bệnh beta thalassemia Tạp chí khoa học ĐHQGHN, 33(1S), 97–103 146.Nguyễn Thị Thu Hà, Ngô Mạnh Quân, Bạch Quốc Khánh CS (2021) Khảo sát nguy di truyền gen bệnh huyết sắc tố Thalassemia dân tộc sống số tỉnh miền bắc Tạp chí Y học Việt Nam , 502(5-số chuyên đề), 103–111 147.Vũ Hải Toàn, Nguyễn Thị Thu Hà, Đặng Thị Vân Hồng (2021) Kết chẩn đốn trước sinh cho thai nhi có nguy bị bệnh Thalassemia viện huyết học truyền máu TW từ 2018 đến 2020 Tạp chí Y học Việt Nam , 502(5-số chuyên đề), 142–149 148.Phạm Thị Ngọc Nga, Nguyễn Trung Kiên (2017) Sự di truyền bệnh beta thalassemia 12 gia đình khu vực Đồng sơng Cửu Long Tạp chí Y học Việt Nam , 452(1), 197–201 BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU I Hành Họ tên: Tuổi: Giới tính: Địa chỉ: Điện thoại: Nghề nghiệp: Dân tộc: Tình trạng nhân: Số con: Khi cần báo tin cho: II Tiền sử Bản thân: Lúc nhỏ: Khỏe mạnh Thiếu máu Phát bệnh Thalassemia từ khi: Đã phẫu thuật cắt lách Số lần truyền máu: …… Thể tích máu truyền/lần: Đã sử dụng thuôc thải sắt Bệnh lý kèm theo: Sức khỏe tại: Gia đình: Bố mắc Thalassemia Mẹ mắc Thalassemia Anh, chị em mắc Thalassemia Vợ/chồng mắc Thalassemia Chưa có thơng tin Con mắc Thalassemia III Triệu chứng Hoa mắt chóng mặt Xuất huyết Đau nhức xương Sốt Gãy xương IV Khám lâm sàng Vàng da Ngất Cân nặng: Chiều cao: BMI: Lâm sàng Có/khơng Xuất huyết Gan to Lách to Hạch to Niêm mạc nhợt nhạt nhẹ (+), vừa (++), nặng (+++) Khuôn mặt Thalassemia Vàng da V Cận lâm sàng Huyết đồ RBC: MCH MCHC: g/L T/L Hb pg RDW: WBC: G/L g/L HCT l/l MCV fL Điện di Hemoglobin HbA % HbH HbA2 % HbF: % HbE % Hb khác (S, D, Barts, ) % Sinh hóa máu Sắt huyết g/L Ferritine huyết Bilirubin toàn phần ng/m l ng/m l u/L Bilirubin trực tiếp u/L AST u/L ALT u/L GGT u/L Transferrin Chức đông máu Xét nghiệm Kết PT % APTT giây Fibrinogen g/L Kết chụp X-quang Kết chẩn đoán gen VI Chẩn đoán VII Điều trị Hải Phòng, ngày tháng năm Người tham gia nghiên cứu (Ký ghi rõ họ tên) DANH SÁCH BỆNH NHÂN T T Mã BN Họ tên Ngày sinh Gi ới Địa 74492 BÙI NGỌC M 01.02.20 05 Nữ Lê Chân - HP 96168 NGUYỄN HỮU GIA B 09.07.20 15 Na m Hồng Bàng - HP 13987 NGUYỄN ANH KH 20.09.20 15 Na m An Dương - HP 13986 NGUYỄN VĂN B 19.11.20 13 Na m An Dương - HP 266491 NGUYỄN NGỌC TƯỜNG S 12.02.20 20 Nữ Hải An - HP 58362 NGUYỄN HÀ G 01.08.20 05 Nữ An Dương - HP 79713 NGUYỄN VĂN PH 29.07.20 17 Na m Vĩnh Bảo - HP 19523 NGUYỄN VĂN C 01.06.20 02 Na m Thủy Nguyên HP 146125 ĐẬU THÁI THÙY L 12.04.20 15 Nữ Quỳnh Lưu - NA 10 206217 LÊ GIA B 09.03.20 18 Na m Tứ Kỳ - HD 11 5509 ĐỒNG GIA KH 11.01.20 10 Na m Dương Kinh - HP 12 260140 ĐỖ BÀN THÀNH TR 30.09.20 17 Nữ Dương Kinh - HP 13 261559 ĐÀO NGỌC A 09.08.20 19 Nữ Thủy Nguyên HP 14 59875 CÙ VĂN H 04.02.20 19 Na m Thủy Nguyên HP 15 12857 NGUYỄN DIỆU Q 05.12.20 07 Nữ An Dương - HP 16 202789 NGUYỄN PHƯƠNG TH 02.11.20 13 Nữ An Dương - HP 17 5494 PHẠM HOÀI A 08.06.20 15 Nữ Dương Kinh - HP 18 48005 VŨ MINH D 18.04.20 08 Na m An Lão - HP 19 139101 NGUYỄN THỊ PHƯƠNG A 22.11.20 03 Nữ Ngô Quyền - HP 20 71748 NGUYỄN MINH PH 25.09.20 17 Na m Tiên Lãng - HP 21 103939 HOÀNG KHÁNH N 22.01.20 12 Na m Thủy Nguyên HP 22 89852 LẠI GIA PH 16.09.20 16 Na m An Dương - HP 23 122192 NGUYỄN GIA H 19.03.20 18 Na m Tiên Lãng - HP 24 52607 NGUYỄN DUY NH 28.12.20 03 Na m Kiến Thụy - HP 25 12573 DỖ BINH M 24.11.20 06 Nữ An Dương - HP 26 5586 NGUYỄN TIẾN D 27.09.20 08 Na m Ngô Quyền - HP 27 1611 PHẠM QUANG H 23.05.20 08 Na m An Dương - HP 28 1533 VŨ QUỐC Đ 29.05.20 11 Na m Thủy Nguyên HP 29 5471 NGUYỄN THỊ NGỌC M 14.08.20 13 Nữ Hải An - HP 1573 NGUYỄN TRỌNG H 22.11.20 10 Na m Tiên Lãng - HP 32629 LÊ HUYỀN A 20.12.20 14 Nữ Hồng Bàng - HP 1656 ĐỖ ÁNH D 07.12.20 11 Nữ Lê Chân - HP 3 8952 ĐỖ THỊ THU TH 17.04.20 07 Nữ An Lão - HP 218220 NGUYỄN TÙNG L 21.05.20 19 Na m Thái Thụy - TB 112867 ĐỖ THÙY L 20.07.20 11 Nữ Kim Thành - HD 48124 LÊ VĂN D 04.11.20 11 Na m Dương Kinh - HP 104662 ĐINH THỊ KHÁNH L 28.08.20 08 Nữ Kiến Thụy - HP 167720 LÊ THỊ MỸ V 24.11.20 15 Nữ Kiến An - HP 19529 NGUYỄN VĂN K 17.10.20 11 Na m Thủy Nguyên HP 39282 LÊ THẾ B 22.08.20 09 Na m Thủy Nguyên HP 12544 PHẠM THỊ THU Q 28.02.20 02 Nữ Lê Chân - HP 12714 TRINH DUY H 20.09.20 12 Na m Thủy Nguyên HP 648844 ĐỖ KIM C 10.10.20 15 Nữ An Lão - HP 4 16356 ĐỖ HỒNG G 10.10.20 15 Nữ An Lão - HP 169688 BÙI MINH Q 21.06.20 16 Na m Kiến An - HP 35631 PHÙNG KHÁNH NG 26.09.20 15 Nữ Kiến An - HP 32676 HÀ DUY H 25.08.20 07 Na m Thủy Nguyên HP 5453 ĐỖ ĐĂNG C 23.01.20 01 Na m Thủy Nguyên HP 5612 NGUYỄN TIẾN TH 17.08.20 10 Na m An Lão - HP 19590 VŨ NGỌC D 11.07.20 13 Nữ An Lão - HP 1464 VŨ TÙNG L 07.10.20 15 Na m An Lão - HP 24920 HOÀNG MINH NH 02.11.20 02 Na m Thủy Nguyên HP 24969 ĐẬU HẢI Y 28.08.20 07 Nữ Ngô Quyền - HP 5329 PHẠM THẢO A 10.10.20 09 Nữ Kiến Thụy - HP 5 1635 NGUYỄN TUẤN H 28.10.20 06 Na m Dương Kinh - HP 1561 BÙI THỊ H 31.01.20 09 Nữ Thủy Nguyên HP 5389 BÙI THỊ KHÁNH CH 21.02.20 07 Nữ An Lão - HP 30282 LƯU ĐỨC CH 10.09.20 15 Na m An Lão - HP 59302 LƯU NGỌC LAN V 11.08.20 15 Nữ An Dương - HP 206968 LÊ THỊ NG 18.08.20 13 Nữ Tứ Kỳ - HD 202414 NGUYỄN HOÀNG PH 14.03.20 11 Na m Cát Hải - HP 70517 VŨ ĐỨC TH 09.12.20 12 Na m Hải An - HP 5426 TRẦN ĐỨC TH 02.04.20 05 Na m An Lão - HP 19417 VŨ HỒNG QUỲNH A 16.04.20 11 Nữ Ngơ Quyền - HP 164395 TRẦN QUỲNH TR 05.06.20 15 Nữ Vĩnh Bảo - HP 6 285260 PHẠM NGUYỆT NHI 17.04.20 15 Nữ Kiến Thụy - HP 19436 ĐÀO THỊ KHÁNH NG 24.08.20 04 Nữ An Lão - HP 1757 NGUYỄN THÙY A 18.11.20 04 Nữ Lê Chân - HP 1383 ĐẶNG CHÂU A 26.01.20 04 Nữ Hồng Bàng - HP 1717 LÊ QUANG B 19.04.20 11 Na m Thủy Nguyên HP 1730 LÊ QUANG Đ 20.08.20 08 Na m Thủy Nguyên HP 234504 VŨ THÀNH Đ 03.10.20 19 Na m An Dương - HP 37072 LẠI GIA B 13.11.20 10 Na m An Dương - HP 212690 NGUYỄN MAI PH 10.02.20 08 Nữ Hồng Bàng - HP 261756 NINH GIA H 30.03.20 20 Na m Kim Thành - HD 16140 VŨ NGỌC TH 18.01.20 03 Na m Vĩnh Bảo - HP 7 12795 BÙI ANH V 11.05.20 06 Na m Lê Chân - HP 121646 LÝ THIÊN NH 23.09.20 17 Na m Lục Ngạn - BG 188348 VŨ QUỲNH A 12.02.20 19 Nữ An Lão - HP 27675 NGHIÊM MINH TH 21.08.20 15 Nữ Lê Chân - HP 8969 PHẠM THỊ LAN A 23.06.20 07 Nữ Kiến An - HP 318658 TRẦN MINH CH 02.03.20 21 Nữ Ngô Quyền - HP 319496 NGUYỄN CÔNG Đ 15.07.20 11 Na m Hải An - HP 12684 PHẠM VĂN H 14.07.20 15 Na m An Lão - HP 12690 PHẠM VĂN CH 14.07.20 15 Na m An Lão - HP HẢI PHÒNG - 2022 HẢI PHÒNG - 2022 Đỗ Thị Quỳnh Mai Đỗ Thị Quỳnh Mai MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1, Xác định số đột biến gen bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng từ 01/01/2016 đến 31/12/2020 Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh Thalassemia 1.1.1 Dịch tễ học Bảng 1.1 Tỷ lệ người mang gen Thalassemia Việt Nam (tổng hợp nhiều nghiên cứu) Bảng 1.2 Đột biến gen Hb (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) Bảng 1.3 Tỉ lệ người mang gen nước ta (tổng hợp từ nhiều nghiên cứu) Bảng 1.4 Cấu trúc globin Hb sinh lý 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh Thalassemia 1.1.4 Cơ chế di truyền bệnh Thalassemia Bảng 1.5 Các loại allen đột biến bệnh α-Thalassemia Bảng 1.6 Các đột biến gây bệnh β-Thalassemia thường gặp người Việt 1.1.5 Lịch sử nghiên cứu bệnh Thalassemia 1.2 Đặc điểm lâm sàng xét nghiệm 1.2.1 Phân loại Thalassemia 1.2.2 Biểu lâm sàng xét nghiệm Thalassemia Bảng 1.7 Các kiểu gen kiểu hình bệnh α-Thalassemia 1.2.2 Một số hậu hay gặp bệnh Thalassemia 1.2.3 Tổng quan phương pháp phát đột biến gen gây bệnh Thalassemia 1.3 Tổng quan phương pháp lập phân tích phả hệ bệnh Thalassemia 1.3.1 Ý nghĩa phương pháp nghiên cứu phả hệ 1.3.2 Phương pháp lập phả hệ 1.3.3 Phân tích phả hệ 1.3.4 Tiến hành sàng lọc 1.3.5 Một số ký hiệu thường dùng để lập sơ đồ phả hệ 1.3.6 Tư vấn di truyền nhằm phòng bệnh Thalassemia 1.3.7 Thực trạng nghiên cứu quản lý gen Thalassemia Hải Phòng Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu + Triệu chứng lâm sàng: + Xét nghiệm: * Tiêu chuẩn loại trừ: 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu: 2.1.3 Thời gian nghiên cứu: 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 2.2.2 Cỡ mẫu cách chọn mẫu: 2.2.3 Nội dung biến số nghiên cứu 2.2.4 Quy trình kỹ thuật sinh học phân tử phát đột biến gen globin Bảng 2.1 Trình tự mồi kích thước đột biến thường gặp Bảng 2.2 Các thông số phản ứng GAP-PCR đột biến thường gặp Bảng 2.3 Trình tự mồi kích thước đột biến điểm thường gặp Bảng 2.4 Các thông số phản ứng ARMS-PCR 2.2.5 Phương pháp thu thập số liệu 2.2.6 Xử lý số liệu 2.2.7 Sai số cách khống chế 2.2.8 Đạo đức nghiên cứu 2.2.9 Sơ đồ nghiên cứu Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 3.1.1 Đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu Bảng 3.2 Phân bố bệnh nhi α β-Thalassemia theo nhóm tuổi vào viện Bảng 3.3 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh Bảng 3.4 Đặc điểm giới đối tượng nghiên cứu Bảng 3.5 Đặc điểm địa dư đối tượng nghiên cứu 3.1.2 Xác định đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng Bảng 3.6 Phân bố đột biến gen hemoglobin bệnh nhân α-Thalassemia Bảng 3.7 Phân loại bệnh nhân α-Thalassemia theo kiểu đột biến gen (n = 27) Hình 3.2 Hình ảnh điện di thu đột biến SEA, 3.7 Hình 3.3 Hình ảnh điện di thu đột biến c2delT Hình 3.4 Hình ảnh điện di thu đột biến HbCs Bảng 3.8 Phân bố đột biến gen β-globin bệnh nhân β-Thalassemia Hình 3.6 Hình ảnh điện di thu đột biến CD17, CD41/42 Hình 3.7 Hình ảnh điện di thu đột biến CD95 Hình 3.8 Hình ảnh điện di thu đột biến CD26 Hình 3.9 Hình ảnh điện di thu đột biến CD71/72 Bảng 3.9 Phân loại đột biến β-globin theo vị trí gen bị đột biến Bảng 3.10 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo chức gen bị đột biến Bảng 3.11 Phân bố bệnh nhân β-Thalassemia theo kiểu gen đột biến (n = 56) 3.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia 3.2.1 Biểu lâm sàng, cận lâm sàng theo kiểu hình đột biến Bảng 3.12 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo lý vào viện Bảng 3.13 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng lâm sàng vào viện Bảng 3.14 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo mức độ lách to vào viện Bảng 3.15 Phân bố đối tượng nghiên cứu theo triệu chứng mặt Thalassemia Bảng 3.16 Đặc điểm niêm mạc lợi đối tượng nghiên cứu vào viện Bảng 3.17 Phân bố bệnh nhân theo tuổi bắt đầu truyền máu Bảng 3.18 Phân bố bệnh nhân theo số lần truyền máu năm Bảng 3.19 Đặc điểm lệ thuộc truyền máu bệnh nhân Thalassemia Bảng 3.20 Đặc điểm huyết học đối tượng nghiên cứu (n=83) Bảng 3.21 Đặc điểm sắt ferritin huyết bệnh nhân Thalassemia Bảng 3.22 Đặc điểm GOT, GPT, ure, creatinin bệnh nhân Thalassemia 3.3 Mô tả đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng phả hệ di truyền hệ số bệnh nhân Thalassemia 3.3.1 Biểu lâm sàng, cận lâm sàng theo kiểu gen đột biến Bảng 3.23 Hội chứng tán huyết theo gen đột biến α-Thalassemia (n=27) Bảng 3.24 Đặc điểm lâm sàng theo gen đột biến α-Thalassemia (n=27) Bảng 3.25 Đặc điểm huyết học theo số lượng gen đột biến α-Thalassemia (n=27) Bảng 3.26 Đặc điểm điện di huyết sắc tố theo số lượng gen đột biến (n=27) Bảng 3.27 Đặc điểm lâm sàng theo đột biến gen HbB β-Thalassemia (n=56) Bảng 3.28 Đặc điểm huyết học theo đột biến gen HbB β-Thalassemia (n=56) Bảng 3.29 Đặc điểm điện di huyết sắc tố theo đột biến gen HbB β- Thalassemia(n=56) 3.3.2 Xây dựng số phả hệ bệnh nhi Thalassemia Hình 11 Phả hệ gia đình số Hình 12 Phả hệ gia đình số Hình 13 Phả hệ gia đình số Hình 14 Phả hệ gia đình số Hình 15 Phả hệ gia đình số Hình 16 Phả hệ gia đình số Hình 17 Phả hệ gia đình số Hình 18 Phả hệ gia đình số Hình 19 Phả hệ gia đình số Hình 20 Phả hệ gia đình số 10 Hình 21 Phả hệ gia đình số 11 Hình 22 Phả hệ gia đình số 12 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Xác định đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 4.1.1 Đặc điểm dịch tễ học lâm sàng bệnh nhi Thalassemia 4.1.2 Xác định đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng 4.2.1 Biểu lâm sàng, cận lâm sàng theo kiểu hình đột biến gen 4.3 Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ bệnh nhi Thalassemia nghiên cứu 4.3.1 Các biểu lâm sàng, cận lâm sàng theo kiểu gen đột biến 4.3.2 Phả hệ di truyền số bệnh nhân Thalassemia nghiên cứu A KẾT LUẬN Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng Đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng theo gen đột biến bước đầu xây dựng số phả hệ bệnh nhi Thalassemia NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN NHỮNG HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI KHUYẾN NGHỊ PHƯƠNG HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO TÀI LIỆU THAM KHẢO BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU II Tiền sử III Triệu chứng V Cận lâm sàng Điện di Hemoglobin Chức đông máu Kết chẩn đoán gen VI Chẩn đoán VII Điều trị Người tham gia nghiên cứu DANH SÁCH BỆNH NHÂN ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y-DƯỢC HẢI PHÒNG ĐỖ THỊ QUỲNH MAI PHÁT HIỆN MỘT SỐ ĐỘT BIẾN GEN VÀ ĐỐI CHIẾU KIỂU GEN VỚI KIỂU HÌNH CỦA BỆNH NHI THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN TRẺ EM HẢI PHÒNG... QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Đột biến gen gây bệnh Thalassemia bệnh nhi Bệnh viện Trẻ em Hải Phịng 49 3.2 Đối chiếu kiểu gen với kiểu hình bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phịng 60 3.3 Mơ tả... bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng? ?? với mục tiêu sau: 1, Xác định số đột biến gen bệnh nhi Thalassemia Bệnh viện Trẻ em Hải Phòng từ 01/01/2016 đến 31/12/2020 2, Đối chiếu kiểu gen với