NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT GIỐNG NHÂN TẠO ỄNH ƯƠNG (Kaloula pulchra)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT GIỐNG NHÂN TẠO ỄNH ƯƠNG (Kaloula pulchra) y Nguyễn Công Tráng(*), Huỳnh Thanh Duy(**) Tóm tắt Nghiên cứu nhằm đánh giá khả sinh sản ễnh ương (Kaloula pulchra) điều kiện nhân tạo Kết ghi nhận tiêu sinh học sinh sản: thời gian hiệu ứng 5,2 ± 0,8 nhiệt độ 28,6 ± 0,1oC; TLSS 62,5 ± 7,0 %; SSSTT 143.285 ± 5.860 trứng/kg; tỷ lệ thụ tinh 94,7 ± 2,0%; TGN 20,5 ± 0,9 nhiệt độ 28,6 ± 0,1oC với tỷ lệ nở 98,1 ± 0,8 %; thời gian biến thái 15,0 ± 0,1 ngày nhiệt độ 30,1 ± 0,1oC tỷ lệ sống sau 40 ngày ương 13,8 ± 1,4 % Đây nghiên cứu sản xuất giống nhân tạo ễnh ương (Kaloula pulchra) Việt Nam, cung cấp liệu quan trọng cho nghiên cứu ễnh ương Từ khóa: Ễnh ương, Kaloula pulchra, sản xuất giống, ễnh ương giống Giới thiệu Phương pháp nghiên cứu Khi mức sống người dân cải thiện Nghiên cứu tiến hành phương pháp nâng cao nhu cầu thực phẩm phải đáp thực nghiệm, bố trí thí nghiệm (TN) cho sinh sản ứng theo Bên cạnh loại thực phẩm truyền ương ni nịng nọc Trại thực nghiệm Thủy thống thịt gà, heo, bò, tơm, cá… sản Trường Đại học Tiền Giang thịt loài lưỡng cư, đặc biệt ễnh ương 2.1 Tuyển chọn dưỡng ễnh ương người tiêu dùng ngày ưa chuộng sử dụng bố mẹ với tỷ lệ ngày cao Loài ễnh ương (Kaloula Ễnh ương bố mẹ có khối lượng 35-55 g/con, pulchra) phân bố nhiều nơi giới nhiều chiều dài thể 5-8 cm/con có nguồn gốc từ tự vùng Việt Nam [7] Thịt ễnh ương thơm ngon, nhiên, thu gom tuyển chọn từ tỉnh Bến giàu dinh dưỡng nên chúng người dân ưa Tre, Tiền Giang Ễnh ương bố mẹ sau thu gom, thích, đặc biệt nhà hàng, quán ăn với nuôi riêng đực bể composite (có chả ễnh ương, ễnh ương phết bột rán, giá thể tàu dừa) với mật độ 100 con/bể m3 cho ễnh ương xào lăn với nghệ, lẩu chả ễnh ương [8] thích nghi dần với điều kiện nuôi nhốt từ 20-30 Bên cạnh đó, ễnh ương chiên giịn, ễnh ương xào xả ngày cho sinh sản (Hình 1) Hằng ngày, ớt hay cháo ễnh ương với đậu xanh ễnh ương bố mẹ cho ăn sâu gạo tươi ăn ngon nhiều người ưa chuộng [1], với phần 5% [3] Ngoài làm thực phẩm cho người, ễnh ương ăn lượng lớn thức ăn sâu bọ, côn trùng gây hại mùa màng nên ễnh ương cịn người dân ni nông trại để tiêu diệt côn trùng gây hại trồng [2] Tuy nhiên, nguồn lợi ễnh ương tự nhiên suy giảm rõ rệt bị khai thác mức để làm thực phẩm, với hậu việc sử dụng thuốc trừ sâu, thuốc bảo vệ thực vật vấn đề Hình Ễnh ương bố mẹ chuẩn bị cho sinh sản ô nhiễm nguồn nước [2], [5] Những tác động bất lợi 2.2 Bố trí TN, tiêm chất kích thích sinh này, làm ảnh hưởng trực tiếp tới môi trường sống sản (KTSS) tự nhiên ễnh ương, nên nguồn lợi ễnh ương dần Chọn ễnh ương bố mẹ cho sinh sản: Con cái, cạn kiệt Vì lồi ễnh ương cần sinh sản nhân tạo, gây nuôi để phục vụ nhu cầu thực phẩm chọn có ngoại hình cân đối, không dị người để bảo tồn đa dạng sinh học tật, khỏe mạnh, bụng phình to, mềm đều, hàm khơng có túi âm (Hình 2a) Con đực, chọn lồi điều cần thiết khỏe mạnh, linh hoạt, không xây sát, chai tay (*) nhám, hàm có túi âm sậm màu Trường Đại học Tiền Giang (**) rõ (Hình 2b) Sinh viên, Trường Đại học Tiền Giang 85 TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP Hình Ễnh ương (a-khơng có túi kêu) ễnh ương đực (b-túi kêu sậm màu) Bố trí TN sinh sản: TN bố trí hồn tồn ngẫu nhiên với nghiệm thức (NT) dựa theo kết TN thăm dò liều lượng LHRHa+Domperidon/kg ễnh ương bố mẹ Mỗi NT lặp lại lần, NT ễnh ương đực tiêm chất KTSS với liều NT1: 60 μg LH-RHa+2,5 mg Domperidon, NT2: 80 μg LH-RHa+2,5 mg Domperidon, NT3: 100 μg LH-RHa+5 mg Domperidon NT4: 120 μg LH-RHa+5 mg Domperidon Tiêm chất KTSS vào bắp chi trước ễnh ương (Hình 3) Sau tiêm chất KTSS ễnh ương bố trí vào bễ composite m3 (có giá thể lục bình, dừa, rau muống) Tỷ lệ đực/cái ghép cặp 1/1, bễ 10 cặp Theo dõi thường xuyên để xác định thời gian hiệu ứng (TGHU) chất KTSS lên ễnh ương bố mẹ Chế độ quản lý NT hồn tồn giống Hình Tiêm chất KTSS cho ễnh ương 2.3 Ấp trứng ương nòng nọc Ấp trứng: Sau đẻ xong, vớt ễnh ương bố mẹ ra, trứng ấp bể Riêng số trứng mẫu để xác định tỷ lệ nở (TLN) vớt bể riêng khác có chất lượng nước để ấp ấp với mật độ 500 trứng/m2 Ương nòng nọc: Nòng nọc ương bể nhựa hình chữ nhật 120 L (dài 60 cm x rộng 86 Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) 50 cm x cao 40 cm) Trong bể có bố trí thủy sinh (rau muống, lục bình), cấp thêm nước để giảm mật độ nịng nọc ương bể q trình ương Mật độ ương: 550 nòng nọc/m2 Thức ăn sử dụng ương ni nịng nọc lịng đỏ trứng vịt kết hợp với thức ăn công nghiệp (dạng bột mịn dạng mãnh) có độ đạm 38% theo tỷ lệ 1/1, cho ăn với phần 5-7%/ngày tùy theo giai đoạn Chăm sóc, quản lý: Hàng ngày phải kiểm tra yếu tố chất lượng nước, từ ngày thứ 10 trở đi, định kỳ thay nước ngày/lần, lần thay 40% lượng nước bể ương Thời gian ương 40 ngày (nịng nọc biến thái hồn tồn thành ễnh ương con) 2.4 Thu thập số liệu nghiên cứu 2.4.1 Các tiêu môi trường nước - Nhiệt độ (oC) đo nhiệt kế, pH đo bút đo pH, DO (mg/L) đo máy đo DO, tiêu đo ngày Ánh sáng đo Lux kế, đo trình kích thích ễnh ương bố mẹ sinh sản ấp trứng - Hàm lượng NH4+ (mg/L), NO2- (mg/L) đo định kỳ ngày/lần test Công ty Sera (Đức) 2.4.2 Các tiêu sinh học sinh sản Gồm: TGHU, tỷ lệ sinh sản (TLSS), sức sinh sản thực tế (SSSTT), tỷ lệ thụ tinh (TLTT), thời gian nở (TGN), TLN thời gian biến thái (TGBT) Trong đó: - TGHU (giờ): Tính từ lúc kết thúc tiêm chất KTSS đến lúc ễnh ương bắt đầu đẻ - TLSS (%) = [Số ễnh ương đẻ trứng/Số ễnh ương bố trí TN] x100 - SSSTT (trứng/kg) = Tổng số trứng thu được/ Tổng khối lượng ễnh ương đẻ - TLTT (%) = [Số trứng thụ tinh/Tổng số trứng đẻ ra] x100 - TGN (giờ): Tính từ lúc đẻ xong đến lúc có trứng bắt đầu nở - TLN (%) = [Số nòng nọc nở/Số trứng thụ tinh] x100 - TGBT(ngày): Tính từ lúc nịng nọc nở đến lúc bắt đầu có nịng nọc mọc đủ chân, bắt đầu tiêu biến, nhảy lên cạn 2.4.3 Các tiêu tăng trưởng tỷ lệ sống - Sự tăng trưởng: Đo chiều dài (mm), từ đầu mõm đến chót thước kẻ chia vạch Cân Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP khối lượng (mg) cân điện tử số lẻ Định kỳ cân, đo 10 ngày lần, lần thu mẫu 30 con/ bể, cân đo xong thả lại nuôi tiếp đến kết thúc TN tính tỷ lệ sống Khi kết thúc TN cân, đo hết tất nịng nọc ễnh ương bể Tăng trưởng khối lượng (WG-weight gain): WG = Wt - W0 Tăng trưởng tuyệt đối khối lượng (DWGdaily weight gain): DWG (mg/ngày) = (Wt - W0)/t Tăng trưởng chiều dài (LG-length gain): LG = Lt - L0 Tăng trưởng tuyệt đối chiều dài (DLG-daily length gain): DLG (mm/ngày) = (Lt - L0)/t (Trong đó: (W-weight, L-length) Wt/Lt khối lượng/chiều dài nòng nọc ễnh ương thời điểm t, W0/L0 khối lượng/chiều dài nòng nọc ban đầu, t ngày ương) - Tỷ lệ sống (%) = [(Số nòng nọc + số ễnh ương thu được)/Số nòng nọc thả ương ban đầu]x 100 2.5 Xử lý số liệu Nghiên cứu sử dụng phần mềm SPSS 16.0 để xử lý số liệu Các tiêu nghiên cứu NT so sánh dựa phân tích ANOVA với phép thử Duncan Kết thảo luận 3.1 Các tiêu môi trường nước 3.1.1 Các tiêu mơi trường nước q trình đẻ ấp trứng Các yếu tố môi trường quan trọng trình sinh sản động vật thủy sản (ĐVTS), định thành cơng đợt sản xuất Bảng Các tiêu môi trường nước trình đẻ ấp trứng NT1 NT2 NT3 NT4 Nhiệt độ (oC) 28,7 ± 0,3 28,5 ± 0,2 28,5 ± 0,8 28,6 ± 0,2 pH 7,6 ± 0,1 7,3 ± 0,1 7,5 ± 0,1 7,4 ± 0,2 DO (mg/L) 4,5 ± 0,1 4,4 ± 0,2 4,3 ± 0,1 4,3 ± 0,3 Ánh sáng (lux) 18,9 ± 0,2 24,0 ± 0,3 21,1 ± 0,1 15,1 ± 0,2 Chỉ tiêu Ghi chú: Các giá trị bảng giá trị trung bình sai số chuẩn Qua Bảng 1, tiêu môi trường nước pH, nhiệt độ, DO ánh sáng trình sinh sản ấp trứng nằm khoảng thích hợp cho lồi ĐVTS sinh sống sinh sản Vì vậy, tiêu chất lượng nước nghiên cứu, thích hợp cho sinh sản, q trình phát triển phơi nở trứng ễnh ương 3.1.2 Các tiêu môi trường nước q trình ương nịng nọc Bảng Các tiêu mơi trường nước q trình ương nịng nọc Chỉ tiêu NT1 NT2 NT3 NT4 Nhiệt độ (oC) 30,2 ± 0,2 30 ± 0,1 30,1 ± 0,2 30 ± 0,3 pH 7,9 ± 0,3 8,0 ± 0,1 8,0 ± 0,3 8,3 ± 0,2 DO (mg/L) 5,4 ± 0,1 4,2 ± 0,3 4,5 ± 0,1 4,8 ± 0,3 NH4 (mg/L) NO2-(mg/L) 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,4 ± 0,2 0,2 ± 0,1 0,6 ± 0,1 0,2 ± 0,2 0,2 ± 0,2 0,2 ± 0,1 + Ghi chú: Xem Bảng TN bố trí hồn tồn ngẫu nhiên ngồi trời (có che lưới lan phía trên) nên chịu ảnh hưởng trực tiếp nhiều điều kiện bên Nhiệt độ ảnh hưởng đến tăng trưởng biến thái ễnh ương giai đoạn nòng nọc, nhiên dao động nhiệt độ nước NT không lớn (30-30,2oC), nên việc ảnh hưởng đến khác biệt tăng trưởng nịng nọc khơng đáng kể Nghiên cứu sử dụng nguồn nước giếng khoan bể ương có tảo nên pH bể ương cao, khác biệt NT không lớn giá trị pH thích hợp cho ĐVTS sinh sống [6] DO 87 Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP yếu tố quan trọng với lồi ĐVTS, ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe, tăng trưởng, tiêu hố hơ hấp vật ni [6] Ễnh ương giai đoạn nịng nọc sống hồn tồn mơi trường nước nên chịu ảnh hưởng trực tiếp hàm lượng DO DO NT dao động khơng lớn thích hợp cho nịng nọc phát triển (Bảng 2) Các ion hồ tan NH4+, NO2- xuất nước, môi trường có pH cao ảnh hưởng xấu đến sức khỏe nòng nọc, nhiên hàm lượng chúng bễ ương không nhiều Bảng cho thấy, mơi trường nước thích hợp cho tăng trưởng biến thái nòng nọc ễnh ương 3.2 Các tiêu sinh học sinh sản Phương pháp tiêm LH-RHa+Dom liều lượng 60 μg, 80 μg, 100 μg 120 μg LHRHa+2,5-5 mg Domperidon/kg ễnh ương, kích thích ễnh ương sinh sản (Hình 4) Hình Ễnh ương bắt cặp (a) sinh sản bể đẻ (b) Nghiên cứu ghi nhận số tiêu sinh học sinh sản loài ễnh ương Kaloula pulchra qua Bảng Bảng Một số tiêu sinh học sinh sản ễnh ương Chỉ tiêu NT1 NT2 NT3 NT4 TGUH (giờ) 4,6 ± 0,7a 5,3 ± 0,6a 5,5 ± 0,8a 5,5 ± 0,9a TLSS (%) 80 ± 8,3a 75 ± 5,0a 60 ± 9,8ab 35 ± 5,0b 188.426 ± 3.770a 173.264 ± 8.901a 132.741 ± 4.720a 78.711 ± 6.065a 95 ± 2,2a 97,5 ± 1,6a 95 ± 2,9a 91,3 ± 4,8a SSSTT (trứng/kg) TLTT (%) TGN (giờ) 17,4 ± 1,4a 18,8 ± 1,2a 21,9 ± 0,6a 23,9 ± 0,3a TLN (%) 97,8 ± 1,9 97,5 ± 0,3 a 98,5 ± 0,3 98,5 ± 0,5a TGBT (ngày) 14,3 ± 0,0a 14,9 ± 0,3a 15,3 ± 0,3a 15,6 ± 0,3a a a Ghi chú: Các giá trị bảng giá trị trung bình sai số chuẩn Các giá trị hàng có chứa ký tự giống khác khơng có ý nghĩa (p>0,05) Bảng cho thấy, ễnh ương đẻ trứng sau 4,6-5,5 tiêm chất KTSS TGHU khác biệt ý nghĩa (p>0,05) NT So với lồi lưỡng cư khác, ví dụ ếch Thái Lan [4] TGHU ễnh ương sử dụng LH-RHa KTSS ngắn TLSS ễnh ương NT khác biệt có ý nghĩa (p0,05), khác biệt có ý nghĩa so với NT4 (p0,05) với NT3 khác biệt có ý nghĩa với NT1 88 NT2 (p0,05) (Bảng 3) Vì thế, chưa thể khẳng định liều lượng LH-RHa+Dom ảnh hưởng đáng kể lên SSSTT ễnh ương TN áp dụng phương pháp tiêm kích thích tố TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP cho bắt cặp tự nhiên để sinh sản nên TLTT trứng trung bình NT cao, tỷ lệ cao 90% tất NT Trứng NT2 có TLTT đạt 97,5%, cao NT, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05) với NT lại (Bảng 3) Kết Bảng cịn cho thấy, LH-RHa+Dom có tác dụng tốt việc kích thích ễnh ương rụng trứng, gia tăng liều lượng chúng không ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm sinh dục nên khả thụ tinh trứng NT cao TGN trứng ĐVTS phụ thuộc nhiều vào nhiệt độ nước Nhiệt độ nước tỷ lệ nghịch với TGN, nhiệt độ cao (trong khoảng thích ứng) TGN ngắn ngược lại TN cho thấy, nhiệt độ 28,5-28,7oC TGN trứng ễnh ương dao động từ 17,4-23,9 TGN tương tự TGN trứng ếch Thái Lan, đồng thời khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT với (Bảng 3) Kết Bảng cho thấy, trứng ễnh ương tất NT nở thành nịng nọc (Hình 5) TLN trứng cao 97% khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT, điều chứng tỏ, liều chất KTSS không ảnh hưởng lên TLN trứng ễnh ương Hình Nịng nọc ngày tuổi ễnh ương Khi nịng nọc chăm sóc quản lý tốt, tích lũy hàm lượng dinh dưỡng đầy đủ chúng đủ điều kiện để thực trình biến thái Nòng nọc nở phải trải qua trình biến thái thể thành ễnh ương (Hình 6) Nghiên cứu cho thấy, nịng nọc NT1 có TGBT nhanh 14,3 ngày, nịng nọc NT4 TGBT chậm 15,6 ngày Theo Bảng 3, TGBT nịng nọc tăng dần theo liều tăng dần chất KTSS, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT với TGBT nòng nọc ễnh ương nhanh so với TGBT nịng Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) nọc ếch Thái Lan (19 ngày) nghiên cứu Lê Trần Trí Thức [9] Đồng Tháp Hình Ễnh ương 3.3 Kết trình ương nòng nọc 3.3.1 Sự tăng trưởng nòng nọc ễnh ương Tăng trưởng gia tăng kích thước khối lượng diễn liên tục thể động vật theo thời gian Sự tăng trưởng ĐVTS nói chung, ễnh ương nói riêng phụ thuộc nhiều vào yếu tố đặc tính sinh học lồi, chế độ dinh dưỡng, giới tính, chất lượng nước, mật độ ương… a Sự tăng trưởng khối lượng Khối lượng nòng nọc ễnh ương ghi nhận lúc bố trí TN, kết thúc TN định kỳ 10 ngày/lần, kết tăng trưởng khối lượng thể qua Bảng Bảng cho thấy, lúc bố trí TN, khối lượng (W0) nòng nọc NT nhỏ từ 27-30 mg/con khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT Từ thời điểm bố trí TN đến 10 ngày ương, WG DWG đạt giá trị lớn khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT, WG (216-280 mg) DWG (22-28 mg/ngày) Đây giai đoạn nòng nọc hấp thu nhiều dinh dưỡng tăng trọng nhanh vòng đời sinh trưởng chúng Ngày ương 10-20, WG DWG có giảm nhiều so với giai đoạn trước tăng trưởng số dương, WG (12-51 mg) DWG (1-5 mg/ngày) NT4 NT có WG DWG thấp khác biệt có ý nghĩa (p0,05) NT, LG (17,45-19,03 mm) LWG (1,75-1,90 mm/ngày) Đây giai đoạn nòng nọc hấp thu nhiều dinh dưỡng để tăng trọng nhanh khối lượng kích thước Từ ngày ương 10-20, LG DLG giảm nhiều so với giai đoạn trước tăng trưởng dương LG dao động 1,25-1,96 mm DLG dao động 0,13-0,20 mm/ngày, khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) NT (Bảng 5) Nguyên nhân dẫn đến tăng trưởng chiều dài giai đoạn giảm mạnh so với 10 ngày ương trước đó, giai đoạn có số nịng nọc biến thái thành ễnh ương nên chiều dài chúng giảm nhiều Giai đoạn ương từ 20-40 ngày, LG DLG tất NT mang giá trị âm khác biệt có ý nghĩa (p0,05) NT Nguyên nhân dẫn đến tăng trưởng âm chiều dài giai đoạn hầu hết nòng nọc biến thái hồn tồn thành ễnh ương con, tiêu biến nên chiều dài chúng giảm mạnh Khi kết thúc TN (ngày 40) hầu hết ễnh ương thu có chiều dài gia tăng so với chiều dài nịng nọc lúc bố trí TN Chiều dài ễnh ương ngày kết thúc TN (40) dao động từ 11,08-15,06 mm khác biệt có ý nghĩa (p0,05) với NT1 NT3 (Bảng 5) Sự khác biệt LG, DLG NT với ảnh liều lượng chất KTTS sử dụng để kích đẻ ễnh ương bố mẹ 3.3.2 Tỷ lệ sống Tỷ lệ sống nòng nọc ễnh ương trình ương ghi nhận tổng số lượng nòng nọc sống bể ương (dù ít) ễnh ương trình ương Tỷ lệ sống ghi nhận thời điểm kết thúc TN biểu thị Bảng Bảng Tỷ lệ sống nịng nọc ễnh ương q trình ương NT Tỷ lệ sống (%) NT1 14,0 ± 2,5b NT2 20,9 ± 1,1a NT3 13,7 ± 1,2b NT4 6,4 ± 1,2c Ghi chú: Xem Bảng 91 TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐỒNG THÁP Tạp chí Khoa học số 32 (6-2018) Kết thời điểm 40 ngày ương, tỷ lệ kích thích ễnh ương sinh sản nhân tạo, liều sống ễnh ương khác biệt có ý nghĩa thống kê 80 μg LH-RHa+2,5 mg Domperidon/kg ễnh ương (p